專利名稱：葡萄糖醛酸轉移酶ugt1a1的特異性探針底物及應用的制作方法
技術領域：
本發明屬醫藥技術領域，具體涉及一種葡萄糖醛酸轉移酶UGTlAl的特異性探針底物及其應用。
背景技術：
葡萄糖醒酸轉移酶(Uridinediphosphate-glucuronosy I transferase, UGT)超家族是機體內重要的II相代謝酶，催化化合物與輔因子尿苷二磷酸葡糖醛酸(UDPGA)結合，從而增加底物的親水性，使其能更 有效地從尿或膽汁中排出體外，這是機體的一個重要的解毒過程。多種外源性物質，如SN-38和亞硝胺類化合物，以及內源性物質，如膽紅素和雌二醇的脫毒都通過葡萄糖醛酸化途徑來實現。人UGT可以分為4個家族:UGT1，UGT2，UGT3和UGT8。其中最重要的參與藥物結合反應的酶屬于UGTl和UGT2家族。目前，已被鑒定的UGT亞型有25個，包括UGTlA中的16個以及UGT2B中的7個亞型。UGT2B在人肝臟中的表達量比UGTlA更豐富。其中，UGT2B4的含量最高，UGT2B15次之。值得注意的是，UGTlAl，1A4，1A6，1A9在人肝臟中都有中等程度的表達，但UGT1A3在人肝臟中表達量極低，同時UGT1A7，UGT1A8及UGT1A10僅在人腸道中表達。在UGTlA中，UGTlAl和人體健康的關系最為密切。它的基因缺失會影響膽紅素的代謝，從而導致嚴重的高膽紅素血癥如Crigler-Najjar綜合癥和Gilbert’s綜合癥。此夕卜，UGTlAl也是SN-38，一種廣泛使用的抗癌藥物伊立替康的活性代謝產物的主要代謝酶，UGTlAl的活性缺失被證明和伊立替康的毒性相關。因此，在患者用藥前，用IAl探針底物對其體內的IAl酶活性進行探測，對于臨床安全用藥有著重要意義。目前，已經報道的最有可能成為UGTlAl的探針底物有3個，分別是膽紅素，雌二醇和依托泊甙，但是，由于膽紅素和雌二醇屬于內源性化合物，不能作為體內探針使用，而依托泊甙又具有細胞毒性，也限制了它成為體內IAl探針底物。因此，UGTlAl的特異性探針藥物的開發具有重要的臨床意義。本發明中補骨脂二氫黃酮甲醚具有代謝產物單一(僅生成一個單葡萄糖醛酸化產物)、代謝酶高選擇性(肝臟主要由UGTlAl代謝，少量1A3參與極少部分代謝)、代謝產物易檢測等特點。此外，補骨脂二氫黃酮甲醚作為一種天然的黃酮類化合物，具有毒性低的特點，因此其作為體內UGTlAl的探針更加安全。
發明內容
本發明的目的是提供一種葡萄糖醛酸轉移酶UGTlAl的特異性探針底物及其應用，該特異性探針底物是B環4’位具有羥基的黃酮類化合物補骨脂二氫黃酮甲醚，與目前已報道的探針/標準底物雌二醇相比，補骨脂二氫黃酮甲醚的代謝產物單一，更易于檢測；與已報道的探針/標準底物依托泊甙相比，具有安全性更高的優點。因此，用補骨脂二氫黃酮甲醚作為探針底物評估人肝等生物樣品中UGTlAl的酶活性，具有顯著的優勢。
本發明提供了一種葡萄糖醛酸轉移酶UGTlAl的特異性探針底物，該特異性探針底物是B環4’位具有羥基的黃酮類化合物補骨脂二氫黃酮甲醚，其結構式見式(I )。
權利要求
1.一種葡萄糖醛酸轉移酶UGTlAl的特異性探針底物，其特征在于:該特異性探針底物是具有C-4’羥基的二氫黃酮類化合物，其結構式見式(I)。
2.一種利用權利要求1所述特異性探針底物定量測定生物體系中UGTlAl酶活的方法，其特征在于:采用上述式(I)化合物作為底物，通過定量檢測單位時間內的底物消除量或其葡萄糖醛酸產物的生成量來測定各生物樣品及細胞中UGTlAl酶的活性。
3.按照權利要求2所述利用特異性探針底物定量測定生物體系中UGTlAl酶活的方法，其特征在于:所述方法條件為:底物濃度介于l/l(TlOKm之間；孵育體系pH介于5.5^10.5之間；反應溫度介于2(T60°C之間。
4.按照權利要求2所述利用特異性探針底物定量測定生物體系中UGTlAl酶活的方法，其特征在于:所述產物生成率或底物轉化率低于10%。
5.權利要求1所述 特異性探針底物的應用，其特征在于:該特異性探針底物用于各種重組UGT1A1、人及動物組織制備液及各類組織細胞中UGTlAl酶活的定量測定；也用于體內探針，評估膽紅素代謝酶UGTlAl的個體及種屬差異。
全文摘要
本發明提供了一種葡萄糖醛酸轉移酶UGT1A1的特異性探針底物及其應用，該特異性探針底物是具有C-4'羥基的二氫黃酮類化合物，其酶活測定的流程如下選擇補骨脂二氫黃酮甲醚的C-4’羥基-O-葡萄糖醛酸化代謝為探針反應，通過定量檢測單位時間內補骨脂二氫黃酮甲醚的消除量或其葡萄糖醛酸化代謝產物的生成量來測定各生物樣品、細胞、在體及整體器官中UGT1A1酶的活性。本發明可用于不同種屬、不同個體來源生物樣本中UGT1A1酶活的定量評估，以及不同來源的動物組織細胞培養液及細胞制備物中UGT1A1酶活的定量測定，以期實現對重要藥物代謝酶UGT1A1處置藥物能力的評估。
文檔編號C12Q1/48GK103146804SQ201310044800
公開日2013年6月12日 申請日期2013年2月4日 優先權日2013年2月4日
發明者楊凌, 葛廣波, 夏楊柳, 朱亮亮, 呂俠, 何桂元, 寧靜 申請人:中國科學院大連化學物理研究所