<listing id="vjp15"></listing><menuitem id="vjp15"></menuitem><var id="vjp15"></var><cite id="vjp15"></cite>
<var id="vjp15"></var><cite id="vjp15"><video id="vjp15"><menuitem id="vjp15"></menuitem></video></cite>
<cite id="vjp15"></cite>
<var id="vjp15"><strike id="vjp15"><listing id="vjp15"></listing></strike></var>
<var id="vjp15"><strike id="vjp15"><listing id="vjp15"></listing></strike></var>
<menuitem id="vjp15"><strike id="vjp15"></strike></menuitem>
<cite id="vjp15"></cite>
<var id="vjp15"><strike id="vjp15"></strike></var>
<var id="vjp15"></var>
<var id="vjp15"></var>
<var id="vjp15"><video id="vjp15"><thead id="vjp15"></thead></video></var>
<menuitem id="vjp15"></menuitem><cite id="vjp15"><video id="vjp15"></video></cite>
<var id="vjp15"></var><cite id="vjp15"><video id="vjp15"><thead id="vjp15"></thead></video></cite>
<var id="vjp15"></var>
<var id="vjp15"></var>
<menuitem id="vjp15"><span id="vjp15"><thead id="vjp15"></thead></span></menuitem>
<cite id="vjp15"><video id="vjp15"></video></cite>
<menuitem id="vjp15"></menuitem>

稻谷內源性酶激活法生產高gaba功能食品材料的方法

文檔序號:423808閱讀:571來源:國知局
專利名稱:稻谷內源性酶激活法生產高gaba功能食品材料的方法
技術領域
本發明涉及食品領域,特別是涉及利用稻谷內源性酶激活法生產高GABA功能食品材料的方法,改善食物產品結構和營養結構。
背景技術
作為一種具有多種生理功能的生物活性因子,GABA在美國、日本等國家已廣泛用于營養補充劑和功能食品中,1996年,富含GABA的米胚芽制品在日本實現了商業化。日本科學家利用米胚芽等原料開發制造的富含GABA的功能食品配料,將其應用于飲料、果醬、糕點、餅干、調味料等制品中。現有報道顯示,應用生物技術制造的高濃度GABA飲料以及利用乳酸菌等制作的富含GABA的食品配料,均可直接作為或者用于抗高血壓、增進腦機能及肝功能的功能食品。上世紀九十年代中期,日本ORYZA油化學公司開發出一種名為GABARICEGERM的保健食品添加劑,其后不久,日本食品科學技術學會報道了該產品在改善失眠、抑郁和更年期綜合癥等方面的顯著效果,證實了 GABA的多種生理作用,并指出富含GABA的食品是一種功能性食品。2007年日本可口可樂公司推出了面向大眾的、具有放松和抗緊張效果的GABA功能性飲料“AQUARIUS SHARP CHARGE”,GABA產品市場得到了進一步的擴展,而我國在這方面的研究尚處于起步階段,亟待發展和提高。利用高產GABA品種的發芽糙米內源酶轉化提高發芽糙米中GABA的含量,對功能型稻米品種選育,稻米深加工及發芽糙米食品的研究開發具有重要意義。

發明內容
本發明的目的在于提供一種易操作,效果好的稻谷內源性酶激活法生產高GABA功能食品材料的方法。本發明的技術解決方案是:
一種稻谷內源性酶激活法生產高GABA功能食品材料的方法,其特征是:
(1)在明確稻米內源性谷氨酸脫羧酶特性和活性調節機制的基礎上,采用谷氨酸脫羧酶激活技術,生產高GABA含量的稻米健康食品;
(2)以富含GABA的發芽糙米為原料,采用鈍化分解GABA的轉氨酶預處理,生產留胚GABA精白米;
(3)采用含有谷氨酸脫羧酶激活劑和特殊緩沖體系的天然培養液進行發芽;
(4)以米糠、米胚芽作為GAD源,將其固定化后生產富集GABA的食品配料,并將其應用到GABA營養配合米粉生產中。一種稻谷內源性谷氨酸脫羧酶的制備方法,其特征是:包括下列步驟:
(O Y-氨基丁酸的制備:稱取糙米置于盤中,先用自來水沖洗一遍,洗去表面的雜質和灰塵,再加入4倍體積的水浸泡,將浸泡后的糙米均勻地攤于盤中,加入水,蓋上濕潤的紗布,發芽;然后稱取發芽糙米,加入水磨成漿狀,制成糙米漿;取一定量的糙米漿,在其中加入底物L-谷氨酸、輔酶PLP及激活劑CaCl2,在PBS緩沖液中轉化生成GABA ; (2)谷氨酸脫羧酶提取:稱取發芽糙米,加入由磷酸緩沖液、維生素B6、EDTA、β-巰基乙醇及NaCL組成的提取緩沖液研磨勻漿,靜置提取后離心,上清液即為谷氨酸脫羧酶提取液;
(3)谷氨酸脫羧酶分離純化:谷氨酸脫羧酶提取液中加入(順4)404至30%飽和度,靜置,冷凍離心去除部分雜蛋白;上清液加入(NH4)2SO4至50%飽和度,靜置,冷凍離心棄去上清液,收集沉淀,沉淀溶于標準緩沖液;在標準緩沖液中透析至無NH4+,得到GAD粗酶液,冷凍干燥保存;采用DEAE-Sephrose FF陰離子交換柱對米胚GAD進行分離,控制米胚GAD的等電點在4.5 4.7,分離采用磷酸鉀緩沖液進行梯度洗脫;再取經上述處理得到的米胚GAD上Superdex 200凝膠柱,用磷酸鉀緩沖液反復洗脫,即得分離純化后的谷氨酸脫羧酶。所述的稻谷內源性谷氨酸脫羧酶的制備方法,包括下列步驟:
(1)Y-氨基丁酸制備:稱取200g的糙米置于盤中,先用自來水沖洗一遍,洗去表面的雜質和灰塵,再加入4倍體積的水于40°C下浸泡12h ;將浸泡后的糙米均勻地攤于鋪有四層紗布的盤中,加入水,蓋上濕潤的紗布,置于35°C下發芽72h,得發芽糙米;稱取50g發芽糙米,加入200mL水用高速組織搗碎機磨成楽;狀,得糙米楽;;取一定量的糙米衆,在其中加入
9.5mmol/L底物谷氨酸鈉、輔酶PLP、0.2mmol/L激活劑CaCl2,在pH為6.5的PBS緩沖液中轉化生成GABA,控制轉化溫度為40.(TC ;
(2)谷氨酸脫羧酶提取:稱取IOOg的發芽糙米,加入50mmol/LpH5.7磷酸緩沖液,0.5mmol/L 維生素 B6, 2mmol/L EDTA, 0.2% 的 β -巰基乙醇,0.15mol/L NaCL 的提取緩沖液研磨勻漿,定容至IOOOmL,靜置提取2h后離心lOmin,上清液即為GAD提取液;
(3)谷氨酸脫羧酶分離純化:GAD提取液中加入(NH4)2SO4至30%飽和度,4°C靜置lh,冷凍離心去除部分雜蛋白,上清液加入(NH4)2SO4至50%飽和度,4°C靜置lh,冷凍離心棄去上清液,收集沉淀,沉淀溶于標準緩沖液,在標準緩沖液中透析至無NH4+,得到GAD粗酶液,冷凍干燥保存;采用DEAE-Sephrose FF陰離子交換柱對米胚GAD進行分離,控制米胚GAD的等電點在4.7 ;分離采用50mmol/L、pH5.6、1.30mol/L NaCl濃度的磷酸鉀緩沖液進行梯度洗脫;再取一定量經上述離子交換色譜分離并透析除鹽的米胚GAD上Superdex200凝膠柱,用pH5.6,含lmmol/L PLP和lmmol/L PMSF的50mmol/L磷酸鉀緩沖液反復洗脫,即得分離純化后的GAD。本發明通過控制發芽條件,采用降低氧分壓和低pH培養方式,采用含有Ca2+、H+的培養液,進行糙米發芽培養,使發芽糙米中富集GABA ;采用蒸氣滅酶技術,鈍化發芽糙米中Y -氨基丁酸轉氨酶(GABA-T)活性,提高GABA保存率的問題;采用低溫干燥工藝,降低發芽糙米中的水分至安全含水量并能夠達到產品較為疏松的結構,以利于后續的蒸煮糊化。以米糠、米胚芽作為GAD源,將其固定化后生產富集GABA的食品配料,并將其應用到GABA營養配合米粉生產中。加速開發富含GABA功能因子的食品材料,可作為或者用于抗高血壓、增進腦機能及肝功能的功能食品。


下面結合附圖和實施例對本發明作進一步說明。圖1是本發明的流程示意圖。
具體實施例方式實施例1:
(l)GABA(Y-氨基丁酸)制備:稱取200g的糙米(糙米由稻谷礱谷并除雜制備)置于淺盤中,先用自來水沖洗一遍,洗去表面的雜質和灰塵,再加入4倍體積的水于25°C下浸泡3h。將浸泡后的糙米均勻地攤于鋪有四層紗布的淺盤中,加入適量的水,蓋上濕潤的紗布,置于25°C下發芽24h并定時噴水。稱取50g發芽糙米,加入200mL水用高速組織搗碎機磨成漿狀,取一定量的糙米漿,在其中加入8.0mmol/L底物L-谷氨酸、0.2mmol/L輔酶PLP、0.2mmol/L激活劑CaCl2,在pH為6.1的PBS緩沖液中轉化生成GABA,控制轉化溫度為 37.5。。。(2)GAD (谷氨酸脫羧酶)提取:稱取IOOg的發芽糙米,加入50mmol/L磷酸緩沖液(pH5.7), 0.5mmol/L 維生素 B6,2mmol/L EDTA,0.2% 的 β -巰基乙醇,0.15mol/L NaCL 的提取緩沖液研磨勻漿,定容至IOOOmL,靜置提取2h后離心lOmin,上清液即為GAD提取液。(3)GAD(谷氨酸脫羧酶)分離純化:酶提取液中加入(NH4)2SO4至30%飽和度,4°C靜置lh,冷凍離心去除部分雜蛋白。上清液加入(NH4)2SO4至50%飽和度,4°C靜置lh,冷凍離心棄去上清液,收集沉淀。沉淀溶于標準緩沖液(50mmol/L磷酸鉀緩沖液,pH5.6, ImmoI/L PLP和lmmol/L PMSF)。在標準緩沖液中透析至無NH4+,得到GAD粗酶液,冷凍干燥保存。采用DEAE-Sephrose FF陰離子交換柱對米胚GAD進行分離,控制米胚GAD的等電點在4.5。分離采用50mmol/L、pH5.6、0.25mol/L NaCl濃度的磷酸鉀緩沖液進行梯度洗脫,再取一定量經離子交換色譜分離并透析除鹽的米胚GAD (蛋白質含量約為5mg/ml)上Superdex 200 凝膠柱,用 ρΗ5.6,含 lmmol/L PLP 和 lmmol/L PMSF 的 SOmmoI /I,憐酸鉀緩沖液反復洗脫,即得分離純化后的GAD。實施例2:
(l)GABA(Y-氨基丁酸)制備:稱取200g的糙米(糙米由稻谷礱谷并除雜制備)置于淺盤中,先用自來水沖洗一遍,洗去表面的雜質和灰塵,再加入4倍體積的水于30°C下浸泡6h。將浸泡后的糙米均勻地攤于鋪有四層紗布的淺盤中,加入適量的水,蓋上濕潤的紗布,置于30°C下發芽36h并定時噴水。稱取50g發芽糙米,加入200mL水用高速組織搗碎機磨成漿狀,取一定量的糙米漿,在其中加入8.5mmol/L底物谷氨酸鈉、輔酶PLP、0.2mmol/L激活劑CaCl2,在pH為6.2的PBS緩沖液中轉化生成GABA,控制轉化溫度為38.(TC。(2) GAD (谷氨酸脫羧酶)提取:稱取200g的糙米,加入提取液800ml (50mmol/L憐酸鉀緩沖液,pH5.6, 2mmol/L 疏基乙醇,2mmol/L EDTA, lmmol/L PLP, lmmol/L PMSF 和10%甘油),用高速分散器打成勻漿,四層紗布過濾,9000g、4°C離心25min,上清液即為米胚GAD提取液。(3)GAD(谷氨酸脫羧酶)分離純化:酶提取液中加入(NH4)2SO4至30%飽和度,4°C靜置lh,冷凍離心去除部分雜蛋白。上清液加入(NH4)2SO4至50%飽和度,4°C靜置lh,冷凍離心棄去上清液,收集沉淀。沉淀溶于標準緩沖液(50mmol/L磷酸鉀緩沖液,pH5.6, ImmoI/L PLP和lmmol/L PMSF)。在標準緩沖液中透析至無NH4+,得到GAD粗酶液,冷凍干燥保存。采用DEAE-Sephrose FF陰離子交換柱對米胚GAD進行分離,控制米胚GAD的等電點在4.6。分離采用50mmol/L、pH5.6、0.50mol/L NaCl濃度的磷酸鉀緩沖液進行梯度洗脫。再取一定量經離子交換色譜分離并透析除鹽的米胚GAD (蛋白質含量約為5mg/ml)上Superdex 200 凝膠柱,用 ρΗ5.6,含 lmmol/L PLP 和 lmmol/L PMSF 的 SOmmoI /I,憐酸鉀緩沖液反復洗脫,即得分離純化后的GAD。實施例3:
(l)GABA(Y-氨基丁酸)制備:稱取200g的糙米(糙米由稻谷礱谷并除雜制備)置于淺盤中,先用自來水沖洗一遍,洗去表面的雜質和灰塵,再加入4倍體積的水于35°C下浸泡9h。將浸泡后的糙米均勻地攤于鋪有四層紗布的淺盤中,加入適量的水,蓋上濕潤的紗布,置于30°C下發芽46h并定時噴水。稱取50g發芽糙米,加入200mL水用高速組織搗碎機磨成漿狀,取一定量的糙米漿,在其中加入9.0mmol/L底物谷氨酸鈉、輔酶PLP、0.2mmol/L激活劑CaCl2,在pH為6.3的PBS緩沖液(含50mmol/L磷酸緩沖液(pH5.7),0.2mmol/L磷酸吡哆醛(PLP),2mmol/L EDTA,0.2% 的 β -巰基乙醇,0.15mol/L NaCL)中轉化生成 GABA,控制轉化溫度為38.5°C。(2)GAD (谷氨酸脫羧酶)提取:稱取IOOg的發芽糙米,加入50mmol/L磷酸緩沖液(pH5.7),0.5mmol/L 維生素 B6,2mmol/L EDTA,0.2% 的 β -巰基乙醇,0.15mol/L NaCL 的提取緩沖液研磨勻漿,定容至IOOOmL,靜置提取2h后離心lOmin,上清液即為GAD提取液。(3)GAD(谷氨酸脫羧酶)分離純化:酶提取液中加入(NH4)2SO4至30%飽和度,4°C靜置lh,冷凍離心去除部分雜蛋白。上清液加入(NH4)2SO4至50%飽和度,4°C靜置lh,冷凍離心棄去上清液,收集沉淀。沉淀溶于標準緩沖液(50mmol/L磷酸鉀緩沖液,pH5.6, ImmoI/L PLP和lmmol/L PMSF)。在標準緩沖液中透析至無NH4+,得到GAD粗酶液,冷凍干燥保存。采用DEAE-Sephrose FF陰離子交換柱對米胚GAD進行分離,控制米胚GAD的等電點在4.7。分離采用50mmol/L、pH5.6、0.75mol/L NaCl濃度的磷酸鉀緩沖液進行梯度洗脫。再取一定量經離子交換色譜分離并透析除鹽的米胚GAD (蛋白質含量約為5mg/ml)上Superdex 200 凝膠柱,用 ρΗ5.6,含 lmmol/L PLP 和 lmmol/L PMSF 的 SOmmoI /I,憐酸鉀緩沖液反復洗脫,即得分離純化后的GAD。實施例4:
(l)GABA(Y-氨基丁酸)制備:稱取200g的糙米(糙米由稻谷礱谷并除雜制備)置于淺盤中,先用自來水沖洗一遍,洗去表面的雜質和灰塵,再加入4倍體積的水于35°C下浸泡12h。將浸泡后的糙米均勻地攤于鋪有四層紗布的淺盤中,加入適量的水,蓋上濕潤的紗布,置于35°C下發芽60h并定時噴水。稱取50g發芽糙米,加入200mL水用高速組織搗碎機磨成漿狀,取一定量的糙米漿,在其中加入9.5mmol/L底物谷氨酸鈉、輔酶PLP、0.2mmol/L激活劑CaCl2,在pH為6.4的PBS緩沖液(含50mmol/L磷酸緩沖液(pH5.7),0.5mmol/L維生素B6, 2mmol/L EDTA, 0.2%的β -巰基乙醇,0.15mol/L NaCL)中轉化生成GABA,控制轉化溫度為39.(TC。(2) GAD (谷氨酸脫羧酶)提取:稱取200g的糙米,加入提取液800ml (50mmol/L憐酸鉀緩沖液,pH5.6, 2mmol/L 疏基乙醇,2mmol/L EDTA, lmmol/L PLP, lmmol/L PMSF 和10%甘油),用高速分散器打成勻漿,四層紗布過濾,9000g、4°C離心25min,上清液即為米胚GAD提取液。(3)GAD(谷氨酸脫羧酶)分離純化:酶提取液中加入(NH4)2SO4至30%飽和度,4°C靜置lh,冷凍離心去除部分雜蛋白。上清液加入(NH4)2SO4至50%飽和度,4°C靜置lh,冷凍離心棄去上清液,收集沉淀。沉淀溶于標準緩沖液(50mmol/L磷酸鉀緩沖液,pH5.6, ImmoI/L PLP和lmmol/L PMSF)。在標準緩沖液中透析至無NH4+,得到GAD粗酶液,冷凍干燥保存。采用DEAE-Sephrose FF陰離子交換柱對米胚GAD進行分離,控制米胚GAD的等電點在4.6。分離采用50mmOl/L、pH5.6、1.00mOl/L NaCl濃度的磷酸鉀緩沖液進行梯度洗脫。再取一定量經離子交換色譜分離并透析除鹽的米胚GAD (蛋白質含量約為5mg/ml)上Superdex 200 凝膠柱,用 ρΗ5.6,含 lmmol/L PLP 和 lmmol/L PMSF 的 SOmmoI /I,憐酸鉀緩沖液反復洗脫,即得分離純化后的GAD。實施例5:
(I)GABA(y-氨基丁酸)制備:稱取200g的糙米(糙米由稻谷礱谷并除雜制備)置于淺盤中,先用自來水沖洗一遍,洗去表面的雜質和灰塵,再加入4倍體積的水于40°C下浸泡12h。將浸泡后的糙米均勻地攤于鋪有四層紗布的淺盤中,加入適量的水,蓋上濕潤的紗布,置于35°C下發芽72h并定時噴水。稱取50g發芽糙米,加入200mL水用高速組織搗碎機磨成漿狀,取一定量的糙米漿,在其中加入9.5mmol/L底物谷氨酸鈉、輔酶PLP、0.2mmol/L激活劑CaCl2,在pH為6.5的PBS緩沖液(含50mmol/L磷酸緩沖液(pH5.7),0.2mmol/L磷酸吡哆醛(PLP),2mmol/L EDTA, 0.2% 的 β -巰基乙醇,0.15mol/L NaCL)中轉化生成 GABA,控制轉化溫度為40.(TC。(2)GAD (谷氨酸脫羧酶)提取:稱取IOOg的發芽糙米,加入50mmol/L磷酸緩沖液(pH5.7), 0.5mmol/L 維生素 B6,2mmol/L EDTA, 0.2% 的 β -巰基乙醇,0.15mol/L NaCL 的提取緩沖液研磨勻漿,定容至IOOOmL,靜置提取2h后離心lOmin,上清液即為GAD提取液。(3)GAD(谷氨酸脫羧酶)分離純化:酶提取液中加入(NH4)2SO4至30%飽和度,4°C靜置lh,冷凍離心去除部分雜蛋白。上清液加入(NH4)2SO4至50%飽和度,4°C靜置lh,冷凍離心棄去上清液,收集沉淀。沉淀溶于標準緩沖液(50mmol/L磷酸鉀緩沖液,pH5.6, ImmoI/L PLP和lmmol/L PMSF)。在標準緩沖液中透析至無NH4+,得到GAD粗酶液,冷凍干燥保存。采用DEAE-Sephrose FF陰離子交換柱對米胚GAD進行分離,控制米胚GAD的等電點在4.7。分離采用50mmOl/L、pH5.6、1.30mOl/L NaCl濃度的磷酸鉀緩沖液進行梯度洗脫。再取一定量經離子交換色譜分離并透析除鹽的米胚GAD (蛋白質含量約為5mg/ml)上Superdex 200 凝膠柱,用 ρΗ5.6,含 lmmol/L PLP 和 lmmol/L PMSF 的 SOmmoI /I,憐酸鉀緩沖液反復洗脫,即得分離純化后的GAD。GABA 生成量:935.58 mg/L;谷氨酸轉化率:0.8351。
權利要求
1.一種稻谷內源性酶激活法生產高GABA功能食品材料的方法,其特征是: (1)在明確稻米內源性谷氨酸脫羧酶特性和活性調節機制的基礎上,采用谷氨酸脫羧酶激活技術,生產高GABA含量的稻米健康食品; (2)以富含GABA的發芽糙米為原料,采用鈍化分解GABA的轉氨酶預處理,生產留胚GABA精白米; (3)采用含有谷氨酸脫羧酶激活劑和特殊緩沖體系的天然培養液進行發芽; (4)以米糠、米胚芽作為GAD源,將其固定化后生產富集GABA的食品配料,并將其應用到GABA營養配合米粉生產中。
2.一種稻谷內源性谷氨酸脫羧酶的制備方法,其特征是:包括下列步驟: (O Y-氨基丁酸的制備:稱取糙米置于盤中,先用自來水沖洗一遍,洗去表面的雜質和灰塵,再加入4倍體積的水浸泡,將浸泡后的糙米均勻地攤于盤中,加入水,蓋上濕潤的紗布,發芽;然后稱取發芽糙米,加入水磨成漿狀,制成糙米漿;取一定量的糙米漿,在其中加入底物L-谷氨酸、輔酶PLP及激活劑CaCl2,在PBS緩沖液中轉化生成GABA ; (2)谷氨酸脫羧酶提取:稱取發芽糙米,加入由磷酸緩沖液、維生素B6、EDTA、β-巰基乙醇及NaCL組成的提取緩沖 液 研磨勻漿,靜置提取后離心,上清液即為谷氨酸脫羧酶提取液; (3)谷氨酸脫羧酶分離純化:谷氨酸脫羧酶提取液中加入(順4)404至30%飽和度,靜置,冷凍離心去除部分雜蛋白;上清液加入(NH4)2SO4至50%飽和度,靜置,冷凍離心棄去上清液,收集沉淀,沉淀溶于標準緩沖液;在標準緩沖液中透析至無NH4+,得到GAD粗酶液,冷凍干燥保存;采用DEAE-Sephrose FF陰離子交換柱對米胚GAD進行分離,控制米胚GAD的等電點在4.5 4.7,分離采用磷酸鉀緩沖液進行梯度洗脫;再取經上述處理得到的米胚GAD上Superdex 200凝膠柱,用磷酸鉀緩沖液反復洗脫,即得分離純化后的谷氨酸脫羧酶。
3.根據權利要求2所述的稻谷內源性谷氨酸脫羧酶的制備方法,其特征是:包括下列步驟: (1)Y-氨基丁酸制備:稱取200g的糙米置于盤中,先用自來水沖洗一遍,洗去表面的雜質和灰塵,再加入4倍體積的水于40°C下浸泡12h ;將浸泡后的糙米均勻地攤于鋪有四層紗布的盤中,加入水,蓋上濕潤的紗布,置于35°C下發芽72h,得發芽糙米;稱取50g發芽糙米,加入200mL水用高速組織搗碎機磨成楽;狀,得糙米楽;;取一定量的糙米衆,在其中加入·9.5mmol/L底物谷氨酸鈉、輔酶PLP、0.2mmol/L激活劑CaCl2,在pH為6.5的PBS緩沖液中轉化生成GABA,控制轉化溫度為40.(TC ; (2)谷氨酸脫羧酶提取:稱取IOOg的發芽糙米,加入50mmol/LpH5.7磷酸緩沖液,·0.5mmol/L 維生素 B6, 2mmol/L EDTA, 0.2% 的 β -巰基乙醇,0.15mol/L NaCL 的提取緩沖液研磨勻漿,定容至IOOOmL,靜置提取2h后離心lOmin,上清液即為GAD提取液; (3)谷氨酸脫羧酶分離純化:GAD提取液中加入(NH4)2SO4至30%飽和度,4°C靜置lh,冷凍離心去除部分雜蛋白,上清液加入(NH4)2SO4至50%飽和度,4°C靜置lh,冷凍離心棄去上清液,收集沉淀,沉淀溶于標準緩沖液,在標準緩沖液中透析至無NH4+,得到GAD粗酶液,冷凍干燥保存;采用DEAE-Sephrose FF陰離子交換柱對米胚GAD進行分離,控制米胚GAD的等電點在4.7 ;分離采用50mmol/L、pH5.6、1.30mol/L NaCl濃度的磷酸鉀緩沖液進行梯度洗脫;再取一定量經上述離子交換色譜分離并透析除鹽的米胚GAD上Superdex200凝膠柱,用pH5.6,含lmmol/L PLP和lmmol/L PMSF的50mmol/L磷酸鉀緩沖液反復洗脫,即得分離純 化后的GAD。
全文摘要
本發明公開了一種稻谷內源性酶激活法生產高GABA功能食品材料的方法,在明確稻米內源性谷氨酸脫羧酶特性和活性調節機制的基礎上,采用谷氨酸脫羧酶激活技術,生產高GABA含量的稻米健康食品;以富含GABA的發芽糙米為原料,采用鈍化分解GABA的轉氨酶預處理,生產留胚GABA精白米;采用含有谷氨酸脫羧酶激活劑和特殊緩沖體系的天然培養液進行發芽;以米糠、米胚芽作為GAD源,將其固定化后生產富集GABA的食品配料,并將其應用到GABA營養配合米粉生產中。本發明方法簡便,可以加速開發富含GABA功能因子的食品材料,可作為或者用于抗高血壓、增進腦機能及肝功能的功能食品。
文檔編號A23L1/29GK103181523SQ20131009556
公開日2013年7月3日 申請日期2013年3月25日 優先權日2013年3月25日
發明者王立峰, 陳靜宜 申請人:南京財經大學, 王立峰
網友詢問留言 已有0條留言
  • 還沒有人留言評論。精彩留言會獲得點贊!
1
韩国伦理电影