專利名稱：一種蛋清粉源糖肽的制備工藝的制作方法
技術領域：
本發明屬于食品制備的技術領域，涉及一種具有體外抗S180肉瘤細胞作用的蛋清粉源糖肽制備工藝。
背景技術：
糖蛋白(Glycoprotein)是一種糖鏈通過共價鍵與蛋白質或者多肽結合形成的結合蛋白質。大多數情況下，糖鏈所占比例遠小于蛋白質或者多肽。糖蛋白作為一種蛋白質糖基化修飾物，普遍存在于生物體內，參與細胞分化、免疫調解、腫瘤轉移等機體功能活動。在生物體外，源于食物的植物糖蛋白及動物糖蛋白也呈現了不同程度的功能作用，如金蠔蘑中提取得到的糖蛋白成分對U937白血病細胞具有生長抑制作用；山藥糖蛋白的抗氧化活性；甘薯可溶性蛋白的降血脂及增強免疫力活性等。糖肽(Glycopeptide) 作為糖蛋白的酶解產物同樣擁有多種生理活性。TakashiY，Hisanori T, Hifumi 0, et al.的文章 Interaction betweenl20kDa fragment in -subunit from egg white ovomucin and Sarcoma_180cells through basic fibroblastgrowth factor receptor [J].Food Sci Technol, 2000，6 (4): 275-279.給出從鮮蛋清中提取得到卵粘蛋白酶解片段的方法，并指出產物能有效抑制S180肉瘤細胞生長。但是，公開的卵粘蛋白酶解片段的制備方法過程繁雜，并不利于環境保護。
發明內容
本發明要解決的技術問題是，克服背景技術的缺點，提供一種蛋清粉源功能性糖肽的制備方法，得到一種在體外可抑制S180肉瘤細胞生長的糖肽。本發明工藝參數是經過單因素結合Box-Behnken響應面法優化而來。具體技術方案如下:一種蛋清粉源糖肽的制備工藝，取鮮蛋清粉加水溶解，料液質量比為1: 3 4，添加NaCl，使NaCl在水中的濃度為100 300mmol/L，在40 50°C溫度下提取30 50min，濾過不溶物得到濾液；按照濾液與賽維試劑(sevage試劑)體積比1: 2 3的比例在濾液中添加賽維試劑，脫蛋白30 50min，取上層提取液；按上層提取液計80 100U/g的埃爾克斯酶(alcalase酶)添加到上層提取液中，在pH值8 10，溫度40 60°C下酶解80 120min,滅酶,酶解液冷凍干燥得到目標物。本發明最佳的技術方案見實施例3。所述的賽維試劑，是正丁醇與氯仿按體積比為1: 3 4的混合物。制得的目標物，即蛋清粉源糖肽可以在4°C冷藏備用。使用本發明方法制得的目標物是蛋清粉源糖肽。目標物經紫外光譜測定，在280nm及220nm波長下均存在紫外吸收峰，說明氨基與糖基在目標物中同時存在；測試表明，蛋清粉源糖肽對S180肉瘤細胞具有體外抑制作用。所述的蛋清粉源糖肽的水解度在19.77% 21.83%。
本發明的方法過程簡單，反應條件溫和，成本低，產物活性高易溶于水，對環境沒有任何污染；制得的具有體外抗S180肉瘤細胞作用的蛋清粉源糖肽，在糖肽濃度40 100ug/mL范圍內對S180肉瘤細胞的抑制率可達23.45% 43.89%。
具體實施例方式以下結合實施例來進一步解釋本發明，但實施例并不對本發明做任何限定。實施例1本發明優選的實施方式(I)取新鮮蛋清粉，溫和條件下加水溶解，料液質量比為1: 3，適當添加NaCl，濃度控制在100mM/L,在50°C溫度下提取50min,濾過不溶物得濾液。按照體積比濾液:sevage試劑為1: 3的比例添加sevage試劑,其中sevage試劑中的正丁醇與氯仿體積比例為1: 3,脫蛋白50min，取上層提取液。酶添加量按上層提取液計，范圍控制在80U/g添加alcalase酶進行酶解，pH值為10，酶解時間80min，溫度60°C，所得蛋清粉源糖肽的水解度為19.91%。最后滅酶，酶解液冷凍干燥得到目標物。實施例2本發明優選的實施方式(2)取新鮮蛋清粉，溫和條件下加水溶解，料液質量比為1: 4，適當添加NaCl，濃度控制在300mM/L,在40°C溫度下提取30min,濾過不溶物得濾液。按照體積比濾液:sevage試劑為1: 2的比例添加sevage試劑,其中sevage試劑中的正丁醇與氯仿體積比例為1: 4,脫蛋白30min，取上層提取液。酶添加量按上層提取液計，范圍控制在100U/g添加alcalase酶進行酶解，pH值為8，酶解時間120min，溫度40°C，所得蛋清粉源糖肽的水解度為19.77%。最后滅酶，酶解液冷凍干燥得到目標物。實施例3本發明的最佳實施方式取新鮮蛋清粉，溫和條件下加水溶解，料液質量比為1: 4，適當添加NaCl，使NaCl的濃度控制在100mM/L，在45.5 46°C溫度下提取38 38.5min，濾過不溶物得濾液。按照體積比濾液:sevage試劑為1: 3的比例添加sevage試劑,其中sevage試劑中的正丁醇與氯仿體積比例為1: 4，脫蛋白37 37.5min，取上層提取液。酶添加量按上層提取液計，范圍控制在92U/g添加alcalase酶進行酶解，pH值為9.3 9.5，酶解時間116min，溫度50.5 51°C，所得蛋清粉源糖肽的水解度為21.83%。最后滅酶，酶解液冷凍干燥得到目標物。實施例4對本發明方法制得的產物抗體外S180肉瘤細胞作用的測試RPM1-1640干粉按照1%的濃度溶解于去離子水，調解pH值在7.0 7.2范圍內，過濾除菌，加青霉素和鏈霉素各100U/mL，加10%小牛血清配制成完全培養液。S180肉瘤細胞接種于培養基，溫度37°C，CO2濃度5%飽和濕度培養箱條件下傳代培養，取對數期細胞配制成1.5 X 105/mL溶液，96孔板(除四周36孔)每孔添加100 u L，培養24h后，加入不同濃度由完全培養液配制而成的蛋清粉源糖肽溶液100 u L，設立空白對照組，每組6個復孔，置于CO2培養箱中培養24h、48h后，MTT法570nm波長下測吸光度OD值，計算S180肉瘤細胞
抑制率。
權利要求
1.一種蛋清粉源糖肽的制備工藝，取鮮蛋清粉加水溶解，料液質量比為1: 3 4，添加NaCl，使NaCl在水中的濃度為100 300mmol/L，在40 50°C溫度下提取30 50min，濾過不溶物得到濾液；按照濾液與賽維試劑體積比1: 2 3的比例在濾液中添加賽維試齊U，脫蛋白30 50min，取上層提取液；按上層提取液計80 100U/g的埃爾克斯酶添加到上層提取液中，在pH值8 10，溫度40 60°C下酶解80 120min，滅酶，酶解液冷凍干燥得到目標物。
2.根據權利要求1所述的蛋清粉源糖肽的制備工藝，其特征在于，取鮮蛋清粉加水溶解，料液質量比為1: 4，添加NaCl，使NaCl在水中的濃度為100mmol/L，在45.5 46°C溫度下提取38 38.5min，濾過不溶物得到濾液；按照濾液與賽維試劑體積比1: 3的比例在濾液中添加賽維試劑，脫蛋白37 37.5min，取上層提取液；按上層提取液計92U/g的埃爾克斯酶添加到上層提取液中，在PH值9.3 9.5，溫度50.5 51°C下酶解116min，滅酶，酶解液冷凍干燥得到目標物。
3.根據權利要求1或2所述的蛋清粉源糖肽的制備工藝，其特征在于，所述的賽維試齊U，是正丁醇與氯仿按體積比為1: 3 4的混合物。
4.一種權利要求1 蛋清粉源糖肽的制備工藝制得的目標物蛋清粉源糖肽。
5.根據權利要求4所述的目標物蛋清粉源糖肽，其特征在于，所述的蛋清粉源糖肽紫外光譜測定，在280nm及220nm波長下均存在紫外吸收峰，并對S180肉瘤細胞具有體外抑制作用。
6.根據權利要求4或5所述的目標物蛋清粉源糖肽，其特征在于，所述的蛋清粉源糖肽，水解度在19.77% 21.83%。
全文摘要
本發明的一種蛋清粉源糖肽的制備工藝屬于食品制備的技術領域。取鮮蛋清粉加水溶解，添加NaCl進行水浸提，得到濾液；在濾液中添加sevage試劑脫蛋白，取上層提取液；將alcalase酶添加到上層提取液中，在pH值8～10，溫度40～60℃下酶解80～120min，滅酶，酶解液冷凍干燥得到目標物蛋清粉源糖肽。本發明提供一種簡單、低成本、活性高的蛋清粉源糖肽的制備方法，產物易溶于水，在糖肽濃度40～100ug/mL范圍內對S180肉瘤細胞的抑制率可達23.45%～43.89%。
文檔編號C12P21/06GK103224969SQ201310099419
公開日2013年7月31日 申請日期2013年3月26日 優先權日2013年3月26日
發明者劉靜波, 陸春婷, 張燕 申請人:吉林大學