專利名稱：一種白子菜總咖啡酰奎寧酸的制備方法和在抗糖尿病藥物或保健品中的應用的制作方法
技術領域：
本發明屬于中藥領域，具體涉及一種從中藥白子菜中提取和制備總咖啡酰奎寧酸有效部位的方法及該有效部位在治療糖尿病藥物或保健品中的應用。
背景技術：
白子菜(Gynura bicolor DC.)為菊科(Compositae)三七草屬多年生草本植物，又名白背三七，主要分布于我國南方地區。白子菜在江蘇、浙江、四川和福建民間，摘取其新鮮葉片或以莖葉沖茶煮水服用，對治療糖尿病有較好的療效。2000年江蘇省中國科學院植物研究所開始引種栽培，并針對糖尿病治療開展化學成分的研究工作。化學成分研究表明，白子菜主要含有生物堿類、黃酮類、腦苷脂類、有機酸以及腺苷、尿苷等其它類型的化合成分。動物藥理試驗證實，白子菜的水提物具有顯著的降血糖活性(胡勇等，西南林學院學報，2007,27(1):55-58 ;馬正東等，白背三七水提取物對2型糖尿病大鼠的降血糖作用及其機制，中草藥，2010，41(4)，623-626)。已公開的發明專利200710084533.2,200610052502.4,201110372288.1均指出白子菜具有抗糖尿病的作用。在2型糖尿病的臨床治療中，糖苷水解酶抑制劑諸如α -葡萄糖苷酶、麥芽糖酶和蔗糖酶抑制劑是一類以延緩腸道碳水化合物吸收而達到治療糖尿病的口服降糖藥物。由于α -葡萄糖苷酶與糖尿病的緊密聯系，藥物學家一直致力于尋找該類酶的抑制劑，以開發更多的治療糖尿病藥物。目前，已進入市場并在臨床上廣泛使用的α-葡萄糖苷酶抑制劑類降糖藥主要有:阿卡波糖(acarbose)、伏格列波糖(voglibose)、米格列醇(miglitol)等。蛋白酪氨酸憐酸酶IB (protein tyrosine phosphatase-ΙΒ, PTP1B)是糖尿病研究中的一個重要靶標。作為典型的非受體型PTPase家族的成員之一，PTPlB在胰島素信號通路中通過負向調節胰島素受體(insulin receptor),從而達到控制血糖的作用。尋找PTPlB的特異性抑制劑，通過抑制PTPlB的活性來提高胰島素信號通路的敏感性，對糖尿病的治療有著重要的應用前景。
發明內容
本發明的目的是發現并提供白子菜中的抗糖尿病有效化學部位。為了達到上述目的，本發明提供了白子菜總咖啡酰奎寧酸的制備方法及其在制備抗糖尿病藥物或保健品中的用途。本發明提供的白子菜總咖啡酰奎寧酸有效部位，以白子菜的干燥地上部分為原料，通過以下操作步驟制備得到:(I)將白子菜地上部分干燥和粉碎后，用質量百分比濃度為60-100%乙醇溶液回流提取，料液比6 10倍(L/kg)，提取次數為1-3次，提取溫度為50-80°C，提取時間為1_3小時，合并提取液 ，過濾，濾液減壓濃縮至無醇味，真空干燥得到粗提物粉末。(2)步驟(I)所述乙醇粗提物粉末，先用一定體積的2 5%鹽酸水溶液溶解，過濾后濾液用乙酸乙酯萃取2次，合并乙酸乙酯層，回收溶劑，得到乙酸乙酯萃取物。(3)步驟(2)所述乙酸乙酯萃取物再經低濃度乙醇水復溶，流經大孔樹脂柱DlOl吸附，先用去離子水沖洗樹脂，再用水乙醇梯度洗脫，收集乙醇濃度為40-60%之間的洗脫液，減壓濃縮，干燥，得到總咖啡酰奎寧酸有效部位。以上述方法制備得到的白子菜總咖啡酰奎寧酸有效部位，包括以下活性成分:3，
4-0-二咖啡酰奎寧酸，3，5-0- 二咖啡酰奎寧酸，4，5-0- 二咖啡酰奎寧酸，3,4-0- 二咖啡酰奎寧酸甲酯，3，5-0- 二咖啡酰奎寧酸甲酯，4，5-0- 二咖啡酰奎寧酸甲酯。以干品重量計算，該有效部位中總酚酸的質量百分含量> 50%。上述白子菜總咖啡酰奎寧酸有效部位具有α -葡萄糖苷酶、蛋白酪氨酸磷酸酶IB抑制劑作用，可以應用于制備抗糖尿病藥物或保健品。所述抗糖尿病藥物或保健品分別為含有治療有效劑量或功效成分的白子菜總咖啡酰奎寧酸有效部位在藥學上可接受的載體和保健食品。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明作進一步詳細的描述，但本發明的實施方式不限于此。實施例1:取白子菜干燥地上部分300g，粉碎，用質量百分比濃度為80%的乙醇溶液3000mL在70°C下回流提取2次，合并提取液，過濾，減壓濃縮至無醇味，真空干燥得到粗提物粉末；將上述粗提物粉 末，先用一定體積的2%的鹽酸水溶液溶解，過濾后濾液用500mL乙酸乙酯萃取2次，合并乙酸乙酯層，回收溶劑，得到乙酸乙酯提取物。稱取大孔吸附樹脂(DlOl)600g，加入蒸餾水在室溫下放置過夜，使樹脂充分溶脹，濕法裝柱，用95%乙醇流動清洗柱子至流出液與水的體積比為1: 5混合時不呈白色渾濁，然后用蒸餾水充分淋洗柱子至流出液無乙醇味，放置過夜；上述乙酸乙酯提取物經10%乙醇水(v/v)溶解，過濾，濾液緩緩流過上述處理和平衡過的大孔樹脂柱，先用去離子水沖洗，再用不同濃度的乙醇梯度洗脫，收集乙醇濃度為40-60%之間的洗脫液，流出液經TLC展開，噴灑5%的FeCl3乙醇溶液顯藍綠色；減壓濃縮收集液，冷凍干燥，得到總咖啡酰奎寧酸有效部位。以干品重量計算，該部位中總酚酸的質量百分含量> 50%。以上得到的總咖啡酰奎寧酸有效部位用一定體積色譜純甲醇溶解，45 μ m微孔濾膜過濾，進行制備型高效液相色譜(Agilent Prep-HPLCllOO)分離,色譜方法如下:流動相:A水(0.1%甲酸)，B乙腈；洗脫方法:等度洗脫，20% B，0_30mmin ;線性洗脫，20-30% B,30-55min ;線性洗脫 30-20 %, 55-57min ;流速 6mL/min，室溫，檢測波長325nm,進樣體積每次 250 μ L,運行時間 57mins, C18 柱(21.2mm IDX 1 50mm, 5 μ m)分離，自動餾分收集器峰觸發模式收集餾分。分別收集餾分，減壓濃縮并經高真空干燥，得到6個咖啡酰奎寧酸類化合物，根據MS和NMR數據與文獻比較，鑒定它們的結構分別為:3，4-0_ 二咖啡酰奎寧酸(I)，3，
5-0-二咖啡酰奎寧酸(2)，4，5-0-二咖啡酰奎寧酸(3)，3，4-0_二咖啡酰奎寧酸甲酯(4)，3，5-0-二咖啡酰奎寧酸甲酯(5)，4，5-0-二咖啡酰奎寧酸甲酯(6);除化合物3，5_0_ 二咖啡酰奎寧酸(2)外，其它5個咖啡酰奎寧酸衍生物均為首次從白子菜中分離得到。各化合物的結構如下所示:
權利要求
1.一種白子菜總咖啡酰奎寧酸的制備方法及其在抗糖尿病藥物或保健品中的應用，其特征在于白子菜總咖啡酰奎寧酸的制備方法包括以下操作步驟:將白子菜地上部分干燥和粉碎后，以乙醇溶液回流提取，提取液過濾，減壓濃縮至無醇味，真空干燥得到粗提物粉末。粗提物粉末經鹽酸水溶液溶解，濾液用乙酸乙酯萃取，再經大孔樹脂吸附，水乙醇梯度洗脫，洗脫液濃縮、干燥。白子菜總咖啡酰奎寧酸的用途包括其在抗糖尿病藥物或(和)保健品中的應用。
2.根據權利要求1所述的白子菜粗取物，其特征在于:所述乙醇溶液的質量百分比濃度為60-100%，用量為6-10倍藥材質量體積，提取次數為1-3次，提取溫度為50-80°C，提取時間為1-3小時。
3.根據權利要求1所述的白子菜總咖啡酰奎寧酸的制備方法，其特征在于:所述經一定濃度乙醇溶液提取并干燥得到的粗提物粉末，先用一定體積的2 5%鹽酸水溶液溶解，過濾，濾液用乙酸乙酯萃取2次，合并乙酸乙酯層，回收溶劑，得到乙酸乙酯提取物；再經低濃度乙醇水復溶，流經大孔樹脂柱DlOl吸附，先用去離子水沖洗樹脂，再用水乙醇梯度洗脫，收集乙醇濃度為40-60%之間的洗脫液，減壓濃縮，干燥，得到總咖啡酰奎寧酸有效部位。
4.根據權利要求2和3所述方法得到的總咖啡酰奎寧酸有效部位，其特征在于該有效部位包括以下活性成分:3，4-0- 二咖啡酰奎寧酸，3，5-0- 二咖啡酰奎寧酸，4，5-0- 二咖啡酰奎寧酸，3，4-0- 二咖啡酰奎寧酸甲酯，3，5-0- 二咖啡酰奎寧酸甲酯，4，5-0- 二咖啡酰奎寧酸甲酯。
5.根據權利要求4所述的白子菜總咖啡酰奎寧酸有效部位，其特征在于:以白子菜總咖啡酰奎寧酸有效部位的干品重量計算，白子菜總咖啡酰奎寧酸有效部位總酚酸的質量百分含量> 50 %。
6.根據權利要求1、4、5所述的白 子菜總咖啡酰奎寧酸有效部位在制備抑制α-葡萄糖苷酶、蛋白酪氨酸磷酸酶IB的抗糖尿病藥物或保健品上的應用。
全文摘要
本發明公開了一種白子菜總咖啡酰奎寧酸的制備方法及其在抗糖尿病藥物或保健品中的應用。該白子菜總咖啡酰奎寧酸有效部位以菊三七屬植物白子菜(Gynura divaricata)的地上部分為原料，制備方法包括將白子菜干燥地上部分經一定濃度乙醇回流提取，濾濃縮干燥，再以鹽酸水溶解，過濾，濾液經乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取物經低濃度乙醇復溶，經大孔樹脂水乙醇梯度洗脫，富集酚酸類成分，回收溶劑，干燥，得到總咖啡酰奎寧酸有效部位。本發明制備的白子菜總咖啡酰奎寧酸對腸道碳水化合物水解酶α-葡萄糖苷酶以及糖尿病研究的重要靶標一蛋白酪氨酸磷酸酶1B均具有顯著的抑制作用，可作為輔助治療糖尿病的藥物或保健品進一步研究開發。本發明為白子菜治療糖尿病的民間應用提供了一定的科學依據，而且為開發安全、高效的新型抗糖尿病藥物或保健品提供了新資源。
文檔編號A23L1/29GK103239435SQ20131015228
公開日2013年8月14日 申請日期2013年4月28日 優先權日2013年4月28日
發明者陳劍, 李維林, 任冰如, 馬麗, 呂寒, 劉艷 申請人:江蘇省中國科學院植物研究所