枯草芽孢桿菌Jaas ed1無細胞濾液胞外合成納米銀粒子的方法
【專利摘要】本發明公開了一種枯草芽孢桿菌Jaas?ed1無細胞濾液胞外合成納米銀粒子的方法，包括以下步驟：1)枯草芽孢桿菌Jaas?ed1無細胞濾液的制備，其中包括一次振蕩培養、一次離心處理、收集菌體、二次振蕩培養、二次離心處理；2)納米銀粒子的合成與表征。本發明采用枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)Jaas?ed1無細胞濾液，通過胞外合成納米銀粒子。經紫外/可見光分光光度計全波長掃描(UV-vis)、透射電子顯微鏡掃描(TEM)、X射線粉末衍射分析(XRD)、傅里葉變換紅外光譜分析(FT-IR)等方法驗證所合成的納米銀粒子粒度在20～50nm之間，形態均一，分散性較好。因此本發明條件溫和，既簡便快捷，又經濟環保，所用試劑環境友好，為納米銀的綠色合成提供了一種新的思路。
【專利說明】枯草芽孢桿菌Jaas edl無細胞濾液胞外合成納米銀粒子的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及微生物及納米材料領域，尤其涉及一種枯草芽孢桿菌Jaas edl無細胞濾液胞外制備銀納米粒子的方法。
【背景技術】
[0002]以細菌、真菌、病毒等微生物為侵染源的植物病害種類繁多，對現代種植業構成重大威脅。目前，各種有機殺菌劑農藥的使用非常普遍與頻繁，導致了十分嚴重的農藥污染與病原菌抗藥性問題。銀作為傳統殺菌劑，具有高效、安全無毒、抗菌譜廣、無耐藥性等優點， 但由于銀離子化學性質活潑，在光照、受熱等作用下容易被氧化，且易與鹵族元素陽離子形成鹵化銀沉淀，從而導致抗菌性能的下降。納米銀與銀離子相比，具有比表面積大，抑菌活性強和穩定性高等優點，已廣泛應用于醫藥載體、水質凈化、抗菌涂料、催化等領域(Mallic K, 2006) o但是納米銀在農業病害防治方面應用的報道較少，Kim (2012), Marek (2010)和 Jo (2009)等分別報道了不同形態納米銀粒子對多種植物病原真菌的拮抗作用，顯示了納米銀在植物病害防治領域具有廣闊的應用前景。
[0003]目前納米銀制備方法主要采用液相化學還原法、光化學還原法、微乳液法等化學方法和高能球磨、激光濺射、激光燒蝕等物理方法(周全法，2008)。物理方法所得產品質量高，但對設備要求和能耗較高，且對納米銀顆粒形貌的調控能力有限，不利于工業化生產；化學方法由于其工藝相對簡單，操作相對容易，生產成本較低，是較常采用的方法，但其所用的化學試劑對人體和環境有一定的危害(Andersson M，2005)。采用生物材料或生物體系天然合成納米材料是解決生態友好及可靠性問題的一種較好的方法。近年來，納米材料制備過程綠色化的研究日趨活躍，因其具有安全、環保、反應條件溫和、所得納米銀粒子穩定性高等優點，微生物還原法成為具有發展前景的納米銀制備新方法(Prasad TN, 2011 ；Krishnan V，2010)。當前用于合成納米銀的微生物主要來自于細菌(Sahar Z，2011 ； Sintubin L, 2009)和真菌(Musarrat J, 2010 ；Kathiresan K, 2009)。細菌相對于真菌而言， 具有繁殖速度快、遺傳轉化操作簡單等優點，因而更多地被用于合成納米銀粒子。細菌合成納米銀粒子主要采用菌液胞內合成與上清液胞外合成兩種方法，由于Ag+具有較強的殺菌作用，只有少數對Ag+有較強抗性的菌株才能采用菌液胞內合成的方法，因此具有較大的局限性，同時菌液合成的納米銀顆粒大多吸附在菌體細胞壁表面或內部，后期分離困難。而上清液胞外合成法因為選用細菌上清液，所以不存在拮抗Ag+的問題，同時后期分離方便快捷，已成為細菌合成納米銀方法研究的重點。已有報道表明陰溝腸桿菌(Enterobacter cloacae) (Shahverdi AR, 2007)、地衣芽抱桿菌(Bacillus licheniform) (Kalimuthu K, 2008)可采用上清液胞外合`成法合成納米銀粒子。
【發明內容】
[0004]本發明所要解決的技術問題是針對上述現有技術的不足，提供一種反應條件溫和，既簡便快捷，又經濟環保的枯草芽孢桿菌Jaas edl胞外合成納米銀粒子制備方法。[0005]為解決上述技術問題，本發明采取的技術方案為:一種枯草芽孢桿菌Jaas edl無細胞濾液胞外合成納米銀粒子的方法，包括以下步驟:
[0006]1)枯草芽孢桿菌Jaas edl無細胞濾液的制備:
[0007]—次振蕩培養:將枯草芽孢桿菌Jaas edl放入裝有100毫升LB培養基的搖瓶中， 30°C振蕩培養，振蕩培養的轉速為150轉/分鐘，時間為12-24個小時，獲得枯草芽孢桿菌 Jaas edl培養液；
[0008]一次離心處理:將經過振蕩培養的枯草芽孢桿菌Jaas edl培養液進行離心處理， 離心轉速為5000轉/分鐘，時間為15-30分鐘；
[0009]收集菌體:將經過一次離心處理的枯草芽孢桿菌Jaas edl培養液中的菌體收集， 并將枯草芽孢桿菌Jaas edl菌體用去離子水蕩洗3次，以去除殘留的LB培養基；
[0010]二次振蕩培養:將經過上述收集菌體步驟處理后的枯草芽孢桿菌Jaas edl菌體重懸于100毫升去離子水中，30°C二次振蕩培養，二次振蕩培養的轉速為150轉/分鐘，時間為12-36個小時，獲得枯草芽孢桿菌Jaas edl菌體懸液；
[0011]二次離心處理:將上述經過二次振蕩處理的枯草芽孢桿菌Jaas edl菌體懸液進行二次離心處理，二次離心處理的轉速為12000轉/分鐘，時間為15-30分鐘，以將枯草芽孢桿菌Jaas edl菌體及其碎片與上清液分離；
[0012]收集上清液:將經過上述二次離心處理后產生的上清液收集，然后將收集的上清液用孔徑為0.22 y m的濾膜過濾，獲得枯草芽孢桿菌Jaas edl無細胞濾液；
[0013]2)納米銀粒子的合成與表征:
[0014]首先，取步驟I)中制得的枯草芽孢桿菌Jaas edl無細胞濾液100毫升，加入 100-200 u I濃度為lmol/L的AgNO3,并在室溫放置24-72個小時；接著進行離心處理，離心毫升速為15000轉/分鐘，時間為30-60分鐘；離心結束后，將沉淀物收集，再將收集的沉淀物用無水乙醇蕩洗3次，然后將沉淀物在60°C的溫度下烘干成粉末，制得納米銀粒子。
[0015]作為本發明進一步改進的技術方案，在步驟2)中，枯草芽孢桿菌Jaas edl無細胞濾液與AgNO3體積比為I毫升:1_2微升。
[0016]作為本發明進一步改進的技術方案，在步驟2)中，所述銀納米粒子的粒徑在 20-50納米之間。
[0017]作為本發明進一步改進的技術方案，步驟I)中，所述一次振蕩的時間為12個小時，一次離心處理的時間為15分鐘，二次振蕩的時間為12個小時，二次離心處理的時間為 30分鐘；步驟2)中，向枯草芽孢桿菌Jaas edl無細胞濾液中加入的AgNO3為200微升，離心處理的時間為30分鐘。
[0018]作為本發明進一步改進的技術方案，步驟I)中，所述一次振蕩的時間為12個小時，一次離心處理的時間為15分鐘，二次振蕩的時間為24個小時，二次離心處理的時間為 30分鐘；步驟2)中，向枯草芽孢桿菌Jaas edl無細胞濾液中加入的AgNO3為100微升，室溫放置時間為36個小時，離心處理的時間為50分鐘。
[0019]作為本發明進一步改進的技術方案，在步驟I)中，所述一次振蕩的時間為24個小時，一次離心處理的時間為15分鐘，二次振蕩的時間為36個小時，二次離心處理的時間為 30分鐘；步驟2)中，向枯草芽孢桿菌Jaas edl無細胞濾液中加入的AgNO3為150微升，室溫放置時間為24個小時，離心處理的時間為30分鐘。
[0020]作為本發明進一步改進的技術方案，在步驟I)中，所述一次振蕩的時間為24個小時，一次離心處理的時間為30分鐘，二次振蕩的時間為36個小時，二次離心處理的時間為 30分鐘；步驟2)中，向枯草芽孢桿菌Jaas edl無細胞濾液中加入的AgNO3為200微升，室溫放置時間為72個小時,離心處理的時間為60分鐘。
[0021]本發明采用枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) Jaas edl無細胞濾液,所用枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) Jaas edl菌株為江蘇省農科院植保所自棉花莖桿內分離保存，經鑒定為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)，于2005年12月12日由中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心收藏保存，保藏號CGMCC N0.1564。通過胞外合成納米銀粒子，因此本發明條件溫和，既簡便快捷，又經濟環保，所用試劑環境友好。為納米銀的綠色合成提供了一種新的思路。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0022]圖1本發明實施例1所制備的納米銀粒子的紫外-可見光譜圖。
[0023]圖2本發明實施例1所制備的納米銀粒子的透射電鏡掃描圖。
[0024]圖3本發明實施例1所制備的納米銀粒子的X射線粉末衍射掃描圖。
[0025]圖4本發明實施例1所制備的納米銀粒子的傅里葉變換紅外光譜掃描圖。
[0026]下面通過實施例對本發明的【具體實施方式】作進一步說明。
【具體實施方式】
[0027]實施例1
[0028]本枯草芽孢桿菌Jaas edl無細胞濾液胞外合成納米銀粒子的方法，包括以下步驟:
[0029]I)枯草芽孢桿菌Jaas edl無細胞濾液的制備:
[0030]—次振蕩培養:將枯草芽孢桿菌Jaas edl放入裝有100毫升LB培養基的搖瓶中， 30°C振蕩培養，振蕩培養的轉速為150轉/分鐘，時間為12個小時，獲得枯草芽孢桿菌Jaas edl培養液；
[0031]一次離心處理:將經過振蕩培養的枯草芽孢桿菌Jaas edl培養液進行離心處理， 離心轉速為5000轉/分鐘，時間為30分鐘；
[0032]收集菌體:將經過一次離心處理的枯草芽孢桿菌Jaas edl培養液中的菌體收集， 并將枯草芽孢桿菌Jaas edl菌體用去離子水蕩洗3次，以去除殘留的LB培養基；
[0033]二次振蕩培養:將經過上述收集菌體步驟處理后的枯草芽孢桿菌Jaas edl菌體重懸于100毫升去離子水中，30°C二次振蕩培養，二次振蕩培養的轉速為150轉/分鐘，時間為24個小時，獲得枯草芽孢桿菌Jaas edl菌體懸液；
[0034]二次離心處理:將上述經過二次振蕩處理的枯草芽孢桿菌Jaas edl菌體懸液進行二次離心處理，二次離心處理的轉速為12000轉/分鐘，時間為30分鐘，以將枯草芽孢桿菌Jaas edl菌體及其碎片與上清液分離；
[0035]收集上清液:將經過上述二次離心處理后產生的上清液收集，然后將收集的上清液用孔徑為0.22 y m的濾膜過濾，獲得枯草芽孢桿菌Jaas edl無細胞濾液；[0036]2)納米銀粒子的合成與表征:
[0037]首先，取步驟I)中制得的枯草芽孢桿菌Jaas edl無細胞濾液100毫升，然后向枯草芽孢桿菌Jaas edl無細胞濾液中加入200 u L濃度為lmol/L的AgNO3,并在室溫放置24 個小時；接著進行離心處理，離心毫升速為15000轉/分鐘，時間為30分鐘；離心結束后，將沉淀物收集，再將收集的沉淀物用無水乙醇蕩洗3次，然后將沉淀物在60°C的溫度下烘干成粉末，制得納米銀粒子。
[0038]如圖1、圖2、圖3和圖4所示，用透射電鏡(TEM)觀察本實施例制得的納米銀粒子， 其中銀納米顆粒的形貌均為近球形，粒徑分布在20-50納米。本實施例中所用枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) Jaas edl菌株為江蘇省農科院植保所自棉花莖桿內分離保存，經鑒定為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis),于2005年12月12日由中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(地址北京市朝陽區北辰西路I號院中科院微生物研究所)收藏保存，保藏號CGMCC N0.1564。
[0039]實施例2
[0040]本枯草芽孢桿菌Jaas edl無細胞濾液胞外合成納米銀粒子的方法，包括以下步驟:
[0041]I)枯草芽孢桿菌Jaas edl無細胞濾液的制備:
[0042]—次振蕩培養:將枯草芽孢桿菌Jaas edl放入裝有100毫升LB培養基的搖瓶中， 30°C振蕩培養，振蕩培養的轉速為150轉/分鐘，時間為12個小時，獲得枯草芽孢桿菌Jaas edl培養液；
[0043]一次離心處理:將經過振蕩培養的枯草芽孢桿菌Jaas edl培養液進行離心處理， 離心轉速為5000轉/分鐘，時間為15分鐘；
[0044]收集菌體:將經過一次離心處理的枯草芽孢桿菌Jaas edl培養液中的菌體收集， 并將菌體用去離子水蕩洗3次，以去除殘留的LB培養基；
[0045]二次振蕩培養:將經過上述收集菌體步驟處理后的枯草芽孢桿菌Jaas edl菌體重懸于100毫升去離子水中，30°C二次振蕩培養，二次振蕩培養的轉速為150轉/分鐘，時間為24個小時，獲得枯草芽孢桿菌Jaas edl菌體懸液；
`[0046]二次離心處理:將上述經過二次振蕩處理的枯草芽孢桿菌Jaas edl菌體懸液進行二次離心處理，二次離心處理的轉速為12000轉/分鐘，時間為30分鐘，以將枯草芽孢桿菌Jaas edl菌體及其碎片與上清液分離；
[0047]收集上清液:將經過上述二次離心處理后產生的上清液收集，然后將收集的上清液用孔徑為0.22 y m的濾膜過濾，獲得枯草芽孢桿菌Jaas edl無細胞濾液；
[0048]2)納米銀粒子的合成與表征:
[0049]首先，取步驟I)中制得的枯草芽孢桿菌Jaas edl無細胞濾液100毫升，加入 100 U I濃度為lmol/L的AgNO3,并在室溫放置36個小時；接著進行離心處理，離心轉速為 15000轉/分鐘，時間為30分鐘；離心結束后，將沉淀物收集，再將收集的沉淀物用無水乙醇蕩洗3次，然后將沉淀物在60°C的溫度下烘干成粉末，制得納米銀粒子。
[0050]本實施例中所用枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) Jaas edl菌株為江蘇省農科院植保所自棉花莖桿內分離保存，經鑒定為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)，于2005 年12月12日由中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心收藏保存，保藏號CGMCCN0.1564。
[0051]實施例3
[0052]本枯草芽孢桿菌Jaas edl無細胞濾液胞外合成納米銀粒子的方法，包括以下步驟:
[0053]I)枯草芽孢桿菌Jaas edl無細胞濾液的制備:
[0054]—次振蕩培養:將枯草芽孢桿菌Jaas edl放入裝有100毫升LB培養基的搖瓶中， 并置于30°C溫度，然后進行振蕩培養，振蕩培養的轉速為150轉/分鐘，時間為24個小時， 獲得枯草芽孢桿菌Jaas edl培養液；
[0055]一次離心處理:將經過振蕩培養的枯草芽孢桿菌Jaas edl培養液進行離心處理， 離心轉速為5000轉/分鐘，時間為15分鐘；
[0056]收集菌體:將經過一次離心處理的枯草芽孢桿菌Jaas edl培養液中的菌體收集， 并將枯草芽孢桿菌Jaas edl菌體用去離子水蕩洗3次，以去除殘留的LB培養基；
[0057]二次振蕩培養 :將經過上述收集菌體步驟處理后的枯草芽孢桿菌Jaas edl菌體重懸于100毫升去離子水中，30°C二次振蕩培養，二次振蕩培養的轉速為150轉/分鐘，時間為36個小時，獲得枯草芽孢桿菌Jaas edl菌體懸液；
[0058]二次離心處理:將上述經過二次振蕩處理的枯草芽孢桿菌Jaas edl菌體懸液進行二次離心處理，二次離心處理的轉速為12000轉/分鐘，時間為30分鐘，以將枯草芽孢桿菌Jaas edl菌體及其碎片與上清液分離；
[0059]收集上清液:將經過上述二次離心處理后產生的上清液收集，然后將收集的上清液用孔徑為0.22 y m的濾膜過濾，獲得枯草芽孢桿菌Jaas edl無細胞濾液；
[0060]2)納米銀粒子的合成與表征:
[0061]首先，取步驟I)中制得的枯草芽孢桿菌Jaas edl無細胞濾液100毫升，然后向枯草芽孢桿菌Jaas edl無細胞濾液中加入150 U I濃度為lmol/L的AgNO3,并在室溫放置24 個小時；接著進行離心處理，離心轉速為15000轉/分鐘，時間為30分鐘；離心結束后，將沉淀物收集，再將收集的沉淀物用無水乙醇蕩洗3次，然后將沉淀物在60°C的溫度下烘干成粉末，制得納米銀粒子。
[0062]本實施例中所用枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) Jaas edl菌株為江蘇省農科院植保所自棉花莖桿內分離保存，經鑒定為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)，于2005 年12月12日由中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心收藏保存，保藏號CGMCC N0.1564。
[0063]實施例4
[0064]本枯草芽孢桿菌Jaas edl無細胞濾液胞外合成納米銀粒子的方法，包括以下步驟:
[0065]I)枯草芽孢桿菌Jaas edl無細胞濾液的制備:
[0066]—次振蕩培養:將枯草芽孢桿菌Jaas edl放入裝有100毫升LB培養基的搖瓶中， 30°C振蕩培養，振蕩培養的轉速為150轉/分鐘，時間為24個小時，獲得枯草芽孢桿菌Jaas edl培養液；
[0067]一次離心處理:將經過振蕩培養的枯草芽孢桿菌Jaas edl培養液進行離心處理， 離心轉速為5000轉/分鐘，時間為30分鐘；[0068]收集菌體:將經過一次離心處理的枯草芽孢桿菌Jaas edl培養液中的菌體收集， 并將枯草芽孢桿菌Jaas edl菌體用去離子水蕩洗3次，以去除殘留的LB培養基；
[0069]二次振蕩培養:將經過上述收集菌體步驟處理后的枯草芽孢桿菌Jaas edl菌體重懸于100毫升去離子水中，30°C二次振蕩培養，二次振蕩培養的轉速為150轉/分鐘，時間為36個小時，獲得枯草芽孢桿菌Jaas edl菌體懸液；
[0070]二次離心處理:將上述經過二次振蕩處理的枯草芽孢桿菌Jaas edl菌體懸液進行二次離心處理，二次離心處理的轉速為12000轉/分鐘，時間為30分鐘，以將枯草芽孢桿菌Jaas edl菌體及其碎片與上清液分離；
[0071]收集上清液:將經過上述二次離心處理后產生的上清液收集，然后將收集的上清液用孔徑為0.22 y m的濾膜過濾，獲得枯草芽孢桿菌Jaas edl無細胞濾液；
[0072]2)納米銀粒子的合成與表征:
[0073]首先，取步驟I)中制得的枯草芽孢桿菌Jaas edl無細胞濾液200毫升，加入 150 u I濃度為lmol/L的AgNO3,并在室溫放置72個小時；接著進行離心處理，離心轉速為 15000轉/分鐘，時間為60分鐘；離心結束后，將沉淀物收集，再將收集的沉淀物用無水乙醇蕩洗3次，然后將沉淀物在60°C的溫度下烘干成粉末，制得納米銀粒子。
[0074]本實施例中所用枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) Jaas edl菌株為江蘇省農科院植保所自棉花莖桿內分離保存，經鑒定為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)，于2005 年12月12日由中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心收藏保存，保藏號CGMCC N0.1564。`
【權利要求】
1.一種枯草芽孢桿菌Jaas edl無細胞濾液胞外合成納米銀粒子的方法，包括以下步驟:1)枯草芽孢桿菌Jaasedl無細胞濾液的制備:一次振蕩培養:將枯草芽孢桿菌Jaas edl放入裝有100毫升LB培養基的搖瓶中，30°C 振蕩培養，振蕩培養轉速為150轉/分鐘，時間為12-24個小時，獲得枯草芽孢桿菌Jaas edl培養液；一次離心處理:將經過振蕩培養的枯草芽孢桿菌Jaas edl培養液進行離心處理，離心轉速為5000轉/分鐘，時間為15-30分鐘；收集菌體:將經過一次離心處理的枯草芽孢桿菌Jaas edl培養液中的菌體收集,并將枯草芽孢桿菌Jaas edl菌體用去離子水蕩洗3次，以去除殘留的LB培養基；二次振蕩培養:將經過上述收集菌體步驟處理后的枯草芽孢桿菌Jaas edl菌體重懸于100毫升去離子水中，并置于30°C的溫度下，二次振蕩培養，二次振蕩培養的轉速為150 轉/分鐘，時間為12-36個小時，獲得枯草芽孢桿菌Jaas edl菌體懸液；二次離心處理:將上述經過二次振蕩處理的枯草芽孢桿菌Jaas edl菌體懸液進行二次離心處理，二次離心處理的轉速為12000轉/分鐘，時間為15-30分鐘，以將枯草芽孢桿菌Jaas edl菌體及其碎片與上清液分離；收集上清液:將經過上述二次離心處理后產生的上清液收集，用孔徑為0.22 的濾膜過濾，獲得枯草芽孢桿菌Jaas edl無細胞濾液；2)納米銀粒子的合成與表征:首先，取步驟I)中制得的枯草芽孢桿菌Jaas edl無細胞濾液100毫升，加入 100-200 u I濃度為lmol/L的AgNO3,并在室溫放置24-72個小時；接著進行離心處理，轉速為15000轉/分鐘，時間為30-60分鐘；離心結束后，將沉淀物收集，再將收集的沉淀物用無水乙醇蕩洗3`次，在60°C的溫度下烘干成粉末，制得納米銀粒子。經紫外/可見光分光光度計全波長掃描(UV-vis)、透射電子顯微鏡掃描(TEM)、X射線粉末衍射分析(XRD)、傅里葉變換紅外光譜分析(FT-1R)等方法驗證所合成的納米銀粒子形態均一，分散性較好。
2.根據權利要求1所述的枯草芽孢桿菌Jaasedl無細胞濾液胞外合成納米銀粒子的方法，其特征在于:在步驟2)，枯草芽孢桿菌Jaas edl無細胞濾液與AgNO3體積比為I毫升:1_2微升。
3.根據權利要求1所述的枯草芽孢桿菌Jaasedl無細胞濾液胞外合成納米銀粒子的方法，其特征在于:所述銀納米粒子的粒徑在20-50納米之間。
4.根據權利要求1或2或3所述的枯草芽孢桿菌Jaasedl無細胞濾液胞外合成納米銀粒子的方法，其特征在于:步驟I)中，所述一次振蕩的時間為12個小時，一次離心處理的時間為15分鐘，二次振蕩的時間為12個小時，二次離心處理的時間為30分鐘；步驟2)中， 向枯草芽孢桿菌Jaas edl無細胞濾液中加入的AgNO3為200微升，離心處理的時間為30分鐘。
5.根據權利要求1或2或3所述的枯草芽孢桿菌Jaasedl無細胞濾液胞外合成納米銀粒子的方法，其特征在于:步驟I)中，所述一次振蕩的時間為12個小時，一次離心處理的時間為15分鐘，二次振蕩的時間為24個小時，二次離心處理的時間為30分鐘；步驟2)中， 向枯草芽孢桿菌Jaas edl無細胞濾液中加入的AgNO3為100微升，室溫放置時間為36個小時，離心處理的時間為50分鐘。
6.根據權利要求1或2或3所述的枯草芽孢桿菌Jaasedl無細胞濾液胞外合成納米銀粒子的方法，其特征在于:步驟I)中，所述一次振蕩的時間為24個小時，一次離心處理的時間為15分鐘，二次振蕩的時間為36個小時，二次離心處理的時間為30分鐘；步驟2)中， 向枯草芽孢桿菌Jaas edl無細胞濾液中加入的AgN03為150微升，室溫放置時間為24個小時，離心處理的時間為30分鐘。
7.根據權利要求1或2或3所述的枯草芽孢桿菌Jaasedl無細胞濾液胞外合成納米銀粒子的方法，其特征在于:步驟I)中，所述一次振蕩的時間為24個小時，一次離心處理的時間為30分鐘，二次振蕩的時間為36個小時，二次離心處理的時間為30分鐘；步驟2)中， 向枯草芽孢桿菌Jaas edl無細胞濾 液中加入的AgNO3為200微升，室溫放置時間為72個小時，離心處理的時間為60分鐘。
【文檔編號】C12R1/125GK103555769SQ201310163716
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年5月7日 優先權日:2013年5月7日
【發明者】張昕, 林玲, 鄧晟, 周益軍 申請人:江蘇省農業科學院