甘草查爾酮a的抗菌用途
【專利摘要】本發明公開了甘草查爾酮A的抗菌用途。通過實驗，證明了甘草查爾酮A的抗菌作用，可以用于制備抗菌藥物、食品添加劑或化妝品等。
【專利說明】甘草查爾酮A的抗菌用途
【技術領域】
[0001] 本發明涉及甘草查爾酮A的一種抗菌用途，具體地涉及甘草查爾酮A在制備抗菌 藥物或食品中的用途。
【背景技術】
[0002] 查爾酮類化合物屬于中草藥的一種化學成分，主要存在于甘草，紅花，廣豆根等藥 用植物中，也是現代工業中比較常用的一類黃色素。查爾酮類化合物由于其結構特點而具 有較大的柔性，因此表現出了廣泛的藥理學作用，主要包括抗腫瘤、清除氧自由基以及抗氧 化以及抗菌作用等，其抗菌作用尤其針對革蘭氏陽性菌，而且某些化合物的作用效果與慶 大霉素作用相當。
[0003] 從甘草根中提取出來的查爾酮又可以細分為以下幾種新的組分：刺查爾酮，查爾 酮A，查爾酮B，查爾酮C以及查爾酮D，具體結構見附圖1。這些查爾酮與之前的傳統意義 上的查爾酮又有所不同，因為其在2' -位置上的氧的缺失，被命名為刺甘草查爾酮。1975 年，甘草查爾酮A (Licochalcone A，分子式C21H2204,分子量338. 39698)首次被報道，具有 廣泛的生物學活性。有研究表明，查爾酮A對食物中的污染的微生物有比較強烈的抑制作 用，而且查爾酮A可以抵抗高溫。但查爾酮A對熱處理過的由L-丙氨酸誘導產芽孢菌產生 的芽孢沒有抑制作用。與陽離子抗生物肽在3% (wt/vol)氯化鈉或者20ug/ml蛋白酶存在 的情況下失去抗菌的活性相比較，查爾酮A仍然具有抗菌活性。甘草查爾酮A的抗鏈球菌 尤其是抗變形鏈球菌及豬鏈球菌作用未見報道。
【發明內容】
[0004] 本發明公開了甘草查爾酮A的抗菌用途，尤其是在抗鏈球菌和葡萄球菌的用途。 甘草查爾酮A可以用于制備抗菌藥物，也可以制備抗菌食品或食品添加劑，制備抗菌化妝 品。
[0005] 本發明公開的甘草查爾酮A的抗菌用途中的細菌為鏈球菌。其中鏈球菌可為導致 人類和動物疾病的鏈球菌，如A族鏈球菌、變形鏈球菌、肺炎鏈球菌或豬鏈球菌。本發明在 公開的甘草查爾酮A的抗菌用途中的細菌可以為葡萄球菌，特別是金黃色葡萄球菌。
[0006] 本發明通過實驗證明甘草查爾酮A對上述細菌有廣泛、強烈的抑制作用。首先進 行了培養基、甘草查爾酮A溶液、MIC板和接種物的制備，然后對甘草查爾酮A的抗菌作用 進行觀察。實驗結果顯示甘草查爾酮A對所實驗的鏈球菌、葡萄球菌有較好的抑菌作用。
[0007] 將甘草查爾酮A作為活性成分原料，添加適當的輔料，通過適當制劑工藝，可以制 成相應的藥物劑型，制備抗菌藥物，也可以通過適當的食品工藝，制備食品添加劑，或通過 化妝品制備工藝，制備有抗菌作用的化妝品，不限于以上所述，可以利用其抗菌作用，將甘 草查爾酮A用于其他任何方面。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0008] 圖1為查爾酮的化學分子式示意圖，其中1.查爾酮A 2查爾酮B 3查爾酮C 4查 爾酮D 5刺查爾酮6查爾酮。
[0009] 圖2為甘草查爾麗A對變形鏈球菌（Streptococcus mutans ATCC55677)的生長 抑制作用圖。過夜培養的變形鏈球菌菌株S.mutans ATCC55677以1%的比例接種到新培 養基中，分別在接種后〇h，4h和6h后加入不同濃度的查爾酮A溶液（0. 5MIC，MIC)，每隔Ih 觀察記錄細菌的0D600。
[0010] 圖3為甘草查爾酮A對A族鏈球菌GAS G519的生長抑制作用圖。過夜培養的A 族鏈球菌菌株GAS G519以1 %的比例接種到新培養基中，并加入不同濃度的甘草查爾酮A， 繼續培養llh，每隔Ih測量一次0D600。
[0011] 圖4為甘草查爾酮A對豬鏈球菌血清2型的生長抑制作用圖。過夜培養的豬鏈球 菌血清2型菌株05ZYH33,以1 %的比例接種到新培養基中，每隔Ih測量一次0D600,繼續培 養4. 5h后，加入不同濃度的甘草查爾酮A(0,0. 5MIC，MIC)，然后繼續培養5h。
【具體實施方式】
[0012] 實施例甘草查爾酮A的抗菌作用
[0013] 一、實驗材料
[0014] 1.菌株：變形鏈球菌（Streptococcus mutans)，購自 ATCC，編號為 ATCC55677 ;豬 鏈球菌血清 2 型 05ZYH33 (Streptococcus suis serotype2) (PLoS 0NE2 (3) :e315)，購自 中國⑶C傳染病預防控制所；A族鏈球菌中國分離株（GAS G519) (Journal of Clinical Microbiology，2009,47 (3) :715-720)，購自中國 CDC 傳染病預防控制所。
[0015] 2.實驗器材
[0016] 甘草查爾酮A :購自Sigma公司；THB培養基：購自BD公司；酵母提取物，蛋白胨： 購自0X0ID公司。C02孵箱：日本三洋公司，生物安全柜：美國Thermo公司。
[0017] 二·實驗方法
[0018] 1.液體培養基的制備
[0019] THB培養基（30gTHB每升）或者LB (IOg氯化鈉、5g酵母提取物、IOg蛋白胨每升）， 113°C 15min高壓滅菌后4°C冰箱保存待用。
[0020] 2.甘草查爾酮A溶液的制備
[0021] 將甘草查爾酮A用無水乙醇配成12mg/ml的母液，無菌條件下依照試驗需要用液 體培養基進行倍比稀釋。
[0022] 3.半數抑菌濃度（MIC50)板的制備
[0023] 在生物安全柜內無菌操作，將倍比稀釋后不同濃度的甘草查爾酮A溶液分別加到 無菌的96孔培養板中，第1至第9孔加藥液，每孔100 μ 1，第10孔加100 μ 1的液體培養基 作為對照。
[0024] 3.接種物的制備
[0025] 將過夜復蘇培養的鏈球菌菌液按1 %接種量接種到5mlTHB液體培養基中， 37°C 5% CO2培養箱中靜置培養。細菌長至對數生長中期，其菌量大概為IO9CFUAiI數量級 時備用。
[0026] 4.甘草查爾酮A抗菌作用觀察
[0027] 將培養接種物菌液用培養基十倍稀釋，100 μ 1/孔加到對應的含甘草查爾酮A溶 液與96孔培養板中，密封后置37°C 5% CO2培養箱中靜置孵育24h，觀察甘草查爾酮A溶液 的抗菌作用。
[0028] 5.結果判斷
[0029] 藥物和菌共孵育24h后，各孔取100 μ 1涂THB或LB平板，37°C 5 % CO2培養箱中 靜置培養24h，以完全無菌生長的最低藥物濃度定為MIC。當陽性對照孔（即不含藥物）內 細菌明顯生長試驗才有意義。
[0030] 三·實驗結果
[0031] 如表1所示，半數抑菌濃度平板實驗證實甘草查爾酮A對變形鏈球菌、豬鏈球菌血 清2型，A族鏈球菌均有明顯的抑制效果，最低抑菌濃度在μ g/ml水平。然后分別測試甘 草查爾酮A對變形鏈球菌菌株ATCC55677 (圖2)，A族鏈球菌G519 (圖3)以及豬鏈球菌菌 株05ZYH33(圖4)生長抑制情況，這些細菌的生長速度在加入甘草查爾酮A后明顯受到抑 制。
[0032] 表1.甘草查爾酮A對各菌株的最低抑制濃度（MIC)
[0033]
【權利要求】
1. 甘草查爾酮A在制備抗菌藥物中的用途。
2. 甘草查爾酮A在制備抗菌食品添加劑中的用途。
3. 甘草查爾酮A在制備抗菌化妝品中的用途。
4. 根據權利要求1到3任一所述用途，其中細菌為鏈球菌。
5. 根據權利要求4所述用途，其中細菌為變形鏈球菌。
6. 根據權利要求4所述用途，其中細菌為豬鏈球菌。
7. 根據權利要求4所述用途，其中細菌為A族鏈球菌。
【文檔編號】A23L1/30GK104337799SQ201310315081
【公開日】2015年2月11日 申請日期:2013年7月25日 優先權日:2013年7月25日
【發明者】姜永強, 鄭玉玲, 郝淮杰, 王燕子, 鄭新, 江華, 惠文佳 申請人:中國人民解放軍軍事醫學科學院微生物流行病研究所