一種用于改進池塘水質的復合微生態制劑的制作方法
【專利摘要】本發明提供一種用于改進池塘水質的復合微生態制劑，其制備方法的具體步驟：將冷凍保藏管中的沼澤紅假單胞菌、硝化菌、乳酸桿菌、及釀酒酵母分別在斜面中活化，之后純化得各斜面菌種，備用；利用各斜面菌種制備相應的原菌液；將各原菌液按2：2：1：1的菌量比接種于已滅菌的發酵培養基Ⅰ中進行培養，得復合微生態菌劑的一級種子；將一級種子按5%的接種量接種于已滅菌的發酵培養基Ⅱ中培養得復合微生態菌劑的二級種子；最后將二級種子按5%的接種量接種至已滅菌的發酵培養基Ⅲ培養以獲得復合微生態菌劑的成品。采用本發明復合微生態制劑既能夠提高水體中的溶氧量，又能降低水體中的COD，從而起到改善、優化池塘水質的作用。
【專利說明】一種用于改進池塘水質的復合微生態制劑
【【技術領域】】
[0001]本發明涉及一種水產養殖領域用的復合微生態制劑，尤其涉及一種用于改進池塘水質的復合微生態制劑。
【【背景技術】】
[0002]改革開放以來，我國的水產養殖業取得了突飛猛進的發展，成為世界上唯一養殖產量超過捕撈產量的漁業大國。在我國的水產養殖業中，池塘水產養殖占據了舉足輕重的地位，現有的池塘水產養殖大多秉承了以“密、混、輪”為技術特征的傳統養殖模式。為了提高單位水體的養殖產量，片面追求高產，往往過分的增加水體營養，過度投餌、施肥和加大放養密度，致使水中有害微生物、有害藻類的過快繁殖，及出現排泄物和殘餌污染，破壞養殖水體的生態尤其是微生態環境，從而直接或間接地危害水體中的養殖生物，進而使得優質水產品種的養殖受到水質的限制。水體生態環境被破壞，池塘中水產動物的病害發生頻繁，漁業蒙受巨大損失。為了預防或防止病害，目前在整個養殖周期中均在使用魚藥，魚藥的使用雖然取得應急治療的效果，但更多地帶來了諸如抗藥性、在水產品和環境中蓄積殘留等問題。因此，從生態學角度來看，盡管養殖池塘是一個極為復雜的水生生態系統，但不論其多復雜，歸根到底是一個環境的問題。養殖池塘水體生態環境的控制已成為發展我國池塘水產養殖的關鍵問題，因此對水產養殖池塘水質的凈化和改進顯得十分重要。
【
【發明內容】
】
[0003]本發明所要解決的技術問題在于提供一種用于改進池塘水質的復合微生態制劑。
[0004]本發明是通過以下技術方案解決上述技術問題的:一種用于改進池塘水質的復合微生態制劑，其制備方法的具體步驟如下:
[0005](I)原菌種斜面培養:將冷凍保藏管中的沼澤紅假單胞菌、硝化菌、乳酸桿菌、及釀酒酵母分別在斜面中活化，之后分別置于90_培養皿中進行純化，得沼澤紅假單胞菌斜面菌種、硝化菌斜面菌種、乳酸桿菌斜面菌種、及釀酒酵母斜面菌種，備用；
[0006](2)原菌種液體培養:將沼澤紅假單胞菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養基I中，之后于28°C -30°C厭氧鎢絲燈光照培養5-7天得沼澤紅假單胞菌原菌液；將硝化菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養基II中，接著于25°C -28°C下好氧培養3-5天得硝化菌原菌液；將乳酸桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養基III中，接著于37°C下厭氧培養1-2天得乳酸桿菌原菌液；將釀酒酵母斜面菌種接種于已滅菌的液體培養基IV中，之后于280C -30°C下好氧培養3天得釀酒酵母原菌液；
[0007](3)—級種子培養:將沼澤紅假單胞菌原菌液、硝化菌原菌液、乳酸桿菌原菌液、及釀酒酵母原菌液按2:2:1:1的菌量比接種于已滅菌的發酵培養基I中進行培養，具體地:先接種硝化菌原菌液、釀酒酵母原菌液并于28°C -30°C下好氧培養3天，然后再接種沼澤紅假單胞菌原菌液、乳酸桿菌原菌液37°C厭氧培養3天，得復合微生態制劑的一級種子；
[0008](4)二級種子培養:將所得的一級種子按5%的接種量接種于已滅菌的發酵培養基II中，并于28°C -30°c下先好氧培養3-5天再厭氧培養3-5天，得復合微生態制劑的二級種子;
[0009](5)成品培養:將所得的二級種子按5%的接種量接種至已滅菌的發酵培養基III中，并于28°C _30°C下先好氧培養3-5天再厭氧培養3-5天，獲得所述復合微生態制劑的成品O
[0010]進一步地，所述步驟(I)中沼澤紅假單胞菌在斜面中活化的具體操作為:用接種環將沼澤紅假單胞菌接種于已滅菌的斜面培養基I上，之后于28°C -30°c厭氧鎢絲燈光照培養5-7天；所述斜面培養基I的滅菌溫度為121°C、滅菌時間為15min;且該斜面培養基I的組分:酵母粉10克、磷酸氫二鉀I克、硫酸鎂0.5克、瓊脂20克、水1000ml、PH
7.0-7.2。
[0011]進一步地，所述步驟(I)中硝化菌在斜面中活化的具體操作為:制備斜面培養基II，并將斜面培養基II置于121°C下滅菌20min，之后用接種環將硝化菌接種于斜面培養基II上，然后于25V -28°C下好氧培養3-5天；所述斜面培養基II的組分:硝酸鈉I克、硫酸鎂0.03克、硫酸錳0.0 1、磷酸氫二鉀0.8克、碳酸鈉I克、過磷酸鈣0.25克、瓊脂50克、水1000ml、PH 自然。
[0012]進一步地，所述步驟(I)中乳酸桿菌在斜面中活化的具體操作為:用接種環將乳酸桿菌接種于已滅菌的斜面培養基III上，之后于37°C下厭氧培養1-2天；所述斜面培養基III的滅菌溫度為121°C、滅菌時間為20min ;且該斜面培養基III的組分:蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫80lml、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.58克、硫酸錳0.28克、瓊脂15克、水1000ml、PH6.5。
[0013]進一步地，所述 步驟(I)中釀酒酵母在斜面中活化的具體操作為:用接種環將釀酒酵母接種于已滅菌的斜面培養基IV上，之后于28-30°C下好氧培養3天；所述斜面培養基IV的滅菌溫度為121°C、滅菌時間為30min ;且該斜面培養基IV的組分:馬鈴薯200克、蔗糖20克、瓊脂15-20克、水1000ml、PH自然。
[0014]進一步地，所述步驟(2)中液體培養基I的組分:酵母粉10克、磷酸氫二鉀I克、硫酸鎂0.5克、水1000ml、PH7.0-7.2 ;液體培養基II的組分:硝酸鈉I克、硫酸鎂0.03克、硫酸錳0.01、磷酸氫二鉀0.8克、碳酸鈉I克、過磷酸鈣0.25克、水1000ml、PH自然；液體培養基III的組分:蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801ml、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.58克、硫酸錳0.28克、水1000ml、PH6.5 ；液體培養基IV的組分:馬鈴薯200克、蔗糖20克、7jC 1000ml、PH自然。
[0015]進一步地，所述步驟(3)中發酵培養基I的組分:桔水5%、酵母粉0.5%、蛋白胨1%、氯化銨0.2%、氯化鈉0.1%、磷酸二氫鉀0.1%、硫酸鎂0.05%、硫酸鋅0.025%、硫酸亞鐵0.025%，余量為水。
[0016]進一步地，所述步驟(4)中發酵培養基II的組分:桔水5%、酵母粉0.1%、蛋白胨0.1%、氯化銨0.2%、氯化鈉0.1%、磷酸二氫鉀0.1%、硫酸鎂0.05%、硫酸鋅0.025%、硫酸亞鐵0.025%，余量為水。
[0017]進一步地，所述步驟(5)中發酵培養基III的組分:桔水5%、氯化銨0.2%、氯化鈉
0.05%、磷酸二氫鉀0.1%、硫酸鎂0.05%、硫酸鋅0.025%、硫酸亞鐵0.025%，余量為水。
[0018]本發明一種用于改進池塘水質的復合微生態制劑的有益效果在于:采用該復合微生態制劑既能夠提高水體中的溶氧量，促進養殖生態系中的正常菌群和有益藻類活化生長，保持養殖水體的生態平衡；又能使池塘中的排泄物和殘餌污染得到凈化，穩定和改善水質，從而降低了水體中的COD ;即本發明復合微生態制劑具有改善、優化池塘水質的作用。
【【具體實施方式】】
[0019]本發明一種用于改進池塘水質的復合微生態制劑，其制備方法的具體步驟如下:
[0020](I)原菌種斜面培養:將冷凍保藏管中的沼澤紅假單胞菌、硝化菌、乳酸桿菌、及釀酒酵母分別在斜面中活化，之后分別置于90_培養皿中進行純化，得沼澤紅假單胞菌斜面菌種、硝化菌斜面菌種、乳酸桿菌斜面菌種、及釀酒酵母斜面菌種，備用；
[0021](2)原菌種液體培養:將沼澤紅假單胞菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養基I中，之后于28°C -30°C厭氧鎢絲燈光照培養5-7天得沼澤紅假單胞菌原菌液；將硝化菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養基II中，接著于25°C -28°C下好氧培養3-5天得硝化菌原菌液；將乳酸桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養基III中，接著于37°C下厭氧培養1-2天得乳酸桿菌原菌液；將釀酒酵母斜面菌種接種于已滅菌的液體培養基IV中，之后于280C -30°C下好氧培養3天得釀酒酵母原菌液；
[0022](3)—級種子培養:將沼澤紅假單胞菌原菌液、硝化菌原菌液、乳酸桿菌原菌液、及釀酒酵母原菌液按2:2:1:1的菌量比接種于已滅菌的發酵培養基I中進行培養，具體地:先接種硝化菌原菌液、釀酒酵母原菌液并于28°C -30°C下好氧培養3天，然后再接種沼澤紅假單胞菌原菌液、乳酸桿菌原菌液37°C厭氧培養3天，得復合微生態制劑的一級種子；
[0023](4)二級種子培養:將所得的一級種子按5%的接種量接種于已滅菌的發酵培養基II中，并于28°C -30°c下先好氧培養3-5天再厭氧培養3-5天，得復合微生態制劑的二級種子;·
[0024](5)成品培養:將所得的二級種子按5%的接種量接種至已滅菌的發酵培養基III中，并于28°C _30°C下先好氧培養3-5天再厭氧培養3-5天，獲得所述復合微生態制劑的成品O
[0025]其中:步驟(I)中沼澤紅假單胞菌在斜面中活化的具體操作為:用接種環將沼澤紅假單胞菌接種于已滅菌的斜面培養基I上，之后于28°c -30°c厭氧鎢絲燈光照培養5-7天；所述斜面培養基I的滅菌溫度為121°C、滅菌時間為15min ;且該斜面培養基I的組分:酵母粉10克、磷酸氫二鉀I克、硫酸鎂0.5克、瓊脂20克、水1000ml、PH 7.0-7.2。步驟(I)中硝化菌在斜面中活化的具體操作為:制備斜面培養基II，并將斜面培養基II置于121°C下滅菌20min，之后用接種環將硝化菌接種于斜面培養基II上，然后于25°C _28°C下好氧培養3-5天；所述斜面培養基II的組分:硝酸鈉I克、硫酸鎂0.03克、硫酸錳0.01、磷酸氫二鉀
0.8克、碳酸鈉I克、過磷酸鈣0.25克、瓊脂50克、水1000ml、PH自然。步驟(I)中乳酸桿菌在斜面中活化的具體操作為:用接種環將乳酸桿菌接種于已滅菌的斜面培養基III上，之后于37°C下厭氧培養1-2天；所述斜面培養基III的滅菌溫度為121°C、滅菌時間為20min ；且該斜面培養基III的組分:蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫80lml、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.58克、硫酸錳0.28克、瓊脂15克、水1000ml、PH6.5。步驟(I)中釀酒酵母在斜面中活化的具體操作為:用接種環將釀酒酵母接種于已滅菌的斜面培養基IV上，之后于28-30°C下好氧培養3天；所述斜面培養基IV的滅菌溫度為121°C、滅菌時間為30min ;且該斜面培養基IV的組分:馬鈴薯200克、蔗糖20克、瓊脂15-20克、水1000ml、PH自然。
[0026]步驟(2)中液體培養基I的組分:酵母粉10克、磷酸氫二鉀I克、硫酸鎂0.5克、水1000ml、PH7.0-7.2 ;液體培養基II的組分:硝酸鈉I克、硫酸鎂0.03克、硫酸錳0.01、磷酸氫二鉀0.8克、碳酸鈉I克、過磷酸鈣0.25克、水1000ml、PH自然；液體培養基III的組分:蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801ml、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.58克、硫酸錳0.28克、水1000ml、PH6.5 ;液體培養基IV的組分:馬鈴薯200克、蔗糖20克、水1000ml、PH自然。
[0027]步驟(3)中發酵培養基I的組分:桔水5%、酵母粉0.5%、蛋白胨1%、氯化銨0.2%、氯化鈉0.1%、磷酸二氫鉀0.1%、硫酸鎂0.05%、硫酸鋅0.025%、硫酸亞鐵0.025%，余量為水。步驟(4)中發酵培養基II的組分:桔水5%、酵母粉0.1%、蛋白胨0.1%、氯化銨0.2%、氯化鈉
0.1%、磷酸二氫鉀0.1%、硫酸鎂0.05%、硫酸鋅0.025%、硫酸亞鐵0.025%,余量為水。步驟
(5)中發酵培養基III的組分:桔水5%、氯化銨0.2%、氯化鈉0.05%、磷酸二氫鉀0.1%、硫酸鎂
0.05%、硫酸鋅0.025%、硫酸亞鐵0.025%，余量為水。
[0028]需要說明的是，本發明中各培養基的百分比均為質量百分比。
[0029]本發明復合微生態制劑用于改進優化池塘的水質， 申請人:通過如下實驗來說明該復合微生態制劑能夠起到優化池塘水質，具體地:
[0030]在某水產養殖場中，取兩池塘，該兩池塘的面積、水深、養殖模式、放養量、配套設備、及飼養管理條件等配置均相同，且兩池塘一個設置為試驗池，另一個設置為對照池，在試驗池中施用本發明復合微生態制劑，且施用量為400ml/畝，而對照池為空白對照池即未施用本發明復合微生態制劑；試驗`時間7月20到7月30 ;試驗結果:經檢測，試驗池較之對照池，其水體中的溶氧量提高了從3.2mg/L提高到5.lmg/L,即提高了 59% ;C0D從2500mg/L下降到1700mg/L，降低了 32%。因此，通過該試驗結果可知，采用本發明復合微生態制劑能夠優化池塘中水體的水質，平衡養殖水體的生態環境，從而促進池塘中養殖生物的健康生長。
[0031]綜上，采用該復合微生態制劑既能夠提高水體中的溶氧量，促進養殖生態系中的正常菌群和有益藻類活化生長，保持養殖水體的生態平衡；又能使池塘中的排泄物和殘餌污染得到凈化，穩定和改善水質，從而降低了水體中的COD ;即本發明復合微生態制劑具有改善、優化池塘水質的作用。
【權利要求】
1.一種用于改進池塘水質的復合微生態制劑，其特征在于:其制備方法的具體步驟如下:(O原菌種斜面培養:將冷凍保藏管中的沼澤紅假單胞菌、硝化菌、乳酸桿菌、及釀酒酵母分別在斜面中活化，之后分別置于90_培養皿中進行純化，得沼澤紅假單胞菌斜面菌種、硝化菌斜面菌種、乳酸桿菌斜面菌種、及釀酒酵母斜面菌種，備用；(2)原菌種液體培養:將沼澤紅假單胞菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養基I中，之后于28°C -30°C厭氧鎢絲燈光照培養5-7天得沼澤紅假單胞菌原菌液；將硝化菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養基II中，接著于25°C -28°C下好氧培養3-5天得硝化菌原菌液；將乳酸桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養基III中，接著于37°C下厭氧培養1-2天得乳酸桿菌原菌液；將釀酒酵母斜面菌種接種于已滅菌的液體培養基IV中，之后于28°C -30°C下好氧培養3天得釀酒酵母原菌液；(3)—級種子培養:將沼澤紅假單胞菌原菌液、硝化菌原菌液、乳酸桿菌原菌液、及釀酒酵母原菌液按2:2:1:1的菌量比接種于已滅菌的發酵培養基I中進行培養，具體地:先接種硝化菌原菌液、釀酒酵母原菌液并于28°C -30°C下好氧培養3天，然后再接種沼澤紅假單胞菌原菌液、乳酸桿菌原菌液37°C厭氧培養3天，得復合微生態制劑的一級種子；(4)二級種子培養:將所得的一級種子按5%的接種量接種于已滅菌的發酵培養基II中，并于28°C -30°C下先好氧培養3-5天再厭氧培養3-5天，得復合微生態制劑的二級種子; (5)成品培養:將所得的二級種子按5%的接種量接種至已滅菌的發酵培養基III中，并于28°C -30°C下先好氧培養3-5天再厭氧培養3-5天，獲得所述復合微生態制劑的成品。
2.根據權利要求1所述的一種用于改進池塘水質的復合微生態制劑，其特征在于:所述步驟(I)中沼澤紅假單胞菌在斜面中活化的具體操作為:用接種環將沼澤紅假單胞菌接種于已滅菌的斜面培養基I上，之后于28°C-30°C厭氧鎢絲燈光照培養5-7天；所述斜面培養基I的滅菌溫度為121°C、滅菌時間為15min ;且該斜面培養基I的組分:酵母粉10克、磷酸氫二鉀I克、硫酸鎂0.5克、瓊脂20克、水1000ml、PH 7.0-7.2。
3.根據權利要求1所述的一種用于改進池塘水質的復合微生態制劑，其特征在于:所述步驟(I)中硝化菌在斜面中活化的具體操作為:制備斜面培養基II，并將斜面培養基II置于121 V下滅菌20min，之后用接種環將硝化菌接種于斜面培養基II上，然后于250C -28°C下好氧培養3-5天；所述斜面培養基II的組分:硝酸鈉I克、硫酸鎂0.03克、硫酸錳0.01、磷酸氫二鉀0.8克、碳酸鈉I克、過磷酸鈣0.25克、瓊脂50克、水IOOOmUPH自然。
4.根據權利要求1所述的一種用于改進池塘水質的復合微生態制劑，其特征在于:所述步驟(I)中乳酸桿菌在斜面中活化的具體操作為:用接種環將乳酸桿菌接種于已滅菌的斜面培養基III上，之后于37°C下厭氧培養1-2天；所述斜面培養基III的滅菌溫度為121°C、滅菌時間為20min ;且該斜面培養基III的組分:蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫80 lml、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.58克、硫酸錳 0.28 克、瓊脂 15 克、水 1000ml、PH6.5。
5.根據權利要求1所述的一種用于改進池塘水質的復合微生態制劑，其特征在于:所述步驟(I)中釀酒酵母在斜面中活化的具體操作為:用接種環將釀酒酵母接種于已滅菌的斜面培養基IV上，之后于28-30°C下好氧培養3天；所述斜面培養基IV的滅菌溫度為121°C、滅菌時間為30min ;且該斜面培養基IV的組分:馬鈴薯200克、蔗糖20克、瓊脂15-20克、水1000ml、PH 自然。
6.根據權利要求1所述的一種用于改進池塘水質的復合微生態制劑，其特征在于:所述步驟(2)中液體培養基I的組分:酵母粉10克、磷酸氫二鉀I克、硫酸鎂0.5克、瓊脂20克、水1000ml、PH7.0-7.2 ;液體培養基II的組分:硝酸鈉I克、硫酸鎂0.03克、硫酸錳0.01、磷酸氫二鉀0.8克、碳酸鈉I克、過磷酸鈣0.25克、水1000ml、PH自然；液體培養基III的組分:蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801ml、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.58克、硫酸錳0.28克、水1000ml、PH6.5 ;液體培養基IV的組分:馬鈴薯200克、蔗糖20克、水1000ml、PH自然。
7.根據權利要求1所述的一種用于改進池塘水質的復合微生態制劑，其特征在于:所述步驟(3)中發酵培養基I的組分:桔水5%、酵母粉0.5%、蛋白胨1%、氯化銨0.2%、氯化鈉0.1%、磷酸二氫鉀0.1%、硫酸鎂0.05%、硫酸鋅0.025%、硫酸亞鐵0.025%，余量為水。
8.根據權利要求1所述的一種用于改進池塘水質的復合微生態制劑，其特征在于:所述步驟(4)中發酵培養基II的組分:桔水5%、酵母粉0.1%、蛋白胨0.1%、氯化銨0.2%、氯化鈉0.1%、磷酸二氫鉀0.1%、硫酸鎂0.05%、硫酸鋅0.025%、硫酸亞鐵0.025%，余量為水。
9.根據權利要求1所述的一種用于改進池塘水質的復合微生態制劑，其特征在于:所述步驟(5)中發酵培養基III的組分:桔水5%、氯化銨0.2%、氯化鈉0.05%、磷酸二氫鉀0.1%、硫酸鎂0.05%、硫酸鋅0.025 %、硫酸亞鐵0.025%，余量為水。
【文檔編號】C12R1/865GK103436472SQ201310374472
【公開日】2013年12月11日 申請日期:2013年8月23日 優先權日:2013年8月23日
【發明者】陳琳, 莫艷華, 秦火保, 周世須 申請人:福州大用生物應用科技有限公司