一種提高阿尼芬凈前體化合物Echinocandin B產量的方法
【專利摘要】本發明提供了一種提高阿尼芬凈前體化合物Echinocandin?B（ECB）產量的方法，所述方法為：配制用于培養構巢曲霉（Aspergillus?nidulans）合成ECB的發酵培養基，接入構巢曲霉，在28～37℃下培養3天后，繼續在25℃下培養直至發酵結束。本發明方法與恒溫培養相比，采用前三天37℃培養，后9天25℃培養的策略使ECB產量由728mg/L提高至1237mg/L；除此之外，第6天添加2g/L脯氨酸可以使ECB的產量由540mg/L提高至850mg/L；在培養基中添加2g/L蘇氨酸或2g/L鳥氨酸可使ECB產量分別提高21.9%和55.2%。
【專利說明】一種提高阿尼芬凈前體化合物Echinocandin B產量的方法
(-)【技術領域】
[0001]本發明涉及一種提高阿尼芬凈前體化合物Echinocandin B產量的培養方法。
(二)【背景技術】
[0002]近年來，器官移植手術導致免疫抑制劑的大量使用，化療和更具有侵襲性的醫療方法的應用等多種原因造成免疫低下患者增多，真菌感染發病率顯著升高，尤其是深部真菌感染的發病率和病死率逐年增加。據世界衛生組織(WHO) 2004年的統計估計，全球每年的系統性真菌感染人數為33.5萬。其中最常見的是系統性念珠菌病，約占所有此類感染的70%左右，而其引起的死亡率又聞達40%左右。隨著醫學的不斷進步，20世紀90年代后，各種抗真菌藥物不斷問世，為治療各類真菌疾病帶來革命性的進步。由于對抗真菌藥物的需求逐年攀升，使得其市場規模越加旺盛。
[0003]棘白菌素(Echinocandin)類抗生素是20世紀70年代發現的一組天然產物，具有類似的環狀多肽核心和不同的脂肪酸側鏈的結構特征，能夠非競爭性地抑制真菌細胞壁β -1, 3-葡聚糖合成酶的活性,從而達到抗真菌的目的。其中阿尼芬凈(Anidulafungin)是繼卡泊芬凈(Caspofungin)、米卡芬凈(Micafungin)之后的第三代全身抗真菌類棘白菌素衍生物藥物，2006年2月21日，由輝瑞公司生產的阿尼芬凈通過了美國FDA認證，主要治療念珠菌血癥和其他 形式的念珠菌感染(腹腔膿腫、腹膜炎)和食管念珠菌等。阿尼芬凈是由前體化合物Echinocandin B (ECB)經猶他游動放線菌產生的酰化酶作用脫去側鏈亞油酰基，然后在DMF中與活性中間體4〃-戊氧基-[1，1’，4’，1〃]三苯基-4-甲酸-2，4，5-三氯-苯基酯反應制得。阿尼芬凈與ECB的化學結構式如式1、2所示。
[0004]
【權利要求】
1.一種提高阿尼芬凈前體化合物Echinocandin B (ECB)產量的方法,所述方法為:配制用于培養構巢曲霉(Aspergillus nidulans)合成ECB的發酵培養基,接入構巢曲霉,在28~37°C下培養3天后，繼續在25°C下培養直至發酵結束。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述培養在第O~9天時添加前體氨基酸，所述前體氨基酸為下列之一或其中兩種以上的混合物:脯氨酸、鳥氨酸、蘇氨酸、亞油酸，添加量為2~8g/L發酵培養基。
3.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于所述發酵培養基組成如下:花生油20g/L,甘油 10g/L，蛋白胨 10g/L，L-脯氨酸 2g/L，甘露醇 90g/L，豆粉 40g/L，K2HPO4.3H208g/L,MgSO4.7Η200.5g/L，MnSO4.H2O0.lg/L, FeSO4.7Η200.05g/L, CaCl20.3g/L，溶劑為水，pH7.0。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述方法如下: (1)構巢曲霉接種至種子培養基，培養溫度25V，搖床轉速220r/min，培養2天，獲得種子液；所述種子培養基組成如下:葡萄糖10g/L，甘油10g/L，棉籽粉25g/L，溶劑為水，ρΗ6.8 ~7.0，115°C滅菌 30min ； (2)種子液以10%體積比接種量接種至發酵培養基，在28~37°C、搖床轉速220r/min條件下培養3天后，繼續在25°C、搖床轉速220r/min條件下培養直至總發酵時間為12天，并在發酵第6天時添加2g/L的脯氨酸，或者在發酵第O天添加2g/L的蘇氨酸或鳥氨酸；所述發酵培養基組成如下:花生油20g/L，甘油10g/L，蛋白胨10g/L，L-脯氨酸2g/L，甘露醇 90g/L,豆粉 40g/L, K2HPO4.3H208g/L, MgSO4.7Η200.5g/L, MnSO4.H2O0.lg/L,FeSO4.7H200.05g/L, CaCl20.3g/L，溶劑為水，ρΗ7.0 ； (3)發酵產物經分離`純化獲得所述阿尼芬凈前體化合物EchinocandinB。
【文檔編號】C12R1/66GK103509840SQ201310478251
【公開日】2014年1月15日 申請日期:2013年10月12日 優先權日:2013年10月12日
【發明者】鄭裕國, 牛坤, 鄒樹平, 毛健, 鐘偉, 沈寅初 申請人:浙江工業大學