一種多粘類芽胞桿菌發酵生產粘桿菌素的培養基和補料方法

一種多粘類芽胞桿菌發酵生產粘桿菌素的培養基和補料方法
【專利摘要】本發明涉及一種多粘類芽胞桿菌發酵生產粘桿菌素的培養基和補料方法，本發明通過設置適合于多粘類芽胞桿菌發酵生產粘桿菌素的種子培養基和發酵培養基組方，及發酵補料工藝，從而提高粘桿菌素發酵單位，縮短發酵周期，降低發酵成本，并且最大限度的降低原輔料來源不受環境影響，保證其供應充足，實現粘桿菌素穩定、高效的生產。
【專利說明】一種多粘類芽胞桿菌發酵生產粘桿菌素的培養基和補料方 法

【技術領域】
[0001] 本發明屬于發酵【技術領域】，特別是涉及一種多粘類芽胞桿菌發酵生產粘桿菌素的 培養基和補料方法。

【背景技術】
[0002] 粘桿菌素系由多粘軒菌培養液中獲得的堿性瑣環狀多肽類（polypeptide system)抗生素，是多粘菌素 El和E2的混合物。為白色粉末，易溶于水，耐熱，消化道不 易吸收，排泄迅速，毒性小，無副作用，不易產生耐藥菌株，是最安全的畜禽促生長抗生素之 一。粘桿菌素主要對革蘭氏陰性菌有很強的抗菌作用，幾乎對所有革蘭氏陰性菌有效，對綠 膿桿菌有顯著作用。治療時常與抗革蘭氏陽性菌的桿菌肽鋅合用；用作飼料添加劑可刺激 幼畜生長，提高飼料效率，防止肉雞、豬、牛等畜禽傳染性腸炎；防治大腸桿菌、綠膿桿菌、沙 門氏菌等革蘭氏陰性菌引起的腸道疾病。
[0003] 目前，國內粘桿菌素的發酵生產采用二級發酵模式，該方式存在的主要問題有以 下幾點： 1粘桿菌素發酵水平較低，一般控制在700000u/ml左右。
[0004] 2國內發酵生產粘桿菌素的培養基中加入葡萄糖，經高溫滅菌，易導致部分葡萄糖 碳化，降低還原糖含量，影響發酵液效價。
[0005] 3國內粘桿菌素的發酵培養周期較長，一般在120h以上，導致能耗較高。
[0006] 4發酵成本較高。


【發明內容】

[0007] 本發明的目的就在于克服上述現有技術的缺陷，提供一種有效提高其發酵單位， 同時最大限度的降低原輔料對發酵單位的影響，降低生產成本，且原輔料來源不受環境影 響，保證其供應充足，實現粘桿菌素穩定、高效生產的多粘類芽胞桿菌發酵生產粘桿菌素的 培養基； 本發明的另一目的利用上述培養基發酵生產粘桿菌素的補料方法。
[0008] 為實現上述目的所采取的技術方案為： 一種多粘類芽胞桿菌發酵生產粘桿菌素的培養基，包括種子培養基和發酵培養基，其 特征在于 所述種子培養基組成為：麩皮5?10g/L，麥芽提取物10?15g/L，魚粉2?6g/L，玉 米漿11?15ml/L，烘培豆粉15?20g/L，啤酒酵母浸膏10?15g/L，硫酸銨1?5g/L，輕 質碳酸1丐1?5g/L，橄欖油或菜籽油3?7ml/L ; 所述發酵培養基組成為：麩皮9?13g/L，麥芽提取物15?20g/L，魚粉4?8g/L，玉米 漿15?19ml/L，烘培豆粉20?25g/L，啤酒酵母浸膏15?19g/L，硫酸銨4?8g/L，輕質 碳酸鈣5?9g/L，磷酸二氫鉀0. 3?0. 7g/L，橄欖油或菜籽油15?20ml/L，氯化鈉0. 2? 〇· 6g/L，硫酸鎂(λ 1?(λ 5g/L，硫酸亞鐵(λ 1?(λ 5g/L，消泡劑(λ 03?(λ 08ml/L，麥芽糖酶 0·002 ?0· 006g/L。
[0009] 所述消泡劑為乳化硅油、聚氧乙烯、聚氧丙烯季戊四醇醚或聚氧丙烯甘油醚。
[0010] 所述麥芽提取物是指將啤酒釀造過程中產生的麥芽廢渣經閃蒸干燥、浸提、濃縮、 真空干燥、粉碎、分篩后所獲得的麥芽提取物，其質量要求為：麥芽提取物過80目篩的量超 過80%，氨基氮含量超過35%，可溶性蛋白含量達到14%以上。
[0011] 上述閃蒸干燥：啤酒釀造過程中產生的麥芽廢渣加入應用水，其加量為2?4L/ kg，加入40?50%的鹽酸或硫酸溶液，調節pH至2?3,攪拌40?60h，過濾得到濕菌渣。 啟動閃蒸干燥設備，進風溫度控制在100?120°C，出風溫度控制在40?60°C。閃蒸干燥 結束，得到麥芽干渣。
[0012] 浸提：麥芽干渣中加入有機溶媒，其加入量為干渣重量（kg):有機溶媒α)=ι:2? 3。有機溶媒可以使甲醇或醋酸丁酯或乙酸乙酯。攪拌轉速控制在300?500r/min，時間控 制在240?300min，提取結束，并過濾，得到浸提液。重復以上操作1次，收集兩個批次的浸 提液。
[0013] 降膜濃縮：采用旋轉刮板薄膜蒸發器降膜蒸發麥干芽渣浸提液，控制溫度100? 120°C，濃縮至原體積的20?30%。
[0014] 真空干燥：濃縮液進行真空干燥，真空度控制在-0. 04?-0. 08MPa，溫度控制在 40?60°C，時間控制在180?200min。干燥結束，得到固體麥芽提取物。
[0015] 粉碎、分篩：麥芽提取物經粉碎機粉碎，并過80目篩。
[0016] 所述烘培豆粉是指將豆粉在60°C?80°C溫度條件下加熱80?lOOmin，然后過篩 所得，其尿素酶含量< 〇. 15U。
[0017] 利用上述培養基發酵生產粘桿菌素的補料方法，其特征是：在發酵過程中采用流 加法進行補料，補料包括補氨水、補糖和補水，其中 a補糖工藝控制： 發酵前l〇h不用進行補麥芽汁， 發酵時間在11?30h，當還原糖含量低于15%，補入麥芽汁，控制還原糖含量為15? 20%，每隔3?5h檢測發酵液還原糖含量， 發酵時間在31?60h，當還原糖含量低于8%，補入麥芽汁，控制還原糖含量為8?10%， 每隔3?5h檢測發酵液還原糖含量， 發酵時間在61h?90h，當還原糖含量低于5%，補入麥芽汁，控制還原糖含量為5?8%， 每隔3?5h檢測發酵液脂肪含量， 發酵時間在91h?發酵結束，不補入麥芽汁； b補水工藝控制： 發酵前30h不用進行補水， 發酵時間在31?60h，當菌體濃度高于50%，加入滅菌水，要求控制發酵液菌體濃度在 40?45%，每隔3?5h檢測發酵液菌體濃度， 發酵時間在61?90h，當菌體濃度高于45%，加入滅菌水，要求控制發酵液菌體濃度在 40?45%，每隔3?5h檢測發酵液菌體濃度， 發酵時間在91h?發酵結束，當菌體濃度高于40%，加入滅菌水，要求控制發酵液菌體 濃度在35?40%，每隔3?5h檢測發酵液菌體濃度； c補入氨水：，氨水濃度控制在15?20%， 發酵前l〇h，不補入氨水， 發酵llh至40h :氨基氮含量< 15%時，補入已滅菌的氨水溶液，使氨基氮的含量控制 在15?20%, 發酵41h至80h :氨基氮含量< 10%時，補入已滅菌的氨水溶液，使氨基氮的含量控制 在10?15%, 發酵81h至90h :氨基氮含量< 5%時，補入已滅菌的氨水溶液，使氨基氮的含量控制在 5 ?7%, 發酵91h至發酵結束：還原糖含量< 1%時，補入已滅菌的氨水溶液，使氨基氮的含量控 制在1?3%。
[0018] 本發明的技術優勢體現在： 1本發明確認了種子培養基、發酵培養碳源、氮源和最佳配伍比例。
[0019] 2本發明對發酵培養的補料工藝進行了詳細的闡述，確認了粘桿菌素最佳的補料 工藝和控制參數。
[0020] 3使用培養基配方和補料控制方法，粘桿菌素發酵單位達到810000u/ml以上，生 產周期不超過l〇〇h，同國內技術相比，發酵單位提高了 15. 7%，生產周期減少了 20h以上。
[0021] 3本發明適用于規模化發酵生產粘桿菌素，能夠滿足年產500噸粘桿菌素生產需 求。
[0022] 4培養基中使用麥芽提取物代替葡萄糖，不僅避免出現葡萄糖碳化現象，而且降 低了發酵成本，提高產品市場競爭力。
[0023] 具體實施方法 下面用實例予以說明本發明，應該理解的是，實例是用于說明本發明而不是對本發明 的限制。本發明的范圍與核心內容依據權利要求書加以確定。
[0024] 下述實施例的菌種選用多粘類芽胞桿菌：生產使用的菌種來源為母瓶發酵液。母 瓶發酵液質量：pH6?8 ;菌體濃度10?30% ;鏡檢無雜菌；發酵單位120000u/ml左右。
[0025] 下述實施例中采用多粘類芽胞桿菌發酵生產粘桿菌素的工藝采用常規技術， 種子培養工藝 首先將種子培養基滅菌并冷卻至25?30°C，并用無菌空氣保壓，然后在火焰保護下， 將已經培養好的多粘類芽胞桿菌按照〇. 3?0. 5L/m3的接種量接入種子培養基中進行種子 培養，至菌體濃度30?40%、pH值6?8、培養時間30?50h時移種，移種比例控制在0. 8? lm3/m3 ; 發酵培養工藝 先將發酵培養基滅菌，冷卻至20?30°C，并用無菌空氣保壓，然后將培養好的種子液 移入發酵培養基進行發酵培養。發酵培養過程中，溫度控制在32?33°C，空氣流量控制在 800?1000m3/h，攪拌轉速控制在80?100r/min，pH控制在6. 0?6. 5,至菌體濃度35? 40%、總糖< 3mg/100ml、脂肪< 0· 5g/L、氨基氮 10 ?15mg/100ml、化學效價> 800000u/mL、 pH6. 0?6. 5、培養時間90?100h時終止發酵。
[0026] 實施例1 種子培養基制備：種子液體積為lm3 種子培養基：麩皮5kg，麥芽提取物10kg、魚粉2kg、玉米漿11L、烘培豆粉15kg、啤酒酵 母浸膏10kg，硫酸銨lkg、輕質碳酸|丐lkg、橄欖油3L。
[0027] 首先將種子培養基滅菌并冷卻至25°C，并用無菌空氣保壓，然后在火焰保護下，將 已經培養好的多粘類芽胞桿菌按照0. 3L/m3的接種量接入種子培養基中進行種子培養，至 菌體濃度30%、pH值7. 8、培養時間30h時移種，移種比例控制在0. 8m3/m3 ; 發酵培養基制備：發酵液體積為l〇m3 發酵培養基：麩皮90kg、麥芽提取物150kg、魚粉40kg、玉米漿150L、烘培豆粉200kg、 啤酒酵母浸膏150kg，硫酸銨40kg、輕質碳酸|丐50kg、磷酸二氫鉀3kg，橄欖油150L、氯化鈉 2kg、硫酸鎂lkg、硫酸亞鐵lkg、乳化硅油0. 3L、麥芽糖酶0. 02kg。
[0028] 先將發酵培養基滅菌，冷卻至20°C，并用無菌空氣保壓，然后將培養好的種子液移 入發酵培養基進行發酵培養。發酵培養過程中，溫度控制在32?33°C，空氣流量控制在 800?1000m 3/h，攪拌轉速控制在80r/min，pH控制在6. 0?6. 5。發酵結束，菌體濃度35%、 總糖 1. 8mg/100ml、脂肪 0· 25g/L、氨基氮 10mg/100ml、pH6. 1，化學效價 811247u/mL、發酵周 期為92h。
[0029] 實施例2 種子培養基制備：種子液體積為lm3 種子培養基：麩皮6kg，麥芽提取物11kg、魚粉3kg、玉米漿12L、烘培豆粉16kg、啤酒酵 母浸膏11kg，硫酸銨2kg、輕質碳酸|丐2kg、菜籽油4L。
[0030] 首先將種子培養基滅菌并冷卻至26°C，并用無菌空氣保壓，然后在火焰保護下，將 已經培養好的多粘類芽胞桿菌按照0. 35L/m3的接種量接入種子培養基中進行種子培養，至 菌體濃度32%、pH值7. 4、培養時間35h時移種，移種比例控制在0. 85m3/m3 ; 發酵培養基制備：發酵液體積為l〇m3 發酵培養基：麩皮l〇〇kg、麥芽提取物160kg、魚粉50kg、玉米漿160L、烘培豆粉210kg、 啤酒酵母浸膏160kg，硫酸銨50kg、輕質碳酸|丐60kg、磷酸二氫鉀4kg，菜籽油160L、氯化鈉 3kg、硫酸鎂2kg、硫酸亞鐵2kg、聚氧乙烯0. 4L、麥芽糖酶0. 03kg。
[0031] 先將發酵培養基滅菌，冷卻至22°C，并用無菌空氣保壓，然后將培養好的種子液移 入發酵培養基進行發酵培養。發酵培養過程中，溫度控制在32?33°C，空氣流量控制在 800?1000m 3/h，攪拌轉速控制在85r/min，pH控制在6. 0?6. 5。發酵結束，至菌體濃度 36%、總糖 2. 0mg/100ml、脂肪 0· 29g/L、氨基氮 llmg/100ml、化學效價 813527u/mL、pH6. 2、發 酵周期93h。
[0032] 實施例3 種子培養基制備：種子液體積為lm3 種子培養基：麩皮7kg，麥芽提取物12kg、魚粉4kg、玉米漿13L、烘培豆粉17kg、啤酒酵 母浸膏12kg，硫酸銨3kg、輕質碳酸|丐3kg、橄欖油5L。
[0033] 首先將種子培養基滅菌并冷卻至27°C，并用無菌空氣保壓，然后在火焰保護下，將 已經培養好的多粘類芽胞桿菌按照0. 4L/m3的接種量接入種子培養基中進行種子培養，至 菌體濃度35%、pH值6. 9、培養時間40h時移種，移種比例控制在0. 9m3/m3。
[0034] 發酵培養基制備：發酵液體積為10m3 發酵培養基：麩皮110kg、麥芽提取物170kg、魚粉60kg、玉米漿170L、烘培豆粉220kg、 啤酒酵母浸膏170kg，硫酸銨60kg、輕質碳酸鈣70kg、磷酸二氫鉀5kg，橄欖油170L、氯化鈉 4kg、硫酸鎂3kg、硫酸亞鐵3kg、乳化硅油0. 5L、麥芽糖酶0. 04kg。
[0035] 先將發酵培養基滅菌，冷卻至25°C，并用無菌空氣保壓，然后將培養好的種子液移 入發酵培養基進行發酵培養。發酵培養過程中，溫度控制在32?33°C，空氣流量控制在 800?1000m 3/h，攪拌轉速控制在90r/min，pH控制在6. 0?6. 5。發酵結束，菌體濃度37%、 總糖 2. 3mg/100ml、脂肪 0· 33g/L、氨基氮 13mg/100ml、化學效價 817905u/mL、pH6. 3、發酵周 期 95h。
[0036] 實施例4 種子培養基制備：種子液體積為lm3 種子培養基：麩皮8kg，麥芽提取物13kg、魚粉5kg、玉米漿14L、烘培豆粉18kg、啤酒酵 母浸膏13kg，硫酸銨4kg、輕質碳酸|丐4kg、橄欖油6L。
[0037] 首先將種子培養基滅菌并冷卻至28°C，并用無菌空氣保壓，然后在火焰保護下，將 已經培養好的多粘類芽胞桿菌按照0. 45L/m3的接種量接入種子培養基中進行種子培養，至 菌體濃度38%、pH值6. 7、培養時間45h時移種，移種比例控制在0. 95m3/m3。
[0038] 發酵培養基制備：發酵液體積為10m3 發酵培養基：麩皮120kg、麥芽提取物180kg、魚粉70kg、玉米漿180L、烘培豆粉230kg、 啤酒酵母浸膏180kg，硫酸銨70kg、輕質碳酸鈣80kg、磷酸二氫鉀6kg，橄欖油180L、氯化鈉 5kg、硫酸鎂4kg、硫酸亞鐵4kg、聚氧丙烯季戊四醇醚0. 6L、麥芽糖酶0. 05kg。
[0039] 先將發酵培養基滅菌，冷卻至28°C，并用無菌空氣保壓，然后將培養好的種子液移 入發酵培養基進行發酵培養。發酵培養過程中，溫度控制在32?33°C，空氣流量控制在 800?1000m 3/h，攪拌轉速控制在95r/min，pH控制在6. 0?6. 5。發酵培養結束，菌體濃度 38%、總糖 2. 5mg/100ml、脂肪 0· 38g/L、氨基氮 14mg/100ml、化學效價 815476u/mL、pH6. 4、發 酵周期97h。
[0040] 實施例5 種子培養基制備：種子液體積為lm3 種子培養基：麩皮l〇kg，麥芽提取物15kg、魚粉6kg、玉米漿15L、烘培豆粉20kg、啤酒 酵母浸膏15kg，硫酸銨5kg、輕質碳酸|丐5kg、菜籽油7L。
[0041] 首先將種子培養基滅菌并冷卻至30°C，并用無菌空氣保壓，然后在火焰保護下，將 已經培養好的多粘類芽胞桿菌按照0. 5L/m3的接種量接入種子培養基中進行種子培養，至 菌體濃度40%、pH值6. 2、培養時間50h時移種，移種比例控制在lm3/m3。
[0042] 發酵培養基制備：發酵液體積為10m3 發酵培養基：麩皮130kg、麥芽提取物200kg、魚粉80kg、玉米漿180L、烘培豆粉250kg、 啤酒酵母浸膏190kg，硫酸銨80kg、輕質碳酸|丐90kg、磷酸二氫鉀7kg，菜籽油200L、氯化鈉 6kg、硫酸鎂5kg、硫酸亞鐵5kg、聚氧丙烯甘油醚0. 8L、麥芽糖酶0. 06kg。
[0043] 先將發酵培養基滅菌，冷卻至30°C，并用無菌空氣保壓，然后將培養好的種子液移 入發酵培養基進行發酵培養。發酵培養過程中，溫度控制在32?33°C，空氣流量控制在 800?1000m 3/h，攪拌轉速控制在100r/min，pH控制在6. 0?6. 5。發酵結束，，菌體濃度 40%、總糖 2. 8mg/100ml、脂肪 0· 46g/L、氨基氮 15mg/100ml、化學效價 813004u/mL、pH6. 1、發 酵周期為99h。
[0044] 在上述實施例1-5中，在發酵過程中需要進行補料。補料采用流加法，補料包括 補油、補水、補糖和pH控制，其中 a補糖工藝控制： 發酵前l〇h不用進行補麥芽汁。
[0045] 發酵時間在11?30h，當還原糖含量低于15%，補入麥芽汁，控制還原糖含量為 15?20%，每隔3?5h檢測發酵液還原糖含量。
[0046] 發酵時間在31?60h，當還原糖含量低于8%，補入麥芽汁，控制還原糖含量為8? 10%,每隔3?5h檢測發酵液還原糖含量。
[0047] 發酵時間在61h?90h，當還原糖含量含量低于5%，補入麥芽汁，控制還原糖含量 為5?8%，每隔3?5h檢測發酵液脂肪含量。
[0048] 發酵時間在91h?發酵結束，不補入麥芽汁。
[0049] b補水工藝控制： 發酵前30h不用進行補水。
[0050] 發酵時間在31?60h，當菌體濃度高于50%，加入滅菌水，要求控制發酵液菌體濃 度在40?45%，每隔3?5h檢測發酵液菌體濃度， 發酵時間在61?90h，當菌體濃度高于45%，加入滅菌水，要求控制發酵液菌體濃度在 40?45%，每隔3?5h檢測發酵液菌體濃度， 發酵時間在91h?發酵結束，當菌體濃度高于40%，加入滅菌水，要求控制發酵液菌體 濃度在35?40%，每隔3?5h檢測發酵液菌體濃度； d補入氨水：氨水濃度控制在15?20%。
[0051] 發酵前l〇h，不補入氨水， 發酵llh至40h :氨基氮含量< 15%時，補入已滅菌的氨水溶液，使氨基氮的含量控制 在15?20%。
[0052] 發酵41h至80h :氨基氮含量< 10%時，補入已滅菌的氨水溶液，使氨基氮的含量 控制在10?15%。
[0053] 發酵81h至90h :氨基氮含量< 5%時，補入已滅菌的氨水溶液，使氨基氮的含量 控制在5?7%。
[0054] 發酵91h至發酵結束：還原糖含量< 1%時，補入已滅菌的氨水溶液，使氨基氮的含 量控制在1?3%。
[0055] 上實施例1-5中，麥芽提取物是指將啤酒釀造過程中產生的麥芽廢渣經閃蒸干 燥、浸提、濃縮、真空干燥、粉碎、分篩后所獲得的麥芽提取物，其質量要求為：麥芽提取物過 80目篩的量超過80%,氨基氮含量超過35%,可溶性蛋白含量達到14%以上，具體為： 上述閃蒸干燥：啤酒釀造過程中產生的麥芽廢渣加入應用水，其加量為2?4L/kg，加 入40?50%的鹽酸或硫酸溶液，調節pH至2?3,攪拌40?60h，過濾得到濕菌渣。啟動 閃蒸干燥設備，進風溫度控制在100?120°C，出風溫度控制在40?60°C。閃蒸干燥結束， 得到麥芽干渣。
[0056] 浸提：麥芽干渣中加入有機溶媒，其加入量為干渣重量（kg):有機溶媒（L)=l:2? 3。有機溶媒可以使甲醇或醋酸丁酯或乙酸乙酯。攪拌轉速控制在300?500r/min，時間控 制在240?300min，提取結束，并過濾，得到浸提液。重復以上操作1次，收集兩個批次的浸 提液。
[0057] 降膜濃縮：采用旋轉刮板薄膜蒸發器降膜蒸發麥干芽渣浸提液，控制溫度100? 120°C，濃縮至原體積的20?30%。
[0058] 真空干燥：濃縮液進行真空干燥，真空度控制在-0. 04?-0. 08MPa，溫度控制在 40?60°C，時間控制在180?200min。干燥結束，得到固體麥芽提取物。
[0059] 粉碎、分篩：麥芽提取物經粉碎機粉碎，并過80目篩。
[0060] 所述烘培豆粉是指將豆粉在60°C?80°C溫度條件下加熱80?lOOmin，然后過篩 所得，其尿素酶含量< 〇. 15U。
[0061] 對比實施例 種子培養基制備：種子液體積為lm3 種子培養基：葡萄糖10kg，麥芽糖15kg、酵母膏4kg、玉米楽13L、黃豆粉19kg、玉米蛋 白粉12kg，硫酸銨3kg、輕質碳酸|丐3kg。
[0062] 發酵培養基制備：發酵液體積為10m3 發酵培養基：葡萄糖120kg、麥芽糖170kg、酵母膏60kg、玉米漿170L、黃豆粉220kg、玉 米蛋白粉17〇kg，硫酸銨60kg、輕質碳酸興70kg、磷酸二氫鉀5kg，氯化鈉4kg、硫酸鎂3kg、 硫酸亞鐵3kg、硅油0. 5L、麥芽糖酶0. 04kg。
[0063] 發酵培養結束，粘桿菌素效價為710357u/ml，發酵周期為123h。
[0064] 發酵工藝控制同實施例1。
【權利要求】
1. 一種多粘類芽胞桿菌發酵生產粘桿菌素的培養基，包括種子培養基和發酵培養基， 其特征在于 所述種子培養基組成為：麩皮5?10g/L，麥芽提取物10?15g/L，魚粉2?6g/L，玉 米漿11?15ml/L，烘培豆粉15?20g/L，啤酒酵母浸膏10?15g/L，硫酸銨1?5g/L，輕 質碳酸1丐1?5g/L，橄欖油或菜籽油3?7ml/L ; 所述發酵培養基組成為：麩皮9?13g/L，麥芽提取物15?20g/L，魚粉4?8g/L，玉米 漿15?19ml/L，烘培豆粉20?25g/L，啤酒酵母浸膏15?19g/L，硫酸銨4?8g/L，輕質 碳酸鈣5?9g/L，磷酸二氫鉀0. 3?0. 7g/L，橄欖油或菜籽油15?20ml/L，氯化鈉0. 2? 〇· 6g/L，硫酸鎂(λ 1?(λ 5g/L，硫酸亞鐵(λ 1?(λ 5g/L，消泡劑(λ 03?(λ 08ml/L，麥芽糖酶 0·002 ?0· 006g/L。
2. 按照權利要求1所述多粘類芽胞桿菌發酵生產粘桿菌素的培養基，其特征在于所述 消泡劑為乳化硅油、聚氧乙烯、聚氧丙烯季戊四醇醚或聚氧丙烯甘油醚。
3. 按照權利要求1所述多粘類芽胞桿菌發酵生產粘桿菌素的培養基，其特征在于所述 麥芽提取物是指將啤酒釀造過程中產生的麥芽廢渣經閃蒸干燥、浸提、濃縮、真空干燥、粉 碎、分篩后所獲得的麥芽提取物，其質量要求為：麥芽提取物過80目篩的量超過80%，氨基 氮含量超過35%，可溶性蛋白含量超過14%。
4. 按照權利要求1所述多粘類芽胞桿菌發酵生產粘桿菌素的培養基，其特征在于所述 烘培豆粉是指將豆粉在60°C?80°C溫度條件下加熱80?lOOmin，然后過篩所得，其尿素酶 含量< 0· 15U。
5. -種利用權利要求1-4所述的培養基發酵生產粘桿菌素的補料方法，其特征是：在 發酵過程中采用流加法進行補料，補料包括補氨水、補糖和補水，其中 a補糖工藝控制： 發酵前l〇h不用進行補麥芽汁， 發酵時間在11?30h，當還原糖含量低于15%，補入麥芽汁，控制還原糖含量為15? 20%，每隔3?5h檢測發酵液還原糖含量， 發酵時間在31?60h，當還原糖含量低于8%，補入麥芽汁，控制還原糖含量為8?10%， 每隔3?5h檢測發酵液還原糖含量， 發酵時間在61h?90h，當還原糖含量低于5%，補入麥芽汁，控制還原糖含量為5?8%， 每隔3?5h檢測發酵液脂肪含量， 發酵時間在91h?發酵結束，不補入麥芽汁； b補水工藝控制： 發酵前30h不用進行補水， 發酵時間在31?60h，當菌體濃度高于50%，加入滅菌水，要求控制發酵液菌體濃度在 40?45%，每隔3?5h檢測發酵液菌體濃度， 發酵時間在61?90h，當菌體濃度高于45%，加入滅菌水，要求控制發酵液菌體濃度在 40?45%，每隔3?5h檢測發酵液菌體濃度， 發酵時間在91h?發酵結束，當菌體濃度高于40%，加入滅菌水，要求控制發酵液菌體 濃度在35?40%，每隔3?5h檢測發酵液菌體濃度； c補入氨水：，氨水濃度控制在15?20%， 發酵前l〇h，不補入氨水， 發酵llh至40h :氨基氮含量< 15%時，補入已滅菌的氨水溶液，使氨基氮的含量控制 在15?20%, 發酵41h至80h :氨基氮含量< 10%時，補入已滅菌的氨水溶液，使氨基氮的含量控制 在10?15%, 發酵81h至90h :氨基氮含量< 5%時，補入已滅菌的氨水溶液，使氨基氮的含量控制在 5 ?7%, 發酵91h至發酵結束：還原糖含量< 1%時，補入已滅菌的氨水溶液，使氨基氮的含量控 制在1?3%。
【文檔編號】C12R1/12GK104152516SQ201410432709
【公開日】2014年11月19日 申請日期:2014年8月29日 優先權日:2014年8月29日
【發明者】任勇 申請人:寧夏泰瑞制藥股份有限公司