一種利用高硒食用菌提取含硒蛋白的方法
【專利摘要】本發明公開了一種利用高硒食用菌提取含硒蛋白的方法，其特征在于包括以下步驟：A.高硒食用菌子實體的培育；B.高硒食用菌子實體漂洗與干燥；C.高硒食用菌子實體的粉碎；D.溶解處理；E.蛋白沉淀處理；F.偷襲處理；G.硒蛋白溶液進行噴霧干燥或真空冷凍干燥，得到純凈的硒蛋白粉。該方法生產的食用蛋白含硒量比較高，而且可操作性強，能夠實現標準化生產，保證所生產的含硒蛋白硒含量的穩定。
【專利說明】—種利用高砸食用菌提取含砸蛋白的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種利用高硒食用菌提取含硒蛋白的方法，屬于功能性食品的加工領域。
【背景技術】
[0002]硒是人體必需的微量元素，是谷胱甘肽過氧化物酶的必需成分，硒有抗氧化的作用，與人體健康息息相關，硒具有抗癌、保護心臟、抗肝壞死、防治近視和白內障、解毒、提高免疫力、延緩衰老和增強生殖功能等多種藥理作用。據不完全統計，世界上有40多個國家和地區缺硒，而我國有72%的地區屬于缺硒地區，因此，尋找和開發富硒產品，以保證人體攝入充足的硒，正被各國科學工作者關注。
[0003]食用菌是一大類可供食用的真菌，富含豐富的氨基酸和多糖等營養物質，營養價值豐富，同時具有很高的藥用價值，是公認的高營養保健食品，成為FAO推薦的21世紀健康食品，WHO推薦的“一葷一素一菇”健康膳食三大基石之一，具有廣闊的發展前景。
[0004]補硒的方式多種多樣，有各種含硒的保健品、各種富硒農產品等。經過幾十年的發展，人們補硒的硒源從第一代補硒產品的亞硒酸鈉，到第二代產品的富硒酵母，目前正在發展的第三代補硒產品，則以各種形式的有機硒為主，既包括通過各種植物轉化得到的有機硒，也包括通過動物轉化得到的富硒牛奶、雞蛋等等有機硒源，而含硒蛋白就是第三代硒源中其主要作用的活性物質。目前關于硒蛋白的提取方法及工藝，尚報道的比較少。“一種米糠硒蛋白粉的制備方法”(專利號:ZL201210494766.0)、“一種米糠硒蛋白與大豆蛋白復配膠囊”(專利申請號:201310287485.2)兩篇專利介紹的就是利用NaOH堿提的方法從米糠中提取硒蛋白，最終得到的蛋白硒含量為0.2?0.3mg/kg。“富硒靈芝中硒蛋白的制備方法”(專利號:ZL201010179117.2)介紹的則是利用富硒靈芝通過NaOH堿提與離子交換層析柱相結合的方法進行蛋白的提取，最終得到的蛋白硒含量為6mg/kg。“從富硒酵母中提取含硒蛋白的方法”(專利申請號:201110440135.6)介紹了從富硒酵母中通過堿提的方法提取含硒蛋白，通過該方法得到的硒的提取率在70%以上。“富硒酵母中含硒蛋白的制備方法”(專利申請號:201210288241.1)則采用鹽析和透析相結合并利用洗脫柱純化的方法制備蛋白硒。“一種富硒綠茶硒蛋白的提取方法”(200910181276.3)介紹的則是利用NaOH堿提的方法從茶葉中提取硒蛋白。以上這些蛋白提取方法利用不同的材料進行硒蛋白的提取，最終得到的硒蛋白產率與硒含量均與選擇的材料硒含量及蛋白含量相關，因此選擇好的富硒材料來進行硒蛋白的提取是相當重要的。
[0005]有鑒于上述的缺陷，本設計人，積極加以研究創新，以期創設一種利用高硒食用菌提取含硒蛋白的方法，使其更具有產業上的利用價值。
【發明內容】
[0006]為解決上述技術問題，本發明的目的是提供一種利用高硒食用菌提取含硒蛋白的方，旨在解決對目前硒蛋白提取過程中出現的硒蛋白產率低，及硒蛋白硒含量低的問題。
[0007]本發明提供的技術方案如下:
[0008]A.高硒食用菌子實體的培育:高硒食用菌采用粘土負載亞硒酸鈉緩釋劑的方法培育得到，其特征在于所述方法包括在食用菌栽培料中按10%的比例加入高硒緩釋添加齊U，然后按照食用菌正常的培育方法進行高硒食用菌的栽培。
[0009]優選的，所述的高硒緩釋添加劑以組分的重量份數計包括:
[0010]亞硒酸鈉0.22-0.44重量份數；
[0011]粘土 100重量份數；
[0012]優選的，所述的高硒緩釋添加劑中硒含量為1000_2000mg/kg。
[0013]優選的，所述粘土為納米級的中性粘土或高粘凹土。
[0014]優選的，所述的食用菌包括杏鮑菇、雞腿菇、秀珍菇、靈芝、平菇等食用菌中的一種。
[0015]優選的，所述高硒緩釋添加劑的制備方法為:將亞硒酸鈉溶于水中配置成溶液，然后與粘土均勻混合后于50-60°C進行低溫烘干，然后進行超微粉碎，制成所述的高硒緩釋添加劑。
[0016]優選的，本發明所述的高硒緩釋添加劑，經過本 申請人:的研究證實，所述的高硒緩釋添加劑在溶液狀態下，經過2小時達到穩定釋放狀態，溶液中硒溶度可達硒緩釋添加劑中原始硒濃度的50%以上，而且穩定釋放狀態可維持60-90天，起到硒的緩控釋放的作用。
[0017]根據本方法培育得到的食用菌子實體總硒含量在100_400mg/kg(DW)范圍內，與普通食用菌子實體相比較，最高可提高1000倍以上。而且，根據子實體硒形態的檢測結果，食用菌中硒絕大部分以有機結合態為主，有機硒比例在80%以上。
[0018]B.高硒食用菌子實體漂洗與干燥:將優選的高硒食用菌子實體進行漂洗，洗凈后將子實體置于50?55°C下烘干。
[0019]C.高硒食用菌子實體的粉碎:將干燥的食用菌子實體進行粉碎，過120目篩，得到高硒食用菌子實體菌粉。
[0020]D.將C中得到的高硒食用菌子實體菌粉用pH 10?14的NaOH溶液進行溶解，料液比為1:10?1:20，并于37°C水溶中浸提2?5h，離心，取上清液。
[0021]E.收集D中的上清液，用0.2mol/L的HCl調至中性。然后加入80?95%飽和度的硫酸銨，并于4°C靜止12?15h后用高速冷凍離心機進行離心，轉速為lOOOOrpm，取沉淀；
[0022]F.收集E中沉淀，用少量pH7.0左右的Tris-HCl緩沖液溶解沉淀，并放入透析袋中進行透析，直至無硫酸根離子，最終得到硒蛋白溶液。
[0023]G.對F中得到的硒蛋白溶液進行噴霧干燥或真空冷凍干燥，得到純凈的硒蛋白粉。
[0024]對所到的富硒蛋白粉進行總硒測定,總硒含量在25?100mg/kg范圍內。
[0025]借由上述方案，本發明至少具有以下優點:
[0026](I)本發明實現了高硒食用菌的深加工，利用高硒食用菌提取得到了富硒蛋白，提高了富硒食用菌的附加值；
[0027](2)本發明中采用的高硒食用菌作為原料，總硒含量高，而且高硒食用菌中的硒絕大部分以蛋白結合態為主，硒蛋白含量高，因此最終得到的富硒蛋白硒含量高，達到25?lOOmg/kg
[0028]上述說明僅是本發明技術方案的概述，為了能夠更清楚了解本發明的技術手段，并可依照說明書的內容予以實施，以下以本發明的較佳實施例進行詳細說明。
【具體實施方式】
[0029]下面結合實施例，對本發明的【具體實施方式】作進一步詳細描述。以下實施例用于說明本發明，但不用來限制本發明的范圍。
[0030]實施例1
[0031]富硒蛋白的提取
[0032]A.用菌子實體的培育:高硒食用菌采用粘土負載亞硒酸鈉緩釋劑的方法培育得至IJ，其特征在于所述方法包括在食用菌栽培料中按10 %的比例加入高硒緩釋添加劑，然后按照食用菌正常的培育方法進行高硒食用菌的栽培。
[0033]優選的，所述的高硒緩釋添加劑以組分的重量份數計包括:
[0034]亞硒酸鈉0.22重量份數；
[0035]粘土100重量份數；
[0036]優選的，所述的高硒緩釋添加劑中硒含量為1000mg/kg。
[0037]優選的，所述粘土為納米級的中性粘土或高粘凹土。
[0038]優選的，所述的食用菌包括杏鮑菇、雞腿菇、秀珍菇、靈芝、平菇等食用菌中的一種。
[0039]優選的，所述高硒緩釋添加劑的制備方法為:將亞硒酸鈉溶于水中配置成溶液，然后與粘土均勻混合后于50-60°C進行低溫烘干，然后進行超微粉碎，制成所述的高硒緩釋添加劑。
[0040]優選的，本發明所述的高硒緩釋添加劑，經過本 申請人:的研究證實，所述的高硒緩釋添加劑在溶液狀態下，經過2小時達到穩定釋放狀態，溶液中硒溶度可達硒緩釋添加劑中原始硒濃度的50%以上，而且穩定釋放狀態可維持60-90天，起到硒的緩控釋放的作用。
[0041]根據本方法培育得到的香菇子實體總硒含量在100mg/kg(DW)范圍內，與普通香菇子實體相比較，最高可提高1000倍以上。而且，根據子實體硒形態的檢測結果，食用菌中硒絕大部分以有機結合態為主，有機硒比例在80 %以上。
[0042]B.用菌子實體漂洗與干燥:將優選的高硒食用菌子實體進行漂洗，洗凈后將子實體置于50?55°C下烘干。
[0043]C.用菌子實體的粉碎:將干燥的食用菌子實體進行粉碎，過120目篩，得到高硒食用菌子實體菌粉。
[0044]D.將C中粉用pH 10的NaOH溶液進行溶解，料液比為1:10，并于37°C水溶中浸提2?5h，離心，取上清液。
[0045]E.收集D中的上清液，用0.2mol/L的HCl調至中性。然后加入80?95%飽和度的硫酸銨，并于4°C靜止12?15h后用高速冷凍離心機進行離心，轉速為lOOOOrpm，取沉淀；
[0046]F.收集E中沉淀，用少量pH7.0左右的Tris-HCl緩沖液溶解沉淀，并放入透析袋中進行透析，直至無硫酸根離子，最終得到硒蛋白溶液。
[0047]G.對F中得到的硒蛋白溶液進行噴霧干燥或真空冷凍干燥，得到純凈的硒蛋白粉。
[0048]對得到的富硒蛋白粉進行總硒測定,總硒含量在25mg/kg范圍內。
[0049]實施例2
[0050]富硒蛋白的提取
[0051]A.高硒食用菌子實體的培育:高硒食用菌采用粘土負載亞硒酸鈉緩釋劑的方法培育得到，其特征在于所述方法包括在食用菌栽培料中按10%的比例加入高硒緩釋添加齊U，然后按照食用菌正常的培育方法進行高硒食用菌的栽培。
[0052]優選的，所述的高硒緩釋添加劑以組分的重量份數計包括:
[0053]亞硒酸鈉0.264重量份數；
[0054]粘土100重量份數；
[0055]優選的，所述的高硒緩釋添加劑中硒含量為1200mg/kg。
[0056]優選的，所述粘土為納米級的中性粘土或高粘凹土。
[0057]優選的，所述的食用菌包括杏鮑菇、雞腿菇、秀珍菇、靈芝、平菇等食用菌中的一種。
[0058]優選的，所述高硒緩釋添加劑的制備方法為:將亞硒酸鈉溶于水中配置成溶液，然后與粘土均勻混合后于50-60°C進行低溫烘干，然后進行超微粉碎，制成所述的高硒緩釋添加劑。
[0059]優選的，本發明所述的高硒緩釋添加劑，經過本 申請人:的研究證實，所述的高硒緩釋添加劑在溶液狀態下，經過2小時達到穩定釋放狀態，溶液中硒溶度可達硒緩釋添加劑中原始硒濃度的50%以上，而且穩定釋放狀態可維持60-90天，起到硒的緩控釋放的作用。
[0060]根據本方法培育得到的香菇子實體總硒含量在200mg/kg(DW)范圍內，與普通香菇子實體相比較，最高可提高2000倍以上。而且，根據子實體硒形態的檢測結果，食用菌中硒絕大部分以有機結合態為主，有機硒比例在80 %以上。
[0061]B.高硒食用菌子實體漂洗與干燥:將優選的高硒食用菌子實體進行漂洗，洗凈后將子實體置于50?55°C下烘干。
[0062]C.高硒食用菌子實體的粉碎:將干燥的食用菌子實體進行粉碎，過120目篩，得到高硒食用菌子實體菌粉。
[0063]D.將C中得到的高硒食用菌子實體菌粉用pH 10的NaOH溶液進行溶解，料液比為1:10，并于37°C水溶中浸提2?5h，離心，取上清液。
[0064]E.收集D中的上清液，用0.2mol/L的HCl調至中性。然后加入80?95%飽和度的硫酸銨，并于4°C靜止12?15h后用高速冷凍離心機進行離心，轉速為lOOOOrpm，取沉淀；
[0065]F.收集E中沉淀，用少量pH7.0左右的Tris-HCl緩沖液溶解沉淀，并放入透析袋中進行透析，直至無硫酸根離子，最終得到硒蛋白溶液。
[0066]G.對F中得到的硒蛋白溶液進行噴霧干燥或真空冷凍干燥，得到純凈的硒蛋白粉。
[0067]對得到的富硒蛋白粉進行總硒測定，總硒含量在50mg/kg范圍內。
[0068]實施例3
[0069]富硒蛋白的提取
[0070]A.高硒食用菌子實體的培育:高硒食用菌采用粘土負載亞硒酸鈉緩釋劑的方法培育得到，其特征在于所述方法包括在食用菌栽培料中按10%的比例加入高硒緩釋添加齊U，然后按照食用菌正常的培育方法進行高硒食用菌的栽培。
[0071]優選的，所述的高硒緩釋添加劑以組分的重量份數計包括:
[0072]亞硒酸鈉0.33重量份數；
[0073]粘土100重量份數；
[0074]優選的,所述的高硒緩釋添加劑中硒含量為1500mg/kg。
[0075]優選的，所述粘土為納米級的中性粘土或高粘凹土。
[0076]優選的，所述的食用菌包括杏鮑菇、雞腿菇、秀珍菇、靈芝、平菇等食用菌中的一種。
[0077]優選的，所述高硒緩釋添加劑的制備方法為:將亞硒酸鈉溶于水中配置成溶液，然后與粘土均勻混合后于50-60°C進行低溫烘干，然后進行超微粉碎，制成所述的高硒緩釋添加劑。
[0078]優選的，本發明所述的高硒緩釋添加劑，經過本 申請人:的研究證實，所述的高硒緩釋添加劑在溶液狀態下，經過2小時達到穩定釋放狀態，溶液中硒溶度可達硒緩釋添加劑中原始硒濃度的50%以上，而且穩定釋放狀態可維持60-90天，起到硒的緩控釋放的作用。
[0079]根據本方法培育得到的香菇子實體總硒含量在320mg/kg(DW)左右，與普通香菇子實體相比較，最高可提高3000倍以上。而且，根據子實體硒形態的檢測結果，食用菌中硒絕大部分以有機結合態為主，有機硒比例在80%以上。
[0080]B.高硒食用菌子實體漂洗與干燥:將優選的高硒食用菌子實體進行漂洗，洗凈后將子實體置于50?55°C下烘干。
[0081]C.高硒食用菌子實體的粉碎:將干燥的食用菌子實體進行粉碎，過120目篩，得到高硒食用菌子實體菌粉。
[0082]D.將C中得到的高硒食用菌子實體菌粉用pH 12的NaOH溶液進行溶解，料液比為1:15，并于37°C水溶中浸提2?5h，離心，取上清液。
[0083]E.收集D中的上清液，用0.2mol/L的HCl調至中性。然后加入80?95%飽和度的硫酸銨，并于4°C靜止12?15h后用高速冷凍離心機進行離心，轉速為lOOOOrpm，取沉淀；
[0084]F.收集E中沉淀，用少量pH7.0左右的Tris-HCl緩沖液溶解沉淀，并放入透析袋中進行透析，直至無硫酸根離子，最終得到硒蛋白溶液。
[0085]G.對F中得到的硒蛋白溶液進行噴霧干燥或真空冷凍干燥，得到純凈的硒蛋白粉。
[0086]對得到的富硒蛋白粉進行總硒測定，總硒含量在80mg/kg范圍內。
[0087]實施例4
[0088]富硒蛋白的提取
[0089]A.高硒食用菌子實體的培育:高硒食用菌采用粘土負載亞硒酸鈉緩釋劑的方法培育得到，其特征在于所述方法包括在食用菌栽培料中按10%的比例加入高硒緩釋添加齊U，然后按照食用菌正常的培育方法進行高硒食用菌的栽培。
[0090]優選的，所述的高硒緩釋添加劑以組分的重量份數計包括:
[0091]亞硒酸鈉0.44重量份數；
[0092]粘土100重量份數；
[0093]優選的，所述的高硒緩釋添加劑中硒含量為2000mg/kg。
[0094]優選的，所述粘土為納米級的中性粘土或高粘凹土。
[0095]優選的，所述的食用菌包括杏鮑菇、雞腿菇、秀珍菇、靈芝、平菇等食用菌中的一種。
[0096]優選的，所述高硒緩釋添加劑的制備方法為:將亞硒酸鈉溶于水中配置成溶液，然后與粘土均勻混合后于50-60°C進行低溫烘干，然后進行超微粉碎，制成所述的高硒緩釋添加劑。
[0097]優選的，本發明所述的高硒緩釋添加劑，經過本 申請人:的研究證實，所述的高硒緩釋添加劑在溶液狀態下，經過2小時達到穩定釋放狀態，溶液中硒溶度可達硒緩釋添加劑中原始硒濃度的50%以上，而且穩定釋放狀態可維持60-90天，起到硒的緩控釋放的作用。
[0098]根據本方法培育得到的香菇子實體總硒含量在400mg/kg(DW)范圍內，與普通香菇子實體相比較，最高可提高4000倍以上。而且，根據子實體硒形態的檢測結果，食用菌中硒絕大部分以有機結合態為主，有機硒比例在80 %以上。
[0099]B.高硒食用菌子實體漂洗與干燥:將優選的高硒食用菌子實體進行漂洗，洗凈后將子實體置于50?55°C下烘干。
[0100]C.高硒食用菌子實體的粉碎:將干燥的食用菌子實體進行粉碎，過120目篩，得到高硒食用菌子實體菌粉。
[0101]D.將C中得到的高硒食用菌子實體菌粉用pH 14的NaOH溶液進行溶解，料液比為1: 1:20，并于37°C水溶中浸提2?5h，離心，取上清液。
[0102]E.收集D中的上清液，用0.2mol/L的HCl調至中性。然后加入80?95%飽和度的硫酸銨，并于4°C靜止12?15h后用高速冷凍離心機進行離心，轉速為lOOOOrpm，取沉淀；
[0103]F.收集E中沉淀，用少量pH7.0左右的Tris-HCl緩沖液溶解沉淀，并放入透析袋中進行透析，直至無硫酸根離子，最終得到硒蛋白溶液。
[0104]G.對F中得到的硒蛋白溶液進行噴霧干燥或真空冷凍干燥，得到純凈的硒蛋白粉。
[0105]對得到的富硒蛋白粉進行總硒測定，總硒含量在100mg/kg左右。
[0106]以上所述僅是本發明的優選實施方式，并不用于限制本發明，應當指出，對于本【技術領域】的普通技術人員來說，在不脫離本發明技術原理的前提下，還可以做出若干改進和變型，這些改進和變型也應視為本發明的保護范圍。
【權利要求】
1.一種利用高硒食用菌提取含硒蛋白的方法，其特征在于包括以下步驟: A.高硒食用菌子實體的培育:高硒食用菌采用在食用菌栽培料中按10%的比例加入高硒緩釋添加劑，然后采用粘土負載亞硒酸鈉緩釋劑的方法培育進行高硒香菇的栽培； B.高硒食用菌子實體漂洗與干燥:將優選的高硒食用菌子實體進行漂洗，洗凈后將子實體進行烘干； C.高硒食用菌子實體的粉碎:將干燥的食用菌子實體進行粉碎，過120目篩，得到高硒食用菌子實體菌粉； D.將C中得到的高硒食用菌子實體菌粉用pH10?14的NaOH溶液進行溶解，料液比為1:10?1:20，并于37°C水溶中浸提2?5h，離心，取上清液； E.收集D中的上清液，用0.2mol/L的HCl調至中性。然后加入80?95%飽和度的硫酸銨，并于4°C靜止12?15h后用高速冷凍離心機進行離心，轉速為lOOOOrpm，取沉淀； F.收集E中沉淀，用少量pH7.0左右的Tris-HCl緩沖液溶解沉淀，并放入透析袋中進行透析，直至無硫酸根離子，最終得到硒蛋白溶液； G.對F中得到的硒蛋白溶液進行噴霧干燥或真空冷凍干燥，得到純凈的硒蛋白粉。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于:所述高硒緩釋添加劑以組分的重量份數計包括: 亞硒酸鈉 0.22-0.44重量份數； 粘土100重量份數。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于:所述高硒緩釋添加劑中硒含量為1000_2000mg/kg。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于:所述粘土為納米級的中性粘土或高粘凹土。
5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于:所述的食用菌包括杏鮑菇、雞腿菇、秀珍菇、靈芝、平菇等食用菌中的一種。
6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于:所述高硒緩釋添加劑的制備方法為:將亞硒酸鈉溶于水中配置成溶液，然后與粘土均勻混合后于50-60°C進行低溫烘干，然后進行超微粉碎，制成所述的高硒緩釋添加劑。
7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于:所述步驟B中高硒食用菌子實體的干燥溫度為50?55°C。
【文檔編號】A23J1/00GK104365988SQ201410608615
【公開日】2015年2月25日 申請日期:2014年11月3日 優先權日:2014年11月3日
【發明者】羅磊, 袁林喜 申請人:蘇州硒谷科技有限公司