嗜酸乳桿菌固態發酵母豬配合飼料的制備方法及其應用與流程

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本發明涉及發酵飼料技術領域，具體涉及特別涉及一種嗜酸乳桿菌固態發酵母豬配合飼料的制備方法及其應用。

背景技術：

母豬腸道健康和繁殖性能提高，是豬場的重要任務。而母豬配合飼料是母豬繁殖生產的重要投入品，其營養價值、適口性和原料價格等，直接影響豬場生產水平和經濟效益。近幾年，隨著飼用抗生素逐漸被禁用，益生菌發酵飼料備受推崇，希望通過益生菌的作用，平衡腸道菌群，抑制大腸桿菌、金黃色葡萄球菌等有害細菌生長與繁殖，提高配合飼料的適口性，降解飼料中的抗營養因子和霉菌毒素，將大分子蛋白轉化為容易消化吸收的小肽，減少氨、吲哚、生物胺和臭氣等有害物質產生，進而改善母豬腸道健康，增強機體免疫力，提高母豬繁殖性能，優化生豬養殖環境。

目前，固態發酵飼料技術，多采用多菌種混合發酵技術，產生了一定效果，但這些固態發酵飼料技術，操作較為繁瑣(需要多菌種分別操作)，發酵時間較長(4～10天或更長)，發酵飼料新鮮度往往受到影響(揮發性鹽基氮超標)，并且還會因為耗氧產熱等造成飼料能量損失，飼喂方式與飼喂效果還需要改進。譬如，公布號cn102429112a的申請專利和公布號cn102422996a的申請專利，使用嗜酸乳桿菌、枯草芽孢桿菌、釀酒酵母、長柄木霉、黑曲霉和米曲霉，分別發酵妊娠母豬飼料和生長肥育豬料；公布號cn105410410a的申請專利，使用混合嗜酸乳桿菌(嗜酸乳桿菌、短乳桿菌、干酪乳桿菌、糞腸球菌、乳糖乳桿菌)、酵母菌和芽孢桿菌等混合發酵保育豬料、生長育肥豬料和妊娠母豬料；公布號cn104106727a的申請專利，使用植物乳桿菌、納豆芽孢桿菌、啤酒酵母菌和產朊假絲酵母，混合發酵雞、豬、牛飼料；公布號cn105595028a的申請專利，使用嗜酸乳桿菌、凝結芽孢桿菌和球擬圓酵母菌，混合發酵母豬飼料；公布號cn103960479a的申請專利，使用單一菌種嗜酸乳桿菌發酵橙渣，在15～30℃溫度下密閉發酵7～10天，制備了橙渣發酵產品，應用于牛飼料；劉曉明等(2014)研究指出，采用嗜酸乳桿菌、酵母菌混合菌株發酵豬飼料后，發現發酵后的飼料能量值降低了。謝全喜等(2016)采用鼠李糖乳桿菌和產朊假絲酵母發酵母豬配合飼料，在溫度28℃條件下發酵48小時，乳酸桿菌活菌數達到109×10⁸cfu/g，酵母菌活菌數為46×10⁶cfu/g，但目前我國農業部尚沒有允許鼠李糖乳桿菌使用在畜禽飼料中。

技術實現要素：

本發明的目的在于提供一種嗜酸乳桿菌用于制備固態發酵母豬配合飼料的方法，其優化固態發酵飼料工藝，簡化操作，縮短發酵時間，保持飼料新鮮度，減少耗氧產熱等引起的飼料能值損失，利用該方法制備的固態發酵母豬配合飼料飼養母豬后，改善了母豬腸道健康，提高機體免疫力，提高母豬的繁殖性能。

一種嗜酸乳桿菌固態發酵母豬配合飼料的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)發酵母豬飼料原料的準備：將按重量份計的下述物料混合均勻：母豬配合飼料90～110、飲用水70～90、葡萄糖1～3和豬源嗜酸乳桿菌凍干制劑0.3～0.5；

(2)將所述步驟(1)準備好的原料，裝入干凈的不銹鋼桶或塑料桶中，壓實，加蓋密封，作為發酵飼料桶；

(3)將所述發酵飼料桶放入密閉條件下，35～39℃恒溫培養，發酵24～36h后，獲得嗜酸乳桿菌固態發酵母豬飼料。

優選地，所述豬源嗜酸乳桿菌凍干制劑中其活菌數含量≥10⁹cfu/g。

優選地，所述母豬配合飼料為100份，所述飲用水80份、葡萄糖2份和豬源嗜酸乳桿菌cgmccno.8491凍干制劑0.4份。

優選地，所述豬源嗜酸乳桿菌為嗜酸乳桿菌lactobacillusacidophiluszla012，保藏號為：cgmccno.8491。

該制備方法獲得的嗜酸乳桿菌固態發酵母豬配合飼料，其粗蛋白質和酸溶蛋白含量明顯提高，嗜酸乳桿菌活菌數大于10⁹cfu/g，ph值小于4.2，乳酸含量大于130mmol/kg，揮發性鹽基氮含量小于29mg/100g，新鮮可口，具有酸香味。

如上所述制備方法制備的嗜酸乳桿菌固態發酵母豬飼料在母豬飼料中的應用。

如上所述的應用，優選地，所述嗜酸乳桿菌固態發酵母豬飼料在常規母豬飼料中添加量為重量比5％。

本發明的有益效果為：

本發明提供的嗜酸乳桿菌固態發酵母豬配合飼料的制備方法，其操作簡單，并縮短發酵時間，能保持飼料新鮮度，減少耗氧產熱等引起的飼料能值損失。獲得的嗜酸乳桿菌固態發酵母豬配合飼料，其粗蛋白質和酸溶蛋白含量明顯提高，嗜酸乳桿菌活菌數大于10⁹cfu/g，ph值小于4.2，乳酸含量大于130mmol/kg，揮發性鹽基氮含量小于29mg/100g，新鮮可口，具有酸香味。用于飼喂妊娠母豬和哺乳母豬后，能改善母豬腸道健康，提高機體免疫力，提高母豬繁殖性能。仔豬斷奶時成活率提高，仔豬日增重提高，能顯著減少豬糞中有害細菌排放。

附圖說明

圖1為不同發酵溫度對母豬飼料中嗜酸乳桿菌活菌數的影響結果圖。

圖2為不同發酵時間對母豬飼料中嗜酸乳桿菌活菌數的影響結果圖。

圖3為不同接種量對母豬飼料中嗜酸乳桿菌活菌數的影響結果圖。

圖4為不同料水比對母豬飼料中嗜酸乳桿菌活菌數的影響結果圖。

圖5為發酵前后(鮮基)活菌數、ph及乳酸、揮發性鹽基氮含量對比圖。

圖6為發酵前后(干基)營養成分的變化比較圖。

具體實施方式

本發明是對在前申請201510111576.x，所述的嗜酸乳桿菌lactobacillusacidophiluszla012，保藏號為：cgmccno.8491的進一步研究應用。

下面結合具體的實施例來說明本發明內容，但不應理解為對本發明的限制。在不背離本發明精神和實質的情況下，對本發明方法、步驟或條件所作的修改或替換，均屬于本發明的范圍。

若未特別指明，實施例中所用的技術手段為本領域技術人員所熟知的常規手段。

實施例1嗜酸乳桿菌固態發酵母豬飼料工藝優化

一種嗜酸乳桿菌固態發酵母豬飼料的制備方法，包括如下步驟：

(1)發酵母豬飼料原料的準備：將下述物料混合均勻：母豬配合飼料、飲用水、葡萄糖和豬源嗜酸乳桿菌凍干制劑；

(2)將所述步驟(1)準備好的原料裝入干凈的不銹鋼桶或塑料桶中，壓實，加蓋密封，作為發酵飼料桶；

(3)將所述發酵飼料桶放入密閉的條件下，一定的發酵溫度下恒溫培養，一定發酵時間后，獲得嗜酸乳桿菌固態發酵母豬飼料。

其中，采用豬源嗜酸乳桿菌為(lactobacillusacidophiluszla012，保藏號為：cgmccno.8491)凍干制劑(活菌數≥10⁹cfu/g)，其制備方法可參見公開號為cn104673726a中所述方法，發酵母豬配合飼料(水分含量11.71％)，以嗜酸乳桿菌活菌數為指標，分別研究發酵溫度(25℃、33℃、35℃、37℃和39℃)、發酵時間(12、24、36、48、60和72h)、接種量(按母豬配合飼料的重量百分比分別為0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.8％和1.0％)及料水比(1:0.4、1:0.6、1:0.8、1:1、1:1.2和1:1.4)的影響。結果見圖1、2、3、4。

由圖1～4可見，隨著發酵溫度、發酵時間、接種量及料水比的增加，發酵配合飼料中的嗜酸乳桿菌活菌數先增后減，根據結果，溫度35～39℃、發酵時間24～36h、接種量0.4％及料水比1:0.8時，發酵效果較好。

具體地，優化后的豬源嗜酸乳桿菌固態發酵母豬配合飼料的制備方法，包括如下步驟：

(1)發酵母豬飼料原料的準備：將按重量份計的下述物料混合均勻：母豬配合飼料100、飲用水80、葡萄糖2和豬源嗜酸乳桿菌cgmccno.8491凍干制劑0.4；

(2)將所述步驟(1)準備好的原料裝入干凈的不銹鋼桶或塑料桶中，壓實，加蓋密封，作為發酵飼料桶；

(3)將所述發酵飼料桶放入密閉的條件下，35～39℃恒溫培養，發酵24～36h后，獲得嗜酸乳桿菌固態發酵母豬飼料。

其中，母豬配合飼料配方按照母豬妊娠后期基礎日糧和哺乳期基礎日糧參照《豬飼養標準》(2004)配制。

實施例2飼料發酵前后的指標變化情況

采用實施例1中優化后發酵工藝，采用嗜酸乳桿菌對哺乳母豬配合飼料進行發酵，發酵24h后即為發酵飼料鮮樣，測定鮮樣中嗜酸乳桿菌活菌數、ph、乳酸含量及揮發性鹽基氮含量。將發酵后飼料于60℃烘干，粉碎過60目篩，為發酵飼料干樣，測定干樣中粗蛋白質、粗灰分、鈣、總磷和酸溶蛋白含量。

粗蛋白的測定：采用gb/t6432-1994測定樣品中粗蛋白質含量；

粗灰分的測定：采用gb/t6438-1992測定樣品中粗灰分含量；

鈣的測定：采用gb/t6436-2002測定樣品中鈣含量；

磷的測定：采用gb/t6437-2002測定樣品中總磷含量；

酸溶蛋白的測定：準確稱取樣品6g于100ml燒杯中，準確加入15％三氯乙酸溶液50ml，混合均勻，靜置5min，以中速定性濾紙過濾，將濾液轉移至離心管，4000r/min離心10min，取上清液按半微量法測定其酸溶蛋白含量。將發酵飼料鮮樣的發酵前后活菌數、ph及乳酸、揮發性鹽基氮含量對比數據例為柱狀圖，結果見圖5所示，由圖5可見，發酵后的母豬配合飼料(鮮基)ph值降至4.11，乳酸含量達到133.69mmol/kg，嗜酸乳桿菌活菌數(lgcfu/g值為9.38)，顯著高于發酵前(lgcfu/g值為6.64)。另外，發酵后飼料中的揮發性鹽基氮含量為28.67mg/100g，發酵飼料新鮮可口，具有酸香味。

發酵飼料干樣的發酵前后營養成分的對比數據例為柱狀圖，結果見圖6所示，由圖6可見，發酵后的母豬配合飼料(干基)，其粗蛋白質、酸溶蛋白、鈣及總磷含量明顯提高。這表明使用豬源嗜酸乳桿菌固態發酵飼料，能夠提高配合飼料的營養品質，有利于消化吸收。

實施例3發酵飼料對母豬繁殖性能、乳成分、飼料消化率及糞中菌群的影響1試驗動物及管理

選用健康、胎次和預產期相近的妊娠母豬40頭，隨機分成兩個組，每組20個重復，每個重復1頭母豬。試驗期限為母豬妊娠85d至仔豬28d斷奶。對照組飼喂基礎日糧，試驗組母豬在基礎日糧中添加5％發酵配合飼料(采用實施例3中優化后的方法制備，其中，發酵溫度為37℃恒溫培養，發酵24后)。其中，母豬妊娠后期基礎日糧和哺乳期基礎日糧參照《豬飼養標準》(2004)配制。母豬飼養于同一棟圈舍，飼喂方式、飼喂時間、免疫程序和飼養管理等均按豬場統一要求執行。

2試驗結果

2.1母豬繁殖性能

由表1可見，飼喂發酵飼料的試驗組，其母豬窩產活仔數提高了1頭以上，仔豬斷奶時成活率提高了8個百分點，哺乳期仔豬日增重提高了9.1％,仔豬腹瀉率降低了3個百分點，哺乳母豬采食量提高了6.8％。這表明發酵飼料能夠提高母豬繁殖性能，同時促進仔豬健康和成活率提高。

表1發酵飼料對母豬繁殖性能的影響

2.2母豬初乳成分及乳中免疫指標

見表2可見，試驗組母豬初乳中蛋白質、乳總固形物、iga和igm含量，分別比對照組分別提高了18.07％、13.06％、4.06％和5.61％，這表明飼喂發酵飼料能夠改善母豬初乳成分，增加乳中免疫球蛋白含量，有利于仔豬健康生長。

表2發酵飼料對母豬初乳成分及免疫指標的影響

2.3母豬飼料營養成分消化率

表3可見，試驗組母豬對飼料中有機物質、粗蛋白質、鈣和總磷的表觀消化率均顯著高于對照組，這表明發酵飼料能夠促進豬群對營養物質的消化吸收，有利于母豬降低生產成本，提高養殖效益。

表3發酵飼料對母豬營養成分表觀消化率的影響％

2.4母豬糞中菌群

表4可見，母豬飼喂發酵飼料后，能顯著增加糞便中有益的嗜酸乳桿菌菌數，顯著降低糞便中有害的大腸桿菌和金黃色葡萄球菌數量。這表明發酵飼料能夠改善母豬腸道菌群，有利于機體健康生長，并減少有害細菌的排放。