專利名稱：乳酸左旋氧氟沙星粉針劑及制備方法
技術領域：
本發明涉及藥物制備技術領域。具體涉及乳酸左旋氧氟沙星粉針劑及制備方法。
背景技術：
氧氟沙星是第三代喹諾酮類抗菌藥。喹諾酮類抗菌藥具有抗菌譜廣，抗菌活性強，給藥方便，與常用抗菌藥物無交叉耐藥性，生產不需糧食，價格比療效相當的抗生素低廉，對輕、中、重各類感染均有良好療效等特點。氧氟沙星具有第三代喹諾酮類抗菌藥物的特性，對多數腸桿菌科的細菌如肺炎克雷白桿菌、變形桿菌屬、傷寒沙門氏菌屬、志賀桿菌、部分綠膿桿菌、淋球菌、大腸桿菌等具有較強的抗菌活性，對部分葡萄球菌、肺炎鏈球菌、衣原體等也有良好的抗菌作用。作為氧氟沙星的更新換代產品左氧氟沙星，它的作用機理同其它的喹諾酮類一樣，是通過抑制細菌的DNA螺旋酶而起作用。它的體外抗菌活性為消旋體氧氟沙星的2倍，為右旋體的8-128倍，并且該藥物對細菌及哺乳動物異構酶II抑制作用有明顯選擇性，兩者之差達1400倍，從而明顯提高了臨床用藥的安全性，尤其是中樞神經系統的毒性低于氧氟沙星。對革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽性菌和部分厭氧菌有較大的抗菌作用。體內抗菌活性表明，對大腸桿菌有效性為氧氟沙星的15倍，對金葡菌及綠膿桿菌的有效性分別為環丙沙星的3倍和1倍。該藥體外試驗表明，它的抗菌譜廣，臨床使用耐藥性良好。左氧氟沙星具有良好的藥代動力學特性，該藥口服吸收快，生物利用度為100％，口服或靜脈注射2種給藥途徑可替換使用，為臨床順貫療法提供了好的依據。該藥主要以藥物原形經尿液排出體外，代謝物少且無活性，半衰期較長為6-8小時，體內分布廣泛，穿透性強，在組織與體液內的藥物濃度較高，較抗菌所需MIC值高數倍。
雖然左氧氟沙星的口服吸收較快，但重癥病人還是需要用注射劑來快速控制病情。左氧氟沙星的水溶性較差，將左氧氟沙星制成乳酸鹽后，水溶性有所改變，這為注射劑奠定了基礎。乳酸左氧氟沙星注射液療效確切，毒副作用較低，受到市場的好評，但注射液不利于貯藏和運輸，穩定性難以保證。
發明內容
本發明所要解決的技術問題在于改進現有的乳酸左旋氧氟沙星的劑型，提供一種制備簡便、純度高、質量穩定、副作用低、便于儲存運輸的粉針劑。
本發明公開的乳酸左旋氧氟沙星粉針劑是將乳酸左旋氧氟沙星水溶液經脫色、除菌過濾后用乙醇或丙酮沖析結晶、灌裝后獲得的無菌粉末制劑。采用高壓液相檢測，無菌粉末中右旋異構體含量低于0.5％。
本發明乳酸左旋氧氟沙星粉針劑具體通過下述步驟制得1.乳酸左旋氧氟沙星無菌粉制備將乳酸左旋氧氟沙星加入存有3～4.5倍蒸餾水的反應器中，攪拌溶解，加入活性炭，脫色過濾，用50％乙醇或丙酮溶液洗滌碳餅，濾液經粗濾、精濾，抽至無菌結晶鍋內，攪拌下加入25～35倍無水乙醇或丙酮，先室溫結晶，后冷卻過濾，用適量無水乙醇洗滌晶體，100℃干燥，得乳酸左旋氧氟沙星無菌粉，收率為65～75％；2.乳酸左旋氧氟沙星分裝在100級潔凈區域中，稱取乳酸左旋氧氟沙星無菌粉，于層流罩下分別封裝入10ml模制抗生素瓶中，按無水物計算，每瓶含左旋氧氟沙星0.1g。
乳酸左旋氧氟沙星原料中，含有微量的乳酸右旋氧氟沙星，在原料質量標準中必須控制乳酸右旋氧氟沙星小于1.0％。盡管右旋異構體含量較低，但注射劑本身使用的劑量較小，使得藥物有效劑量不足，影響治療效果，并可能增加副作用。在水針劑中未見有控制右旋異構體的報道。本發明通過在粉針劑制備過程中增加用溶媒沖析結晶，利用乳酸左旋氧氟沙星與右旋異構體在溶劑中的溶解度差異，獲得純度更高的乳酸左旋氧氟沙星無菌粉末。表1即為采用本發明方法獲得的左旋結晶粉末與未精制前原料的右旋異構體含量比較，結果顯示，結晶后右旋異構體含量明顯降低。
表1溶媒結晶前后左、右旋成分含量比較
將本發明方法獲得的粉針劑與乳酸左旋氧氟沙星水注射液進行穩定性對照試驗，經24個月的考查發現本發明制劑中右旋異構體和有關物質的量均明顯低于水注射劑，且右旋異構體和有關物質的增量亦明顯少于水注射劑，見表2。
表2注射用乳酸左旋氧氟沙星與乳酸左旋氧氟沙星注射液穩定性比較(單位％)
對用本發明方法獲得的粉針劑進行乙醇殘留量試驗、溶血試驗、過敏試驗和血管刺激性試驗，均未檢測到任何副反應，證明本發明制劑安全。
本發明乳酸左旋氧氟沙星粉針劑較現有水針劑具有下述顯著優點(1)本發明采用溶媒結晶法，有利于提高其活性成分的純度，使對人體無益的右旋成分含量降低；(2)制成固體粉末，使其穩定性提高；(3)利于儲藏和運輸過程中保證質量；(4)操作簡便，工藝條件溫和，成本低廉，適合工業化生產；(5)利于臨床劑量的調配；(6)本品副作用低，容易被病人普遍接受；(7)本品水溶性較好，注射劑能快速控制重癥病人病情，能滿足臨床重癥病人治療的需要。
下面結合實施例對本發明作進一步的描述。
圖1流動相空進樣圖2千分之一檢測限圖3酸破壞(右旋異構體)圖4堿破壞(右旋異構體)圖5氧化破壞(右旋異構體)圖6預試溶液(右旋異構體)圖7右旋異構體檢查具體實施方式
實施例1將乳酸左旋氧氟沙星170g加入存有595ml蒸餾水的2L反應器中，攪拌溶解15min，加入3.6g活性炭，攪拌30min過濾，并用2×85ml50％乙醇水溶液洗滌炭餅，濾液經粗濾，精濾，抽至無菌室結晶鍋內，攪拌下加入5.1L無水乙醇，先室溫結晶，后冷卻過濾，用適量無水乙醇洗滌晶體2次，100℃干燥，得乳酸左旋氧氟沙星無菌粉約120g，收率71％。右旋體含量0.39％，有關物質含量0.06％。
實施例2將乳酸左旋氧氟沙星100g加入存有300ml蒸餾水的1L反應器中，攪拌溶解15min，加入3.0g活性炭，攪拌30min過濾，并用2×60ml 30％丙酮水溶液洗滌炭餅，濾液經粗濾，精濾，抽至無菌室結晶鍋內，攪拌下加入2.8L丙酮，先室溫結晶，后冷卻，過濾，用適量丙酮洗滌晶體2次，100℃干燥，得乳酸左旋氧氟沙星無菌粉約75g，收率75％。右旋體含量0.1％，有關物質含量0.03％。
實施例3注射用乳酸左氧氟沙星中乙醇殘留量的測定1)色譜條件儀器島津GC-14B檢測器FID檢測器色譜柱玻璃填充柱(2m×4mm，填料Porapak QS 80/100目)柱溫130℃進樣口溫度160℃檢測器溫度260℃進樣量1μl2)測定法精密稱取乙醇適量，加水定量稀釋制成每1ml中含乙醇0.5mg的溶液，作為對照品液；另取本品約0.5g，精密稱定，用水溶解并稀釋至5ml，作為供試品溶液。精密吸取上述兩種溶液1μl，照有機溶劑殘留量測定法(中國藥典2000年版二部附錄VIII P第一法)，在上述色譜條件下，依法進行測定，理論塔板數按乙醇計不得低于1000，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，即得。
3)線性試驗精密稱取乙醇適量，加水定量稀釋制成每1ml中約含乙醇2mg的溶液，作為線性儲備液，精密吸取該儲備液1.0ml、2.0ml、4.0ml、6.0ml和8.0ml，分別置于10ml量瓶內，加水稀釋至刻度，搖勻，加上儲備液(共6個濃度點)作為測定溶液，照上述測定法依法測定，記錄色譜圖。以進樣濃度為橫坐標，以測得的乙醇峰面積為縱坐標進行線性回歸分析，結果如下乙醇A＝601727C-37421 r＝0.99974)精密度試驗取線性試驗項下3號溶液作為供試溶液，依法連續進樣6次，計算平均校正因子的相對標準偏差(RSD)，結果見下表3。
5)回收率試驗供試品批號020101(未檢出)試驗方法取本品約0.1g，精密稱定，用水溶解，精密加入線性儲備溶液2ml，4ml，6ml，用水稀釋至10ml，搖勻，作為供試品溶液。照上述測定法進行測定。結果見表4。
6)最低檢測限取線性項下的最低濃度作為儲備液，用水以不同比例稀釋后測定，以信噪比為3∶1時的濃度為最低檢測限，具體如下乙醇2.1ng7)樣品測定按測定法項的要求依法測定，其結果見表5
實施例4 右旋異構體高效液相測定方法確定1)高效液相色譜儀——島津LC-10ATvp泵，島津SPD-10Avp紫外檢測器，色譜柱為Luna 5μC18(2)250×4.6mm(DM)，甲醇為色譜純，其它試劑均為分析純。
2)波長的選擇取樣品用流動相配制成每1ml中約含5μg溶液，在200-400nm波長范圍內乳酸左氧氟沙星在293nm波長附近有最大吸收，故選擇293nm波長作為右旋異構體檢查的檢測波長。
3)流動相的選擇右旋異構體檢查中選擇L-苯丙氨酸和硫酸銅為手性流動相添加劑，其中，L-苯丙氨酸為配合劑，硫酸銅為配合離子。試驗表明L-苯丙氨酸可使左、右旋異構體獲得良好分離。參照乳酸左氧氟沙星局版標準WS-576(X-508)-99選擇甲醇∶手性溶液(取L-苯丙氨酸0.33g，硫酸銅0.25g，加水1000ml溶解后，搖勻，即得)(13∶87)為流動相。
4)流動相進樣，見圖1。
5)千分之一檢測限取本品適量，加流動相配制成每1ml含左氧氟沙星1μg的溶液，取該溶液10μl注入色譜儀，記錄色譜圈，見圖2。試驗結果表明此濃度下樣品能被檢出。
6)酸、堿、氧化破壞試驗①酸破壞試驗取本品12mg置10ml容量瓶中，加1mol/L鹽酸1ml，置沸水浴中加熱0.5小時，取出，放冷，加流動相定容取該溶液10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結果見圖3。
②堿破壞試驗取本品12mg置10ml容量瓶中，加1mol/L，氫氧化鈉1ml，置沸水浴中加熱0.5小時，取出，放冷，加流動相定容，取該溶液10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結果見圖4。
③氧化破壞試驗取本品12mg置10ml容量瓶中，加10％雙氧水1ml，置沸水浴中加熱0.5小時，取出，放冷，加流動相定容，取該溶液10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結果見圖5。
④結論(見表7)
7)右旋異構體檢查方法的確定取本品，加流動相制成每1ml中含左氧氟沙星1mg的溶液，作為供試品溶液；另取氧氟沙星對照品，用流動相制成每1ml中含0.02mg的溶液，作為預試溶液，照高效色譜法(中國藥典2000年版二部附錄VD)，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇∶手性溶液(取L-苯丙氨酸0.33g，硫酸銅0.25g，加水1000ml溶解后，搖勻，即得)(13∶87)為流動相，檢測波長為293nm，調節流速使左旋異構體保留時間在12分鐘左右。取預試溶液10μl注入液相色譜儀(圖6)，各組分出峰順序依次為氧氟沙星的左旋異構體和右旋異構體，調節儀器靈敏度，使主峰高約為滿量程的40-50％，理論塔板數按左氧氟沙星峰計算應不低于2500，左、右旋異構體之間的分離度應大于1.5。再取供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主峰保留時間的2倍，供試品溶液的色譜圖中右旋異構體峰面積不得大于總峰面積的0.5％。
8)三批樣品的右旋異構體的測定取本品三批，按上述方法測定，結果見表8及圖7。
表8三批樣品的右旋異構體檢查結果
實施例5 穩定性試驗一、樣品采源1.供試品來源由上海新亞藥業有限公司提供2.樣品批號010401、010402、010403二、考察項目1.試驗目的對注射用乳酸左氧氟沙星進行影響因素試驗(45001x強光照射下，60℃高溫及RH 92.5％高濕下)，加速試驗、長期試驗考察，以確定其生產、包裝、貯存條件及有效期。
2.考察項目及方法(1)外觀顏色觀察判斷實驗前后樣品外觀顏色的變化。
(2)澄明度、溶液顏色、酸度、右旋異構體、有關物質、水分、含量(百分含量、標示含量)測定均參照申報資料中的測定方法進行考察試驗。
三、實驗方法1.影響因素試驗 取本品(批號010402)，分別置于強光照射(45001x)、60℃高溫及RH92.5％高濕(開口)條件下放置10天，于5、10天時分別取樣測定，并于0天同批樣品數據比較，實驗結果見表9。
表9 注射用乳酸左氧氟沙星影響因素試驗考察結果(批號010402)
以上結果表明各影響因素條件下的樣品，在放置5、10天后，與0天結果比較，除高濕(RH 92.5％)條件下有關物質有所增加、水分超限、含量(10天)略有下降及光照(4500k)條件下有關物質有所增加外其他無明顯變化。
2.加速試驗 三批樣品(批號010401、010402、010403，模擬市售包裝)，放置在干燥器上部，下部放相對濕度為75％的溶液，將干燥器移至恒溫箱中，調節溫度至40℃，放置6個月，于0、1、2、3、6個月分別取樣測定，并與0個月同批樣品數據比較，試驗結果見表10。
表10 注射用左氧氟沙星加速試驗考察結果
以上結果表明加速試驗6個月后，與0個月結果比較，除有關物質有所增加外，其他無明顯變化，本品質量穩定。
3.長期試驗考察三批樣品(批號010401、010402、010403，模擬市售包裝)，于溫度25℃，相對濕度RH 60％放置，分別于3，6，9，12，18，24等個月時定期取樣測定，并與0個月同批樣品數據比較，試驗結果見表11。
表11 注射用左氧氟沙星加速試驗考察結果
以上結果表明，長期留樣12個月后，與0月數據比較，除有關物質有所增加外，其他無明顯變化，本品質量穩定。
四、結論1.通過影響因素試驗(除高濕(RH 92.5％)條件下有關物質有所增加、水分超限、含量(10天)略有下降及光照(45001x)條件下有關物質有所增加)、加速試驗6個月(除有關物質有所增加)、長期試驗12個月考察(除有關物質有所增加)，樣品均無明顯變化，說明樣品質量穩定。
2.由加速試驗6個月、長期試驗12個月考察結果表明，模擬市售包裝模制瓶(10ml模制瓶)對樣品無影響。
實施例6 溶血試驗一、試驗目的通過供試品與血液直接接觸，觀察供試品是否引起體外溶血和凝聚。
二、試驗材料1.供試品品名注射用乳酸左氧氟沙星規格0.19/瓶批號(1)02-01-01 (2)02-01-02 (3)02-01-03生產單位上海新亞藥業有限公司2.供試液配制取1瓶(0.1g/瓶)加3.5ml滅菌注射用水，溶解后，加氯化鈉注射液稀釋至50ml，混勻后供測試。
三、試驗方法1.2％兔血紅細胞混懸液的制備取家兔心臟血，置有玻璃珠的容器內，振搖數分鐘，除去纖維蛋白原，使成脫纖血，加生理鹽水，搖勻，離心，傾去上清液，沉淀的紅細胞再用生理鹽水洗滌3-4次，至離心后上清液不顯紅色為止，然后按所得紅細胞體積，用生理鹽水稀釋成2％混懸液。當天使用，用時搖勻。
2.試驗步驟取試管若干，分為供試品3組、陰性及陽性對照各一組，每組2管，按表12依次加樣，搖勻后，迅速置恒溫水浴內。保持37℃，觀察4小時(10:30-14:30)。
表6溫和度對比
*實施例11與實施例5相同。
由于實施例#11的組合物(不含疏水改性的、交聯的陰離子丙烯酸類共聚物)給出了明顯低的TEP值，它被認為是刺激性的，是不能被人體試驗所接受的，因此，對該組合物不進行眼刺痛測試。
如實施例12所示，向組合物中添加疏水改性的、交聯的陰離子丙烯酸類共聚物可以顯著地增加TEP值，這表明所得的組合物對皮膚和/或眼睛是溫和的。但是，眼刺痛值表明，該組合物的感覺刺痛水平仍然不理想。
實施例13示出了在向實施例12的組合物中加入兩性表面活性劑前體之后，所得的組合物不僅對皮膚和/或眼睛是溫和的，而且基本上沒有眼刺痛。
這些實施例證明，含有較高含量的陰離子表面活性劑的組合物對皮膚和眼睛的刺激性可以通過向其中加入疏水改性的、交聯的陰離子丙烯酸類共聚物來減小，但是，所得的組合物仍然具有眼刺痛性。這些實施例還證明，眼刺痛效果可以通過加入兩性表面活性劑來減小，還揭示了能夠減小上述效果的陰離子表面活性劑與兩性表面活性劑之比。
實施例14-19清潔劑組合物的制備根據表7中列出的物質以及它們的用量來制備實施例14-19的清潔劑組合物。
生產單位麗珠東風生物技術有限公司溶液配制致敏液取牛血清白蛋白適量，用氯化鈉注射液溶解并稀釋制成每1ml含10mg的溶液供試液取牛血清白蛋白適量，用氯化鈉注射液溶解并稀釋制成每1ml含10mg的溶液試驗動物名稱豚鼠；性別♂；體重250-300℃來源松聯實驗動物養殖場；合格證號SCXK(滬2002-0012)試驗方法取健康豚鼠18只，分為受試物3組，陰性、陽性對照物各1組、分別連續3次間日腹腔注射致敏液0.5ml/只，然后將豚鼠分為兩部分，各3只，分別于第一次注射后14日及21日自靜脈注射供試液1.0ml/只，觀察注射后15分鐘內動物的過敏反應情況，并繼續觀察24小時。
結果表13陰性對照組
表14陽性對照組
表15受試物組
結論本品經豚鼠過敏試驗，未見過敏反應。
實施例8 血管刺激性試驗試驗目的觀察動物靜脈注射一定量受試物后所產生的血管刺激反應情況。
受試藥物品名注射用乳酸左氧氟沙星；規格0.1g/瓶提供單位上海新亞藥業有限公司；批號02-01-03配制取1瓶(0.1g/瓶)加20ml氯化鈉注射液，溶解后，供測試。
對照物品名氯化鈉注射液；規格250ml/瓶；生產單位上海長征制藥廠；批號9711112試驗動物名稱新西蘭兔；性別雌性；體重2.0-2.5kg來源陳行兔場；許可證號醫動字第02-53-1號試驗方法取上述健康動物3只，左耳和右耳分別每日1次耳緣靜脈注射受試物和對照物各5.0ml/kg，連續3次。于末次給藥后24小時肉眼觀察家兔耳緣靜脈，然后處死動物，每耳由進針點起每隔1.5厘米取一段共3段耳緣靜脈(取材寬度為0.5厘米)作病理切片觀察，看有無組織變性或壞死等顯著刺激反應，以第3段(近心端)的病理切片結果進行結果判定。
試驗結果(第3段)表16
肉眼觀察家兔耳緣靜脈注射受試物或對照物后均未見有充血、紅腫現象。
結論本品經家兔血管刺激性試驗，未見有刺激性反應。
權利要求
1.乳酸左旋氧氟沙星粉針劑，其特征在于該粉針劑是將乳酸左旋氧氟沙星水溶液經脫色、除菌過濾后用乙醇或丙酮沖析結晶，灌裝后獲得的無菌粉末制劑；采用高壓液相檢測，無菌粉末中右旋異構體含量低于0.5％。
2.根據權利要求1所述的乳酸左旋氧氟沙星粉針劑的制備方法，其特征在于所述制劑的制備包括下列步驟1)乳酸左旋氧氟沙星無菌粉制備將乳酸左旋氧氟沙星加入存有3～4.5倍蒸餾水的反應器中，攪拌溶解，加入活性炭，脫色過濾，用50％乙醇或丙酮溶液洗滌碳餅，濾液經粗濾、精濾，抽至無菌結晶鍋內，攪拌下加入25～35倍無水乙醇或丙酮，先室溫結晶，后冷卻過濾，用適量無水乙醇洗滌晶體，100℃干燥，得乳酸左旋氧氟沙星無菌粉，采用高壓液相檢測，無菌粉末中右旋異構體含量低于0.5％；2)乳酸左旋氧氟沙星分裝在100級潔凈區域中，稱取乳酸左旋氧氟沙星無菌粉，于層流罩下分別分裝入抗生素瓶中。
3.根據權利要求2所述的乳酸左旋氧氟沙星粉針劑的制備方法，其特征在于其中無菌粉末中右旋異構體含量采用高壓液相檢測的方法為手性溶液取L-苯丙氨酸0.33g，硫酸銅0.25g，加水1000ml溶解后，搖勻，即得；流動相甲醇∶手性溶液＝13∶87檢測波長293nm供試品溶液取無菌粉末，加流動相制成每1ml中含左氧氟沙星1mg的溶液；預試溶液取氧氟沙星對照品，用流動相制成每1ml中含0.02mg的溶液；方法照中國藥典2000年版二部附錄VD高效色譜法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，調節流動相流速使左旋異構體保留時間在12分鐘左右；取預試溶液10μl注入液相色譜儀，各組分出峰順序依次為氧氟沙星的左旋異構體和右旋異構體，調節儀器靈敏度，使主峰高約為滿量程的40-50％，理論塔板數按左氧氟沙星峰計算應不低于2500，左、右旋異構體之間的分離度應大于1.5；再取供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主峰保留時間的2倍，供試品溶液的色譜圖中右旋異構體峰面積不得大于總峰面積的0.5％。
全文摘要
本發明涉及乳酸左旋氧氟沙星粉針劑及制備方法。所述乳酸左旋氧氟沙星粉針劑是將乳酸左旋氧氟沙星水溶液經脫色、除菌過濾后用乙醇或丙酮沖析結晶、灌裝后獲得的無菌粉末制劑。采用高壓液相檢測，無菌粉末中右旋異構體含量低于0.5％。本發明乳酸左旋氧氟沙星粉針劑較現有的水針劑純度高、質量穩定、副作用低、便于儲存和運輸。
文檔編號A61P31/04GK1613451SQ20031010846
公開日2005年5月11日 申請日期2003年11月6日 優先權日2003年11月6日
發明者吳建文, 方時亮, 黃君勤, 李建文, 吳慧琴 申請人:上海醫藥科技發展有限公司, 上海新亞藥業有限公司