專利名稱：從流感疫苗制劑中去除內毒素的方法
技術領域：
本發明涉及重組蛋白質藥物的生產過程，特別提供了一種從流感疫苗制劑中去除內毒素的方法。
背景技術：
隨著基因工程技術的日益成熟，越來越多的重組蛋白質藥物被開發利用。由于生產過程中涉及到革蘭氏陰性的大腸桿菌以及分離純化過程復雜，因此會造成內毒素的污染。
親和技術是分離純化生物大分子的有效手段，主要利用配基與生物大分子之間的親和作用原理。將配基通過化學鍵共價鍵合到多孔介質上就得到親和介質，可以用來選擇性地吸附內毒素，實現從重組蛋白質溶液中去除內毒素的目標。已有的親和配基和親和介質包括單克隆抗體，多克隆抗體，抗生素，多粘菌素B，聚乙烯亞胺，組氨酸，凝膠過濾柱，親和膜，顆粒吸附劑等。如專利EP0800862，采用含有磺酸基的苯乙烯-二乙烯基苯共聚物，利用離子交換的原理，來去除重組蛋白質腫瘤壞死因子或白介素中的內毒素，主要吸附重組蛋白質。
專利EP0337243，使用串聯的兩只反相液相色譜柱，來純化重組人IL-2。在純化重組人白介素-2的同時，去除內毒素雜質，流速低，介質昂貴。
專利US4885168，采用低分子量殼聚糖，利用殼聚糖上帶正電荷的氨基來與帶負電荷的核酸與內毒素作用，達到除去核酸與內毒素的目的。但殼聚糖的利用率低。
專利00123290.6，魏桂林等的一種用于內毒素去除的疏水荷正電親和膜，將胺類疏水荷正電親和配基鍵合到纖維素膜上，得到相應的親和膜。胺類疏水荷正電親和配基包括2～12碳的烴基二胺、帶有乙烯基的不飽和雜環化合物、帶有環氧基團的季銨鹽及帶有多個疏水基團的季銨鹽。
D.Petsch，T.C.Beeskow等(1997，Journal of Chromatography B.693，79-91.)采用去氧膽酸鈉，或己二胺作為親和配基，以微孔尼龍膜為介質，制成親和膜。采用單張親和膜，可以去除緩沖液或牛血清白蛋白中的內毒素。但流速低，阻力高，處理量少，不易放大。
由于重組蛋白質種類較多，其分離純化步驟各不相同，生產過程中對其中的內毒素含量要求也有差異，因此去除內毒素的方法和效果無法完全通用。
發明內容
本發明的目的在于提供一種從流感疫苗制劑中去除內毒素的方法，用該方法可以達到既去除內毒素，又盡可能減少流感疫苗活性損失的目的。
本發明提供了一種從流感疫苗制劑中去除內毒素的方法，以親和介質裝填成層析柱或膜過濾器，以靜態吸附或過濾的方式去除流感疫苗制劑中的內毒素，其特征在于所述親和介質為聚丙烯。
本發明從流感疫苗制劑中去除內毒素的方法中，親和介質可以為聚丙烯絲，直徑為0.13微米-40微米。
本發明從流感疫苗制劑中去除內毒素的方法中，親和介質也可以為由聚丙烯絲構成的膜片，膜的密度為20g/m2-90g/m2。
本發明從流感疫苗制劑中去除內毒素的方法中，可以用聚丙烯絲裝填層析柱，裝填密度為0.13g/cm3-0.5g/cm3。
本發明從流感疫苗制劑中去除內毒素的方法中，流感疫苗與聚丙烯介質的比例最好為20-200毫升/克。
本發明針對流感疫苗制劑生產過程中的內毒素，根據其分子量大小、等電點的范圍、溶液中其它物質的含量和種類的需要，判斷和選擇了聚丙烯為親和介質。
使用聚丙烯絲構成的膜，膜在疫苗中浸泡， 流感疫苗與聚丙烯介質的比例為20毫升/克，在8度的溫度下，以200rpm的頻率振蕩吸附3小時，溶液中的內毒素濃度從＞8000EU/ml降低到＜150EU/ml，流感疫苗的活性成分回收率為95％以上。
使用聚丙烯絲構成的膜，組裝成裝填密度為0.20g/cm3的膜過濾器，流感疫苗與聚丙烯介質的比例為200毫升/克，在7度的溫度下，反復過濾吸附2小時，處理后疫苗溶液的內毒素濃度從＞3000EU/ml降低到＜450EU/ml，流感疫苗的有效成分回收率為85％以上。
總之，本發明的從流感疫苗制劑中去除內毒素的方法，可以在不改變疫苗原有性質的條件下，有效地去除流感疫苗制劑生產中含有的內毒素污染物，保留疫苗中的有效成分。可以用于流感疫苗的生產過程中，提高其生產質量。
具體實施例方式實施例1.
取直徑為0.13微米的聚丙烯絲構成的膜，膜的密度為20g/m2，，在8度的溫度下，膜在疫苗中浸泡，流感疫苗與聚丙烯介質的比例為20毫升/克，以200rpm的頻率振蕩吸附3小時，溶液中的內毒素濃度從＞8000EU/ml降低到＜150EU/ml，流感疫苗的活性成分回收率為95％以上。
實施例2.
取直徑為0.26微米的聚丙烯絲構成的膜，膜的密度為90g/m2，在8度的溫度下，膜在疫苗中浸泡，流感疫苗與聚丙烯介質的比例為200毫升/克，以200rpm的頻率振蕩吸附3小時，溶液中的內毒素濃度從＞5000EU/ml降低到＜1250EU/ml，流感疫苗的活性成分回收率為80％以上。
實施例3.
取直徑為40微米的聚丙烯絲，組裝成層析柱，裝填密度為0.5g/cm3，在8度的溫度下，絲在疫苗中浸泡，流感疫苗與聚丙烯介質的比例為90毫升/克，以0.5ml/min的流速反復過濾吸附3小時，內毒素的濃度從430EU/ml降低到250EU/ml，流感疫苗的活性成分回收率為85％以上。
實施例4.
取直徑為0.13微米的聚丙烯絲構成的膜，膜的密度為60g/m2，組裝成膜過濾器，裝填密度為0.39g/cm3，流感疫苗與聚丙烯介質的比例為200毫升/克，在7度的溫度下，以1ml/min的流速反復過濾吸附2小時，處理后疫苗溶液的內毒素濃度從＞3000EU/ml降低到＜450EU/ml，流感疫苗的有效成分回收率為85％以上。
實施例5.
取直徑為0.13微米的聚丙烯絲構成的膜，膜的密度為85g/m2，組裝成膜過濾器的裝填密度為0.13g/cm3，流感疫苗與聚丙烯介質的比例為100毫升/克，在7度的溫度下，以1ml/min的流速反復過濾吸附2小時，處理后疫苗溶液的內毒素濃度從＞400EU/ml降低到＜100EU/ml，流感疫苗的有效成分回收率為53％以上。
權利要求
1.一種從流感疫苗制劑中去除內毒素的方法，以親和介質裝填成層析柱或膜過濾器，以靜態吸附或過濾的方式去除流感疫苗制劑中的內毒素，其特征在于所述親和介質為聚丙烯。
2.按照權利要求1所述從流感疫苗制劑中去除內毒素的方法，其特征在于所述親和介質為聚丙烯絲，直徑為0.13微米-40微米。
3.按照權利要求2所述從流感疫苗制劑中去除內毒素的方法，其特征在于所述介質為由聚丙烯絲構成的膜片，膜的密度為20g/m2-90g/m2。
4.按照權利要求2所述從流感疫苗制劑中去除內毒素的方法，其特征在于所述層析柱，裝填密度為0.13g/cm3-0.5g/cm3。
5.按照權利要求1所述的從流感疫苗制劑中去除內毒素的方法，其特征在于流感疫苗與聚丙烯介質的比例為20-200毫升/克。
全文摘要
一種從流感疫苗制劑中去除內毒素的方法，以親和介質裝填成層析柱或膜過濾器，以靜態吸附或過濾的方式去除流感疫苗制劑中的內毒素，其特征在于所述親和介質為聚丙烯。本發明的從流感疫苗制劑中去除內毒素的方法，可以在不改變疫苗原有性質的條件下，有效地去除流感疫苗制劑生產中含有的內毒素污染物，保留疫苗中的有效成分。可以用于流感疫苗的生產過程中，提高其生產質量。
文檔編號A61P31/16GK1621089SQ200310119269
公開日2005年6月1日 申請日期2003年11月26日 優先權日2003年11月26日
發明者李京華, 邵英光, 叢潤滋, 王俊德 申請人:中國科學院大連化學物理研究所