專利名稱：造影劑中內毒素的去除的制作方法
技術領域：
本發明涉及造影劑的制造，更具體地講涉及這種造影劑中內毒素的去除。
背景技術：
各種造影劑的生產中的一個普遍問題涉及內毒素的存在，所述內毒素是在處理大 量水溶液的過程中由細菌繁殖產生的。雖然細菌本身可在各種滅菌程序中被輕易去除或破 壞，但內毒素有時候卻仍保持完整。人們已經知道和研究內毒素多年，特別是在動物中的病理生理學反應方面。多年 來認為，內毒素物質包含在革蘭氏陰性桿菌細胞中，只有細胞壁分解時才釋放出來。因此， 該物質被稱為內毒素。但是，最近的研究提示，內毒素定位于革蘭氏陰性桿菌的細胞表面， 且可在活細胞和被殺滅的細胞中存在，以及在液體介質中以游離形式存在。已知內毒素會造成幾種不同的病理生理學反應，且已被鑒定為造成許多住院患者 死亡的直接原因和附帶原因。已知內毒素會在動物中引起發燒反應，癥狀為極度高燒、血管 舒張、腹瀉等，在極端情況下出現致命性休克。還已知內毒素會造成白細胞增多、碳水化合 物和蛋白質代謝的有害變化以及血纖蛋白形成所致的廣泛性血管內凝血。由于造影劑常被大量注射入住院患者體內，造影劑必須首先經純化無內毒素污
^fe ο從溶液去除內毒素的普通方法有超濾、吸附基質如色譜樹脂和離子交換樹脂。已 確認這些方法存在幾個問題，如過濾器堵塞、物質損失量大和后處理麻煩、費用高且耗時。US 5972225描述了從大批的非離子型碘化造影劑去除內毒素的方法，該方法包括 將造影劑溶于起始水溶液中，然后使溶液通過含有活性炭的過濾區。需要快速且性價比高的去除造影劑中內毒素的方法。更具體地講，需要開發出這 樣的方法，其能得到小于約lEU/ml的內毒素值，且對造影劑的濃度、不同陽離子的含量、制 劑的PH和離子強度的影響最小。發明概述本發明提供通過用陰離子交換膜過濾去除內毒素來純化造影劑的方法。因此，在一方面看，本發明提供一種從造影劑去除內毒素的方法，其包括使所述造 影劑通過陰離子交換膜。根據本發明的方法操作簡單，效率高，且對制劑的PH和其他參數的影響可忽略不 計。發明詳述通常，造影劑的制造涉及到生產出化學藥物物質(稱為一級生產)，然后配制成藥物產品(稱為二級生產)。提供了從這種造影劑去除內毒素的方法。在這點上，本文所用的術語“造影劑”意 指任何用來在醫學成像中增強體內的結構或流體的對比度的物質，帶負電荷的離子型造影 劑除外。造影劑可以是一級生產所得的藥物物質溶于起始水溶液制成，但優選的是造影劑 是在二級生產中配制后得到的產物。現有技術的一些內毒素去除方法的一個重要問題是，純化工藝不能處理高粘度的 已配制造影劑。還更重要的是，不能在同時不改變造影劑的組成的情況下去除內毒素。為解決這個問題，同時為滿足上述標準，本發明提供了從造影劑去除內毒素的方 法，其包括使所述造影劑通過陰離子交換膜。根據本發明使用的造影劑優選可為用于磁共振成像(MRI)的造影劑，如基于Gd的 造影劑，或者用于X射線成像的造影劑。根據本發明使用的優選X射線造影劑是非離子型碘化造影劑。更優選地，所述造 影劑高度粘稠，優選粘度為約20-35mPas。更優選地，非離子型造影劑包含1，3-雙(甲酰氨基)_N，N'-雙[3，5-雙(2， 3- 二羥丙基氨基羰基)_2，4，6-三碘苯基]-2-羥基-丙烷。最優選地，非離子型造影劑是 Visipaque ，其為X射線診斷方法中最常用的造影劑之一。碘克沙醇是Visipaque 的化學 藥物物質的非專有名稱。有利地，要按照本發明進行處理的溶液會使碘化藥物物質以這樣的濃度存在， 該濃度足以提供約50毫克至500毫克有機結合碘每毫升溶液(mg I/ml)，更優選約 100-400mg/I ml ο此外，根據本發明，溶液在純化前其所含內毒素水平通常會超過0. 2EU每50mg I (0. 2EU/50mg I)，往往超過約 5EU/50mg I。陰離子交換膜能有效且快速地將內毒素從手頭的造影劑中去除。分離是由于造影 劑中的離子與膜中的反荷離子的選擇性交換而發生的。造影劑基本上不表現出對膜的親和 性，因此內毒素得以有效地與造影劑溶液分離。帶負電荷的內毒素會吸附到離子交換膜上 的帶正電荷的基團，從而從溶液中去除。當將交換膜用制劑所用的緩沖劑的相同離子強度 平衡時，對于每個被吸附的內毒素分子，將有一個陰性緩沖劑反荷離子被交換。在工業規模上，溶液將優選地以這樣的速率通過陰離子交換膜，該速率將不僅能 優化從通過該膜的溶液去除的內毒素的量，而且能優化在給定時間量內通過該膜的溶液的 體積。對于本發明的方法，典型的流速在1至101/分鐘之間，更優選2至51/分鐘之間。系統將優選在Ipsig至lOOpsig、更優選5psig至15psig、最優選約IOpsig的壓 力下操作。此外，系統將保持這樣的溶液溫度，該溫度將使所需的分離得以進行，而又低于 所涉及的藥物物質的分解溫度。優選地，本發明的方法將在約室溫至約4°C的溶液溫度下操 作。將按需讓純化系統在上述參數范圍內運行這樣一段時間，該時間足以實現將內毒 素如所希望地降低到可接受的水平。通常，這樣的運行將持續約0. 5至約10. 0小時，更優 選約1. 5至約2. 5小時。可定期采集樣品進行測試，以監控內毒素水平，一旦達到可接受的 水平，可停止進行該方法。最終產品將由這樣的造影劑溶液構成，其基本上含有起始溶液的所有全部造影劑。產品溶液所含的內毒素水平與起始溶液相比將大大降低，且更優選地將基本上不含內 毒素(即所含內毒素水平低于約lEU/ml)。以下實施例將進一步說明本發明，這些實施例不應被解釋為將本發明的范圍局限 于其中所述的具體方法或產品。由實施例1可見，本發明的方法在相對較短的、商業上可行的時間里實現了內毒 素水平降低到lEU/ml以下。同時，Visipaque 和Prohance 的效價保持不變。因此，本發 明的方法提供了性價比極高的降低造影劑中內毒素污染的方法。實施例2顯示了內毒素從包含1，3_雙(甲酰氨基)-N，N'-雙[3，5_雙(2，3_ 二 羥丙基氨基羰基)-2，4，6_三碘苯基]-2-羥基-丙烷的溶液中的去除。可見內毒素的水平 急劇下降到0. 5EU/ml以下的水平，且重要的是還可看出，溶液中的鈉離子和鈣離子的濃度 基本上不變。
實施例實施例1樣品a)碘化的芳族X射線化合物Visipaque (碘克沙醇，320mg碘/ml于IOmM TRIS 緩沖液(PH 7.4)中，重量摩爾滲透壓濃度用無菌無內毒素的NaCl調至290mmol/kg，粘度= 24mPa)。b)供用于MR Prohance 的基于Gd螯合物的造影劑(Gd-DOTA，0. 8M于IOmM TRIS 緩沖液(PH 7.4)中，重量摩爾滲透壓濃度用無菌無內毒素的NaCl調至290mmol/kg)。大腸桿菌內毒素原液的制備向一個小瓶(lOmg, IOe 7EU，Sigma Corp.，美國)中加入9ml注射用水(WFI)和 Iml 乙腈，得至Ij 9. le6EU/ml = 9. le3EU/y 1 的濃度。大腸桿菌LPS工作液的制備將0. Iml的原液用WFI稀釋至IOml (稀釋系數=100)，得到91EU/y 1。用內毒素對制劑進行摻雜向Visipaque 和Prohance 的IOml等分試樣分別加入3和6 μ 1大腸桿菌LPS 工作液至270和550EU內毒素的最終理論濃度。去熱原方法a)過濾器裝置=Sartobind Q15 膜，裝配成易于使用的單元，孔徑大小3_5 μ m，由 用帶正電荷的季銨基團改性的纖維素制成。b)Sartobind Q15 的平衡和滅菌每個過濾器用50ml IOmM TRIS pH 7. 4洗脫，然后用5ml 70%乙醇洗脫(讓其在 過濾器中停留3分鐘)，最后用50mlIOmM TRIS pH7.4(無菌)洗脫。c)內毒素去除使各制劑以每秒約1-2滴的流量通過過濾器單元。內毒素分析的采樣由于粘度高，制劑在洗脫通過Sartobind Q15陰離子交換膜后先將其充分混合再 采樣進行內毒素分析。
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內毒素含量的分析用來測定內毒素含量的方法是美國和歐洲藥典中描述的發色方法，靈敏度為 0. 005EU/ml。將50 μ 1制劑稀釋于9. 95ml WFI (注射用水)中制備成1 200稀釋液，然 后將樣品連同陽性對照在動力QCL儀器上進行分析。如果陽性對照為陽性，則認為試驗有 效，由軟件自動計算出結果。無內毒素存在將得出NMT lEU/ml的結果。內毒素、pH以及碘和釓濃度的結果數值在表1中顯示。注意，內毒素的數值為測 量值，不同于實驗章節中給出的理論值。*參考值為80.4mg Gd/ml ；**參考值為320mg I/ ml ο表 權利要求
一種從造影劑去除內毒素的方法，所述方法包括使所述造影劑通過陰離子交換膜。
2.權利要求1所述的方法，其中所述造影劑是非離子性碘化造影劑。
3.權利要求1所述的方法，其中所述造影劑的粘度為約20-35mPas。
4.權利要求1所述的方法，其中所述造影劑包含1，3-雙(甲酰氨基)-N，N'-雙[3， 5-雙(2，3- 二羥丙基氨基羰基)_2，4，6-三碘苯基]-2-羥基-丙烷。
全文摘要
本發明涉及造影劑的制造方法，更具體而言涉及這種造影劑中內毒素的去除方法，所述方法包括使所述造影劑通過陰離子交換膜從而將內毒素從造影劑中除去。
文檔編號A61K49/06GK101961498SQ20101024108
公開日2011年2月2日 申請日期2010年7月21日 優先權日2009年7月21日
發明者G·哈格林, L·G·威斯特蘭 申請人:通用電氣醫療集團股份有限公司