專利名稱：具有抗骨質疏松作用的雌激素－rgd肽綴合物及在醫學中的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種雌激素綴合物，尤其涉及一種雌激素肽綴合物、其制備方法及應用。
背景技術：
骨質疏松是一種多原因代謝性骨病，以骨質彌漫性減少為特征。50歲以上的絕經婦女有50％以上在生活的某個時期經歷有骨質疏松引起的骨折(Davidson M，DeSimone M E.Confronting osteoporosiswhat we know，wherewe’re headed.Clin Rev；12，76-82，2002)。在骨質疏松引起骨折的婦女中，50％以上要花很長時間康復，這就避免不了發生一些后遺癥包括死亡。據估計，遭遇骨折的婦女至少有20％會死亡(Michaelsson K，Baron J A，et al.，Influenceof parity and lactation on hip fracture risk.Am J Epidemiol；153，1166-1172，2001)。對北京和上海的初步調查表明，60歲以上女性骨質疏松癥患病率為40-50％。骨質疏松正日益成為一個國際公認的健康問題。在當前常見疾病中，骨質疏松位于前十位(陳星飚等，運動防止絕經后骨質疏松癥的研究進展，國外醫學，老年醫學分冊，23(2)，85-88，2002)。
早在1941年，Albright發現骨質疏松癥常見于絕經后婦女，提出雌激素缺乏是絕經后骨質疏松的主要病因(Albright F，Smith P H，et al，Postmenopausalosteoporosis.JAMA，116，2465-2474，1941)。婦女絕經的平均年齡是51歲。這就意味著婦女1/3以上的時間將在絕經期后度過，也就是婦女要在雌激素缺乏的環境下生活30年以上(Mikinlay SM，Brambilla DJ，The normal menopansetransition，Maturitas，14，103-15，1992)。如果沒有激素替代治療(HRT)，這些婦女不僅將處于無勞動能力的狀態，而且也將經歷一些機體上因骨質疏松引起的病癥，如心血管疾病等，甚至是致死性(Michael J.S，Selective estrogenreceptor modulatorsthe ideal estrogen replacement，8，25-30，2001)。一位婦女一生得骨質疏松癥性骨折的幾率是11-18％，其中每6位就有一位會因骨質疏松癥的并發癥而死亡(Spencer C P.Morris E P，et al.，Selective estrogen receptormodulatorswomen’s penacea for the next millennium？Am J obstet Gynecol，180，763-770，1999)。
雌激素替代療法(ERT)能夠減輕婦女絕經期的癥狀，能夠減少心血管疾病的風險，能夠阻止骨丟失(Stampter M，Colditz.G.，et al.，Estrogen replacementtherapy and coronary heart diseasea quantitative assessment of theepidimiological evidence.Prev Med，20，47-63，1991)。使用雌激素進行治療能夠明顯地抑制骨質缺損和骨代謝，明顯地增大骨骼中礦物質的密度(BMD)，絕經早期的婦女使用雌激素進行治療時，雌激素可使脊椎骨中礦物質的密度增高3～4％(Hosking D，Chilrers C E D，et al.Prevention of Bone loss withAlendronate in Postmenopausal Women under 60 Years of Age，N Engl J Med，338，485-492，1998)。那些使用激素(雌激素/孕激素)進行替代療法(HRT)的患者或者在最近的5～9年內進行至少為期5年的HRT治療的患者，其骨折的危險率降低了50％以上(Michealsson K，Baron J A.，et al.，Hormone replacementtherapy and risk of hip fracturePopulation based case-control study.The SwedishHip Fracture Study Group，BMJ，316，1858-1863，1998)。盡管雌激素是現今為止治療絕經后婦女骨質疏松的最有效的藥物，但長期使用激素替代治療或雌激素替代治療，不可避免地會引起一些并發癥，如使骨形成表面顯著下降，引起子宮內膜增生或腫瘤，引起陰道出血，使乳房變軟，增加乳腺癌的危險性，引起高血壓或使原有高血壓惡化，可明顯增加靜脈血栓栓塞性疾病的危險性等(Colditz G A，Hankinson S E，et al.，The use of estrogen and progestin and the riskof breast cancer in postmenopausal women.N Engl J.Med.332，1589-93，1995)，雌激素的使用期通常不超過3年(Scalley E K，Henrich J B，et al.；An overview ofestrogen replacement therapy in postmenopausal women.，J.Women Health，2，289～294，1993；Witt D M，Lousberg T R..Controversies surrounding estrogen usein postmenopausal women.Ann Pharmaeother，31，745～755，1997；Josse R G，Effect of ovarian hormonal therapy on skeletal and estraskeletal tissues in women.Can Med Assoc J，155，929～934，1996)。
發明內容
本發明所要解決的技術問題是提供一種抗骨質疏松活性高、副作用低的雌激素肽綴合物。
本發明的一種雌激素肽綴合物，具有下述通式I的結構 通式I其中，當R3為H時，R1和R2一個為H，一個為-OCOCH2CH2CO-Arg-Gly-Asp-Ser-OH、CH2CO-Arg-Gly-Asp-Val-OH、-OCOCH2-CH2CO-Arg-Gly-Asp-Phe-OH、Ser-Asp-Gly-Arg-H、＝NNH-Val-Asp-Gly-Arg-H或＝NNH-Phe-Asp-Gly-Arg-H；當R1和R2一個為H，一個為OH時，R3選自-CH2CO-Arg-Gly-Asp-Ser-OH、-CH2CO-Arg-Gly-Asp-Val-OH、-CH2CO-Arg-Gly-Asp-Phe-OH、-CH2CONHNH-Ser-Asp-Gly-Arg-H、-CH2CONH-NH-Val-Asp-Gly-Arg-H或-CH2CONHN-Phe-Asp-Gly-Arg-H；當R1和R2共同為羰基氧時，R3選自-CH2CO-Arg-Gly-Asp-Ser-OH、-CH2CO-Arg-Gly-Asp-Val-OH或-CH2CO-Arg -Gly-Asp-Phe-OH。
本發明所要解決的另一技術問題是提供一種雌激素肽綴合物的制備方法。
本發明的雌激素肽綴合物的制備方法，包括以下步驟將雌酮和雌二醇的3位或17位引入連接臂(COCH2CH2CO、CH2CO或CH2CONH)，然后把液相方法合成的Arg-Gly-Asp-Ser-OH、Arg-Gly-Asp-Val-OH或Arg-Gly-Asp-Phe-OH的保護中間體引入到連接臂上，再經脫保護即得。
本發明系列化合物經試驗證實具有良好的抗骨質疏松活性。本發明利用雌激素對絕經型骨質疏松的明顯治療作用、利用RGD(Arg-Gly-Asp)肽的靶向性、利用RGD三肽序列對破骨細胞與骨表面粘附的抑制作用，把RGD肽與雌激素綴合，因此所得到的雌激素綴合物比雌激素具有更好的抗骨質疏松活性。
整合素介導的細胞粘附過程與一系列重要疾病的病理相關聯。例如血小板活化后的表面的整合素受體與血液中的纖維蛋白原、粘連蛋白或VWF粘連，形成血栓。癌細胞表面的整合素與正常組織粘連，造成癌轉移。破骨細胞表面的整合素與骨基質蛋白粘連，造成骨質疏松。整合素受體可分為細胞表面部分和跨膜進入胞漿區的鉸鏈部分。整合素介導的細胞黏附由配基結合域參與。在癌轉移、血栓形成和骨質疏松發病中與整合素的配基結合域粘附的蛋白的共同序列為RGD。
骨吸收裝置的形成有賴于破骨細胞表面整合素與特異的骨基質蛋白成份之間的相互作用。在破骨細胞膜上鑒定出來的整合素主要有avβ3、a2β1和avβ1三種。其中avβ3是破骨細胞識別骨基質的主要整合素。與avβ3結合的特異性骨基質蛋白骨橋蛋白(osteopontin，OPN)、骨唾液蛋白(bone sialoptein，BSP-II)和纖維連接素(fibronectin，FN)均含RGD三肽序列。整合素介導的破骨細胞粘附過程，對于破骨細胞分化、成熟、募集、活化以及骨吸收十分重要。體外實驗表明，整合素avβ3單抗、人工合成的骨橋蛋白、RGD三肽序列、RGD多肽或RGD肽段，可抑制破骨細胞骨吸收。
多肽與甾體激素兩個主體之間存在“允許作用”。“允許作用”是指類固醇激素可以對多肽和其它遞質的生物效應起增效作用，反之亦然。隨著分子生物學的發展，提示其可能的機制主要表現在對其它激素所作用的受體和受體后信息傳遞物質的調節，以及直接或間接作用于靶細胞基因。發明人在研究具有較強鎮痛作用的內源性小分子二肽京都啡肽時，發現它們與氫化可的松及雌酮的綴合物的鎮痛作用可增強。
本發明的另一目的在于提供一種藥物組合物，由通式(I)所示結構的化合物和藥學上可接受的載體配合而成，即將藥學上可接受用量的通式(I)化合物與藥學上可接受的載體配合后，按本領域常規的制劑方法將其制備成任意一種適宜的藥物組合物。通常該組合物適合于口服給藥和注射給藥，也適合其他的給藥方法。
該組合物可以是片劑、膠囊、粉劑、顆粒、錠劑、栓劑，或口服液或無菌胃腸外懸液等液體制劑形式。
根據不同的給藥方法，組合物可以含有0.1％～99％重量的活性物質，優選10～60％重量的活性物質。
具體實施例方式
以下將結合實施例和試驗例具體說明本發明，本發明的實施例和試驗例僅用于說明本發明的技術方案，并非限定本發明的實質。
原料和試劑各種保護氨基酸和雌二醇、雌酮購自sigma公司；所用氨基酸均為L-構型；薄層層析硅膠GF254、柱層析200-300目硅膠和硅膠H為青島海洋化工廠生產；其它試劑除注明外均為國內市售分析純。無水四氫呋喃用適量五氧化二磷干燥24小時后，過濾所得濾液用金屬鈉回流(二苯甲酮為指示劑)變藍，常壓蒸餾收集65-66℃的餾分。
絕對乙醇按常規方法制備，即于1.5L的圓底燒瓶中加5g干凈的金屬鎂和0.5g的碘，然后加入50～75ml無水乙醇，加熱至碘消失，繼續加熱至鎂都轉換完全，再加入900ml無水乙醇，回流30min，常壓蒸餾收集80℃的餾分。密封保存。
無水二甲基甲酰胺按常規方法制備，即市售二甲基甲酰胺，過干燥的強酸型離子交換柱，后加入其1/3體積的苯進行蒸餾，等基本蒸去苯后，減壓蒸出二甲基甲酰胺(沸程1℃)的餾分，加入4A分子篩適量，密封保存備用。吡啶精制吡啶用氫氧化鉀干燥，經蒸餾后收集114～116℃的餾分。
4N HCl/乙酸乙酯按常規方法制備，即市售乙酸乙酯用無水碳酸鉀干燥24小時后，過濾，得干燥的乙酸乙酯。用NaCl濃硫酸發生氯化氫氣體，氣體經濃硫酸洗瓶及氯化鈣干燥塔后通入乙酸乙酯溶液中吸收。至增重4N為止，溶液密封保存。
測試儀器核磁儀器型號為VXR-300S(300MHz)或INOVA-500(500MHz)。質譜儀器型號為FAB-MS用英國VG公司的ZAB-MS，美國Thermo Finnigan公司的Trace MS System質譜儀和MALDI-TOF-MS。熔點儀為北京科儀電光儀器廠生產的XT5熱臺式顯微熔點儀，溫度未校正。旋光儀為SCHMIDT-HAENSCH公司的POLAARTRONIC D型微量旋光儀，樣品池為5厘米，體積0.7ml。
實施例1 Boc-Ser(Bzl)-OBzl(化合物1)的合成將1.0g(3.386mmol)Boc-Ser(Bzl)-OH溶于2.5ml無水乙醇中，加入0.557g(1.693mmol)Cs2CO3水溶液，室溫反應2小時后，減壓濃縮至干，殘留物加無水乙醇，減壓濃縮至干，反復3次，得無色固體。置干燥器中干燥過夜。該無色固體溶于2ml無水DMF中，加入0.402ml(3.386mmol)溴芐，55℃左右反應16小時。將反應液倒入培養皿中用吹風機吹干溶劑。殘留物用乙酸乙酯溶解，濾掉不溶物，濾液依次用飽和NaHCO3水溶液、飽和NaCl水溶液、5％KHSO4水溶液、飽和NaCl水溶液各洗三遍(上述操作在下文統稱常規處理)。有機層用無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓濃縮至干，得無色粗產品，用乙酸乙酯—石油醚重結晶，得純的標題化合物1.223g(94％)。
實施例2 HCl·H-Ser(Bzl)-OBzl(化合物2)的合成500mg(1.299mmol)Boc-Ser(Bzl)-OBzl溶于3ml 4NHCl/乙酸乙酯中，室溫反應1.5小時，TLC顯示原料點消失。反應混合物減壓濃縮至干，殘留物再用乙酸乙酯溶解，減壓濃縮至干。該操作反復4次，殘留物用無水乙醚泡洗，得標題化合物，直接用于下步反應。ESI-MS286.6[M+H]+，571.2[2M+H]+.
實施例3 Boc-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl(化合物3)的合成A)420mg(1.299mmol)Boc-Asp(OBzl)-OH溶于2ml無水THF中，冰浴下加入175.5mg(1.299mmol)HoBt和268mg(1.299mmol)的DCC的無水THF溶液，0℃反應30分鐘。
B)417.6mg(1.299mmol)HCl·H-Ser(Bzl)-OBzl溶于2ml無水THF中，冰浴下加入155μl N-甲基嗎啉，反應10分鐘后，將該溶液加入到上面A反應液中。加N-甲基嗎啉使兩者混和反應液的pH＝8～9左右，室溫反應8小時后，TLC顯示原料點消失。過濾掉不溶物，濾液減壓濃縮至干，殘留物用石油醚和無水乙醚泡洗6次后，用乙酸乙酯溶解殘留物，濾液依次用飽和NaHCO3水溶液、飽和NaCl水溶液、5％KHSO4水溶液、飽和NaCl水溶液各洗三遍。有機層用無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓濃縮至干，得無色產品。用乙酸乙酯—石油醚重結晶。得標題化合物722.3mg(94.3％)。
實施例4 HCl·H-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl(化合物4)的合成500mg(1.299mmol)Boc-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl溶于3ml 4NHCl/乙酸乙酯中，室溫反應2小時，TLC顯示原料點消失。反應混合物減壓濃縮至干，殘留物再用乙酸乙酯溶解，減壓濃縮至干，該操作反復3次，殘留物用無水乙醚泡洗，得標題化合物，直接用于下步反應。ESI-MS491.7[M+H]+，981.2[2M+H]+.
實施例5 Boc-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl(化合物5)的合成采用實施例3的操作，由114mg(0.8432mmol)Boc-Gly-OH和444.5mg(0.8432mmol)HCl·H-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl制得494mg(90.5％)標題化合物。ESI-MS 648.4[M+H]+.
實施例6 HCl·H-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl(化合物6)的合成采用實施例4的操作，由400mg(0.6179mmol)Boc-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl制得347.5mg(96％)標題化合物。ESI-MS548.7[M+H]+，1095.6[2M+H]+.
實施例7 Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl(化合物7)的合成采用實施例3的操作，由197mg(0.6197mmol)Boc-Arg(NO2)-OH和363mg(0.6179mmol)HCl·H-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl制得466mg(88.7％)。Mp72-74℃，[a]20D＝+5.0°(c＝1，CHCl3∶MeOH＝10∶1)，FAB-MS(m/e)848.1[M-H]+.
實施例8 HCl·H-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl(化合物8)的合成采用實施例4的操作，由400mg(0.4710mmol)Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl制得標題化合物370mg(92.7％)，FAB-MS(m/e)750.3[M+H]+。
實施例9 HCl·H-Arg-Gly-Asp-Ser-OH(化合物9)的合成100mg(0.1273mmol)HCl·H-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl溶于甲醇/水＝3/2混合溶劑，加入10mg10％Pd/C，通H2，進行催化氫解反應。室溫反應5小時，停反應，過濾，濾液減壓濃縮至干，殘留物用無水乙醚磨洗數次，得54mg(90.2％)標題化合物，為無色固體粉末。mp183-187℃，[a]20D＝+6°(c＝1，H2O)，ESI-MS434.6[M+2H]+.
實施例10 Boc-Val-OBzl(化合物10)的合成將Boc-Val-OH 1g(4.608mmol)溶于2.5ml無水乙醇中，加入Cs2CO30.750g(2.304mmol)的水溶液，室溫反應2小時后，反應混合物減壓濃縮至干，殘留物再加無水乙醇，再減壓濃縮至干，反復3次，得無色固體。置干燥器中干燥過夜。將所得無色固體溶于3ml無水DMF中，加入0.547ml(4.608mmol)溴芐，55℃左右反應16小時。反應混合物減壓濃縮至干。殘留物再用乙酸乙酯溶解，過濾掉不溶物，濾液依次用飽和NaHCO3水溶液、飽和NaCl水溶液、5％KHSO4水溶液、飽和NaCl水溶液各洗三遍。有機層用無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓濃縮至干，得無色粗產品，用乙酸乙酯—石油醚重結晶，得純的標題化合物1.34g(94.7％)。
實施例11 HCl·H-Val-OBzl(化合物11)的合成采用實施例4的操作，由400mg(1.303mmol)Boc-Val-OBzl得311mg(98％)標題化合物。ESI-MS208.5[M+H]+，415.4[2M+H]+.
實施例12 Boc-Asp(OBzl)-Val-OBzl(化合物12)的合成采用實施例3的操作，由422mg(1.303mmol)Boc-Asp(OBzl)-OH和317mg(1.303mmol)HCl·H-Val-OBzl制得634mg(95.0％)標題化合物，為無色固體，FAB-MS513.4[M+H]+。
實施例13 HCl·H-Asp(OBzl)-Val-OBzl(化合物13)的合成采用實施例4的操作，由300mg(0.5854mmol)Boc-Asp(OBzl)-Val-OBzl得254.9mg(97％)標題化合物。
實施例14 Boc-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl(化合物14)的合成采用實施例3的操作，由102mg(0.5854mmol)Boc-Gly-OH和263mg(0.5854mmol)HCl·H-Asp(OBzl)-Val-OBzl制得319mg(95.7％)標題化合物。mp77-79℃。ESI-MS570.5[M+H]+，592.6[M+Na]+，1161.2[2M+Na]+.
實施例15 HCl·H-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl(化合物15)的合成采用實施例4的操作，由300mg(0.5268mmol)Boc-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl得261mg(96％)標題化合物，ESI-MS470.7[M+H]+。
實施例16 Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl(化合物16)的合成采用實施例3的操作，由167mg(0.5268mmol)Boc-Arg(NO2)-OH和266.5mg(0.5268mmol)HCl·H-Asp(OBzl)-Val-OBzl制得405.8mg(88.9％)標題化合物。mp95-97°，[a]20D＝+7(c＝1，CHCl3∶MeOH＝10∶1)，FAB-MS(m/e)771.3[M+H]+.809.3[M+K]+.。
實施例17 HCl·H-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl(化合物17)的合成采用實施例4的操作，由500mg(0.6489mmol)Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl得470mg(94％)標題化合物，FAB-MS(m/e)671.5[M+H]+。
實施例18 HCl·H-Arg-Gly-Asp-Val-OH(化合物18)的合成采用實施例9的操作，由100mg(0.1298mmol)HCl·H-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl得55mg(88.7％)標題化合物，為無色粉末。mp180-182℃，[a]20D＝+3°(c＝1，H2O)，ESI-MS445.4[M+H]+實施例19 Boc-Phe-OBzl(化合物19)的合成將Boc-Phe-OH 1g(3.774mmol)溶于3ml無水乙醇中，加入Cs2CO30.621g(1.887mmol)的水溶液，室溫反應2小時后，減壓蒸干溶劑，再加無水乙醇，減壓蒸干，反復3次，得白色固體。置干燥器中干燥過夜。將上述所得無色固體溶于3ml無水DMF中，加入0.448ml(3.774mmol)溴芐，55℃左右反應16小時。將反應液倒入培養皿中用吹風機吹干溶劑。然后再用乙酸乙酯溶解，過濾掉不溶物，濾液依次用飽和NaHCO3水溶液、飽和NaCl水溶液、5％KHSO4水溶液、飽和NaCl水溶液各洗三遍。有機層用無水硫酸鈉干燥，過濾，旋干，得無色粗產品，用乙酸乙酯—石油醚重結晶，得1.261g(95％)純標題化合物。Rf＝0.72(A).ESI-MS378.4[M+Na]+.。
實施例20 HCl·H-Phe-OBzl(化合物20)的合成采用實施例4的操作，由500mg(1.407mmol)Boc-Phe-OBzl得470mg(94％)標題化合物，直接用于下步反應。
實施例21 Boc-Asp(OBzl)-Phe-OBzl(化合物21)的合成采用實施例3的操作，由455mg(1.407mmol)Boc-Asp(OBzl)-OH和516mg(1.407mmol)HCl·H-Phe-OBzl得757mg(96％)標題化合物。mp88-90℃.ESI-MS583.6[M+Na]+，1143.0[2M+Na]+實施例22 HCl·H-Asp(OBzl)-Phe-OBzl(化合物22)的合成采用實施例4的操作，由500mg(0.8919mmol)Boc-Asp(OBzl)-Phe-OBzl得403mg(98％)標題化合物。ESI-MS461.8[M+H]+.
實施例23 Boc-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl(化合物23)的合成采用實施例3的操作，由153mg(0.8746mmol)Boc-Gly-OH和403mg(0.8746mmol)HCl·H-Asp(OBzl)-Phe-OBzl得509mg(94.3％)標題化合物。mp 72-74℃。ESI-MS618.5[M+H]+，640.6[M+Na]+，1257.0[2M+Na]+.
實施例24 HCl·H-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl(化合物24)的合成采用實施例4的操作，由500mg(0.8097mmol)Boc-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl制得411mg(98％)標題化合物，直接用于下步反應。ESI-MS518.7[M+H]+，1035.4[2M+H]+.
實施例25 Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl(化合物25)的合成采用實施例3的操作，由236mg(0.7412mmol)Boc-Arg(NO2)-OH和411mg(0.7412mmol)HCl·H-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl制得528.5mg(87％)標題化合物。mp148-150℃，[a]20D＝+7°(c＝1，CHCl3∶MeOH＝10∶1)，FAB-MS(m/e)818.6[M-H]+.
實施例26 HCl·H-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl(化合物26)的合成采用實施例4的操作，由500mg(0.6101mmol)Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl制得461mg(93.3％)標題化合物，直接用于下步反應，FAB-MS(m/e)720.5[M+H]+。
實施例27 HCl·H-Arg-Gly-Asp-Phe-OH(化合物27)的合成采用實施例9的操作，由100mg(0.1323mmol)HCl·H-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl，得64mg(92％)標題化合物，為無色粉末。mp158-160℃，[a]20D＝+4°(c＝2，H2O)，ESI-MS492.5[M+2H]+實施例28γ-(3-羥基雌二醇-17β-氧基)丙酸(化合物28)的合成100mg(1mmol)丁二酸酐，溶于1ml吡啶中，待溫熱溶解后，加入100mg(0.3676mmol)雌二醇，90℃反應10小時后，薄層檢測，原料點消失。停止反應后，加入20ml冰水和75mg氯化鈉，劇烈攪拌后用乙酸乙酯萃取，合并有機層，無水Na2SO4干燥，過濾，真空濃縮干有機溶劑，得黃色粘漿。將此粘漿溶于1ml甲醇中，加入適量冷的10％K2CO3溶液，使pH維持在8.5-9，室溫放置18小時，后滴加50％乙酸至pH＝6，真空濃縮除去有機溶劑后，加入2ml冰水和75mg氯化鈉，用乙酸乙酯萃取，有機層用冷冰水反洗幾次。無水Na2SO4干燥，過濾，真空濃縮干有機溶劑，得淺黃色粘漿。置冰箱中過夜，第二天析出固體，用少量冷苯洗滌，得乳白色粉末。柱層析分離，洗脫劑是氯仿∶甲醇＝10∶1，得137mg(94.5％)標題化合物，為無色粉末。Rf＝0.33(C)。FAB-MS(m/e)373.6[M+H]+。mp148-150℃。[a]20D＝+35°(c＝1，THF).1HNMR(DMSO-d6)δ0.774(s，3H，18-CH3)；4.618(t，1H，17-H)；6,400(s，1H，4-H)；6.517(d，1H，3-OH)；7.04(d，1H，1-H)；8.993(s，1H，3-OH)；12.192(s，1H，COOH)實施例29 N-[γ-(3-羥基雌二醇-17β-氧基)丙酰基]-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl(化合物29)的合成采用實施例3的操作，由88mg(0.2355mmol)γ-(3-羥基雌二醇-17β-氧基)丙酸(28)和185mg(0.2355mmol)HCl·H-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl(8)得158mg(60.8％)純標題化合物，為無色粉末。Rf＝0.42(C)。mp143-145℃，[a]20D＝+20°(c＝1，CHCl3∶MeOH＝10∶1)，ESI-TOF1104.4[M+H]+實施例30 N-[γ-(3-羥基雌二醇-17β-氧基)丙酰基]-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl(化合物30)的合成采用實施例3的操作，由121mg(0.3253mmol)γ-(3-羥基雌二醇-17β-氧基)丙酸(28)和230mg(0.3253mmol)HCl·H-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl(17)得177mg(53.1％)純標題化合物，為無色粉末。Rf＝0.53(C)。mp151-153℃，[a]20D＝+30°(c＝1，CHCl3∶MeOH＝10∶1)，ESI-TOF1025.5[M+H]+實施例31 N-[γ-(3-羥基雌二醇-17β-氧基)丙酰基]-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl(化合物31)的合成采用實施例3的操作，由39mg(0.1041mmol)γ-(3-羥基雌二醇-17β-氧基)丙酸(28)和78mg(0.1041mmol)HCl·H-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl(26)得65mg(58.2％)純標題化合物，為無色粉末。Rf＝0.51(C)mp156-158℃，[a]20D＝+23°(c＝2，CHCl3∶MeOH＝10∶1)，ESI-TOF1074.2[M+H]+實施例32 N-[γ-(3-羥基雌二醇-17β-氧基)丙酰基]-Arg-Gly-Asp-Ser-OH(化合物32)的合成采用實施例9的操作，由100mg(0.09067mmol)N-[γ-(3-羥基雌二醇-17β-氧基)丙酰基]-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl(29)得44mg(62％)目標化合物，為無色粉末。Rf＝0.47(D)，mp178-180℃，[a]20D＝+50°(c＝1，MeOH)，FAB-MS788.4[M+H]+，IR(KBr)3367cm-1(νCO-NH)，1720，1658cm-1(νC＝O).
1HNMR(ppm)δ0.773(s，3H，18-CH3)；4.601(t，1H，17-H)；6.439(s，1H，4-H)；6.514(d，1H，2-H)；7.045(d，1H，1-H)；9.068(s，1H，3-OH)實施例33 N-[γ-(3-羥基雌二醇-17β-氧基)丙酰基]-Arg-Gly-Asp-Val-OH(化合物33)的合成采用實施例9的操作，由100mg(0.09766mmol)N-[γ-(3-羥基雌二醇-17β-氧基)丙酰基]-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl(30)得53.4mg(68.4％)目標化合物，為無色粉末。Rf＝0.50(D)，mp193-195℃，[a]20D＝+56°(c＝0.5，MeOH)，MALDI-TOF800.4[M+H]+.IR(KBr)3360cm-1(νCO-NH)，1659cm-1(νC＝O).1HNMR(ppm)δ0.754(s，3H，18-CH3)；0.850(d，6H，Val-2CH3)；6.429(s，1H，4-H)；6.494(d，1H，2-H)；6.931(d，1H，1-H)；9.032(s，1H，3-OH)實施例34 N-[γ-(3-羥基雌二醇-17β-氧基)丙酰基]-Arg-Gly-Asp-Phe-OH(化合物34)的合成采用實施例9的操作，由100mg(0.09320mmol)N-[γ-(3-羥基雌二醇-17β-氧基)丙酰基]-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl(31)得45.8mg(58％)目標化合物，為無色粉末。，Rf＝0.48(D)，mp196-198℃，[a]20D＝+45°(c＝0.5，MeOH)，MALDI-TOF848.4[M+H)+，870.4[M+Na]+IR(KBr)3391cm-1(νCO-NH)，1661cm-1(νC＝O).1HNMR(ppm)δ0.764(s，3H，18-CH3)；6.434(s，1H，4-H)；6.502(d，1H，2-H)；7.009(d，1H，1-H)；7.023(m，1H，aromatic H of Phe)；7.075(m，2H，aromatic H of Phe)；7.103(m，2H，aromatic H of Phe)；9.045(s，1H，3-OH)
實施例35 3-乙氧羰亞甲氧基-雌二醇(化合物35)的合成500mg(1.85mmol)雌二醇溶于10ml無水THF中，加入1.32ml2M乙醇鈉的乙醇溶液，反應30分鐘后，加入0.612ml(5mmol)溴乙酸乙酯，55℃反應16小時后，反應混合物減壓濃縮至干，殘留物再用溶劑溶解并減壓濃縮至干，該操作反復4次，以便去除殘留的溴乙酸乙酯。殘留物柱層析分離純化(氯仿/乙醚，100/3)，得550mg(83％)純標題化合物，為無色粉末。Rf＝0.42(E)。mp88-90℃。[a]20D＝+60°(c＝1，THF)。
實施例36 3-羧亞甲氧基-雌二醇(化合物36)的合成450mg(1.257mmol)3-乙氧羰亞甲氧基-雌二醇(35)溶于3ml無水乙醇中，冰浴下滴加適量2NNaOH水溶液，室溫反應2.5小時后，薄層檢測原料點消失，加適量KHSO4固體使反應液pH＝7，反應混合物減壓濃縮去除有機溶劑后，補加少量水，再用適量KHSO4固體使反應液pH＝2，用乙酸乙酯萃取，無水Na2SO4干燥，過濾，減壓濃縮，得397mg(95.6％)純標題化合物，為無色粉末。Rf＝0.27(B)。mp214-215℃。[a]20D＝+50°(c＝0.6，THF)。EI-MS(m/e)330[M]+.
實施例37 N-(雌二醇-3-氧基亞甲羰基)-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl(化合物37)的合成采用實施例3的操作，由50mg(0.1514mmol)3-羧亞甲氧基-雌二醇(36)和119mg(0.1514mmol)HCl·H-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl(8)得150mg(93.2％)純標題產品，為無色粉末。Rf＝0.44(C)，mp114-116℃。[a]20D＝+55°(c＝0.5，MeOH)。ESI-MS 1062.5[M+H]+實施例38 N-(雌二醇-3-氧基亞甲羰基)-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl(化合物38)的合成采用實施例3的操作，由50mg(0.1514mmol)3-羧亞甲氧基-雌二醇(36)和107mg(0.1514mmol)HCl·H-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl(17)得111mg(73.5％)純標題產品，為無色粉末。Rf＝0.52(C)。mp130-132℃。[a]20D＝+60°(c＝1，MeOH)，FAB-MS(m/e)1025.9[M+H]+.
實施例39 N-(雌二醇-3-氧基亞甲羰基)-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl(化合物39)的合成采用實施例3的操作，由50mg(0.1514mmol)3-羧亞甲氧基-雌二醇(36)和119mg(0.1514mmol)HCl·H-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl(26)得96.5mg(60.9％)純標題產品，為無色粉末。Rf＝0.55(C)。mp136-138℃。[a]20D＝+55°(c＝1，MeOH)，FAB-MS(m/e)1048.2[M+H]+.
實施例40 N-(雌二醇-3-氧基亞甲羰基)-Arg-Gly-Asp-Ser-OH(化合物40)的合成采用實施例9的操作，由100mg(0.09421mmol)N-(雌二醇-3-氧基亞甲羰基)-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl(37)得49.1mg(70％)純標題化合物，為無色粉末。Rf＝0.41(D)，mp155-157℃。[a]20D＝+39°(c＝0.5，MeOH)，ESI-TOF746.3[M+H]+IR(KBr)3387cm-1(νCO-NH)，1659cm-1(νC＝O).1HNMR(ppm)δ＝0.663(s，3H，18-CH3)；4.513(s，2H，3-O-CH2)；6.645(s，1H，4-H)；6.701(d，1H，2-H)；7.156(d，1H，1-H)；實施例41 N-(雌二醇-3-氧基亞甲羰基)-Arg-Gly-Asp-Val-OH(化合物41)的合成采用實施例9的操作，由100mg(0.09757mmol)N-(雌二醇-3-氧基亞甲羰基)-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl(38)得53.9mg(73％)純標題化合物，為無色粉末。Rf＝0.43(D)，mp174-176℃。[a]20D＝+45°(c＝0.5，MeOH)，FAB-MS757.9[M+H]+。IR(KBr)3402cm-1(νCO-NH)，1660cm-1(νC＝O).1HNMR(DMSO-d6)δ＝0.646(s，3H，18-CH3)；0.731(d，6H，Val-2CH3)；3.006(d，1H，Val-CH-CO)；4.505(s，2H，3-O-CH2-CO)；6.596(s，1H，4-H)；6.949(d，2H，2-H)；7.136(d，2H，1-H)。
實施例42 N-(雌二醇-3-氧基亞甲羰基)-Arg-Gly-Asp-Phe-OH(化合物42)的合成采用實施例9的操作，由100mg(0.09549mmol)17β-OH-雌二醇-3-O-乙酰基-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl(39)得59.2mg(77％)純標題化合物，為無色粉末。Rf＝0.45(D)，mp180-182℃。[a]20D＝+48°(c＝0.5，MeOH)，，FAB-MS806.3[M+H]+IR(KBr)3405cm-1(νCO-NH)，1660cm-1(νC＝O).1HNMR(ppm)δ0.659(s，3H，18-CH3)；6.645(s，1H，4-H)；6.667(d，1H，2-H)；7.063(d，1H，1-H)；7.079(m，1H，aromatic H of Phe)；7.127(m，2H，aromatic H of Phe)；7.275(m，2H，aromatic H of Phe).
實施例43 3-肼基亞甲氧基-雌二醇(化合物43)的合成200mg(0.5587mmol)3-乙氧羰亞甲氧基-雌二醇(35)溶于3ml甲醇，于55℃下滴加1ml80％水合肼，反應4小時后，停止反應，冰箱放置過夜，第二天將析出的固體過濾，水洗，干燥，得184mg(96％)標題化合物，為無粉末。Rf＝0.21(C)。mp153-155℃，FAB-MS(m/e)345.5[M+H]+實施例44 Boc-Ser(Bzl)-3-肼基亞甲氧基-雌二醇(化合物44)的合成采用實施例3的操作，由163mg(0.5523mmol)BocSer(Bzl)OH和190mg(0.5523mmol)3-肼基亞甲氧基-雌二醇(43)得305mg(89.1％)純標題化合物，為無色固體粉末。Rf＝0.34(B).FAB-MS(m/e)620.6[M+H]+.
實施例45 Boc-Val-3-肼基亞甲氧基-雌二醇(化合物45)的合成采用實施例3的操作，由120mg(0.5523mmol)BocValOH和190mg(0.5523mmol)3-肼基亞甲氧基-雌二醇(43)得288mg(96％)純標題化合物，為無色固體粉末。mp173-174℃，Rf＝0.35(B).FAB-MS(m/e)543[M]+.
實施例46 Boc-Phe-3-肼基亞甲氧基-雌二醇(化合物46)的合成采用實施例3的操作，由39mg(0.1453mmol)BocPheOH和50mg(0.1453mmol)3-肼基亞甲氧基-雌二醇(43)得73mg(85％)純標題產品，為無色固體粉末。Rf＝0.31(B).FAB-MS(m/e)592[M+H]+實施例47 HCl Ser(Bzl)-3-肼基亞甲氧基-雌二醇(化合物47)的合成采用實施例4的操作，由100mg(0.1615mmol)Boc-Ser(Bzl)-3-肼基亞甲氧基-雌二醇(44)得79mg(94％)標題化合物，為無色粉末。
實施例48 HClVal-3-肼基亞甲氧基-雌二醇(化合物48)的合成采用實施例4的操作，由140mg(0.2579mmol)Boc-Val-3-肼基亞甲氧基-雌二醇(45)得110.8mg(97％)標題化合物，為無色粉末。
實施例49 HClPhe-3-肼基亞甲氧基-雌二醇(化合物49)的合成采用實施例4的操作，由100mg(0.1691mmol)Boc-Phe-3-肼基亞甲氧基-雌二醇(46)得78.8mg(95％)標題化合物，為無色粉末。
實施例50 BocAsp(OBzl)-Ser(Bzl)-3-肼基亞甲氧基-雌二醇(化合物50)的合成采用實施例3的操作，由52mg(0.1615mmol)BocAsp(OBzl)OH和84mg(0.1615mmol)HCl Ser(Bzl)-3-肼基亞甲氧基-雌二醇(47)得115mg(85％)標題化合物，為無色粉末。Rf＝0.53(B)。FAB-MS(m/e)826.3[M+H]+實施例51 Boc-Asp(OBzl)-Val-3-肼基亞甲氧基-雌二醇(化合物51)的合成采用實施例3的操作，由83.4mg(0.2579mmol)BocAsp(OBzl)OH和114.2mg(0.2579mmol)HClVal-3-肼基亞甲氧基-雌二醇(48)得174mg(90％)標題化合物，為無色粉末。Rf＝0.48(B)。FAB-MS(m/e)749.7[M+H]+實施例52 BocAsp(OBzl)-Phe-3-肼基亞甲氧基-雌二醇(化合物52)的合成采用實施例3的操作，由55mg(0.1691mmol)BocAsp(OBzl)OH和83mg(0.1691mmol)HClPhe-3-肼基亞甲氧基-雌二醇(49)得185mg(89％)標題化合物，為無色粉末。mp110-112℃，Rf＝0.56(B)。FAB-MS(m/e)797.4[M]+實施例53 HClAsp(OBzl)-Ser(Bzl)-3-肼基亞甲氧基-雌二醇(化合物53)的合成采用實施例4的操作，由219mg(0.2650mmol)BocAsp(OBzl)-Ser(Bzl)-3-肼基亞甲氧基-雌二醇(50)得184.5mg(96％)純標題化合物，直接用于下步反應。
實施例54 HClAsp(OBzl)-Val-3-肼基亞甲氧基-雌二醇(化合物54)的合成采用實施例4的操作，由100mg(0.1335mmol)Boc-Asp(OBzl)-Val-3-肼基亞甲氧基-雌二醇(51)得79.7mg(92％)純標題化合物，直接用于下步反應。
實施例55 HClAsp(OBzl)-Phe-3-肼基亞甲氧基-雌二醇(化合物55)的合成采用實施例4的操作，由100mg(0.1255mmol)BocAsp(OBzl)-Phe-3-肼基亞甲氧基-雌二醇(52)得80.3mg(94％)純標題化合物，直接用于下步反應。
實施例56 HCl·H-Gly-OCH3(化合物56)的合成25ml無水甲醇冷卻到-10℃，攪拌下慢慢加入6.5mlSOCl2，10分鐘后，加入2g甘氨酸。室溫反應2天后，減壓濃縮，再加入12ml甲醇，反復濃縮二次。用甲醇重結晶。得產品2.75g(95％)。
實施例57 BocArg(NO2)-Gly-OCH3(化合物57)的合成500mg(1.5660mmol)BocArg(NO2)OH溶解在7ml無水THF中，冰鹽浴下加入0.1863ml(1.5660mmol)NMM，幾分鐘后，加入氯丁酸異丁酯0.295ml(1.879mmol)，幾分鐘后再加入225mg(1.5660mmol)化合物(56)和0.1863ml(1.5660mmol)NMM的無水THF溶液。3小時后停反應，常規處理，得525.6mg(86％)純標題產品，為無色粉末。
實施例58 BocArg(NO2)-Gly-OH(化合物58)的合成采用實施例36的操作，由200mg(0.4935mmol)BocArg(NO2)-Gly-OCH3(57)得151mg(81％)純標題產品，為無色粉末。Rf＝0.21(C)。
實施例59 BocArg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-3-肼基亞甲氧基-雌二醇(化合物59)的合成采用實施例3的操作，由100mg(0.2650mmol)BocArg(NO2)-Gly-OH和202mg(0.2650mmol)HClAsp(OBzl)-Ser(Bzl)-3-肼基亞甲氧基-雌二醇(53)得204mg(71％)純標題化合物，為無色粉末。Rf＝0.23(C)。FAB-MS(m/e)1085.3[M+H]+實施例60 BocArg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-3-肼基亞甲氧基-雌二醇(化合物60)的合成采用實施例3的操作，由50mg(0.1335mmol)BocArg(NO2)-Gly-OH和92mg(0.1335mmol)HClAsp(OBzl)-Val-3-肼基亞甲氧基-雌二醇(54)得93.4mg(69.5％)純標題化合物，為無色粉末。Rf＝0.20(C)。FAB-MS(m/e)1007.6[M+H]+。
實施例61 BocArg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-3-肼基亞甲氧基-雌二醇(化合物61)的合成采用實施例3的操作，由46mg(0.1255mmol)BocArg(NO2)-Gly-OH和89.8mg(0.1255mmol)HClAsp(OBzl)-Phe-3-肼基亞甲氧基-雌二醇(55)得92.6mg(70％)純標題化合物，為無色粉末。Rf＝0.27(C)。FAB-MS(m/e)1055.5[M+H]+。
實施例62 3-乙氧羰亞甲氧基-雌酮(化合物62)采用實施例35的操作，由500mg(1.8491mmol)雌酮和0.750ml(5.5mmol)溴乙酸乙酯得593mg(90％)純標題化合物，為無色粉末。Rf＝0.53(E)，mp98-100℃，[a]20D＝+138°(c＝0.5，THF)，FAB-MS(m/e)357.3[M+H]+.
實施例63 3-羧亞甲氧基雌酮(化合物63)的合成采用實施例36的操作，由500mg(1.4025mmol)3-乙氧羰亞甲氧基-雌酮(62)溶于3ml無水乙醇中，冰浴下滴加適量2NNaOH水溶液，室溫反應2.5小時后，薄層檢測原料點消失，加適量KHSO4固體使反應液pH＝7，真空濃縮干有機溶劑后，補加少量水，再用適量KHSO4固體使反應液pH＝2，用乙酸乙酯萃取，無水Na2SO4干燥，過濾，減壓濃縮至干，得442mg(96％)標題化合物，為無色粉末。Rf＝0.42(B)。mp 214-215℃；[a]20D＝+159°(c＝0.45，THF)，FAB-MS(m/e)329.3[M+H]+實施例64 N-(雌酮-3-氧乙酰基)Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl(化合物64)的合成50mg(0.1514mmol)3-羧亞甲氧基雌酮(63)和20mg(0.1514mmol)HoBt，溶于1ml無水THF中，冰浴下加入33mg(0.1514mmol)的DCC，30分鐘后將反應液加入到119mg(0.1514mmol)HCl·H-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl(8)的無水THF溶液中，并用NMM維持反應液的pH＝8左右。室溫反應8小時后，薄層分析原料點基本消失，常規處理，粗品經柱層析分離純化(氯仿/甲醇，10/1)，得99mg(62％)標題化合物，為無色粉末。Rf＝0.47(C)。mp133-135℃，[a]20D＝+32°(c＝0.5，CHCl3∶MeOH＝10∶1)，FAB-MS(m/e)1059.6[M]+.
實施例65 N-(雌酮-3-氧乙酰基)-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl(化合物65)的合成50mg(0.1514mmol)3-羧亞甲氧基雌酮(63)和20mg(0.1514mmol)HoBt，溶于1ml無水THF中，冰浴下加入33mg(0.1514mmol)的DCC，30分鐘后將反應液加入到107mg(0.1514mmol)HCl·H-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl(17)的無水THF溶液中，并用NMM維持反應液的pH＝8左右。室溫反應8小時后，薄層分析原料點基本消失，常規處理，粗品經柱層析分離純化(氯仿/甲醇，10/1)，得101mg(68％)標題化合物，為無色粉末。Rf＝0.56(C)。mp124-126℃[a]20D＝+26°(c＝0.5，CHCl3∶MeOH＝10∶1)，FAB-MS(m/e)981.5[M+H]+實施例66 N-(雌酮-3-氧乙酰基)-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl(化合物66)的合成50mg(0.1514mmol)3-羧亞甲氧基雌酮(63)和20mg(0.1514mmol)HoBt，溶于1ml無水THF中，冰浴下加入33mg(0.1514mmol)的DCC，30分鐘后將反應液加入到119mg(0.1514mmol)HCl·H-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl(26)的無水THF溶液中，并用NMM維持反應液的pH＝8左右。室溫反應8小時后，薄層分析原料點基本消失，常規處理，粗品經柱層析分離純化(氯仿/甲醇，10/1)，得110mg(70.3％)標題化合物，為無色粉末。Rf＝0.57(C)。mp130-132℃，[a]20D＝+28°(c＝0.5，CHCl3∶MeOH＝10∶1)，FAB-MS(m/e)1028.5[M-H]+.
實施例67 N-(雌酮-3-氧乙酰基)Arg-Gly-Asp-Ser-OH(化合物67)的合成采用實施例9的操作，由100mg(0.0944mmol)N-(雌酮-3-氧乙酰基)Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl(64)得40mg(57％)目標化合物，為無色粉末。Rf＝0.55(D)，mp170-172℃，[a]20D＝+55°(c＝1，MeOH)，FAB-MS743.5[M]+1HNMR(ppm)δ0.827(s，3H，18-CH3)；4.534(s，2H，3-O-CH2)；6.646(s，1H，4-H)；6.700(d，1H，2-H)；7.174(d，1H，1-H)；實施例68 N-(雌酮-3-氧乙酰基)Arg-Gly-Asp-Val-OH(化合物68)的合成采用實施例9的操作，由100mg(0.1020mmol)N-(雌酮-3-氧乙酰基)-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl(65)得58.5mg(76％)目標化合物，為無色粉末。，Rf＝0.60(D)，mp164-166℃，[a]20D＝+44°(c＝0.5，MeOH)FAB-MS756.3[M+H]+1HNMR(ppm)δ0.747(d，6H，Val-2CH3)；0.829(s，3H，18-CH3)；4.531(s，2H，3-O-CH2)；6.640(s，1H，4-H)；6.700(d，1H，2-H)；7.171(d，1H，1-H)；實施例69 N-(雌酮-3-氧乙酰基)-Arg-Gly-Asp-Phe-OH(化合物69)的合成采用實施例9的操作，由100mg(0.09713mmol)N-(雌酮-3-氧乙酰基)-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl(66)得43.7mg(56％)目標化合物，為無色粉末。Rf＝0.53(D)，mp167-169℃，[a]20D＝+32°(c＝0.5，MeOH)，FAB-MS803.2[M]+1HNMR(ppm)δ0.810(s，3H，18-CH3)；4.548(3-O-CH2)；6.653(s，1H，4-H)；6.708(d，1H，2-H)；7.092(d，1H，1-H)；7.113(m，1H，aromatic H of Phe)；7.129(m，2H，aromatic H of Phe)；7.151(m，2H，aromatic H of Phe)；9.045(s，1H，3-OH)
實施例70 17-肼基雌酮(化合物70)的合成100mg(0.37mmol)雌酮溶于0.5ml1，4-二氧六環中，加熱至60℃，再加入1ml80％水合肼，60℃下反應4小時后，置冰箱中冷卻，過濾收集析出的固體物質。得產品98mg(93％)標題化合物，為無色粉末。Rf＝0.52(B)，mp.240(dec)，[a]20D＝+102°(C＝1，DMF).EI-MS(m/e)284[M]+.
實施例71 H-Asp(OBzl)-OH(化合物71)的合成將新蒸的芐醇(50ml)加入到無水乙醚(50ml)和濃硫酸(5ml)的混合溶液中，真空抽凈乙醚后，攪拌下分批加入天冬氨酸(6.7g，50mmol)。室溫反應24小時后，用100ml95％的乙醇稀釋反應液，再在劇烈攪拌情況下滴加25ml吡啶中和反應液。反應混合液置冰箱中過夜。過濾收集析出的固體。用乙醚充分泡洗。用含吡啶的熱水重結晶。得4.5g(40％)標題化合物，為無色粉末。mp.218-220℃。[a]20D＝+28°(C＝1，HCl)實施例72 BocGlyONp(化合物72)的合成采用實施例3的操作，由500mg(2.8571mmol)BocGlyOH和405mg(2.9142mmol)HONP，得835mg(98.8％)純標題化合物，為淺黃色固體，Rf＝0.64(F)。
實施例73 BocGly-Asp(OBzl)-OH(化合物73)的合成A)230mg(0.7770mmol)化合物(72)溶于2mlTHF中；B)用少量水溶解174mg(0.7770mmol)化合物(71)和65mg(0.7770mmol)NaHCO3.將A反應液加入到B反應液中，室溫反應24小時后，反應過程中補加些NMM使反應pH維持在弱堿性。反應結束后真空濃縮干有機溶劑，加少量水溶解殘留物，用乙醚先萃取幾次，水層用固體KHSO4酸化至pH＝2，用乙酸乙酯萃取，無水硫酸鈉干燥，過濾，真空濃縮干濾液，得269mg(91％)標題化合物，為無色固體。
實施例74 17-Boc-Ser(Bzl)-肼基雌酮(化合物74)的合成采用實施例3的操作，由300mg(1.016mmol)BocSer(Bzl)OH和17-肼基雌酮(70)得455.5mg(79.9％)純標題化合物，為無色粉末。Rf＝0.51(B)。FAB-MS(m/e)562.4[M+H]+.mp 127-129℃.
實施例75 17-Boc-Val-肼基雌酮(化合物75)的合成采用實施例3的操作，由400mg(1.8433mmol)BocValOH和523.5mg(1.8433mmol)17-肼基雌酮(70)得643mg(72.5％)純標題化合物，為無色粉末。Rf＝0.50(B)。mp131-133℃，FAB-MS(m/e)483.7[M+H]+.
實施例76 17-Boc-Phe-肼基雌酮(化合物76)的合成采用實施例3的操作，由234mg(0.8805mmol)BocPheOH和250mg(0.8805mmol)17-肼基雌酮(70)得433mg(92.5％)純標題化合物，為無色粉末。Rf＝0.62(B)。mp 125-127℃.FAB-MS(m/e)531.7[M+H]+。
實施例77 17-Ser(Bzl)-肼基雌酮鹽酸鹽(化合物77)的合成采用實施例4的操作，由179mg(0.3189mmol)17-Boc-Ser(Bzl)-肼基雌酮(74)得154mg(97％)純標題化合物，為無色粉末，直接用于下步反應。
實施例78 17-Val-肼基雌酮鹽酸鹽(化合物78)的合成采用實施例4的操作，由150mg(0.3106mmol)7-Boc-Val-肼基雌酮(75)得122.4mg(94％)純標題化合物，為無色粉末，直接用于下步反應。
實施例79 17-Phe-肼基雌酮鹽酸鹽(化合物79)的合成采用實施例4的操作，由178mg(0.3350mmol)17-Boc-Phe-肼基雌酮(76)得150.3mg(96％)純標題化合物，為無色粉末，直接用于下步反應。
實施例80 17-Boc-Gly-Asp(OBzl)Ser(Bzl)-肼基雌酮(化合物80)的合成采用實施例3的操作，由121mg(0.3189mmol)BocGly-Asp(OBzl)-OH(73)和154mg(0.3095mmol)17-Ser(Bzl)-肼基雌酮鹽酸鹽(77)得223mg(85％)標題化合物，為無色粉末。
實施例81 17-Boc-Gly-Asp(OBzl)-Val-肼基雌酮(化合物81)的合成采用實施例3的操作，由118mg(0.3106mmol)BocGly-Asp(OBzl)-OH(73)和122.4mg(0.2920mmol)17-Val-肼基雌酮鹽酸鹽(78)得213mg(92％)標題化合物，為無色粉末。
實施例82 17-Boc-Gly-Asp(OBzl)-Phe-肼基雌酮(化合物82)的合成采用實施例3的操作，由127mg(0.3350mmol)BocGly-Asp(OBzl)-OH(73)和150.3mg(0.3217mmol)17-Phe-肼基雌酮鹽酸鹽(79)得242.6mg(91.3％)標題化合物。ESI-TOF(m/e)794.6[M+H]+，816.6[M+Na]+實施例83 17-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-肼基雌酮鹽酸鹽(化合物83)的合成采用實施例4的操作，由100mg(0.1214mmol)17-Boc-Gly-Asp(OBzl)Ser(Bzl)-肼基雌酮(80)得86.9mg(94％)標題化合物，為無色固體，直接用于下步反應。
實施例84 17-Gly-Asp(OBzl)-Val-肼基雌酮鹽酸鹽(化合物84)的合成采用實施例4的操作，由100mg(0.1342mmol)17-Boc-Gly-Asp(OBzl)-Val-肼基雌酮(81)得85.7mg(93.5％)標題化合物，為無色固體，直接用于下步反應。
實施例85 17-Gly-Asp(OBzl)-Phe-肼基雌酮鹽酸鹽(化合物85)的合成采用實施例4的操作，由61mg(0.07688mmol)17-Boc-Gly-Asp(OBzl)-Phe-肼基雌酮(82)得51.7mg(92％)標題化合物，，直接用于下步反應。
實施例86 17-Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-肼基雌酮(化合物86)的合成采用實施例3的操作，由39mg(0.1214mmol)BocArg(NO2)OH和92.3mg(0.1214mmol)17-Gly-Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-肼基雌酮鹽酸鹽(83)得84.6mg(68％)標題化合物，為無色固體。Rf＝0.43(C)。FAB-MS(m/e)1026[M+H]+.
實施例87 17-Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-肼基雌酮(化合物87)的合成采用實施例3的操作，由43mg(0.1342mmol)BocArg(NO2)OH和91.6mg(0.1342mmol)17-Gly-Asp(OBzl)-Val-肼基雌酮鹽酸鹽(84)得92.7mg(73％)標題化合物。mp137-139℃，FAB-MS(m/e)947.4[M+H]+實施例88 17-Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Phe--肼基雌酮(化合物88)的合成采用實施例3的操作，由25mg(0.07688mmol)BocArg(NO2)OH和56.2mg(0.07688mmol)17-Gly-Asp(OBzl)-Phe-肼基雌酮鹽酸鹽(85)得61mg(80％)標題化合物。ESI-TOF(m/e)995.7[M+H]+，1017.7[M+Na]+.
試驗例1本發明化合物的抗骨質疏松活性試驗一、材料和試劑1、供試樣品本發明實施例9、18、27、67、68、69、32、33、34、40、41和42所制備的相應化合物9、18、27、67、68、69、32、33、34、40、41和42。
2、陽性對照藥物雌二醇、雌酮。
3、實驗動物7周齡的昆明種雌小鼠，體重30.7±3.1g，由北京大學醫學部動物部提供。
4、試劑配制1)稱取32.5mg鄰甲酚酞絡合酮(OCPC)，1.1g8-羥基喹啉，加水250ml，加濃鹽酸7.5ml，充分攪拌溶解后，加超純水至500ml得OCPC試液。量取二乙胺21ml加超純水稀釋至500ml得二乙胺試液。
2)精密稱取新烘干的無水碳酸鈣2.5g，加超純水100ml，滴加濃鹽酸5ml，稀釋至1000ml得鈣標準液(1mg/ml)。
3)稱取三氯醋酸50g，硫脲5g，用300ml超純水溶解，再加入硫酸亞鐵銨20g，使溶解，稀釋至500ml得亞鐵-三氯醋酸試劑。
4)緩慢加入濃硫酸45ml至200ml冷超純水中，邊加邊攪拌，冷卻至室溫，稱取鉬酸銨22g，溶于200ml超純水中，與硫酸溶液混和并稀釋至500ml得鉬酸銨試劑。
5)稱取無水磷酸二氫鉀109.9mg，溶于500ml超純水中，加2ml氯仿防腐得磷標準液(50mg/L)。
6)稱取無水碳酸鈉6.36g，碳酸氫鈉3.36g，4-氨基安替比林1.5g，溶于1000ml超純水中得碳酸鹽緩沖液(pH＝10)，在棕色瓶中保存。
7)先煮沸超純水500ml，消滅微生物，迅速加入磷酸苯二鈉(含兩分子結晶水)2.54g，冷卻后，加入2ml氯仿防腐得磷酸苯二鈉底物液(20mmol/L)，冰箱保存。
8)稱取鐵氰化鉀2.5g溶于400ml超純水中，稱取硼酸17g溶于400ml超純水中，混合兩液，稀釋至1000ml得鐵氰化鉀溶液，置棕色瓶中避光保存。
9)精密稱取50mg苯酚，超純水稀釋至1000ml得酚標準溶液的配制(0.05g/L)。
10)稱取牛血清白蛋白0.5g，加超純水20ml混勻，于56℃水浴中保溫1小時，取出放冷，置冰箱中速凍備用。臨用前將備用液37℃水浴融化，倒入含有5g醋酸鈉的水溶液中，再加濃鹽酸3.5ml，超純水稀釋至500ml，測pH＝4.0為血清對照品。
二、試驗方法及結果將192只7周齡雌性昆明種小鼠隨機分為16組，即卵巢切除組(OVX)、假手術組(sham)、卵巢切除+17β-雌二醇治療組、卵巢切除+雌酮組、卵巢切除+化合物8治療組、卵巢切除+化合物17治療組、卵巢切除+化合物26治療組、卵巢切除+化合物67治療組、卵巢切除+化合物68治療組、卵巢切除+化合物69治療組、卵巢切除+化合物32治療組、卵巢切除+化合物33治療組、卵巢切除+化合物34治療組、卵巢切除+化合物40治療組、卵巢切除+化合物41治療組、卵巢切除+化合物42治療組。
用2％的戊巴比妥鈉按40mg/Kg的劑量腹腔注射麻醉小鼠，剪開小鼠腹腔，找到兩側的輸卵管，在兩側輸卵管的盲端找到卵巢，去除小鼠雙側卵巢，結扎輸卵管(手術過程中如果小鼠蘇醒過來，則用棉花蘸取適量無水乙醚置于小鼠的鼻子處使之麻醉)。結扎好后，滴加幾滴青霉素至小鼠腹腔，再將小鼠腹腔縫合好，于傷口外面涂上適量0.1％苯扎溴銨消毒液，以避免傷口感染。
術后5天開始給藥。卵巢切除組和假手術組每天腹腔注射空白溶液(5‰羧甲基纖維素水溶液)，其它組每天腹腔注射一次藥物(劑量為0.1103μmol/Kg)。給藥四周后，稱體重，小鼠摘除眼球取血處死，靜置30min后，3000g/分離心20min，得血清，于-20℃保存。用鄰甲酚酞絡合酮法測定血鈣含量，用鉬藍法測定血磷含量，用磷酸苯二鈉為底物測定堿性磷酸酶(ALP)的含量。分離小鼠的肺、肝、脾、子宮，得它們的凈重。取小鼠左側股骨，剔除干凈肌肉組織，用游標卡尺測定股骨的解剖長度，即雙踝長度。然后再用氯仿∶甲醇(2∶1)浸泡兩次(每次3小時)，進行脫脂。將脫脂后的股骨置于120℃烘箱中6小時，冷卻后稱干重。將已測定干重的股骨，置于800℃馬福爐中煅燒8小時，冷卻后稱灰重。計算灰重與干重的比值(g/g)，得到骨礦含量(BMC)。將已灰化的股骨用0.5ml 6N的鹽酸溶解，超純水稀釋至5ml，再取0.05ml該溶液，稀釋至1ml，備用。
血鈣測定按表1進行操作。搖勻后，用721型紫外可見分光光度計在570nm處測定吸收度，在鈣標準曲線上找到相應的鈣離子濃度。將配制的鈣標準液稀釋至2.5mg/ml，3.0mg/ml，3.5mg/ml，4.0mg/ml，4.5mg/ml，5.0mg/ml，5.5mg/ml，6.0mg/ml，8.0mg/ml。用鄰甲酚酞絡合酮法測定570nm的吸收度，繪制標準曲線。
表1鄰甲酚酞絡合酮法測定血清鈣離子濃度*
*血鈣濃度(mmol/L)＝0.5*測定鈣離子濃度血磷測定按表2進行操作。搖勻后，用721型紫外可見分光光度計在660nm測定吸收度。
表2硫酸亞鐵鏈法測定血磷含量*
血清無機磷(mmol/L)＝Au×1.615/As血清堿性磷酸酶測定按表3進行操作。搖勻后，以蒸餾水調零點，用721型紫外可見分光光度計在510nm處測定吸收度。以(AU-AC)差值查酚標準曲線，求出酶活力單位。
表3比色法測定血清堿性磷酸酶(金氏單位)*
表4酚標準曲線的測定
骨鈣測定按表5進行操作。搖勻后，用721型紫外可見分光光度計在570nm處測定吸收度，在鈣標準曲線上找到相應的鈣離子濃度。
表5鄰甲酚酞絡合酮法測定骨鈣含量*
*骨鈣含量＝2*測定鈣濃度/骨灰重骨磷測定按表6進行操作。搖勻后，用721型紫外可見分光光度計在660nm處測定吸收度。
表6硫酸亞鐵銨法測定骨磷含量*
*骨磷含量＝5*AU/AS*骨灰重腹腔注射給藥的治療結果每天腹腔注射本發明的化合物1次(劑量為0.1103μmol/Kg)，連續治療4周，測定的結果列入表7-10。
表7治療前后小鼠的體重
a)與卵巢切除組比，P＜0.05；b)與雌二醇組比，P＜0.05；c)與雌酮組比，P＜0.05；d)與卵巢切除組比，P＜0.01；e)與雌二醇組比，P＜0.01；f)與雌酮組比，P＜0.01；g)與假手術組比，P＜0.01；h)與假手術組比，P＜0.05；n＝12表7表明治療各組的最終體重都比初始體重明顯增大。所有組的初始體重之間都沒有差異。假手術組與模型對照組相比最終體重明顯大、其它各組最終體重與模型對照組最終體重明顯小。與假手術組相比，雌二醇組最終體重體重明顯大、化合物67組的最終體重明顯小、其它各組的最終體重與假手術組最終體重相當。
表8小鼠的肺、肝、脾及其子宮重量
a)與卵巢切除組比，P＜0.05；b)與雌二醇組比，P＜0.05；c)與雌酮組比，P＜0.05；d)與卵巢切除組比，P＜0.01；e)與雌二醇組比，P＜0.01；f)與雌酮組比，P＜0.01；g)與假手術組比，P＜0.01；h)與假手術組比，P＜0.05；n＝12從表8可以看出，治療后各組小鼠的肺和脾重量無明顯差異。與假手術組及模型對照組相比，雌二醇治療組小鼠的肝重量明顯大，P＜0.05。其它組小鼠肝重和假手術組及模型對照組相比差異不明顯。化合物67、68、69、32、33、34、40、41和42治療組小鼠的肝重量明顯小于雌二醇組。提示，使用雌二醇治療時有可能引起脂肪肝。
從小鼠子宮重量可以看出，雌二醇和雌酮治療組小鼠的子宮重量明顯大于假手術組，P＜0.01，雌二醇和雌酮治療有明顯的子宮增生現象。其它組子宮重量呈現不同程度小于雌二醇和雌酮組。模型對照組的小鼠子宮重量明顯小于假手術組，P＜0.01，提示去勢小鼠的子宮明顯萎縮。與模型對照組一樣，67、68、69、32、33、34、40、41和42治療組小鼠子宮也明顯萎縮。提示，本發明的化合物不會引起子宮增生。
表9小鼠股骨干重、灰重、骨長、骨礦含量及灰重/骨長
a)與卵巢切除組比，P＜0.05；b)與雌二醇組比，P＜0.05；c)與雌酮組比，P＜0.05；d)與卵巢切除組比，P＜0.01；e)與雌二醇組比，P＜0.01；f)與雌酮組比，P＜0.01；g)與假手術組比，P＜0.01；h)與假手術組比，P＜0.05；n＝12小鼠股骨干重、灰重、骨長、骨礦含量及灰重/骨長見表9。從表9可以看出，模型對照組股骨干重明顯小于假手術組。提示，去勢小鼠明顯丟失骨量。其它組股骨干重明顯大于模型對照組，其中化合物68、67、69、32、34、41治療組小鼠的股骨干重增加非常明顯大于模型對照組股骨干重，P＜0.01。可見，本發明的化合物和雌二醇及雌酮可以預防骨質疏松。與假手術組相比，各組小鼠股骨干重明顯小。其中模型對照組、雌二醇組、雌酮組、化合物9、27、32、33、40、41和42治療組小鼠的股骨干重非常明顯小于假手術組，P＜0.01，化合物17、67、68、69和34治療組小鼠的股骨干重明顯小于假手術組，P＜0.05。可見，本發明的化合物和雌二醇及雌酮不能逆轉骨質疏松。與雌二醇治療組相比，化合物32和34治療組小鼠的股骨干重顯著大(P＜0.05)，可見，本發明的化合物32和34比雌二醇及雌酮優秀。
從表9的小鼠股骨灰重可以看出，除化合物9、18、27、68外，各治療組小鼠股骨的灰重均不同程度大于模型對照組(P＜0.05-0.01)。除化合物41治療組小鼠股骨灰重和假手術組沒有顯著性差異外，其它各組小鼠股骨的灰重均有不同程度小于假手術組。化合物32、34組小鼠股骨灰重明顯大于雌二醇組，P＜0.05，化合物33、40、41、42治療組小鼠股骨灰重非常明顯大于雌二醇組，P＜0.01。可見，本發明的化合物32、33、34、40、41、和42比雌二醇及雌酮優秀。
從表9小鼠骨礦含量(BMC)可以看出，模型對照組的BMC明顯低于假手術組。說明模型對照組小鼠明顯骨質疏松。與模型對照組相比，雌二醇組、化合物69、32、33、34、40、41和42的BMC非常明顯高，P＜0.01，化合物67治療組小鼠的BMC顯著高，P＜0.05。雌酮、化合物9、18、27和68治療組小鼠的BMC與模型對照組相當。除化合物33和41治療組小鼠BMC外，其余各組小鼠BMC均不同程度低于假手術組，其中模型對照組、雌酮組、化合物9、18、27、68、69治療組小鼠BMC非常顯著低于假手術組，P＜0.01，雌二醇組顯著低于假手術組，化合物32、33、34、40、41和42治療組小鼠BMC和假手術組之間沒有顯著性差異，分別與正常值接近或相當。可見，本發明的化合物顯示明確的抗骨質疏松作用。
表9中小鼠的灰重與股骨長度的比值說明，與假手術組相比模型對照組小鼠的灰重/骨長的比值明顯小。雌二醇組、化合物67、69、32、33、34、40、41和42治療組小鼠的灰重/骨長的比值則明顯大于模型對照組，P＜0.01，其余各組與模型對照組相當。化合物41治療組小鼠的灰重/骨長的比值與假手術組相當，接近正常值。化合物40治療組小鼠的灰重/骨長的比值顯著小于假手術組，P＜0.05。其余各組小鼠的灰重/骨長的比值非常顯著小于假手術組，P＜0.01。除化合物32、33、34、40、41和42治療組小鼠的灰重/骨長的比值顯著大于雌二醇組治療組外，其余各治療組小鼠灰重/骨長的比值顯著小于雌二醇組。
表9的數據明確地顯示本發明的化合物不僅有良好的抗骨質疏松作用，其中32、33、34、40、41和42的抗骨質疏松作用明顯優于雌二醇和雌酮，而且都未觀察到子宮增生副作用。
表10說明，與假手術組相比模型組小鼠血清堿性磷酸酶(ALP)活性明顯高，說明模型對照組小鼠的骨轉換作用較強。雌二醇組、化合物68、69、32、33、34、40、41和42組小鼠ALP活性非常顯著低于模型對照組，P＜0.01。雌酮、化合物27和67組小鼠ALP活性顯著低于模型對照組，P＜0.05。除化合物9和18組小鼠ALP水平顯著高于假手術組和化合物33和41組小鼠ALP水平顯著低于假手術組外，其它組與假手術組相當。這些數據說明，經本發明的化合物治療后小鼠的骨轉換作用或者降低或者接近正常。
表10.治療后的骨鈣、骨磷、血鈣、血磷和ALP
a)與卵巢切除組比，P＜0.05；b)與雌二醇組比，P＜0.05；c)與雌酮組比，P＜0.05；d)與卵巢切除組比，P＜0.01；e)與雌二醇組比，P＜0.01；f)與雌酮組比，P＜0.01；g)與假手術組比，P＜0.01；h)與假手術組比，P＜0.05；n＝12表10還表明，模型對照組小鼠骨鈣含量顯著低于假手術組。雌二醇、雌酮、化合物67、32、33、34、40、41和42治療組小鼠骨鈣含量非常顯著高于模型對照組，P＜0.01-0.05，其余組和模型對照組沒有顯著差異。與假手術組相比模型對照組、雌酮、化合物9、18、27、67、68和69組小鼠的骨鈣含量非常顯著性低(P＜0.01)。除化合物32治療組小鼠的骨鈣含量非常顯著性低于雌二醇組(P＜0.05)外，其它化合物與雌二醇相當。雌二醇治療組小鼠的骨鈣含量與假手術組相當。
化合物32、40、41和42治療組小鼠的骨磷含量顯著性高于模型對照組(P＜0.05)。模型對照組小鼠的骨磷含量非常顯著性低于假手術組。除雌酮和化合物8治療組小鼠的骨磷含量顯著性低于假手術組(P＜0.05)外，其它化合物治療組與假手術組相當。該結果從另一個角度反映了表發明化合物的抗骨質疏松作用。
本發明化合物口服給藥活性每天灌胃給予本發明的化合物32、33、34、40、41、42以及雌二醇1次(劑量為0.1103μmol/Kg)，連續治療4周，測定的子宮重量、股骨干重、灰重、骨礦含量、骨長和骨灰重/骨長列入表11-13。
表11.口服給藥后的子宮重量
n＝12表11說明，在本發明使用的口服劑量下化合物32、33、34、40、41、42以及雌二醇都未引起子宮增生副作用。
表12.口服給藥后的股骨干重、灰重、骨礦含量、骨長和骨灰重/骨長
a)與卵巢切除組比，P＜0.05；b)與卵巢切除組比，P＜0.01；c)與雌酮組比，P＜0.05；d)與雌二醇組比，P＜0.01，n＝12表13.口服給藥后骨鈣、骨磷和堿性磷酸酶
a)與卵巢切除組比，P＜0.05；b)與卵巢切除組比，P＜0.01；c)與雌酮組比，P＜0.05；d)與雌二醇組比，P＜0.01，n＝12表12和13說明，在本發明使用的口服劑量下化合物32、33、34、40、41、42仍然顯示明顯的抗骨質疏松作用，雌二醇不顯示明顯的抗骨質疏松作用。本發明的化合物32、33、34、40、41和42顯示的口服抗骨質疏松作用使本發明的化合物具有明確的應用前景。
權利要求
1.一種具有抗骨質疏松活性的雌激素肽綴合物，其特征是具有下述通式I的結構 通式I當R3為H時，R1和R2一個為H，一個為-OCOCH2CH2CO-Arg-Gly-Asp-Ser-OH、CH2CO-Arg-Gly-Asp-Val-OH、-OCOCH2-CH2CO-Arg-Gly-Asp-Phe-OH、Ser-Asp-Gly-Arg-H、＝NNH-Val-Asp-Gly-Arg-H或＝NNH-Phe-Asp-Gly-Arg-H；當R1和R2一個為H，一個為OH時，R3選自-CH2CO-Arg-Gly-Asp-Ser-OH、-CH2CO-Arg-Gly-Asp-Val-OH、-CH2CO-Arg-Gly-Asp-Phe-OH、-CH2CONHNH-Ser-Asp-Gly-Arg-H、-CH2CONH-NH-Val-Asp-Gly-Arg-H或-CH2CONHNH-Phe-Asp-Gly-Arg-H；當R1和R2共同為羰基氧時，R3選自-CH2CO-Arg-Gly-Asp-Ser-OH、-CH2CO-Arg-Gly-Asp-Val-OH或-CH2CO-Arg-Gly-Asp-Phe-OH。
2.通式I化合物的制備方法，包括以下步驟 通式I當R3為H時，R1和R2一個為H，一個為-OCOCH2CH2CO-Arg-Gly-Asp-Ser-OH、CH2CO-Arg-Gly-Asp-Val-OH、-OCOCH2-CH2CO-Arg-Gly-Asp-Phe-OH、Ser-Asp-Gly-Arg-H、＝NNH-Val-Asp-Gly-Arg-H或＝NNH-Phe-Asp-Gly-Arg-H；當R1和R2一個為H，一個為OH時，R3選自-CH2CO-Arg-Gly-Asp-Ser-OH、-CH2CO-Arg-Gly-Asp-Val-OH、-CH2CO-Arg-Gly-Asp-Phe-OH、-CH2CONHNH-Ser-Asp-Gly-Arg-H、-CH2CONH-NH-Val-Asp-Gly-Arg-H或-CH2CONHNH-Phe-Asp-Gly-Arg-H；當R1和R2共同為羰基氧時，R3選自-CH2CO-Arg-Gly-Asp-Ser-OH、-CH2CO-Arg-Gly-Asp-Val-OH或-CH2CO-Arg-Gly-Asp-Phe-OH。將雌酮和雌二醇的3位或17位引入連接臂COCH2CH2CO、CH2CO或CH2CONH，然后把液相方法合成的Arg-Gly-Asp-Ser-OH、Arg-Gly-Asp-Val-OH或Arg-Gly-Asp-Phe-OH的保護中間體引入到連接臂上，再經脫保護即得。
3.通式I化合物在制備治療骨質疏松癥藥物中的用途。
全文摘要
本發明公開了一系列新的具有良好的抗骨質疏松活性的雌激素－RGD肽綴合物及其制備方法。本發明雌激素肽綴合物通過下述方法制備而成將雌酮或雌二醇的3位或17位引入連接臂，然后把液相方法合成的保護中間體引入到連接臂上，再經脫保護即得。動物模型試驗證實，本發明系列化合物的抗骨質疏松活性要優于雌二醇和雌酮且無明顯的副作用。
文檔編號A61K47/42GK1789278SQ20041009719
公開日2006年6月21日 申請日期2004年12月13日 優先權日2004年12月13日
發明者彭師奇, 王超, 趙明, 熊瑜 申請人:首都醫科大學