專利名稱：包括i.a.維生素c,鎂,綠茶提取物的延緩心血管疾病的藥物組合物的制作方法
技術領域：
本發明涉及緩解哺乳動物病理狀態的藥物組合物和方法。本發明提供了緩解哺乳動物病理狀態的藥物組合物，該藥物組合物包括賴氨酸，脯氨酸，精氨酸，維生素C，鎂，綠茶提取物，N-乙酰基-半胱氨酸，硒，銅，錳和一種選自載體，稀釋劑以及賦形劑所組成的組的藥學上可接受的成分，其中不含有可接受成分的藥物組合物含有7-9wt％的鎂，20-30wt％的抗壞血酸以及11-25wt％綠茶提取物。本發明還提供了使用該藥物組合物的治療方法。
本申請是2003年9月5日提交的美國申請號第10/657,019號的部分繼續申請，因此將其引入作為參考。
在西方國家和全世界心血管疾病是死亡的主要原因。不利的心血管事件多數由冠狀動脈和大腦動脈發生粥樣硬化病變引起。動脈平滑肌細胞的異常生長是發生動脈粥樣硬化的最重要的步驟之一。出于對病理性刺激的反應，平滑肌細胞首先從動脈壁的中層向內膜層移動，然后在內膜層增殖。這些事件在動脈粥樣硬化斑塊的最初形成中是至關重要的。在許多心血管疾病包括高血壓，動脈粥樣硬化，心肌缺血，梗塞和中風中在內膜層中發生粥樣硬化病變(R.Ross，CellularMechanisms of Atherosclerosis，Atherosclerosis Review，103，第25卷，195-200頁)。因此，需要預防使平滑肌細胞生長的病理性刺激。急性或慢性低水平的炎癥反應，均是使刺激和加速粥樣硬化病變的發生的惡化因素。作為動脈粥樣硬化過程的一部分，血管壁包括內皮組織會發生單核細胞浸潤。在動脈壁內存在的單核細胞會蓄積被氧化的脂質，結果過度負載脂質，變成泡沫細胞。泡沫細胞是粥樣硬化病變的主要特征之一。因此需要在動脈壁中減少或延緩這些泡沫細胞的形成，和單核細胞從血流到動脈壁的募集。出于對由動脈平滑肌細胞分泌的炎癥介質的發應，單核細胞附著于動脈壁。這些介質包括MCP-1。粘附分子例如P-選擇蛋白和ICAM-1的表達有利于單核細胞最初附著于動脈壁然后在動脈壁內滲透的過程。炎癥反應級聯還包括白細胞介素6(IL-6)和白細胞介素1(IL-1)的表達和分泌。這些介質具有至少兩種作用。它們觸發全身炎癥反應包括進一步的單核細胞的募集反應。另一個作用是該細胞因子能夠影響平滑肌細胞的自分泌反應，這意味著這些細胞能夠在惡性的病理細胞刺激循環中連續釋放這些炎癥介質。因此，還需要減少炎癥反應介質例如IL-1，IL-6，MCp-1和其它的表達和釋放。
因此，長期需要提供安全和有效的主要是緩解哺乳動物中使心血管異常，以及與慢性或低水平炎癥反應有關的病理性組分(pathological composition)的藥物組合物和方法。還需要治療動脈粥樣硬化和炎癥的化合物和物質，它們不具有副作用。還需要延緩動脈粥樣硬化，動脈硬化發生的化合物和物質，以及使用低成本的非藥物的物質和化合物而不是昂貴的藥物來延緩慢性和低水平的炎癥反應。
因此，本發明的主要技術問題可以看作是提供符合上述要求的手段和方法。特別地，本發明的一個目標是提供用于緩解哺乳動物病理狀態的藥物組合物。病理狀態包括動脈粥樣硬化和動脈硬化。
通過權利要求書和下文中描述的實施方案解決了上述技術問題，即治療了病理狀態。因此，本發明提供了治療病理狀態的藥物組合物和方法。
因此，本發明提供緩解哺乳動物病理狀態的藥物組合物，該藥物組合物包括賴氨酸，脯氨酸，精氨酸，維生素C，鎂，綠茶提取物，N-乙酰基-半胱氨酸，硒，銅，錳和一種選自載體，稀釋劑以及賦形劑組成的組的藥學上可接受的成分，其中不含有藥學上可接受成分的藥物組合物含有7-9wt％的鎂，20-30wt％的抗壞血酸以及11-25wt％綠茶提取物。
優選地，本發明涉及的哺乳動物是人，狗，貓或馬。更優選地，人是指經絕后的婦女。
本發明提供緩解哺乳動物中與動脈粥樣硬化，動脈硬化有關的病理狀態，以及與慢性或低水平炎癥反應有關的病理狀態的方法，包括給需要治療的哺乳動物施用有效量的藥物組合物的步驟，所述藥物組合物包括賴氨酸，脯氨酸，精氨酸，維生素C，鎂，綠茶提取物，N-乙酰基-半胱氨酸，硒，銅，錳和一種選自載體，稀釋劑以及賦形劑組成的組的藥學上可接受的成分，其中不含有藥學上可接受成分的藥物組合物含有7-9wt％的鎂，20-30wt％的抗壞血酸以及11-25wt％綠茶提取物。
本發明提供緩解哺乳動物中與動脈粥樣硬化，動脈硬化有關的病理狀態，以及與慢性或低水平炎癥反應有關的病理狀態的方法，包括給需要治療的哺乳動物施用有效量的藥物組合物的步驟，所述藥物組合物包括進一步的以下比例的化合物約25,000份賴氨酸，約15,000份脯氨酸，約8,000份精氨酸，約80,000份抗壞血酸，約30,000份鎂，約50,000份綠茶提取物，約15,000份的N-乙酰基-半胱氨酸，約5份硒，約50份銅，以及約200份錳，其中該藥物組合物含有7-9wt％的鎂，20-30wt％的抗壞血酸以及11-25wt％的綠茶提取物。應該理解本發明所指的份數不是絕對值。更確切地，它們用來限定其中物質存在的比例。例如，如果組合物包括12.5份賴氨酸和7.5份脯氨酸，則如本發明所提及，該組合物含有的賴氨酸和脯氨酸的比例為25,000份賴氨酸(12.5的2,000倍)和15,000份脯氨酸(7.5的2,000倍)。更優選地，如上所述施用的藥物組合物包括約25mg賴氨酸，約15mg脯氨酸，約8mg精氨酸，約80mg抗壞血酸，約30mg鎂，約50mg綠茶提取物，約15mgN-乙酰基-半胱氨酸，約5mcg硒，約50mcg銅，和約200mcg錳，其中該藥物組合物含有7-9wt％的鎂，20-30wt％的抗壞血酸以及11-25wt％的綠茶提取物。
本發明提供緩解哺乳動物中與動脈粥樣硬化，動脈硬化有關的病理狀態，以及延緩與慢性或低水平炎癥反應有關的病理狀態的方法，包括給需要治療的哺乳動物施用有效量的藥物組合物的步驟，所述藥物組合物包括賴氨酸，脯氨酸，精氨酸，維生素C，鎂，綠茶提取物，N-乙酰基-半胱氨酸，硒，銅，錳和一種選自載體，稀釋劑以及賦形劑組成的組的藥學上可接受的成分，其中該藥物組合物含有7-9wt％的鎂，20-30wt％的抗壞血酸以及11-25wt％綠茶提取物。
任選地，該組合物的有效量為約0.3mg/kg賴氨酸，0.2mg/kg脯氨酸，0.1mg/kg精氨酸，1.1mg/kg維生素C，0.4mg/kg鎂，0.7mg/kg綠茶提取物，以及0.2mg/kg N-乙酰基-半胱氨酸的日劑量。
優選地，該藥物組合物為口服或腸胃外形式。更優選地，口服形式為片劑或膠囊。優選地，可由口服，靜脈內或腸胃外施用藥物組合物。
本發明提供治療與慢性或低水平炎癥反應有關的病理狀態的組合物，其包括賴氨酸，脯氨酸，精氨酸，抗壞血酸，鎂，綠茶提取物，N-乙酰基-半胱氨酸，硒，銅，錳。
治療慢性或低水平炎癥反應的方法可以隨不同范圍的副反應在個體之間變化。但是這通常包括口服施用活性組合物，該組合物包括賴氨酸，脯氨酸，精氨酸，維生素C，鎂，綠茶提取物，N-乙酰基-半胱氨酸，硒，銅，錳和一種選自載體，稀釋劑，以及賦形劑組成的組的藥學上可接受的成分，其中不含有藥學上可接受成分的藥物組合物含有7-9wt％的鎂，20-30wt％的抗壞血酸以及11-25wt％的綠茶提取物。優選地，在單個藥丸中該組合物包括以下比例的下列化合物約25,000份賴氨酸，約15,000份脯氨酸，約8,000份精氨酸，約80,000份抗壞血酸，約30,000份鎂，約50,000份的綠茶提取物，約15,000份N-乙酰基-半胱氨酸，約5份硒，約50份銅以及約200份錳，其中該藥物組合物含有7-9wt％的鎂，20-30wt％的抗壞血酸以及11-25wt％的綠茶提取物。更優選地，單個藥丸包括約25mg賴氨酸，約15mg脯氨酸，約8mg精氨酸，約80mg抗壞血酸，約30mg鎂，約50mg綠茶提取物，約15mg N-乙酰基-半胱氨酸，約5mcg硒，約50mcg銅以及約200mc g錳，其中該藥物組合物含有7-9wt％的鎂，20-30wt％的抗壞血酸以及11-25wt％的綠茶提取物。
通過施用單個藥丸或膠囊，該組合物可遞送的劑量為約0.3mg/kg賴氨酸，0.2mg/kg脯氨酸，0.1mg/kg精氨酸，1.1mg/kg維生素C，0.4mg/kg鎂，0.7mg/kg綠茶提取物，和0.2mg/kgN-乙酰基-半胱氨酸。任選地每天重復施用藥丸或膠囊以有效延緩慢性或低水平的炎癥。
本發明的藥物組合物顯示可有效抑制平滑肌細胞的增殖。因此該組合物在諸如抗高血壓藥的應用中具有臨床意義。通過減少平滑肌細胞增殖，該組合物可用作血管擴張劑和減少末梢血管總阻力。此外，本發明的藥物組合物顯示了可抑制平滑肌增殖，平滑肌增殖是動脈粥樣硬化發生和發展的一個原因。在下面的體外試驗中本發明顯示了本發明組合物作為增殖抑制劑的藥力效果(通過摻入3H-脫氧胸腺嘧啶苷進行測定)。因此，該組合物可減少動脈粥樣硬化的發病。本發明的藥物組合物還可抑制平滑肌的移動，因此減少動脈粥樣硬化的發生和發展。在動脈粥樣硬化過程中，在形成新內膜的發病機制中中層的平滑肌細胞向內膜的趨化性移動是重要的第一步。PDGF被認為是促進平滑肌細胞移動的關鍵物質(Russel R.(1986)N.Engl.J.Med.314488-500)。因此本發明公開的組合物在體內抑制肌內膜形成的能力部分地與直接抑制血管平滑肌從中膜向內膜的物理遷移有關。因此，在另一個實施方案中，本發明提供包括賴氨酸，脯氨酸，精氨酸，抗壞血酸，鎂，綠茶提取物，N-乙酰基-半胱氨酸，硒，銅，錳和一種選自藥學上可接受的賦形劑的藥物組合物，該藥物組合物用于抑制哺乳動物，優選人的平滑肌細胞的增殖，特別用于抑制那些有發生心臟疾病危險的人的血管平滑肌細胞的增殖；該組合物可用于抑制動脈粥樣硬化的發生。在另一個實施方案中，本發明還提供一種治療方法，該方法用于抑制哺乳動物，優選人的平滑肌細胞的增殖和移動，尤其是用于預防那些有發生心臟疾病危險的人的血管平滑肌細胞的增殖的方法，該方法可用于抑制動脈粥樣硬化的發生；上述方法包括給需要該組合物的患者施用有效劑量的本發明公開的藥物組合物，該藥物組合物包括賴氨酸，脯氨酸，精氨酸，抗壞血酸，鎂，綠茶提取物，N-乙酰基-半胱氨酸，硒，銅，錳和一種藥學上可接受的賦形劑。本發明的藥物組合物顯示可有效抑制由許多種類的不同促細胞分裂劑所介導的血管平滑肌細胞的增殖和移動。
本發明的組合物可有效抑制雌激素誘導的平滑肌細胞增殖和侵襲。它們可調節血壓和動脈粥樣硬化(atheroscloerotic)斑塊的發生。各成分例如賴氨酸和脯氨酸的組合效果可以預防嚴重的結締組織降解，這又可減少增殖和侵襲過程。此外，綠茶提取物和維生素C由于它們的抗氧化特性也可以減弱結締組織的降解。已經令人驚奇地發現，在本發明組合物中存在的成分可協同對抗心血管降解和癌癥發生中雌激素的作用。有利地，提供一種安全和有效緩解哺乳動物上述病理性組分的藥物組合物和治療方法，其察覺不到與本發明化合物和物質有關的副反應。此外，本發明的藥物組合物和治療方法以及用途使用低成本的非藥物物質和化合物而不是昂貴的藥物。
當在這里使用時，術語“緩解”用來指減少，抑制，減弱或治療本發明涉及的病理狀態所具有的綜合癥。通過監測上述病理狀態所具有的癥狀，緩解對于臨床醫師而言是顯而易見的。在標準的教科書如Stedman或Pschyrembel中對上述癥狀有詳細記載。優選地緩解指顯著的減少，抑制，減弱或治療。顯著性可以通過常規的統計學方法例如Student氏t測驗，卡方檢驗及其他方法進行測定。優選地，本發明所涉及的綜合癥是經絕后接受雌激素治療的婦女通常具有的那些。“雌激素治療綜合癥”是公知的術語，在這里主要指在接受雌激素替代療法的婦女中存在的心血管和腫瘤問題包括高血壓，動脈粥樣硬化(atheroscloerosis)和乳癌。
術語“有效量”指能夠緩解本文所述各種病理狀態癥狀的本發明組合物的量。
術語“藥學可接受的”指必須與制劑中其它成分相容，對受者無毒的載體、稀釋劑和賦形劑。
″Wt％″指成分占組合物總重量的比例；例如25wt％的賴氨酸指組合物總重量的25％由賴氨酸組成。
術語″大約″指所涉及的值可在一定范圍變化。但是上述值必須足夠以達到本發明所涉及組合物的效果。通過常規的技術包括在附加的實施例中涉及的那些測定方法可測定給定的化合物的值能否達到這些效果。優選地，上述值在由本發明所涉及的統計學檢驗方法所計算的標準偏差范圍內變化。更優選地，上述值的變化是±20％，±15％，±10％，±5％，±2％，±1％或±0.5％。更優選地，術語“大約”指具體的值。
當在這里使用時，″賴氨酸″包括賴氨酸鹽，優選羥賴氨酸和羥賴氨酸鹽。典型地，以大約0.3mg/kg的日劑量施用L-賴氨酸。可以口服劑型一天一次，兩次或三次施用L-賴氨酸。對于體重為72kg的普通個體，推薦的每單一施用賴氨酸的總的量為約25毫克(mg)。
當在這里使用時，″脯氨酸″包括脯氨酸，脯氨酸鹽，羥脯氨酸和羥脯氨酸鹽。典型地，以大約0.2mg/kg的日劑量施用L-脯氨酸。可以口服劑型一天一次，兩次或三次施用L-脯氨酸。對于體重為72kg的普通個體，推薦的每單一施用脯氨酸的總的量為約15毫克(mg)。
當在這里使用時，″精氨酸″包括精氨酸和精氨酸鹽。典型地，以大約0.1mg/kg的日劑量施用L-精氨酸。可以口服劑型一天一次，兩次或三次施用L-精氨酸。對于體重為72kg的普通個體，推薦的每單一施用精氨酸的總的量為約8毫克。
當在這里使用時，″維生素C″包括抗壞血酸，抗壞血酸鹽及其衍生物。當在這里使用時，抗壞血酸和維生素C可互換，優選地包括抗壞血酸鈣，抗壞血酸鎂或抗壞血酸棕櫚酸鹽。典型地，以大約0.4mg/kg的日劑量施用抗壞血酸.可以口服劑型一天一次，兩次或三次施用抗壞血酸。對于體重為72kg的普通個體，推薦的每單一施用精氨酸的總的量為約80毫克。在本申請中所請求保護的不同化合物可以共價鍵合的化合物的形式或作為物理混合物或以任何其它組合的形式一起使用。
本發明提供了包括抗壞血酸化合物，脯氨酸，賴氨酸或其任意組合的藥物組合物。因此本發明不限于抗壞血酸，脯氨酸或賴氨酸，而包括任何可使用的與本發明優選的用途一致的等價結構。
當在這里使用時，″綠茶提取物″指在綠茶中存在的多酚化合物。在綠茶中存在的多酚化合物可達30％干重。它們包括黃烷醇，黃烷雙醇，類黃酮，以及酚酸。黃烷醇是綠茶中最豐富的多酚，就是通常已知的兒茶素。綠茶提取物中主要的兒茶素包括1)(-)-表兒茶素，2)(-)-表兒茶素-3-沒食子酸酯，3)(-)-表沒食子兒茶素，和4)(-)-表沒食子兒茶素-3-沒食子酸酯(EGCG)。在這些兒茶素中，EGCG是在綠茶中存在的主要多酚成分。當在這里使用時，綠茶提取物含有約80％重量的多酚并且不含有咖啡因。
可以大約0.7mg/kg的日劑量施用綠茶提取物。可以口服劑型一天一次，兩次或三次施用綠茶提取物。對于平均體重為72kg的個體，推薦的每日施用綠茶提取物的總的量為約50毫克。
當在這里使用時，″N-乙酰基-半胱氨酸″包括半胱氨酸或胱氨酸(半胱氨酸的二聚體)以及半胱氨酸的鹽。可以大約0.2mg/kg的日劑量施用N-乙酰基-半胱氨酸。可以口服劑型一天一次，兩次或三次施用N-乙酰基-半胱氨酸。對于平均體重為72kg的個體，推薦的每單一施用N-乙酰基-半胱氨酸的總的量為約15毫克。
本發明進一步提供礦物質和/或微量元素。微量元素有助于催化產生結締組織所需的這些大分子。本發明優選的微量元素是鐵，銅，鋅，錳，鈷，鉬，硒，鉻，鎳，錫，氟或釩。
可以大約0.7mg/kg的日劑量施用鎂。可以口服劑型一天一次，兩次或三次施用鎂。對于平均體重為72kg的個體，推薦的每單一施用鎂的總的量為約30毫克。
可以大約0.00007mg/kg的日劑量施用硒。可以口服劑型一天一次，兩次或三次施用硒。對于平均體重為72kg的個體，推薦的每單一施用硒的總的量為約5mcg。
可以大約0.0007mg/kg的日劑量施用銅。可以口服劑型一天一次，兩次或三次施用銅。對于平均體重為72kg的個體，推薦的每單一施用銅的總的量為約50mcg。
可以大約0.04mg/kg的日劑量施用錳。可以口服劑型一天一次，兩次或三次施用錳。對于平均體重為72kg的個體，推薦的每單一施用錳的總的量為約200mcg。
根據本發明，組合物中某些組分的存在量很高。與組合物總重量相比，維生素C的存在量為20-30wt％(與不包括載體，賦形劑，填充劑，添加劑等的組合物總重量相比)。綠茶提取物的存在量為11-25wt％(與組合物總重量相比)，鎂的存在量為7-9％(與組合物總重量相比)。
組合物任選地包括一種或多種以下物質維生素A，維生素D3，維生素E，維生素B1，維生素B2，煙酸，維生素B6，葉酸，維生素B12，生物素，泛酸，鈣，磷，鋅，鉻，鉬，Pottasium，柑橘生物類黃酮，肌醇，L-卡尼汀，輔酶Q10，氨基葡萄糖，牛磺酸和硫酸軟骨素。優選地上述組合物包括下列比例的物質191IU(國際單位)的維生素A，20IU的維生素D3，10IU的維生素E，1,500份維生素B1，1,500份維生素B2，10,000份煙酸，1,500份維生素B6，75份葉酸，3.3份維生素B12，10份生物素，5,000份泛酸，15,000份鈣，2,500份磷，2,500份鋅，5份鉻，0.5份鉬，5,000份Pottasium，15,000份柑橘生物類黃酮，5,000份肌醇，5,000份L-卡尼汀，2,500份輔酶Q10，25,000份氨基葡萄糖(N-乙酰基-D-氨基葡糖)，50,000份牛磺酸，和15,000硫酸軟骨素。更優選地，這些物質任選地為大約下述量191IU(國際單位)維生素A，20IU維生素D3，10IU維生素E，1.5mg維生素B1，1.5mg維生素B2，10mg煙酸，1.5mg維生素B6，75mcg葉酸，3.3mcg維生素B12，10mcg生物素，5mg泛酸，15mg鈣，2.5mg磷，2.5mg鋅，5mcg鉻，0.5mcg鉬，5mgPottasium，15mg柑橘生物類黃酮，5mg肌醇，5mg L-卡尼汀，2.5mg輔酶Q10，25mg氨基葡萄糖(N-乙酰基-D-氨基葡糖)，50mg牛磺酸和15mg硫酸軟骨素。
本發明的組合物可用于治療或抑制特點為過度平滑肌細胞增殖(平滑肌細胞過度增殖)的心血管疾病。由臨床醫師使用常規技術能夠確定一種疾病的特點是否為過度平滑肌細胞增殖。這樣的常規技術包括基于體內抗體的技術，活組織檢查后的組織學的組織樣品分析或組織樣品的流式細胞計量術。該組合物特別適合用于治療經常由平滑肌細胞過度增殖引起的高血壓和動脈粥樣硬化。動脈粥樣硬化與膽固醇代謝有關。已知弱化的結締組織可促進動脈壁中斑塊的形成。因此本發明提供了有效量的抗壞血酸化合物，賴氨酸和脯氨酸以增強結締組織。已知抗壞血酸可刺激由成纖維細胞和相關細胞合成膠原，彈性蛋白以及其它結締組織大分子。氨基酸賴氨酸和脯氨酸是合成結締組織分子所需的主要氨基酸。
所需劑量根據施用途徑，存在的癥狀的嚴重程度以及特定的治療對象而變。通過口服施用推薦的日劑量的組合物。推薦的日劑量為約0.3mg/kg賴氨酸，0.2mg/kg脯氨酸，0.1mg/kg精氨酸，1.1mg/kg維生素C，0.4mg/kg鎂，0.7mg/kg綠茶提取物以及0.2mg/kg N-乙酰基-半胱氨酸。任選每天重復施用藥丸或膠囊以有效延緩慢性或低水平的炎癥。
本發明的組合物可通過不同途徑施用包括，但不限于口服，靜脈內或經腸胃外施用。口服，靜脈內或經腸胃外施用的準確劑量可以變化，這基于經驗和受治療的單個患者而確定。優選地，藥物組合物為單元劑型如片劑或膠囊。在這樣的劑型中可將組合物分成含有適宜數量活性成分的單位劑量；單位劑型可以是包裝的組合物，例如包裝的粉末，小瓶或安瓿。單位劑型本身可以是例如膠囊，藥丸或片劑或其可以是包裝形式的適宜數目的任何這樣的組合物。
本發明的另一個方面是提供有效量的組合物和藥學上可接受的載體，稀釋劑或賦形劑。
本發明的另一個方面是提供包括賴氨酸，脯氨酸，精氨酸，抗壞血酸，鎂，綠茶提取物，N-乙酰基-半胱氨酸，硒，銅和錳的藥物組合物。
可通過本領域已知的方法，使用眾所周知的和易購的成分制備本發明的藥物制劑。例如，可將本發明組合物的成分和通常的賦形劑，稀釋劑或載體一起配制形成片劑，膠囊，混懸液，粉末等。適合這樣的制劑的賦形劑，稀釋劑以及載體的的實例包括下列物質填充劑和增量劑例如淀粉，糖，甘露醇以及硅衍生物；粘合劑例如羧甲基纖維素和其它纖維素衍生物，藻酸鹽，明膠，聚乙烯吡咯烷酮；潤濕劑例如甘油；崩解劑例如碳酸鈣和碳酸氫鈉；延緩溶解的試劑例如石蠟；重吸收促進劑例如季胺類化合物；表面活性劑例如鯨蠟醇和單硬脂酸甘油酯；吸附載體例如高嶺土和膨潤土；以及潤滑劑例如滑石粉，硬脂酸鈣和硬脂酸鎂以及固體聚乙二醇。
可將本發明的治療化合物配制成可使其使用最佳化或便于其使用的藥物組合物。特別地，藥物組合物含有治療動脈粥樣硬化，動脈硬化，以及延緩慢性或低水平炎癥反應的有效量。這樣的藥物組合物經常含有藥學上可接受的載體或稀釋劑，以及如果適合，含有賦形劑。
還可將該組合物配制成便于口服施用的酏劑或溶液，或適合腸胃外施用，例如通過肌內、皮下或靜脈內途徑施用的溶液。理想的制劑形式是丸劑，片劑，膠囊，錠劑，液體或類似的劑型。該組合物很適合配制成持續釋放劑型，諸如此類。可以這樣配制該制劑以使它們只釋放活性成分或優選地可在一段時間內在特定的生理部位釋放活性成分。可由例如聚合物質或蠟制備包衣，外殼或保護基質。
可通過本領域已知的方法，使用眾所周知的和易購的成分制備本發明的藥物制劑。例如，可將含有或不含有雌激素或孕激素化合物的配方I的化合物和通常的賦形劑，稀釋劑或載體一起配制形成片劑，膠囊，混懸液，粉末等。適合這樣的制劑的賦形劑，稀釋劑以及載體的的實例包括下列物質填充劑和增量劑例如淀粉，糖，甘露醇以及硅衍生物；粘合劑例如羧甲基纖維素和其它纖維素衍生物，藻酸鹽，明膠，聚乙烯吡咯烷酮；潤濕劑例如甘油；崩解劑例如碳酸鈣和碳酸氫鈉；延緩溶解的試劑例如石蠟；重吸收促進劑例如季胺類化合物；表面活性劑例如鯨蠟醇，單硬脂酸甘油酯；吸附載體例如高嶺土和膨潤土；以及潤滑劑例如滑石粉，硬脂酸鈣和硬脂酸鎂以及固體聚乙二醇。
還可將該混合物配制成便于口服施用的酏劑或溶液，或適合腸胃外施用，例如通過肌內、皮下或靜脈內途徑施用的溶液。另外，該混合物很適合配制成持續釋放劑型，諸如此類。可以這樣配制該制劑以使它們只釋放活性成分或優選地可在一段時間內在特定的生理部位釋放活性成分。可由例如聚合物質或蠟制備包衣，外殼或保護基質。
除非另外定義，這里使用的所有科學術語具有與本領域普通技術人員的通常理解相同的含義。下文描述了示例性的方法和材料，可以使用它們的等價物。這里提及的所有出版物和參考文獻均完整引入作為參考。
附圖表示
圖1表示與相同濃度的EGCG相比XR296對抑制平滑肌細胞生長的影響。在人平滑肌細胞中摻入的[3H]脫氧胸腺嘧啶苷是de novo DNA合成和細胞生長的指示物。以對照組值(100％)的百分數表示摻入的脫氧胸腺嘧啶苷。
圖2表示與相同濃度的抗壞血酸相比XR296對抑制平滑肌細胞生長的影響。在人平滑肌細胞中摻入的[3H]脫氧胸腺嘧啶苷是de novoDNA合成和細胞生長的指示物。以對照組值(100％)的百分數表示摻入的脫氧胸腺嘧啶苷。
圖3表示本發明組合物(XR296)(100mcg/ml)和某些單個組分以XR296中存在的濃度對TNFα刺激的平滑肌細胞分泌IL-6的影響的比較圖。
圖4表示本發明組合物(XR296)(20mcg/ml)和其某些單個組分以相當于在4倍該濃度(80mcg/ml)的XR296中存在的濃度對脂多糖誘導的平滑肌細胞分泌IL-1β的影響的比較圖。
圖5表示本發明組合物(XR296)(20mcg/ml)和該組合物的某些單個組分以相當于在160mcg/ml的XR296中的濃度對10ng/ml TNFα刺激的平滑肌細胞分泌MCP-1的影響的比較圖。
圖6表示本發明組合物(XR296)(2.2mcg/ml，6.7mcg/ml，和20mcg/ml)和其某些單個組分以相當于在4倍該濃度(80mcg/ml)的XR296中存在的濃度對脂多糖誘導平滑肌細胞分泌P-選擇蛋白的影響的比較圖。
圖7表示本發明組合物(XR296)(20mcg/ml)和該組合物的某些單個組分以相當于在160mcg/ml的XR296中的濃度對10ng/ml TNFα刺激的平滑肌細胞分泌ICAM-1的影響的比較圖。
提供以下實施例以進一步解釋本發明。這并不意味著通過以下任何一個實施例限制本發明的范圍。應該理解公開的優選實施方案不是用于限制本發明，而是說其包括的所有改進和可供替代的組成均在本發明的精神和范圍內。
實施例試驗原理和方案平滑肌細胞生長速率測定原理如上所述，平滑肌細胞的過度生長速率與加速的動脈粥樣硬化過程直接相關。根據在培養期間摻入細胞DNA的氚標記的代謝前體的量來對de novo DNA合成(即摻入[3H]胸腺嘧啶脫氧核苷)進行估算以估計培養細胞的生長速率。
以平滑肌細胞增殖為標志的心血管疾病進程出于對病理性刺激的反應，平滑肌細胞首選從動脈壁的中層向內膜層移動，然后在內膜層增殖。這些事件在動脈粥樣硬化斑塊的最初形成中是至關重要的。在許多心血管疾病包括高血壓，動脈粥樣硬化，心肌缺血，梗塞和中風中在內膜層中發生粥樣硬化病變(R.Ross，Cellular Mechanisms of Atherosclerosis，Atherosclerosis Review，103，第25卷，195-200頁)。本發明的組合物用于抑制平滑肌細胞的侵襲和增殖，由此延緩動脈粥樣硬化和動脈硬化進程。
在以下試驗中使用的“組合物”指含有特定量的以下特定成分的組合物賴氨酸1克，脯氨酸750mg，精氨酸500mg，抗壞血酸710mg，鎂50mg，綠茶提取物1克，N-乙酰基-半胱氨酸200mg，硒30mcg，銅2mg，錳1mg。首先將含有上述組合物的膠囊用培養基質溶解，在使用前稀釋至適宜濃度。
圖1所示數據表示對平滑肌細胞的體外實驗。如圖1中所示，表示與相同濃度的EGCG相比XR296對抑制平滑肌細胞生長的影響。在人平滑肌細胞中摻入的[3H]脫氧胸腺嘧啶苷是de novo DNA合成和細胞生長的指示物。圖2表示與相同濃度的抗壞血酸相比XR296對抑制平滑肌細胞生長的影響。在人平滑肌細胞中摻入的[3H]脫氧胸腺嘧啶苷是de novo DNA合成和細胞生長的指示物。以對照組值(100％)的百分數表示摻入的脫氧胸腺嘧啶苷。
平滑肌細胞細胞生長速率測定人主動脈平滑肌細胞(SMC)的細胞培養由Clonetics獲得。在37℃含有5％CO2的潮濕氣氛中將SMC在添加100單位/ml的青霉素，0.1mg/ml鏈霉素(此后是DMEM)和10％FBS(v/v)的Dulbecco′s改良Eagle培養基中培養，當達到融合時，將其分成1∶3至1∶5。在試驗中使用5-8代的SMC。
通過向細胞遺傳物質中摻入[3H]-脫氧胸腺嘧啶苷測定SMC增殖。在添加2％FBS的0.5ml DMEM中以每cm210,000個細胞的濃度將細胞接種于24孔板。如試驗方案所述，每24小時給附著的細胞提供新鮮的生長介質和添加劑。每天在加入到細胞培養以前通過用DMEM溶解到10mg/ml，劇烈渦旋1分鐘，通過0.2μm無菌過濾器過濾直接制備XR296儲備液。3天后通過在試驗的最后24小時向細胞培養中加入1μCi/ml的[3H]脫氧胸腺嘧啶苷測定細胞增殖。用冷的pH7.2的磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)洗滌細胞三次，然后在4℃用10％三氯醋酸培養15分鐘，用冷乙醇洗滌，風干，用0.5N氫氧化鈉溶解，然后用鹽酸中和。將樣品和閃爍液混合，使用液體閃爍計數器(型號6500LS，BeckmanInstruments，USA)計數。以每孔d/min表示摻入細胞DNA的放射活性。
以平滑肌細胞中細胞因子表達為標志的自分泌炎癥反應原理細胞因子的表達和其涉及的炎癥反應是已知的。最近人們公認在心血管疾病中出現的血管和平滑肌病狀是動脈粥樣硬化和高血壓期間的炎癥反應之一。白介素-6是觸發炎癥過程的關鍵細胞因子之一。在病理性刺激下平滑肌細胞中的白介素-6的過度表達可能進一步加重炎癥性病變。本發明的組合物用于抑制平滑肌細胞中細胞因子(特別是白介素-6)的過度產生。通過抑制平滑肌細胞中白介素-6的表達，本發明組合物可用作治療動脈粥樣硬化的藥物，延緩低水平慢性炎癥和炎癥反應的影響。
如圖3所示，雖然某些成分如抗壞血酸，N-乙酰基半胱氨酸，綠茶提取物，氨基酸如脯氨酸，賴氨酸和精氨酸以比本發明組合物XR296其它成分相對較大的量存在，但實際上鎂，錳，銅和硒的存在提供了額外的有益效果。因此，所有成分包括礦物質的存在可提供協同效果，而由其它成分單獨或彼此組合但不含有鎂，硒，錳和銅則無法提供協同效果。
細胞因子表達測定細胞因子(IL-6，IL-1β，MCP-1，P-選擇蛋白和ICAM-1)的產生的水平是炎癥反應刺激的標志。另外，這些細胞因子的產生刺激炎癥反應的不同階段。例如IL-6和IL-1β是基礎炎癥反應的介質，MCP-1是吸引單核細胞從血流到動脈壁的化學引誘物，P-選擇蛋白和ICAM-1介導白細胞附著于動脈壁細胞(內皮和平滑肌細胞)。
細胞培養塑料器皿由Costar提供，細胞介質組分由GIBCO提供。其它試劑購自Sigma。在37℃和5％CO2中將人主動脈平滑肌細胞(SMC；Clonetics)在添加青霉素/鏈霉素和10％胎牛血清(FBS)的DMEM中培養，試驗使用第5-8代的細胞。對于細胞因子表達試驗，以每孔50,000個細胞將SMC接種于24孔板，生長至匯合。用0.5ml不含有血清的添加0.1％牛血清蛋白和指定量的營養混合物的DMEM替換細胞培養介質。24小時后，用新鮮的含有相同數量的營養混合物和刺激物，10ng/mL腫瘤壞死因子α(TNFα)或0.1mg/mL細菌脂多糖(LPS)或不含刺激物作為對照的新鮮DMEM/BSA介質替換培養介質。在24小時中，收集培養調理介質(incubation conditioned media)，分別在-80℃冷凍以用于細胞因子測定。在37℃用磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)洗滌細胞層和用0.1NNaOH溶解2小時后，通過BCA蛋白微量法(Pearce)測定細胞蛋白。每孔細胞蛋白的含量與在任何使用的試驗條件的未添加樣品的對照沒有顯著性差異表明未消弱細胞生存力。根據制造商的試驗方案使用ELISA試劑盒(Quantikine，R&D系統)測定培養調理介質中的細胞因子水平。所有試驗測定至少兩次，設三復孔。代表性試驗的結果以試驗樣品中平均細胞因子濃度(+/-SD)的形式提供。
如圖3所示，比較了本發明組合物(XR296)(100mcg/ml)和某些單個組分以XR296存在的濃度對TNFα刺激的平滑肌細胞分泌IL-6的影響。
圖4表示本發明組合物(XR296)(20mcg/ml)和某些單個組分以相當于在4倍該濃度(80mcg/ml)的XR296中存在的濃度對脂多糖誘導的平滑肌細胞分泌IL-1β的影響的比較圖。
圖5表示本發明組合物(XR296)(20mcg/ml)和該組合物的某些單個組分以相當于在160mcg/ml的XR296中的濃度對10ng/ml TNFα刺激的平滑肌細胞分泌MCP-1的影響的比較圖。
圖6表示本發明組合物(XR296)(2.2mcg/ml，6.7mcg/ml，和20mcg/ml)和某些單個組分以相當于在4倍該濃度(80mcg/ml)的XR296中存在的濃度對脂多糖誘導平滑肌細胞分泌P-選擇蛋白的影響的比較圖。
圖7表示本發明組合物(XR296)(20mcg/ml)和該組合物的某些單個組分以相當于在160mcg/ml的XR296中的濃度對10ng/ml TNFα刺激的平滑肌細胞分泌ICAM-1的影響的比較圖。
權利要求
1.一種藥物組合物，包括賴氨酸、脯氨酸、精氨酸、維生素C、鎂、綠茶提取物、N-乙酰基-半胱氨酸、硒、銅、錳和一種選自載體、稀釋劑以及賦形劑組成的組的藥學上可接受的成分，其中不含所述可接受成分的該藥物組合物含有7-9wt％的鎂，20-30wt％的抗壞血酸以及11-25wt％綠茶提取物。
2.一種組合物在制備用于緩解或延緩其特點為過度平滑肌細胞增殖(平滑肌細胞過度增殖)的心血管疾病的藥物組合物中的用途，該組合物包括賴氨酸，脯氨酸，精氨酸，維生素C，鎂，綠茶提取物，N-乙酰基-半胱氨酸，硒，銅，錳和一種選自載體，稀釋劑以及賦形劑組成的組的藥學上可接受的成分，其中不含所述可接受成分的該藥物組合物含有7-9wt％的鎂，20-30wt％的抗壞血酸以及11-25wt％綠茶提取物。
3.根據權利要求2的用途，其中上述疾病為動脈硬化或動脈粥樣硬化。
4.一種組合物在制備用于緩解或延緩炎癥反應的藥物組合物中的用途，該組合物包括賴氨酸，脯氨酸，精氨酸，維生素C，鎂，綠茶提取物，N-乙酰基-半胱氨酸，硒，銅，錳和一種選自載體，稀釋劑以及賦形劑組成的組的藥學上可接受的成分，其中不含所述可接受成分的該藥物組合物含有7-9wt％的鎂，20-30wt％的抗壞血酸以及11-25wt％綠茶提取物。
5.權利要求2至4任一項的用途，其中該藥物組合物可經口服、靜脈內或腸胃外施用。
6.權利要求1的藥物組合物或權利要求2至5任一項的用途，其中該組合物以如下比例提供下述化合物，約25,000份賴氨酸，約15,000份脯氨酸，約8,000份精氨酸，約80,000份抗壞血酸，約30,000份鎂，約50,000份綠茶提取物，約15,000份的N-乙酰基-半胱氨酸，約5份硒，約50份銅，以及約200份錳。
7.權利要求1的藥物組合物或權利要求2至5任一項的用途，其中該組合物提供的劑量為約25mg賴氨酸，約15mg脯氨酸，約8mg精氨酸，約80mg抗壞血酸，約30mg鎂，約50mg綠茶提取物，約15mgN-乙酰基-半胱氨酸，約5mcg硒，約50mcg銅，和約200mcg錳。
8.權利要求1的藥物組合物或權利要求2至5任一項的用途，或權利要求6的藥物組合物或用途，其中所述組合物提供的日劑量為約0.3mg/kg賴氨酸，0.2mg/kg脯氨酸，0.1mg/kg精氨酸，1.1mg/kg維生素C，0.4mg/kg鎂，0.7mg/kg綠茶提取物，以及0.2mg/kg N-乙酰基-半胱氨酸。
9.權利要求1的藥物組合物或權利要求2至5任一項的用途，或權利要求6或7的藥物組合物或用途，其中所述組合物進一步含有一種或多種的以下物質維生素A，維生素D3，維生素E，維生素B1，維生素B2，煙酸，維生素B6，葉酸，維生素B12，生物素，泛酸，鈣，磷，鋅，鉻，鉬，Pottasium，柑橘生物類黃酮，肌醇，L-卡尼汀，輔酶Q10，氨基葡萄糖，牛磺酸和硫酸軟骨素。
10.權利要求8的藥物組合物或用途，其中所述組合物包括以下比例的所述物質191IU(國際單位)的維生素A，20IU的維生素D3，10IU的維生素E，1,500份維生素B1，1,500份維生素B2，10,000份煙酸，1,500份維生素B6，75份葉酸，3.3份維生素B12，10份生物素，5,000份泛酸，15,000份鈣，2,500份磷，2,500份鋅，5份鉻，0.5份鉬，5,000份Pottasium，15,000份柑橘生物類黃酮，5,000份肌醇，5,000份L-卡尼汀，2,500份輔酶Q10，25,000份氨基葡萄糖(N-乙酰基-D-氨基葡糖)，50,000份牛磺酸，和15,000硫酸軟骨素。
11.權利要求8的藥物組合物或用途，其中該組合物包括以下比例的下述物質約191IU維生素A，約20IU維生素D3，約10IU維生素E，約1.5mg維生素B1，約1.5mg維生素B2，約10mg煙酸，約1.5mg維生素B6，約75mcg葉酸，約3.3mcg維生素B12，約10mcg生物素，約5mg泛酸，約15mg鈣，約2.5mg磷，約2.5mg鋅，約5mcg鉻，約0.5mcg鉬，約5mg Pottasium，約15mg柑橘生物類黃酮，約5mg肌醇，約5mgL-卡尼汀，約2.5mg輔酶Q10，約25mg氨基葡萄糖(N-乙酰基-D-氨基葡糖)，約50mg牛磺酸和/或約15mg硫酸軟骨素。
12.權利要求1的藥物組合物，權利要求2至5任一項的用途，或權利要求6至9的藥物組合物或用途，其中該藥物組合物是口服形式。
13.權利要求10的組合物或用途，其中該口服形式為片劑，丸劑或膠囊。
14.權利要求1的藥物組合物，權利要求2至5任一項的用途，或權利要求6至9中任一項的藥物組合物或用途，其中該藥物組合物為腸胃外形式。
全文摘要
本發明提供一種藥物組合物，其包括賴氨酸、脯氨酸、精氨酸、維生素C、鎂、綠茶提取物、N－乙酰基－半胱氨酸、硒、銅、錳和一種選自載體、稀釋劑以及賦形劑組成的組的藥學上可接受的成分，其中不含有可接受成分的藥物組合物含有7－9wt％的鎂，20－30wt％的抗壞血酸以及11－ 25wt％綠茶提取物。還公開了使用該藥物組合物治療心血管疾病的方法，更優選用于治療經絕后的婦女。
文檔編號A61K31/401GK1845729SQ200480025258
公開日2006年10月11日 申請日期2004年8月18日 優先權日2003年9月5日
發明者馬賽厄斯·拉思, 阿萊克桑德拉·尼德茲維奇, 瓦迪姆·伊瓦諾夫, 瓦西德·魯米 申請人:馬賽厄斯·拉思