一種從茶多酚提取物提取高純度egcg的制備方法
【專利摘要】本發明從低含量茶多酚粗提物提取一種高純度EGCG的制備工藝，解決已有制備工藝污染高，成本高，收率低，工藝繁瑣的問題。包括如下步驟：(1)粗提物處理：取茶多酚粗提物（EGCG含量重百分比20%-60%），用其重量5-8倍的10%乙醇水溶液溶解，有不溶物則過濾。(2)聚酰胺柱層析：樣品上樣量為5-8：1，用梯度乙醇水溶液洗脫，洗脫液PH值均以冰醋酸調節至PH4-5。分步收集，濃縮備用。(3)自制MCC柱層析：以步驟(2)下的洗脫液濃縮物為原料，以2-3倍體積水稀釋，以柱體積20-30:1上樣，洗脫液為8%乙醇水溶液（以冰醋酸調節PH值至4-5），分步收集EGCG重量百分比含量為95-98%及98%以上的溶液。(4)濃縮干燥：對各段產品濃縮干燥，冷凍保存。
【專利說明】一種從茶多酚提取物提取高純度[(30(3的制備方法
【技術領域】
[0001]本發明與藥品、健康食品、食品、飲料、化妝品的原料及其添加劑生產工藝有關。
【背景技術】
[0002]郎⑶是表沒食子兒茶素沒食子酸酯的簡稱，是從茶葉中分離得到的兒茶素類單體，是茶多酚生物活性的主要成份，其分子式為￠221118011( (2? 3^-5，辦0x7-2-(3,4，—3，4—(11117己!'0—211—0111X1111611—3—71 3, 4，5—1:11117己!'0X7)36112081:6 ), ^茶樹中主要的活性和水溶性成份，占綠茶毛重的9%-13%。因郎⑶具有非常強的抗氧化活性，在食品工業上用于抗氧化、保鮮、祛臭，醫藥工業上用于抗菌、抗癌、抗衰老，日化產品上作特殊功能添加劑。
[0003]目前，茶葉消費日趨高檔化，而中、低檔茶受消費人群影響常滯銷、積壓，制約著茶葉產業的發展。與此同時，在茶葉生產及加工過程中還有大量修剪枝葉及加工副產品，這些產品多作為廢棄物而未加以充分利用。從老茶葉及茶樹修剪枝葉中提取高純度郎⑶不僅能解決傳統廢棄茶資源的問題，而且可以從低廉原料中獲得價值極高的食品及醫藥原料。
[0004]國內外對于郎⑶提取分離方法的研究中，大多只局限于茶多酚的提取，由于茶多酚中除了郎⑶外，還含有一定含量的其他物質，因此提取出的郎⑶純度不高.因此，有一些研究人員開始了對單組分郎⑶的提取。目前大多數人都選擇單一的傳統硅膠柱層析來制取高含量產物，這樣就導致了提取物的純度偏低、試劑復雜、污染較大、工藝重復繁瑣等缺陷；或者是利用高效逆流色譜技術、分子印跡聚合物的制備等先進設備簡單卻高成本的制得，達不到工業生產的要求。隨著工業原料例如苯乙烯聚合物填料、聚酰胺填料等的工業化生產技術的改進和成本的降低，在傳統生產工藝上引入新型調料，研發一套更為低廉、環保、高效、適宜工業化生產的郎⑶生產工藝極為必要。
【發明內容】
[0005]本發明的目的是提供一種生產成本低、工藝簡單、無污染、收率高、純度高、可循環使用、適合工業化生產的高純度郎⑶的制備工藝。
[0006]本發明一種高純度郎⑶的制備工藝，包括如下步驟:
(1)粗提物處理:取茶多酚粗提物含量重百分比20%-6090，用其重量5-8倍的10%乙醇水溶液溶解，有不溶物則過濾。
[0007](2)聚酰胺柱層析:所溶樣品以柱體積5-8:1上樣，用乙醇水溶液梯度洗脫，洗脫液四值均以冰醋酸調節至四4-5。洗脫液分別為水(2-387),30%乙醇(4-587),40%乙醇(5-887).分步收集，合并無郎⑶臨近雜質的洗脫液，濃縮備用。
[0008](3)1(^柱層析:以步驟⑵下的洗脫液濃縮物為原料，以2-3倍體積水稀釋，以柱體積20-30:1上樣，洗脫液為8%乙醇水溶液(以冰醋酸調節值至4-5),分步收集郎⑶重量百分比含量為95-98%及98%以上的溶液。
[0009](4)濃縮干燥:對各段產品濃縮干燥，冷凍保存。
[0010]步驟(1)中茶多酚粗提物原料為含量20-60%的茶葉下腳料提取物；所有步驟中所述溶液均為工業乙醇水溶液。
[0011]步驟(1)中茶多酚粗提物原料中若包含咖啡因、￡(?等雜質，步驟(2)水洗階段可收集重量百分比含量85%以上的咖啡因副產物，步驟(3)中可收集到重量百分比含量80%以上的￡(?等副產物。
[0012]步驟⑶中所述自制層析材料的制備方法:以采用懸浮聚合法在優化合成條件下合成的新型聚合物樹脂，其中V (苯乙烯):V (二乙烯苯)=8-10: 1，水相分散液為2.5%聚乙烯醇及5%池的水溶液，有機相中20%甲苯為致孔劑，5%過氧化苯甲酰為引發齊0，V (水相):7 (有機相)=4:1混合，反應溫度80 (土丨)1、反應時間10-12匕所得聚合物粒徑為 100-12011111。
[0013]步驟(2) (3)所用層析材料分別為聚酰胺(80-100目 ?、自制IX，其預處理以洗脫液淋洗1-287，實驗完畢尾處理以工業乙醇清洗2-387即可再生使用。
[0014]步驟(3)中濃縮干燥方法為噴霧干燥。
[0015]步驟(2) (3)中雜質較多的洗脫液濃縮干燥后作為原材料進入下次循環，所有步驟中乙醇廢液經統一回收后循環使用。
[0016]本發明除使用冰醋酸調節各步驟所需四值外，整個工藝只使用工業乙醇一種有機溶劑，溶劑安全且更易回收循環使用，減少成本和污染。
[0017]80-100目的聚酰胺材料吸附適中，載量大，具有對多酚類化合物的優良分離性能，反相分離性能強，可有效去除郎⑶大部分雜質。
[0018]自制1(1:穩定性高，載量大，分離度高，二次柱層析對步驟(2)難以去除完全的雜質進行了分離，使郎⑶的重量百分比可達98%以上，且收率有了較大提高。
[0019]聚酰胺層析材料和自制1(1:層析材料均可再生重復利用，以工業乙醇淋洗2-3倍柱體即可使(2) (3)層析材料再生循環使用。
[0020]整個工藝所用工業乙醇經收集后統一回收，循環使用。
[0021]用測定上述所得產品的郎⑶含量，最高可達99%以上。
[0022]本發明中郎⑶含量測定方法為測定(按外標法測定)。
[0023]色譜條件為:流動相:甲醇:0.1 %磷酸=30:70 ；
色譜柱:依利特 ￠18 (4.6 X 250111111)；
柱溫:30。〇；
流速:1.01111 / 111111 ；
測定波長:27911111, 10111進樣。
[0024]本發明與現有技術相比具有如下優點:
(1)本發明精制工藝簡單，收率高，以反相層析克服了含雜質郎⑶冷凍狀態下亦難結晶的問題。根據不同用途對純度的要求，按郎⑶重量百分比計，純度可達95%?99%，收率可達85%以上，其中99%以上產品得率達70-80%。
[0025](2)本發明茶多酚粗提物原料中若包含咖啡因、￡(?等雜質，工藝中可收集重量百分比含量85%以上的咖啡因及重量百分比含量80%以上的￡(?等副產物。
[0026](3)本發明選擇工藝充分考慮郎⑶化學特性和溶解性，全反相層析，所有溶解過程均可使用乙醇水溶液溶解，避免了原料不可溶或者層析上樣前處理繁瑣的問題。
[0027](4)本發明使用溶劑單一，工業乙醇極易回收循環，價格低廉，安全無毒，對環境無污染。
[0028](5)本發明所用層析材料價格低廉，且易于洗脫再生，可多次利用；避免了現有工藝對高設備、高耗材的要求。
[0029](6)本發明自制層析材料穩定性高，吸附量大，雜質分離率高，易洗脫，尤其使高純度郎⑶的得率明顯提高。
[0030]總之，本發明關于郎⑶的制備方法，不僅生產成本低、工藝簡單、無污染，整個工藝可循環生產，而且郎⑶的收率高、純度高，適合工業化生產。
[0031]【具體實施方式】:
下面結合具體實施例對本發明作進一步闡述:
實施例1:
稱取苯乙烯201，二乙烯苯2匕有機相中加入20%甲苯，5%過氧化苯甲酰；配制2.5%聚乙烯醇及5%^^1的水相分散液，V (水相)(有機相)=4:1混合，加入反應罐，反應溫度80 (土丨)I，攪拌轉速40017^111,反應11匕反應結束，分別以水及乙醇洗滌，可得粒徑100-12011111 的 10:聚合物顆粒 15.24。
[0032]取市售茶多酚粗提物10008,2(^(}含量重百分比30% (未脫咖啡因),用其重量6倍的10%乙醇水溶液溶解，有不溶物則過濾。
[0033]所溶樣品以80-100目聚酰胺層析，上樣量為6: 1，用梯度乙醇水溶液洗脫，洗脫液以冰醋酸調節至四4-5。洗脫液分別為水(38^),30%乙醇(48^),40%乙醇“^乂)。分步收集，合并無郎⑶臨近雜質的的洗脫液，濃縮備用。
[0034]取上述濃縮液，以2倍體積水稀釋，1(1:柱層析，柱體積20:1上樣，洗脫液為8%乙醇水溶液(以冰醋酸調節至四4-5),分步收集郎⑶重量百分比含量為95-98%及98%以上的溶液。
[0035]對各段產品濃縮噴霧干燥，冷凍保存。各段低含量不合格溶液濃縮干燥后作為粗提物原材料二次循環。
[0036]制備工藝中所用試劑進行回收，循環利用。
[0037]所得郎⑶產品以含量百分比95%計，得率為88.2%，其中含量99%以上產品得率
77.8%。副產物85%以上含量咖啡因得率為75.1%，80%以上含量￡06得率60.6%。
[0038]實施例2:
稱取苯乙烯201，二乙烯苯2.5匕有機相中加入20%甲苯，5%過氧化苯甲酰；配制2.5%聚乙烯醇及5%^^1的水相分散液3 (水相IV (有機相)=4:1混合，加入反應罐，反應溫度80 (土丨)I，攪拌轉速40017^111,反應10卜，分別以水及乙醇洗滌，可得粒徑100-120110的聚合物顆粒15.8^0
[0039]取市售茶多酚粗提物20008,2(^(}含量重百分比30% (未脫咖啡因),用其重量8倍的10%乙醇水溶液溶解，有不溶物則過濾。
[0040]所溶樣品用用80-100目聚酰胺層析，上樣量為8:1，用梯度乙醇水溶液洗脫，洗脫液四值均以冰醋酸調節至四4-5。洗脫液分別為水(38^),30%乙醇(58^),40%乙醇“^乂)。分步收集，合并無郎⑶臨近雜質的的洗脫液，濃縮備用。
[0041〕 取上述濃縮液，以2.5倍體積水稀釋，100柱層析，柱體積25:1上樣，洗脫液為8%乙醇水溶液(以冰醋酸調節至四4-5),分步收集郎⑶重量百分比含量為95-98%及98%以上的溶液。
[0042]對各段產品濃縮噴霧干燥，冷凍保存。各段低含量不合格溶液濃縮干燥后作為粗提物原材料二次循環。
[0043]制備工藝中所用試劑進行回收，循環利用。
[0044]所得郎⑶產品以含量百分比95%計，得率為90.1%，其中含量99%以上產品得率
79.8%。副產物85%以上含量咖啡因得率為75.3%，80%以上含量￡(?得率60.8%。
[0045]實施例3:
稱取苯乙烯251，二乙烯苯2.8匕有機相中加入20%甲苯，5%過氧化苯甲酰；配制2.5%聚乙烯醇及5%^^1的水相分散液3 (水相IV (有機相)=4:1混合，加入反應罐，反應溫度80 (土丨)卜，分別以水及乙醇洗滌，可得粒徑100-120110的1(1:聚合物顆粒20.24。
[0046]取市售茶多酚粗提物10008,2(^(}含量重百分比50%(已脫咖啡因),用其重量6倍的10%乙醇水溶液溶解，有不溶物則過濾。
[0047]所溶樣品以80-100目聚酰胺層析，上樣量為1:5，用梯度乙醇水溶液洗脫，洗脫液以冰醋酸調節至四4-5。洗脫液分別為水(38^),30%乙醇(4.587),40%乙醇(了^乂)。分步收集，合并無郎⑶臨近雜質的的洗脫液，濃縮備用。
[0048]取上述濃縮液，以2倍體積水稀釋，1(1:柱層析，柱體積20:1上樣，洗脫液為8%乙醇水溶液(以冰醋酸調節至四4-5),分步收集郎⑶重量百分比含量為95-98%及98%以上的溶液。
[0049]對各段產品濃縮噴霧干燥，冷凍保存。各段低含量不合格溶液濃縮干燥后作為粗提物原材料二次循環。
[0050]制備工藝中所用試劑進行回收，循環利用。
[0051]所得郎⑶產品以含量百分比95%計，得率為89.2%，其中含量99%以上產品得率
80.8%。80%以上含量￡(?得率62.6%。
[0052]實施例4:
稱取苯乙烯251，二乙烯苯2.6匕有機相中加入20%甲苯，5%過氧化苯甲酰；配制2.5%聚乙烯醇及5%^^1的水相分散液3 (水相IV (有機相)=4:1混合，加入反應罐，反應溫度80 (土丨)攪拌轉速40017^111,反應12卜，分別以水及乙醇洗滌，可得粒徑100-120110的聚合物顆粒19.54。
[0053]取市售茶多酚粗提物20008,2(^(}含量重百分比50%(已脫咖啡因),用其重量5倍的10%乙醇水溶液溶解，有不溶物則過濾。
[0054]所溶樣品以80-100目聚酰胺層析，上樣量為1:7，用梯度乙醇水溶液洗脫，洗脫液以冰醋酸調節至四4-5。洗脫液分別為水(28^),30%乙醇(58^),40%乙醇(了^乂)。分步收集，合并無郎⑶臨近雜質的的洗脫液，濃縮備用。
[0055]取上述濃縮液，以2倍體積水稀釋，10:柱層析，柱體積30:1上樣，洗脫液為8%乙醇水溶液(以冰醋酸調節至四4-5),分步收集郎⑶重量百分比含量為95-98%及98%以上的溶液。
[0056]對各段產品濃縮噴霧干燥，冷凍保存。各段低含量不合格溶液濃縮干燥后作為粗提物原材料二次循環。
[0057]制備工藝中所用試劑進行回收，循環利用。
[0058]所得郎⑶產品以含量百分比95%計，得率為90.8%，其中含量99%以上產品得率
78.9%。副產物80%以上含量￡06得率63.8%。
【權利要求】
1.一種高純度郎⑶的制備工藝，其特征在于包括如下步驟: (1)粗提物處理:取茶多酚粗提物含量重百分比20%-6090，用其重量5-8倍的10%乙醇水溶液溶解，有不溶物則過濾； (2)聚酰胺柱層析:所溶樣品以柱體積5-8:1上樣，以乙醇水溶液梯度洗脫，洗脫液四值均以冰醋酸調節至？財-5 ； 洗脫液分別為水:(2-387),30%乙醇(4-587),40%乙醇(5-887)； 分步收集，合并無郎⑶臨近雜質的的洗脫液，濃縮備用； (3)自制1(1:柱層析:以步驟(2)下的洗脫液濃縮物為原料，以2-3倍體積水稀釋，以柱體積20-30:1上樣，洗脫液為8%乙醇水溶液(以冰醋酸調節值至4-5),分步收集郎⑶重量百分比含量為95-98%及98%以上的溶液； (4)濃縮干燥:對各段產品濃縮干燥，冷凍保存。
2.如權利要求1所述的高純度郎⑶的制備工藝，其特征在于步驟(1)中茶多酚粗提物原料為郎⑶含量20-60%的茶葉下腳料提取物，所有步驟中所述溶液均為工業乙醇水溶液。
3.如權利要求1所述的高純度郎⑶的制備工藝，其特征在于步驟(1)中茶多酚粗提物原料中若包含咖啡因、￡06等雜質，步驟(2)水洗階段可收集重量百分比含量85%以上的咖啡因副產物，步驟(3)中可收集到重量百分比含量80%以上的￡(?等副產物。
4.如權利要求1所述的郎⑶的制備工藝，其特征在于步驟(3)中所述自制層析材料的制備方法為:以采用懸浮聚合法在優化合成條件下合成的新型聚合物樹脂，其中V (苯乙烯):V (二乙烯苯)=8-10: 1，水相分散液為2.5%聚乙烯醇及5%版101的水溶液，有機相中20%甲苯為致孔劑，5%過氧化苯甲酰為引發劑，V (水相)(有機相)=4:1混合，反應溫度80 (土丨)1、反應時間10-12卜，所得聚合物粒徑為100-12011111。
5.如權利要求1所述的高純度郎⑶的制備工藝，其特征在于步驟(2)(3)所用層析材料分別為聚酰胺(80-100目?、100 ；其預處理以其洗脫液淋洗1-28乂，實驗完畢尾處理以工業乙醇清洗2-387再生使用。
6.如權利要求1所述的高純度郎⑶的制備工藝，步驟(3)中濃縮干燥方法為噴霧干燥。
7.如權利要求1所述的高純度郎⑶的制備工藝，步驟(2)(3)中雜質較多的洗脫液濃縮干燥后作為茶多酚原材料進入下次循環，所有步驟中乙醇廢液經統一回收后循環使用。
【文檔編號】C07D311/62GK104447667SQ201410716136
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年12月2日 優先權日:2014年12月2日
【發明者】高平, 林俊杰, 鄧小寬 申請人:四川大學