專利名稱：用細胞對退變的椎間盤進行自體治療的制作方法
相關申請本發明是提交于2003年11月14日的美國專利申請No.10/714,594的繼續申請，美國專利申請No.10/714,594是提交于2003年11月13日的美國專利申請No.10/714,559的部分繼續申請。上述申請的全部教導通過引用被并入本文。
背景技術：
天然椎間盤含有膠質狀的髓核(nucleus pulposus)，其周圍環繞著纖維狀的纖維環(annulus fibrosus)。在軸向負荷下，髓核被壓縮，并將該負荷放射性地轉移到纖維環上。纖維環的疊層狀本質賦予了其高度的拉伸強度，并且因此使其能夠應答于轉移來的負荷呈放射狀擴張。
在健康的椎間盤中，髓核中的細胞按體積計僅占椎間盤組織的大約百分之一。這些細胞產生細胞外基質(ECM)，其中含有高百分比的蛋白聚糖(proteoglycan)。這些蛋白聚糖含有用以保持水的硫酸化官能團，因此能向髓核提供減震的性能。髓核細胞還可分泌少量細胞因子以及基質金屬蛋白酶(MMPs)。這些細胞因子和MMPs能協助調控髓核細胞的代謝。
在椎間盤退變性疾病(disc degeneration disease，DDD)的某些情況下，椎間盤的逐漸退變是由脊骨其它部分的機械不穩定性造成的。在這些情況下，對髓核增加的負荷和壓力使得椎間盤中的細胞(或侵入的巨噬細胞)釋放比正常量更大的上述細胞因子。在DDD的其它情況下，遺傳因子或凋亡也能導致椎間盤細胞數量的降低和/或這些細胞因子及MMP達到毒性數量的釋放。在一些情況下，椎間盤的泵作用可能出現故障(由于，例如，髓核內蛋白聚糖濃度的降低)，由此阻礙了營養物質流入椎間盤，以及廢物流出椎間盤。向細胞提供營養物質以及清除廢物的能力降低，可能導致細胞存活力和代謝降低，這會導致ECM的進一步退變，以及高水平的毒素積累，可能造成神經刺激和疼痛。
隨著DDD的發展，髓核中存在的毒性水平的細胞因子和MMPs開始降解ECM。具體而言，MMPs(受細胞因子的調控)開始切割蛋白聚糖的用于保持水的部分，由此降低其水保持能力。這種降解導致髓核柔韌性降低，并且因此會改變椎間盤內負荷分布的情況，從而可能導致纖維環的分層。這些變化導致了更嚴重的機械不穩定性，由此使得細胞釋放出甚至更多的細胞因子，典型地，因而對MMPs造成正調節。隨著這種破壞性級聯的繼續以及DDD的進一步發展，椎間盤開始凸起(“突出的椎間盤(a herniated disc)”)，并最終破裂，導致髓核與脊髓接觸，產生疼痛。
美國專利No.6,352,557(“Ferree”)教導了以下方法將治療用物質，例如，髓核細胞加入到從供體獲得的顆粒化的(morselized)細胞外基質中，并將該組合注射到椎間盤中。但是，最開始細胞需要被培養，再在植入患病的椎間盤之前加入到供體基質中。該方法會讓病患經歷兩次單獨的處理程序，還會延遲對病患的治療。第一道程序是收獲細胞，其然后需要被培養。培養之后，細胞再被植入到病患體內。
美國專利No.6,340,369(“Ferree II”)教導了如下方法從病患體內獲得活的椎間盤細胞，培養這些細胞，再將它們移植到受影響的椎間盤中。Ferree II進一步教導，這些細胞可與II型膠原-粘多糖基質或I型膠原-粘多糖基質組合，這取決于細胞收獲自髓核(NP)還是纖維環(AF)。Ferree II還提出，在移植之前，將一種或多種治療用物質加入到細胞中。作為細胞的替代性來源，Ferree提出可以使用NP或AF細胞前體細胞、軟骨細胞或其它活細胞，它們與NP或AF細胞功能類似或可分化為NP或AF細胞。總之，Ferree都教導在移植之前要對收獲的細胞進行培養。
Alini，Eur.Spine J.，11(Supp.2)S215-220(2002)提出，注射嵌有細胞的生物基質將有可能恢復椎間盤的功能性。Alini的實驗涉及從髓核中分離細胞，并對它們進行培養。Alini還提出了細胞的其它來源，包括來自異源供體的椎間盤細胞和自體干細胞。他的教導暗示，干細胞可能是理想的來源，但是目前還沒有已知的方法能對干細胞進行培養，使得它們在植入之前能分化為髓核細胞。總之，Alini需要在植入之前對細胞進行培養。
Russell(Abstract 27 ISSLS 2003)報道了一項實驗，用于確定間質(mesenchymal)干細胞(MSCs)是否能被引導為椎間盤軟骨細胞的表型。Russell發現，當受到培養條件的調節，以及還加入TGF-B1的情況下，成年人MSCs能被誘導分化為軟骨細胞表型。
Sakai(Abstract 24 ISSLS 2003)報道了對向椎間盤自體移植MSCs是否能防止椎間盤退變進行評估的實驗。他使用兔子，從骨髓中分離MSCs，培養2周，然后進行移植。結果顯示，對椎間盤具有顯著的維持作用。
Sakai，Biomaterials，243531-3541(2003)描述了一種方法，其中使用的最終細胞密度為1×106細胞/ml，通過27級(27-gauge)胰島素注射器將0.04ml溶液(其中嵌有自體培養的MSCs)注射到每個椎間盤。移植之后發現細胞成功增殖。
Sobajima(Abstract 43 ISSLS 2002)研究了針對DDD的干細胞療法的可行性。從經歷椎間盤手術的病患分離出人NP細胞，將其與來自經歷髖手術的病患的MSCs或從小鼠獲得的肌肉來源的干細胞進行共培養。數據顯示，干細胞和髓核細胞之間有協同效應，這使得體內蛋白聚糖合成被正調節。
Ganey，Eur Spine J，11(Suppl.2)S206-S214(2002)報道了在德國進行的外科手術，其中，在椎間盤摘除術(discectomy)之后，從病患的椎間盤的部分收獲細胞。然后對這些細胞進行培養，以后將其移植回到病患體內。
Sander等在美國專利申請公開文件2003/0069639中教導，使用從病患取得的組織活體作為來源，以獲得用于植入到退變椎間盤中的細胞。
上面引用的文獻中都教導要在植入前對細胞進行培養，這相應會導致對病患處于退變中的椎間盤的治療有所延遲。
發明內容
本發明的發明人發展出了一種手術內(intra-operative)程序，用于有效治療退變性椎間盤疾病，這是通過將自體未培養細胞(例如，間質肝細胞或軟骨細胞或成纖維細胞)引入到病患的椎間盤中來實現的。該程序提供了對于病患來說直接的護理治療方法。
根據本發明的一種實施方式，本發明的發明人發展出了一種用于治療椎間盤的方法，其中，從病患的骨髓收獲的細胞隨后再被引入到退變的椎間盤中，以分化為存在于椎間盤中的髓核和/或纖維環細胞，由此提高椎間盤中存在的這些細胞的數量。在一些實施方式中，將細胞植入到椎間盤可以在收獲細胞之后立即進行，使得病患可以避免如下情況先進行收獲細胞的第一道程序，等待細胞被培養(可能需要數周)，然后再進行將經過培養的細胞植入到椎間盤中的第二道程序。
相信將細胞引入到目標椎間盤中有多種好處。這些細胞的基本功能是產生細胞外基質。如上所述，有多種因素會導致細胞死亡或功能障礙，其接著就會導致該基質的降解。重建或重新產生細胞外基質的一種策略就是增加能產生基質的活的功能性椎間盤細胞的數量。發明人相信，間質干細胞(MSCs)的可塑性(plasticity)現象使得它們成為在植入到目標椎間盤后能分化為椎間盤細胞的細胞類型的理想選擇。這些細胞可以成為能在椎間盤內產生必要的細胞外基質的髓核(NP)和/或纖維環(AF)細胞。此外，在植入時，細胞可與其它治療性試劑組合，例如，生長因子以幫助細胞在椎間盤內存活。
因此，在本發明的一個方面，提供了一種治療椎間盤中退變性椎間盤疾病的方法，所述方法包括收獲來自病患的MSCs，不對其進行培養，將活的MSCs引入到同一病患的退變的椎間盤中，其中，細胞將增殖并分化為髓核和/或纖維環細胞。
在一些實施方式中，細胞單獨遞送或通過載體遞送。在其它實施方式中，細胞與額外的治療性試劑或物質，例如生長因子，一起遞送到椎間盤中。
發明詳述因為DDD是連續的過程，向其中施予細胞的退變中的椎間盤可以是大量退變性狀態中的任何一種。因此，退變中的椎間盤可以是完整的椎間盤。退變中的椎間盤可以是突出的椎間盤(即，其中，纖維環的一部分有凸起)。退變中的椎間盤可以是破裂的椎間盤(即，其中，纖維環已破裂，大量髓核滲出)。退變中的椎間盤可以是分層的(即，其中，纖維環的相鄰的層已分開)。退變中的椎間盤可以具有裂縫(即，其中，纖維環具有細小裂隙或撕裂，來自髓核的選定的分子可以由此漏出)。在所有這些退變性狀態中，AF或NP的細胞外基質也會降解。
本發明涉及在手術內向病患的退變椎間盤提供健康、存活的自體間質干細胞(MSC)。這些細胞可被遞送到髓核或纖維環或兩者中，用于修整和恢復每種各自的細胞外基質。
發明人相信，MSCs對于施予給退變中的椎間盤能提供特殊的好處，因為它們具有能幫助其更容易存活于退變中椎間盤里相對惡劣的環境中的能力。特別地，MSCs具有理想的可塑性水平，其使得它們具有增殖和分化為NP及AF細胞的能力。
在一種實施方式中，MSCs獲得自病患自身的骨髓。在其它實施方式中，脂肪或肌肉組織可以是MSCs的來源。在一些實施方式中，將被施予給椎間盤的MSCs以濃縮形式提供。當以濃縮形式提供時，細胞可以是未培養的。未培養的、濃縮的MSCs可以容易地通過離心、過濾(選擇性保留)或免疫吸收(immunoabsorption)來獲得。當選用過濾時，美國專利6,049,026(“Muschler”)所公開的方法可以使用，該專利的內容通過引用被整體并入本文。例如，骨髓吸出物懸浮液可經過多孔的、生物兼容的、可植入的基底，以提供具有豐富含量的組織祖細胞(tissue progenitor cells)的復合骨移植體。在一些實施方式中，用于過濾和濃縮MSCs的基質作為治療性試劑被共同施予髓核或纖維環。如果該基質具有合適的機械性能，其可被用于恢復退變期間所損失的椎間盤空間的高度。所述細胞可同時注射，或與基質共同被注射到椎間盤的目標區域。
用于收獲MSCs的吸出的骨髓體積優選在大約5cc到大約100cc之間。然后在濃縮過程中使用該體積，以濃縮MSCs。
當選用離心的時候，Connolly et al.所公開的方法可被使用。Development of an Osteogenic bone Marrow Preparation，JBJS 71-A(No.5)(June 1989)通過引用被整體并入本文。在該兔子實驗中，Connolly報道，對7-10ml骨髓進行離心，最終的細胞懸浮液中產生了每毫升平均3.6×106個有核的細胞。
當使用離心工藝來濃縮細胞時，它們可以以懸浮液中的沉淀形式被遞送到椎間盤。在另一種實施方式中，使用載體來運送細胞。載體可以包含珠粒、微球、納米球、水凝膠、凝膠、聚合物、陶瓷、膠原和血小板膠(platelet gel)，或者可選自由它們構成的組。
固體或流體形式的載體，可以以多種不同的方式攜帶細胞。細胞可被嵌入、膠囊化(encapsulate)、懸浮或粘附到載體的表面。在一種實施方式中，載體將細胞膠囊化，提供營養物質，并且當它們被遞送至椎間盤內時對細胞提供保護。在椎間盤中一段時間后，載體降解，釋放出細胞。下文中將會描述各種載體的特殊形式。
在一些實施方式中，間質干細胞被提供于緩釋裝置(即，持續遞送(sustained delivery)裝置)中。施予的配方可以包含緩釋裝置。緩釋裝置被改造為能在椎間盤內保持一段延長的時間，并緩慢地將其中含有的間質干細胞釋放到周圍環境中。這種給藥模式使得間質干細胞得以在椎間盤內以治療有效量保持一段延長的時間。還可以通過持續遞送裝置來運送一種或多種額外的治療性試劑。
已設計出了合成的支架，例如基于反丁烯二酸的支架，并對其進行了調整，使其能夠吸引某些細胞，并提供對這些細胞的指引，使它們得以在目標區域分化。細胞還可嵌于支架中，然后被注射到目標區域，而不會影響到細胞的增殖或存活性。在基于反丁烯二酸的支架植入后，其會隨著時間降解，而不需要進一步的手術將支架移除。
載體還可以包含水凝膠。凝膠化之后，細胞可被膠囊化進水凝膠的聚合物鏈中。水凝膠可通過最小限度入侵的方式遞送，例如向目標區域進行注射。水凝膠還可被身體再吸收。水凝膠的屬性，例如，降解時間、細胞粘附行為以及細胞外基質的空間積累(spatialaccumulation)等，可通過化學及工藝修飾予以改良。
適合用于本發明的水凝膠包括含水凝膠，即，以在水中的不溶性和親水性為特征的聚合物。見，例如，“Hydrogels”，ConciseEncyclopedia of Polymer Science and Engineering，Eds.Mark et al.，Wiley and Sons(1990)中的458-459頁，其內容通過引用被整體并入本文。雖然其使用在本發明中是可選的，但是包含水凝膠是很有好處的，因為它們往往具有大量想要的性質。依靠其親水性和含水的本質，水凝膠可以裝納活細胞，例如間質干細胞，并且能對椎間盤承擔負荷的能力提供幫助。
在一種實施方式中，水凝膠是細的、粉末狀的合成水凝膠。合適的水凝膠展示出最優的屬性組合，例如，與選用的基質聚合物的兼容性以及生物兼容性。水凝膠可以包括下述物質中的一種或多種多糖、蛋白質、聚磷腈(polyphosphazene)、聚(氧乙烯)-聚(氧丙烯)嵌段聚合物、乙二胺的聚(氧乙烯)-聚(氧丙烯)嵌段聚合物、聚(丙烯酸)、聚(甲基丙烯酸)、丙烯酸和甲基丙烯酸的共聚物、聚(乙酸乙烯酯)和磺酸化聚合物。
通常，這些聚合物至少部分可溶于水性溶液，例如，水、或具有帶電荷側基的水性醇溶液、或其單價離子鹽。有多種具有可與陽離子發生反應的酸性側基的聚合物的例子，例如，聚(磷腈)、聚(丙烯酸)和聚(甲基丙烯酸)。酸性基團的例子包括羧酸基團、磺酸基團和鹵化的(優選地，氟化的)醇基團。具有可與陰離子發生反應的堿性側基的聚合物的例子是聚(乙烯胺)、聚(乙烯吡啶)和聚(乙烯咪唑)。
根據本發明，提供了一種治療具有髓核的椎間盤中退變性椎間盤疾病的方法，所述方法包括將自體未培養的間質干細胞施予退變的椎間盤。
在一種實施方式中，在施予到椎間盤前收獲自體間質干細胞。
根據本發明的一個方面，間質干細胞可與至少一種額外的治療性試劑一起遞送至椎間盤空間，例如，用于輔助細胞增殖和分化的試劑。可以有，例如，一種額外的治療性試劑(即，第二種治療性試劑)，或者可以有多種額外的治療性試劑(例如，第二種和第三種治療性試劑)。額外的治療性試劑可與間質干細胞同時給藥。在另一種實施方式中，額外的治療性試劑在向椎間盤施予間質干細胞之后給藥。在又一種實施方式中，額外的治療性試劑先行施予，即，在向椎間盤施予間質干細胞之前施予。
還可以用同樣的載體來運送細胞和額外的治療性試劑。在一些實施方式中，細胞處于載體表面，而額外的治療性試劑被置于載體內部。在其它實施方式中，細胞和額外的治療性試劑可以用不同的載體來給藥。
可以加入到椎間盤中的其它額外的治療性試劑包括但不限于維生素和其它營養補充劑、激素、糖蛋白、纖連蛋白、肽和蛋白質、碳水化合物(簡單和/或復雜的)、蛋白聚糖、寡核苷酸(正義和/或反義DNA和/或RNA)、骨形態形成蛋白(BMPs)、分化因子、抗體(例如，對于感染性因子、腫瘤、藥物或激素的抗體)、基因療法試劑和抗癌試劑。經過遺傳改造的細胞和/或其它細胞也可被包括進本發明的基質。如果需要的話，止疼劑(即，止痛劑)和鎮靜劑也可與用于給藥的載體混合，并釋放到椎間盤空間。
在一些實施方式中，生長因子是額外的治療性試劑。本文中使用的術語“生長因子”包括任何能對其它細胞，尤其是結締組織祖細胞的生長或分化進行調節的細胞產物。可根據本發明使用的生長因子包括但不限于，成纖維細胞生長因子家族的成員，包括酸性和堿性成纖維細胞生長因子(FGF-1和FGF-2)以及FGF-4；血小板衍生生長因子(PDGF)家族的成員，包括PDGF-AB、PDGF-BB和PDGF-AA；EGFs，類胰島素生長因子(IGF)家族的成員，包括IGF-I和IGF-II；TGF-β超級家族，包括TGF-β1、2和3(包括MP-52)、類骨質誘導因子(OIF)、血管生成素、內皮縮血管肽、肝細胞生長因子和角化細胞生長因子；骨形態形成蛋白(BMPs)的成員，BMP-1、BMP-3、BMP-2、OP-1、BMP-2A、BMP-2B、BMP-4、BMP-7和BMP-14；HBGF-1和HBGF-2；生長分化因子(GDFs)，刺猬蛋白質家族(hedgehogfamily)的成員，包括印度型(indian)、音速型(sonic)和沙漠型(desert)刺猬蛋白；ADMP-1；GDF-5；以及集落刺激因子(CSF)家族的成員，包括CSF-1、G-CSF和GM-CSF；及其同種型。生長因子可以是自體的，例如，在富含血小板的血漿中包括的，或者可以從商業途徑獲得。在一種實施方式中，生長因子以有效修復椎間盤組織的量施予。
在一些實施方式中，生長因子選自由TGF-β、bFGF和IGF-1組成的組。人們相信，這些生長因子能夠促進髓核的再生，或能刺激軟骨細胞的增殖和/或分化，以及細胞外基質的分泌。在一種實施方式中，生長因子是TGF-β。更優選地，TGF-β以大約10ng/ml至大約5000ng/ml之間的量施予，例如，大約50ng/ml至大約500ng/ml之間，例如，大約100ng/ml至大約300ng/ml之間。
在一種實施方式中，額外的治療性試劑中的至少一種是TGF-β1。在一種實施方式中，另一種額外的治療性試劑是FGF。
在一些實施方式中，血小板濃縮物作為額外的治療性試劑被提供。在一種實施方式中，通過血小板釋放的生長因子的存在量為取得血小板的血液中發現的量的至少兩倍(例如，四倍)。在一些實施方式中，血小板濃縮物是自體的。在一些實施方式中，血小板濃縮物是富含血小板的血漿(PRP)。PRP是有好處的，因為其含有能再次剌激ECM生長的生長因子，并且，因為其纖維蛋白基質提供了適于新組織生長的支架。
因此，根據本發明，提供了一種治療具有髓核的椎間盤中退變性椎間盤疾病的方法，所述方法包括a)將自體未培養間質干細胞施予退變中的椎間盤；以及b)將至少一種額外的治療試劑通過穿過椎間盤的方式(transdiscally)施予退變中的椎間盤。
就本發明的目的而言，“穿過椎間盤施予(transdiscaladministration)”包括但不限于a)將制劑注射到退變中的椎間盤的髓核，例如，相對完整的退變中的椎間盤；b)將制劑注射到退變中的椎間盤的纖維環，例如，相對完整的退變中的椎間盤；c)在附著于纖維環外壁的貼片(patch)中提供制劑，d)在位于纖維環外壁之外但與其緊鄰的位置處的貯庫(depot)中提供制劑(“穿過環的施予(trans-annular administration)”)；以及e)在位于相鄰的脊椎體終板外但與其緊鄰的位置處的貯庫中提供制劑(“穿過終板的施予(trans-annular administration)”)。
也是根據本發明，還提供了一種用于治療退變性椎間盤疾病的制劑，所述制劑包括a)自體未培養的間質干細胞；以及b)至少一種額外的治療性試劑，其中，所述制劑(formulation)存在的量適于施予到退變中的椎間盤中。
還根據本發明，提供了一種用于將用于治療退變性椎間盤疾病的制劑給藥至椎間盤的裝置，所述裝置包括a)含有所述制劑的腔，所述制劑包括自體未培養的間質干細胞和至少一種額外的治療性試劑；以及b)給藥口(delivery port)，其與所述的腔流體連通，并且適于將所述制劑給藥至椎間盤。
在一些實施方式中，細胞可被引入(即施予)到髓核或纖維環中，這取決于何種細胞外基質需要重建。在其它實施方式中，細胞可被引入到椎間盤上的這兩個區域。根據細胞將被給藥至的椎間盤區域，可對特定的治療性試劑加以選擇。
在一些實施方式中，可通過針，例如細孔針將細胞單獨施予(例如，注射)到椎間盤。或者，還可用同樣的細孔針將制劑注射到椎間盤中。在一些實施方式中，針的孔為大約22級或更小，從而減少形成突起的可能性。例如，針的孔可以是大約24級或更小，從而使突起產生的可能性進一步減少。
如果直接注射細胞或制劑的體積足夠高到會導致對髓核產生過高壓力的情況發生，那么優選地，在施予(即，直接注射)間質干細胞之前，移除至少一部分髓核。在一些實施方式中，移除的髓核的體積基本上與有待注射的制劑的體積相似。例如，移除的髓核的體積可在將注射的制劑的體積的大約80-120％之間。此外，該過程還有額外的好處，即，至少部分去除了病患的一些退變的椎間盤。
當將間質干細胞注射進髓核時，給藥的藥物(即，懸浮于生長培養基或載體中的細胞的制劑)的體積在大約0.5ml至大約3.0ml之間是理想的，這包括懸浮于生長培養基或載體中的細胞。當以上述較小的量注射時，我們相信，增加的或替代的體積不會導致可被感知到的髓核中壓力的增加。為確定給藥藥物體積要考慮的因素包括，椎間盤的大小、移除的椎間盤的量以及生長培養基或載體中間質干細胞的濃度。
雖然本發明已被詳細顯示，并引用優選的實施方式予以描述，但是，本領域技術人員應當理解，在不脫離由所附的權利要求所包括的本發明的范圍的情況下，可在形式和細節上進行多種改變。
權利要求
1.一種用于治療具有髓核的椎間盤中的退變性椎間盤疾病的方法，所述方法包括，將自體未培養的細胞施予退變的椎間盤中。
2.如權利要求1所述的方法，其中，在施予到所述椎間盤中之前，所述細胞被濃縮。
3.如權利要求2所述的方法，其中，所述細胞通過離心被濃縮。
4.如權利要求2所述的方法，其中，所述細胞通過過濾被濃縮。
5.如權利要求1所述的方法，其中，使用載體將所述細胞施予所述的椎間盤。
6.如權利要求5所述的方法，其中，所述載體選自由珠粒、微球、納米球、水凝膠、凝膠、聚合物、陶瓷、膠原和血小板膠所構成的組。
7.如權利要求1所述的方法，其中，將額外的治療性試劑施予到所述的椎間盤中。
8.如權利要求7所述的方法，其中，所述額外的治療性試劑選自由生長因子、分化因子和營養補充劑所構成的組。
9.如權利要求8所述的方法，其中，所述額外的治療性試劑是生長因子。
10.如權利要求7所述的方法，其中，使用載體將所述額外的治療性試劑和所述細胞施予所述椎間盤中。
11.如權利要求10所述的方法，其中，所述載體選自由珠粒、微球、納米球、水凝膠、凝膠、聚合物、陶瓷、膠原和血小板膠所構成的組。
12.如權利要求7所述的方法，其中，在向所述椎間盤施予所述細胞的同時，施予所述額外的治療性試劑。
13.如權利要求7所述的方法，其中，在向所述椎間盤施予所述細胞之前，施予所述額外的治療性試劑。
14.如權利要求7所述的方法，其中，在向所述椎間盤施予所述細胞之后，施予所述額外的治療性試劑。
15.如權利要求1所述的方法，其中，將所述細胞于制劑中施予給所述椎間盤，所述制劑的體積在大約0.5ml至大約10ml之間。
16.如權利要求10所述的方法，其中，所述載體包含水凝膠。
17.如權利要求10所述的方法，其中，所述載體包含微球。
18.如權利要求1所述的方法，其中，所述額外的治療性試劑是TGF-β。
19.如權利要求1所述的方法，其中，所述治療性試劑是血小板濃縮物。
20.如權利要求1所述的方法，其中，所述細胞被施予至所述椎間盤的所述髓核中。
21.如權利要求1所述的方法，其中，所述細胞被施予至所述椎間盤的所述纖維環中。
22.如權利要求1所述的方法，其中，在將所述細胞施予到所述椎間盤之前，移除所述髓核的一部分。
23.如權利要求1所述的方法，其中，通過針來施予所述細胞。
24.如權利要求23所述的方法，其中，所述的針最大級別為大約24級。
25.如權利要求1所述的方法，其中，所述細胞選自由間質干細胞、軟骨細胞和成纖維細胞所構成的組。
26.如權利要求1所述的方法，其中，所述細胞包含間質干細胞。
27.一種用于治療退變性椎間盤疾病的制劑，所述制劑包含a)自體未培養的間質干細胞；以及b)額外的治療性試劑，其中，所述制劑存在的量適于施予至退變中的椎間盤中。
28.如權利要求27所述的制劑，其中，所述間質干細胞以濃縮形式提供。
29.如權利要求27所述的制劑，其中，所述額外的治療性試劑是生長因子。
30.一種裝置，用于將權利要求27所述的制劑施予退變的椎間盤，所述裝置包括a)含有所述制劑的腔；以及b)適于將所述制劑施予到所述椎間盤的給藥口。
31.如權利要求1所述的方法，其中，所述制劑以小于大約1ml的量施予。
全文摘要
本發明涉及將自體未培養細胞施予疾病性椎間盤。
文檔編號A61K35/36GK1893962SQ200480033323
公開日2007年1月10日 申請日期2004年11月11日 優先權日2003年11月13日
發明者M·阿塔維亞, H·塞爾翰, T·M·迪茂羅, M·格雷斯, D·烏爾巴恩斯 申請人:德普伊斯派爾公司