一種環孢菌素a眼用微乳制劑及其制備方法

專利名稱：一種環孢菌素a眼用微乳制劑及其制備方法
技術領域：
本發明涉及微乳制劑，具體涉及一種含有環孢菌素A的眼用微乳制劑，本發明還涉及該眼用微乳制劑的制備方法。
背景技術：
環孢菌素A是一種具有免疫抑制活性的非極性環狀低聚肽藥物，主要用于自身免疫性疾病和器官抑制的抗排異治療。環孢素可以選擇性抑制免疫活性細胞，尤其是T淋巴細胞。且淋巴因子、γ干擾素的產生、白介素2、T細胞生長因子的釋放均受到抑制，因此環孢菌素A可作為一種局部免疫調節劑應用于眼部，抑制淚腺內T淋巴細胞的活性，從而增強或恢復淚腺功能(PCT專利申請WO8901772)。另外，將環孢菌素A制成眼用制劑，可避免其全身給藥后引起的對人體肝、腎、神經系統較為嚴重的毒副作用。
環孢菌素A可溶于有機溶劑，幾乎不溶于水。目前市售的環孢菌素A制劑多為含乙醇的油溶性制劑。如口服制劑為含乙醇、乳化劑和油的自微乳化體系。為了提高環孢菌素A在水中的溶解度，注射制劑中需添加乳化劑以增溶，但這會引起靜脈注射給藥時的過敏反應。環孢菌素A容易發生構型變化，在油質制劑中常呈現物理不穩定性，如結晶析出(美國專利USP5474979)，從而嚴重影響其制劑質量的穩定及其療效。
環孢菌素A含油制劑不適合臨床直接應用于眼部疾病的治療，因為如果將環孢菌素A的含油制劑直接滴入眼部，會因制劑含油而對眼部產生刺激作用并引起眼部的粘稠不適感，可能會由此加重某些眼表面疾病。
目前報道的用于眼部給藥的環孢菌素A制劑主要為乳劑，其中普通乳劑在長期放置及后續滅菌工藝中均存在一定的問題，這給工業化生產及臨床安全應用帶來一定的困難。而微乳是具有優異的吸收性，且克服了上述缺陷，因此微乳是研制環孢菌素A眼用制劑的一個方向。乳化劑是乳劑處方中一個的必需成份，由于大多數乳化劑對眼部有很強的刺激性，因此選擇合適的乳化劑是研制環孢菌素A眼用乳劑的關鍵之一。美國專利USP1152876報道了一種環孢素眼用乳劑，該乳劑采用其吐溫80作為乳化劑。新山地明(環孢素口服自微乳制劑)已有報道在臨床上可經適宜稀釋后形成微乳后進行眼部給藥，但由于其中含有一定濃度的乙醇，且乳化劑比例很高，對眼睛有一定的刺激和毒副作用(Knagenhjelm SK等，Acta Ophthalmol Scand.，1999，Apr；77(2)200-203)。F.Lallemand等也對環孢素微乳制劑的處方和制備工藝進行了報道，但尚未進行相關的眼用安全性評價。(EuropeanJournal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics，2003，56307-318)。

發明內容
本發明的目的是提供一種環孢菌素A眼用微乳制劑，該眼用微乳制劑適用于眼部敏感部位，具有舒適度高、無刺激性的特點，在淚腺內可被選擇性吸收。
本發明的另一個目的在于提供該眼用微乳制劑的制備方法。
本發明環孢菌素A眼用微乳制劑由環孢素A、油相、乳化劑、增粘劑、甘油、抑菌劑、氫氧化鈉、純化水配制，經剪切-高壓均質工藝制備而成，呈半透明且有淡藍色乳光，pH值為6.2-8，乳滴平均粒徑小于100nm，90％粒徑累積值不大于200nm。本發明環孢菌素A眼用微乳制劑的特點是采用安全、無刺激性的非離子表面活性劑聚氧乙烯蓖麻油(Cremophor EL)或聚氧乙烯氫化蓖麻油作為乳化劑，主要輔料還包括甘油及蓖麻油或三辛酸癸酸甘油酯。
本發明環孢菌素A眼用微乳制劑的組成如下(以1000ml微乳制劑中的含量計)環孢素A0.005g-5g油相 0.06g-30g乳化劑 0.3g-50g增粘劑 0.0g-1.0g甘油 26g抑菌劑 0.0g-0.5g氫氧化鈉 適量純化水 適量上述配方中溶劑為純化水；油相采用蓖麻油或三辛酸癸酸甘油酯；乳化劑采用聚氧乙烯蓖麻油或聚氧乙烯氫化蓖麻油；增粘劑可采用卡波姆、羥丙甲基纖維素或聚維酮等；抑菌劑可采用苯扎氯銨或苯扎溴銨；其中環孢菌素A與油相的優選重量比為0.02～0.12；油相與乳化劑的優選重量比為0.5～2。
本發明環孢菌素A眼用微乳制劑的制備方法的特點在于采用剪切-高壓均質工藝，操作步驟為將油相、乳化劑、甘油在60℃條件下混合均勻，然后將環孢菌素A溶解在混合物中。加入適量純化水，剪切乳化得到初乳，進而用高壓均質機均質，隨后用增粘劑水溶液調節粘度到2.6-3.5cp；再用氫氧化鈉溶液調節pH至6.2-8；最后加入處方量抑菌劑，用純化水補至足量，制得的產品用0.45μm的微孔濾膜過濾，即得。
上述方法的關鍵工藝是用高壓均質機對剪切乳化得到的初乳進行均質，高壓均質的均質壓力應大于等于100,000kPa，均質時間為1-20小時。用剪切-高壓均質工藝制備的微乳制劑，乳滴平均粒徑小于100nm，顯著低于普通剪切工藝制得的150nm乳劑粒徑，形成微乳體系。
下面通過實驗來說明本發明環孢菌素A眼用微乳制劑的眼用安全性和穩定性一、本發明環孢菌素A眼用微乳制劑對家兔眼部的刺激性試驗1、試驗材料與條件試驗藥物按照實施例1所述的處方和方法制備的環孢菌素A眼用微乳制劑，該微乳制劑的濃度為0.05％(m/v)，每次給藥量為100μl；試驗動物清潔級新西蘭白兔4只，雌雄各半，體重2-3公斤(購自上海和平特種動植物繁殖場)；動物飼養環境家兔飼料來源上海仕林科技有限公司室溫20℃濕度30％-70％照明人工光線，12小時日光，12小時黑暗實驗動物設施合格證號SYXK(滬)2003-00292、試驗方法輕輕拉開家兔眼結膜囊，將0.1ml試驗藥物滴入右側眼結膜囊內，左側給予生理鹽水作為對照。給藥后使眼睛被動閉合5～10秒(動作輕)，使藥液與局部有充分接觸。每日給藥兩次，連續給藥一周。記錄給藥后6、24、48、72、96、120、144、168小時內眼的損傷情況，以Draize眼部刺激試驗評分表示(依據《新藥(西藥)臨床研究指導原則匯編(藥理 藥理 學毒理學)》眼刺激試驗第208頁)。觀察時用熒光素鈉檢查角膜損害，用裂隙燈檢查角膜透明度和虹膜紋理改變。
3、試驗結果各試驗時間點家兔眼刺激分值見表1。
表1各試驗時間點家兔眼刺激分值

根據Draize眼刺激性評價標準，0-3分為無刺激性，從表1可以看出，在各試驗時間點的眼刺激分值為0～0.5，因此本發明環孢菌素A眼用微乳制劑對家兔眼睛在各試驗時間點均無刺激性。同時經裂隙燈和熒光素鈉檢查，角膜和虹膜均正常。由于該試驗系統比人眼刺激反應敏感，因此刺激反應陰性可確定對人眼無刺激性。
此外通過眼內藥動學試驗考察本發明環孢菌素A眼用微乳制劑在兔眼組織中的分布結果證實該眼部給藥體系中的環孢菌素可以用于治療干眼病。
二、本發明環孢菌素A眼用微乳制劑的穩定性試驗(一)、加速試驗按照實施例1所述的處方和方法制備的環孢菌素A眼用微乳制劑在擬上市包裝(低密度聚乙烯塑料小瓶包裝)條件下，在溫度為40℃±2℃，相對濕度為20±5％的環境中放置6個月，定時抽樣檢查外觀、藥物含量、有關物質、pH值和乳滴粒徑等指標。其試驗結果見表2表2市售包裝樣品加速試驗結果

從表2可以看出，在擬上市包裝條件下，經相對濕度20％、溫度40℃的加速試驗條件下放置6個月，本發明環孢菌素A眼用微乳制劑的外觀性狀、藥物含量、有關物質、pH值及粒徑等各項指標均未發生明顯改變，質量穩定。
(二)、室溫留樣試驗按照實施例1所述的處方和方法制備的環孢菌素A眼用微乳制劑在擬上市包裝(低密度聚乙烯塑料小瓶包裝)條件下，在溫度為25℃±2℃，相對濕度為60±10％的環境中放置6個月，定時抽樣檢查外觀、藥物含量、有關物質、pH值和乳滴粒徑等指標。其試驗結果見表3表3市售包裝樣品室溫留樣長期試驗結果

從表3可以看出，在擬上市包裝條件下，經相對濕度60％、溫度25℃的接近實際貯存條件下放置6個月，本發明環孢菌素A眼用微乳制劑的外觀性狀、藥物含量、有關物質、pH值及粒徑等各項指標均未發生明顯改變，質量穩定。
有益效果1、本發明環孢菌素A眼用微乳制劑采用安全、無刺激性的非離子表面活性劑聚氧乙烯蓖麻油或劑聚氧乙烯氫化蓖麻油為乳化劑，適合應用到眼部敏感部位，具有舒適度高、無刺激性的優點。
2、本發明采用剪切-高壓均質工藝制備得到的環孢菌素A眼用微乳制劑乳滴平均粒徑小于100nm，顯著低于普通剪切工藝制得的150nm乳劑粒徑，形成微乳體系，對眼部無刺激性及毒副作用且穩定性良好。
具體實施例方式
下面結合具體實施例對本發明作進一步闡述，但不限制本發明。下述實施例中環孢菌素A購自福建科瑞藥業有限公司，乳滴平均粒徑用動態光散射原理的粒度測定儀測定。
實施例1處方組成環孢素A 0.5g蓖麻油 6g聚氧乙烯蓖麻油 15g卡波姆(Pemulen) 0.05g甘油 26g氫氧化鈉 適量苯扎氯銨 0.05g純化水 適量制成 1000ml制備方法按照處方組成稱取各組分，將蓖麻油、聚氧乙烯蓖麻油和甘油在60℃條件下混合均勻，然后將環孢菌素A溶解在混合物中。加入適量純化水，剪切乳化得到初乳，進而用高壓均質機均質4小時(壓力約140,000kPa)，隨后用卡波姆水溶液調節粘度到2.6-3.5cp；再用氫氧化鈉溶液調節到pH6.2-8；隨后，加入處方量苯扎氯銨，用純化水補至1000ml，制得的產品用0.45μm的微孔濾膜過濾。經測定所制得的微乳乳滴的平均粒徑為60nm，將所制得的微乳制劑以4000rpm速度離心15min后，外觀仍然呈淡藍色半透明乳劑，不分層。
比較例1處方組成環孢素A 0.5g蓖麻油 6g吐溫80 15g卡波姆(Pemulen) 0.05g甘油26g氫氧化鈉適量苯扎氯銨0.05g純化水 適量制成1000ml制備方法按照處方組成稱取各組分，將蓖麻油、吐溫80和甘油在60℃條件下混合均勻，然后將環孢菌素A溶解在混合物中。加入適量純化水，剪切乳化得到初乳，隨后用卡波姆水溶液調節粘度到2.6-3.5cp；再用氫氧化鈉溶液調節到pH6.2-8；隨后，加入處方量苯扎氯銨，用純化水補至1000ml，制得的產品用0.45μm的微孔濾膜過濾。將所制得的微乳制劑以4000rpm速度離心15min后，外觀上乳劑發生明顯分層。
比較例2處方組成同實施例1制備方法按照處方組成稱取各組分，將蓖麻油、聚氧乙烯蓖麻油和甘油在60℃條件下混合均勻，然后將環孢菌素A溶解在混合物中。加入適量純化水，剪切乳化得到初乳，隨后用卡波姆水溶液調節粘度到2.6-3.5cp；再用氫氧化鈉溶液調節到pH6.2-8；隨后，加入處方量苯扎氯銨，用純化水補至1000ml，制得的產品用0.45μm的微孔濾膜過濾。經測定所制得的微乳乳滴的平均粒徑為150nm。
實施例1的乳化劑采用聚氧乙烯蓖麻油代替比較例1采用的吐溫80，加上使用剪切-高壓均質工藝，所得到的微乳制劑不分層，顯示出良好的穩定性；與比較例2相比，實施例1在制備工藝上用剪切-高壓均質工藝替代普通的剪切工藝，所得到的微乳制劑乳滴的平均粒徑為60nm顯著低于普通剪切工藝制得的150nm乳劑粒徑。
實施例2處方組成環孢素A0.5g三辛酸癸酸甘油酯 6g聚氧乙烯蓖麻油 15g卡波姆(Pemulen)0.05g甘油 26g氫氧化鈉 適量苯扎氯銨 0.05g純化水 適量制成 1000ml制備方法按照處方組成稱取各組分，將三辛酸癸酸甘油酯、聚氧乙烯蓖麻油和甘油在60℃條件下混合均勻，然后將環孢菌素A溶解在混合物中。加入適量純化水，剪切乳化得到初乳，進而用高壓均質機均質1小時(壓力約100,000kPa)，隨后用卡波姆水溶液調節粘度到2.6-3.5cp；再用氫氧化鈉溶液調節到pH6.2-8；隨后，加入處方量苯扎氯銨，用純化水補至1000ml，制得的產品用0.45μm的微孔濾膜過濾。經測定所制得的微乳乳滴的平均粒徑為52nm。
實施例3
處方組成環孢素A0.3g蓖麻油 5g聚氧乙烯蓖麻 10g卡波姆(Pemulen)0.05g甘油 26g氫氧化鈉 適量苯扎氯銨 0.05g純化水 適量制成 1000ml制備方法按照處方組成稱取各組分，將蓖麻油、聚氧乙烯蓖麻油和甘油在60℃條件下混合均勻，然后將環孢菌素A溶解在混合物中。加入適量純化水，剪切乳化得到初乳，進而用高壓均質機均質6小時(壓力約100,000kPa)，隨后用卡波姆水溶液調節粘度到2.6-3.5cp；再用氫氧化鈉溶液調節到pH6.2-8；隨后，加入處方量苯扎氯銨，用純化水補至1000ml，制得的產品用0.45μm的微孔濾膜過濾。經測定所制得的微乳乳滴的平均粒徑為83nm。
實施例4處方組成環孢素A 1g蓖麻油 12g聚氧乙烯蓖麻油 20g卡波姆(Pemulen) 0.05g甘油26g氫氧化鈉適量苯扎氯銨0.05g純化水 適量制成1000ml制備方法按照處方組成稱取各組分，將蓖麻油、聚氧乙烯蓖麻油和甘油在60℃條件下混合均勻，然后將環孢菌素A溶解在混合物中。加入適量純化水，剪切乳化得到初乳，進而用高壓均質機均質6小時(壓力約150,000kPa)，隨后用卡波姆水溶液調節粘度到2.6-3.5cp；再用氫氧化鈉溶液調節到pH6.2-8；隨后，加入處方量苯扎氯銨，用純化水補至1000ml，制得的產品用0.45μm的微孔濾膜過濾。經測定所制得的微乳乳滴的平均粒徑為90nm。
實施例5處方組成環孢素A 5g蓖麻油30g聚氧乙烯蓖麻油50g卡波姆(Pemulen) 0.05g甘油 26g氫氧化鈉 適量苯扎氯銨 0.05g純化水適量制成 1000ml制備方法按照處方組成稱取各組分，將蓖麻油、聚氧乙烯蓖麻油和甘油在60℃條件下混合均勻，然后將環孢菌素A溶解在混合物中。加入適量純化水，剪切乳化得到初乳，進而用高壓均質機均質8小時(壓力約170,000kPa)，隨后用卡波姆水溶液調節粘度到2.6-3.5cp；再用氫氧化鈉溶液調節到pH6.2-8；隨后，加入處方量苯扎氯銨，用純化水補至1000ml，制得的產品用0.45μm的微孔濾膜過濾。經測定所制得的微乳乳滴的平均粒徑為87nm。
實施例6處方組成環孢素A0.1g蓖麻油 1g聚氧乙烯蓖麻油 10g卡波姆(Pemulen)0.05g甘油 26g氫氧化鈉 適量苯扎氯銨 0.05g純化水 適量制成 1000ml制備方法按照處方組成稱取各組分，將蓖麻油、聚氧乙烯蓖麻油和甘油在60℃條件下混合均勻，然后將環孢菌素A溶解在混合物中。加入適量純化水，剪切乳化得到初乳，進而用高壓均質機均質4小時(壓力約140,000kPa)，隨后用卡波姆水溶液調節粘度到2.6-3.5cp；再用氫氧化鈉溶液調節到pH6.2-8；隨后，加入處方量苯扎氯銨，用純化水補至1000ml，制得的產品用0.45μm的微孔濾膜過濾。經測定所制得的微乳乳滴的平均粒徑為46nm。
實施例7處方組成環孢素A 0.5g蓖麻油 6g聚氧乙烯蓖麻油 10g卡波姆(Pemulen) 0.05g甘油 26g氫氧化鈉 適量苯扎氯銨 0.05g純化水 適量制成 1000ml制備方法按照處方組成稱取各組分，將蓖麻油、聚氧乙烯蓖麻油和甘油在60℃條件下混合均勻，然后將環孢菌素A溶解在混合物中。加入適量純化水，剪切乳化得到初乳，進而用高壓均質機均質6小時(壓力約160,000kPa)，隨后用卡波姆水溶液調節粘度到2.6-3.5cp；再用氫氧化鈉溶液調節到pH6.2-8；隨后，加入處方量苯扎氯銨，用純化水補至1000ml，制得的產品用0.45μm的微孔濾膜過濾。經測定所制得的微乳乳滴的平均粒徑為92nm。
實施例8處方組成環孢素A 0.1g蓖麻油 12g聚氧乙烯蓖麻油 0.4g卡波姆(Pemulen) 0.05g甘油26g氫氧化鈉適量苯扎氯銨0.05g純化水 適量制成1000ml制備方法按照處方組成稱取各組分，將蓖麻油、聚氧乙烯蓖麻油和甘油在60℃條件下混合均勻，然后將環孢菌素A溶解在混合物中。加入適量純化水，剪切乳化得到初乳，進而用高壓均質機均質6小時(壓力約180,000kPa)，隨后用卡波姆水溶液調節粘度到2.6-3.5cp；再用氫氧化鈉溶液調節到pH6.2-8；隨后，加入處方量苯扎氯銨，用純化水補至1000ml，制得的產品用0.45μm的微孔濾膜過濾。經測定所制得的微乳乳滴的平均粒徑為86nm。
實施例9處方組成環孢素A 0.5g蓖麻油 6g聚氧乙烯氫化蓖麻油 15g卡波姆(Pemulen) 0.05g甘油 26g氫氧化鈉 適量苯扎氯銨 0.05g純化水 適量制成 1000ml制備方法按照處方組成稱取各組分，將蓖麻油、聚氧乙烯蓖麻油和甘油在60℃條件下混合均勻，然后將環孢菌素A溶解在混合物中。加入適量純化水，剪切乳化得到初乳，進而用高壓均質機均質4小時(壓力約140,000kPa)，隨后用卡波姆水溶液調節粘度到2.6-3.5cp；再用氫氧化鈉溶液調節到pH6.2-8；隨后，加入處方量苯扎氯銨，用純化水補至1000ml，制得的產品用0.45μm的微孔濾膜過濾。經測定所制得的微乳乳滴的平均粒徑為51nm。
實施例10處方組成環孢素A 0.5g蓖麻油 6g聚氧乙烯蓖麻油 15g卡波姆(1342)0.05g甘油26g氫氧化鈉適量苯扎氯銨0.05g純化水 適量制成1000ml
制備方法按照處方組成稱取各組分，將蓖麻油、聚氧乙烯蓖麻油和甘油在60℃條件下混合均勻，然后將環孢菌素A溶解在混合物中。加入適量純化水，剪切乳化得到初乳，進而用高壓均質機均質4小時(壓力約140,000kPa)，隨后用卡波姆水溶液調節粘度到2.6-3.5cp；再用氫氧化鈉溶液調節到pH6.2-8；隨后，加入處方量苯扎氯銨，用純化水補至1000ml，制得的產品用0.45μm的微孔濾膜過濾。經測定所制得的微乳乳滴的平均粒徑為60nm。
權利要求
1.一種環孢菌素A眼用微乳制劑，其組成為(以1000ml微乳制劑中的含量計)環孢素A 0.005g-5g油相0.06g-30g乳化劑 0.3g-50g增粘劑 0.0g-1.0g甘油26g抑菌劑 0.0g-0.5g氫氧化鈉適量純化水 適量
2.根據權利要求1所述的環孢菌素A眼用微乳制劑，其特征在于油相為蓖麻油或三辛酸癸酸甘油酯。
3.根據權利要求1所述的環孢菌素A眼用微乳制劑，其特征在于乳化劑為聚氧乙烯蓖麻油或聚氧乙烯氫化蓖麻油。
4.根據權利要求1所述的環孢菌素A的眼用微乳制劑，其特征在于環孢菌素A與油相的重量比為0.02～0.12。
5.根據權利要求1所述的環孢菌素A眼用微乳制劑，其特征在于油相與乳化劑的重量比為0.5～2。
6.根據權利要求1所述的環孢菌素A眼用微乳制劑，其特征在于乳滴平均粒徑小于100nm，90％粒徑累積值小于等于200nm。
7.權利要求1所述的環孢菌素A眼用微乳制劑的制備方法，其特征在于采用剪切—高壓均質工藝，其操作步驟為將油相、乳化劑、甘油混合均勻，然后將環孢菌素A溶解在混合物中，加入適量純化水，剪切乳化得到初乳，進而用高壓均質機均質，隨后用增粘劑水溶液調節粘度，再用氫氧化鈉溶液調節pH，最后加入處方量抑菌劑，用純化水補至足量，制得的產品用0.45μm的微孔濾膜過濾，即得。
8.根據權利要求7所述的環孢菌素A眼用微乳制劑的制備方法，其特征在于高壓均質的壓力大于等于100,000kPa，均質時間為1-20小時。
全文摘要
本發明涉及一種環孢菌素A眼用微乳制劑及其制備方法，該微乳制劑由環孢素A、油相、乳化劑、增粘劑、甘油、抑菌劑、氫氧化鈉、純化水配制，經剪切－高壓均質工藝制備而成，其特點在于采用安全、無刺激性的非離子表面活性劑聚氧乙烯蓖麻油或聚氧乙烯氫化蓖麻油作為乳化劑，主要輔料還包括甘油及蓖麻油或三辛酸癸酸甘油酯。本發明微乳制劑乳滴平均粒徑小于100nm，90％粒徑累積值不大于200nm，具有對眼部無刺激性及毒副作用，制劑質量穩定等優點。
文檔編號A61K38/12GK1686533SQ20051002464
公開日2005年10月26日 申請日期2005年3月25日 優先權日2005年3月25日
發明者甘勇, 甘莉, 王昕 , 沈競康, 朱春柳 申請人:中國科學院上海藥物研究所, 上海醫藥(集團)有限公司