專利名稱：加工微生物生產的環狀寡肽的方法
加工微生物生產的環狀寡肽的方法本發明涉及加工微生物生產的、非極性環狀寡肽的方法，和環孢菌素A和甲基叔丁基醚的新型溶劑化物，所述方法包含以下步驟a)用不與水混合的液體含醚提取劑提取在微生物生產中積聚的全部發酵液或醪液，其中提取劑的量足夠與全部發酵液一起形成兩相系統。環狀寡肽特別是十一肽，是早就知道的微生物代謝物之一。在十一肽中，特別是環孢菌素變得越來越重要。環孢菌素特別是環孢菌素A，是珍貴的藥物活性物質，其可作為免疫抑制劑使用， 特別是在器官移植中。環孢菌素還適于治療疾病，例如糖尿病和牛皮癬，和許多自身免疫疾病，例如類風濕性關節炎和慢性炎癥。由于其對人免疫缺陷病毒(HIV)的抑制作用，環孢菌素特別是環孢菌素A也適用于對抗由HIV引起的疾病。此外，環孢菌素特別是環孢菌素A 已顯示在涉及癌細胞對化學治療劑例如長春新堿或柔紅霉素的致敏中具有藥物作用。環孢菌素特別是環孢菌素A的神經保護和再生性能也可用于多種神經性適應癥，例如阿爾茨海默氏病、肌萎縮側索硬化和帕金森病。如上所述，環狀十一肽例如環孢菌素可通過微生物過程制備。具體來說，環孢菌素A可通過真菌物種菌株即柱孢霉菌(Cylindrocarpon Iucidum Booth)或真菌物種菌株即膨大彎頸霉(Tolypocladium inflatum Gams)制備。此彎頸霉屬真菌物種菌株最初被認為是多孢木霉(Trichoderma polysporum)真菌物種菌株，在美國農業部(北方研究及開發部)(United States Department of Agriculture (Northern Research and Development Division), Peoria, IL, U. S. A)保藏,編號為 NRRL 8044。前一種真菌物種菌株即柱孢霉菌也在美國農業部(北方研究及開發部)Peoria，IL，U. S. A保藏， 編號為NRRL 5760。用于環孢菌素特別是環孢菌素A的微生物制備的其他菌株為真菌物種菌株Tolypocladium geodes,柱抱彎頸霄(Tolypocladium cylindrosporum)禾口彎頸霄屬物種LeA3 (Tolypocladium sp. LeA3)，后一種菌株依照布達佩斯條約在荷蘭霉菌微生物中央局(Central Office for Mold Cultures in Holland)的存放處保藏，編號為CBS 630.92。通過微生物過程的環孢菌素的大規模生產具有重要意義。為此，已經進行了許多試驗通過發現和培養所述真菌物種或新的真菌物種的高效菌株改進微生物生產。上述菌株是這些努力的示例。然而，在環孢菌素的大規模微生物生產中，重要的不僅是高效的發酵過程，還有對發酵得到的代謝物的有效加工。根據從例如DOS 2455859和DD-B-298276中得到的從全部發酵液即培養液中分離環孢菌素特別是環孢菌素A的方法，有可能通過過濾或離心從培養液中分離具有產物的生物質，或加工全部發酵液，即不分離生物質。根據第一種加工變型，優選用甲醇或丙酮重復提取包括代謝物的分離的生物質， 將分離的提取物優選的濃縮為水性殘留物，優選的用例如氯乙烯或氯仿提取幾次。優選的相應的也提取從生物質分離的培養濾出液。根據第二種不分離生物質的加工變型，特別使用上述溶劑即氯乙烯或氯仿提取培養液即全部發酵液，濃縮幾次后分離的有機相在填充不同洗脫液的不同固定相柱上層析以用于進一步加工。考慮使用kphadex LH-20作為固定相柱材料和甲醇作為洗脫液，以及氧化鋁作為柱材料和甲苯/乙酸乙酯作為洗脫液。相應的層析處理也可在第一種加工類型中使用，從氯乙烯或氯仿提取物收集的殘留物通過柱材料即硅膠組合氯仿洗脫液和kphadex LH-20柱材料組合甲醇洗脫液進行純化，進一步被分離為期望的產物，優選的為環孢菌素A。與這些以前已知的加工方法相比，(本發明的)目的是提供技術上有優勢的、與環境相容和高效的加工方法，其用于微生物生產的環狀寡肽，特別是十一肽例如環孢菌素，并具有非常好的產物產量和純度。具體來說，目的是降低應用的有機溶劑數量和獲得其再循環能力，從而使加工方法特別在生態學方面更有效。通過提供根據本發明的用于加工微生物生產的、非極性環狀寡肽的方法達到此目的，所述方法包含以下步驟a)用不與水混合的液體含醚提取劑提取在微生物生產中積聚的全部發酵液，其中提取劑的量足夠與全部發酵液一起形成兩相系統。根據本發明的方法可加工優選的具有5至15個肽鍵的微生物生產的、非極性環狀寡肽。根據本發明，將術語“寡肽”理解為包含特定數量肽鍵的有機化合物，優選的只具有 2個連續的被2個中間碳原子分隔的環系統氮原子。優選的通過本發明的加工方法分離非極性環狀8-13個氨基酸的寡肽，更優選十一肽。此方法特別適用于加工微生物生產的、非極性環狀十一肽，例如環孢菌素，特別是環孢菌素A。根據本發明，必須將作為親脂性化合物在25°C具有< 0. lg/L水的水溶性的環狀寡肽，特別是十一肽，例如環孢菌素理解為非極性的。通過上述特定真菌物種菌株進行所述產物的微生物生產是本領域技術人員熟知的。德國公開印刷物對55859不僅在第3-4頁公開了真菌菌株NRRL 5760和NRRL 8044的培養，還在第4-5頁和實施例1描述了生產環孢菌素的發酵過程。此方法也應用于在WO 94/16091的第3_5頁公開的彎頸霉屬物種LeA3菌株的培養，WO 94/16091的實施例1和2描述了使用此真菌生產環孢菌素的發酵過程。其他微生物方法特別的在 DD-B-298276，EP-A-0507968, US 5156960 中公開。根據本發明，可通過提取從在微生物生產中積聚的培養液即全部發酵液中得到期望的產物。為此，將全部發酵液與不與水混合的液體含醚提取劑混合，其中提取劑的量足夠與全部發酵液一起形成兩相系統。本領域技術人員已知在2個共存的液相中，發酵過程中的固體顆粒也存在上述系統中，其被包含在水相。根據本發明，將不與水混合的液體提取劑理解為在20°C與水具有至少一個混溶性區的提取劑。在所述區域，液體提取劑與水至少不完全的混合或在水中不完全可溶，從而出現相的分離。優選的，根據本發明使用的這些不與水混合的含醚提取劑具有最大0. 9g/cm3的密度，優選0. 6-0. 85g/cm3的密度，更優選的0. 7-0. 8g/cm3,分別在20°C測量。優選的，含醚提取劑基本上由一種或多種醚組成，更優選的由至少一種具下述通式的醚組成R1-O-R2
其中，R1和&獨立的代表線性或分支的具有C1至C5的烷基，和殘基隊和&中至少一個具有至少3個C原子，優選的至少4個C原子。特別優選的可用于提取的醚具有至少1種選自二異丙醚、二正丙醚、二叔丁醚、二異丁醚、甲基叔丁基醚、乙基叔丁基醚、丙基叔丁基醚和正丁基叔丁基醚的醚，特別優選使用甲基叔丁基醚。因此，本發明的另一個主題也涉及優選的具有在20°C測量最大0.9g/cm3密度的不與水混合的液體含醚提取劑作為從微生物生產中積聚的所有發酵液中提取微生物生產的、 非極性環狀寡肽，優選十一肽，更優選環孢菌素，最優選環孢菌素A的方式的用途。優選的上述所列的醚以指示的量用于根據本發明的此用途以與全部發酵液形成兩相系統。優選的在pH7至9，優選7. 5至8. 5提取全部發酵液，特別是當環孢菌素，更優選的環孢菌素A已被分離和加工時。為了加快相分離，可以足夠的量在全部發酵液中加入已知的水溶性濕潤劑，例如基于聚丙烯酸酯的濕潤劑。優選的進行幾次提取。更優選的，使用含醚提取劑優選的提取2次全部提取液。優選使用不與水混合的含醚提取劑在室溫，更優選的在20至30°C提取全部發酵液。全部發酵液的提取可在傳統儀器中進行，分離水相后，合并在提取中收集的具有生物質的提取物用于進一步加工。因此，方法步驟a)之后優選的進行另一個方法步驟b)，根據步驟b)在提取物中存在的殘留水含量降至低于以重量計的1%，優選的低于以重量計的0.3%。在降低殘留水含量之前，提取物優選的用水溶液，優選的用水洗滌以任選的去除存在的生物質殘留物。為了降低用此方法任選純化的提取物中的殘留水含量，有可能進行共沸蒸餾。就此點而言，不僅將提取物中的殘留水含量降低至期望的程度，而且微生物生產的產物，優選環孢菌素，更優選環孢菌素A的濃度也增加了。在此濃縮中將環孢菌素的含量調節至優選的以重量計的 10 至 35%。作為步驟b)中共沸蒸餾的結果，有可能不僅將提取物中的殘留水含量調節至期望的低水含量，而且將提取物濃度調節為對加工產物后續結晶有利的濃度，優選的將所述產物結晶為環孢菌素-醚-溶劑化物。已發現當殘留水含量低于以重量計的1 %，特別是低于以重量計的0.3%時，環孢菌素以環孢菌素-醚-溶劑化物形式結晶，特別是環孢菌素A 以環孢菌素A-醚-溶劑化物形式的結晶顯著更好，得到易于過濾的幾乎無色、白色的環孢菌素-醚-溶劑化物結晶。已經非常純的環孢菌素-醚-溶劑化物結晶的易于過濾能力額外易化和縮短了整個加工方法。相應的，根據本發明的加工微生物生產的產物，優選環孢菌素，更優選環孢菌素A 的方法包含另外的方法步驟c)，根據步驟c)通過將在步驟b)中濃縮的幾乎沒有殘留水含量的提取物冷卻至-10°C至15°C的溫度，優選的_5°C至10°C的溫度以得到醚溶劑化物產物，優選環孢菌素-醚-溶劑化物的結晶。優選的，當結晶不溶于幾乎沒有殘留水含量的濃縮提取物時，不需要加入有機溶劑以結晶出環孢菌素-醚-溶劑化物結晶，因為通過冷卻濃縮的提取物已經可以得到可以很好過濾的幾乎無色、白色的結晶。在適當的情況下，可以用在其中結晶僅緩慢溶解的有機溶劑洗滌結晶，優選環孢菌素-醚-溶劑化物結晶以用于進一步純化。在適當的情況下，在合適的已知溶劑中通過已知的層析純化和結晶可將環孢菌素-醚-溶劑化物結晶分離為環孢菌素A-Z (就此點而言還可見W097/46575，EP0725076, EP 0888382)。相應的，本發明的另一個主題是結晶環孢菌素-醚-溶劑化物在環孢菌素，優選環孢菌素A大規模生產中的用途。特別的，根據本發明得到的結晶環孢菌素-醚-溶劑化物晶體適于此大規模生產。令人驚訝的，使用根據本發明的含醚提取劑提取全部發酵液，特別是與降低殘留水含量的步驟結合后能夠結晶具有良好濾過性和高純度的環孢菌素-醚-溶劑化物結晶。 因此，顯著易化了整個加工方法。本發明特別優選的實施方案涉及加工微生物生產的、非極性環孢菌素，優選環孢菌素A的方法，其包含以下步驟a)用不與水混合的液體含醚提取劑提取在微生物生產環孢菌素中積聚的全部發酵液，其中提取劑的量足夠與全部發酵液形成兩相系統，b)將提取物中溶解的殘留水含量降低至低于以重量計的1%，優選低于以重量計的0.3%，其中在合適的情況下，在降低此殘留水含量之前，可以用水溶液洗滌步驟a)中得到的提取物，和c)將環孢菌素結晶為環孢菌素-醚-溶劑化物，其中優選的在結晶前，將步驟b) 中得到的提取物濃縮至占全部提取物以重量計10至25%的環孢菌素含量，為了結晶將濃縮提取物冷卻至-10°C至15°C的溫度，優選_5°C至10°C的溫度。用于單個方法步驟的上述反應條件同樣適用于根據本發明優選的已經由微生物生產的非極性環孢菌素的加工，特別是應用于環孢菌素A的加工和分離。這也適用于應用的含醚提取劑，優選上述通式的醚。因此，根據本發明優選的加工方法可得到易于過濾的幾乎無色、白色環孢菌素-醚-溶劑化物結晶。此外，這些結晶特別適于被分離為環孢菌素A-Z，通過已知方式的進一步結晶和/ 或使用已知柱材料組合已知合適洗脫劑的層析處理。觀察到在環孢菌素A-醚-溶劑化物結晶中顯著排除了在其他方法中很難分離的異環孢菌素A。因此，本發明的另一個主題涉及包含低于以重量計0.05%異環孢菌素A，優選包含以重量計0. 04至0. 05%異環孢菌素A的環孢菌素A。根據本發明的加工方法可得到的環孢菌素A還具有相對低含量的環孢菌素H和環孢菌素T。因此本發明的另一個主題為環孢菌素A，其中其環孢菌素H和環孢菌素T的總含量低于以重量計的0. 5 %，優選以重量計的0. 1-0. 4%。同樣的，本發明的另一個主題涉及包含以重量計0. 04至0. 005%異環孢菌素A的環孢菌素A，其中環孢菌素H和環孢菌素T的額外總含量為以重量計0. 01至4%。具有低含量副產物的環孢菌素A優選的可通過對根據本發明得到的環孢菌素 A-甲基叔丁基醚-溶劑化物結晶的根據本發明的加工和進一步處理得到。
通過對非極性、微生物生產的環孢菌素的創造性、優選加工方法，因此有可能得到環孢菌素-醚-溶劑化物結晶，所述結晶不僅具有高于90%，優選> 95%的良好純度和產量，還具有非常良好的結晶易處理性，因為至少90%的結晶具有> 10 μ m的結晶大小，粒度分布的中位數為約60 μ m。為了測量粒度分布，3xlg樣品在60mL水中分散，使用Malvern 公司的“Mastersizer 2000”測量儀器在加入分散單元Hydro 2000S后在2000rpm攪拌速度下測量。使用儀器制造商的“Fraimhofer”模式用于評估。上述值為3次所述測量的平均值。因此本發明的另一個主題是結晶環孢菌素A-甲基叔丁基醚-溶劑化物，其至少 90 %的結晶具有> 10 μ m的結晶大小，其中優選的大小分布中位數在30 μ m至100 μ m之間，優選40μπι至80μπι之間。如已經指出的，根據本發明的方法特別適用于加工微生物生產的結晶環孢菌素 A-甲基叔丁基醚-溶劑化物形式的環孢菌素Α。有可能通過X-光粉末衍射圖明確分析所述結晶。X-光粉末衍射圖(XRPD)在AXS Bruker D_8 X-光粉末衍射儀上得到，使用環境條件下的以下記錄參數管陽極銅；發電機電壓40kV ；發電機電流40mA，初始角度 2° 2-θ ；結束角度40° 2-θ ；增量0. 01° 2-θ ；每次增量時間2秒。2-θ值的一般精度為士 0.1° 2-θ的范圍。因此，在大多數X-光衍射儀上在標準條件下發現的在 5. 0° 2- θ的衍射峰(頂點)可能出現在4. 9和5. 1° 2-θ之間。因此本發明的另一個主題是結晶環孢菌素A-甲基叔丁基醚-溶劑化物，其具有包含 7.0° +/-0.1°，8. 2° +/-0.1°，11.0° +/-0.1° 和 20. 5 ° +/-0.1° 的 2Θ 角頂點(峰)，特別另外包含 7. 3 ° +/-0. 1 °，11. 8 ° +/-0. 1 °，13. 3 ° +/-0. 1 ° 和 16.5° +/-0.1°的2 θ角頂點的X-光粉末衍射圖。本發明也涉及以下主題1.加工微生物生產的、非極性環狀寡肽的方法，其包含以下步驟a)用在25°C不與水混合的液體含醚提取劑提取在微生物生產中積聚的全部發酵液，其中提取劑的量足夠與全部發酵液形成兩相系統。2.根據主題1的方法，其中非極性、環狀寡肽為非極性十一肽。3.根據主題2的方法，其中非極性十一肽為環孢菌素，優選環孢菌素A。4.根據主題1至3中任一項的方法，其中含醚提取劑基本上由一種或多種醚組成。5.根據主題3或4的方法，其中其中含醚提取劑基本上由一種或多種醚組成，及所述方法包含另外的步驟b)將提取物中溶解的殘留水含量降低至低于以重量計的1%，優選低于以重量計的 0. 3%。6.根據主題5的方法，其中步驟b)通過共沸蒸餾進行。7.根據主題5或6的方法，其中在進一步用步驟b)加工前用水溶液洗滌步驟a) 中得到的提取物。8.根據主題5至7中任一項的方法，其中將含環孢菌素的提取物濃縮至環孢菌素含量占總提取物質量的以重量計10% -以重量計35%。9.根據主題1至8中任一項的方法，其中使用的醚為至少一種以下通式的醚
R1-O-R2其中，R1和&獨立的代表線性或分支的具有C1至C5的烷基，且殘基隊和&中至少一個具有至少3個C原子，優選的至少4個C原子。10.根據主題9的方法，其中使用的醚為至少一種選自二異丙醚、二正丙醚、二叔丁醚、二異丁醚、甲基叔丁基醚、乙基叔丁基醚、丙基叔丁基醚和正丁基叔丁基醚的醚。11.根據主題5至10中任一項的方法，其中所述方法包含另外的步驟c)將非極性環狀寡肽結晶為醚溶劑化物產物。12.根據主題5至10中任一項的方法，其中所述方法包含另外的步驟c)將環孢菌素結晶為環孢菌素-醚-溶劑化物。13.根據主題11或12的方法，其中將濃縮的提取物冷卻至_10°C至15°C的溫度以用于步驟C)。14.根據主題12或13的方法，其中當環孢菌素-醚-溶劑化物結晶僅在其中緩慢溶解時，用該有機溶劑洗滌根據步驟c)得到的環孢菌素-醚-溶劑化物結晶。15.根據主題1至14中任一項的方法，其中用含醚提取劑提取全部發酵液幾次，優選2次。16.根據主題1至15中任一項的方法，其中在提取時全部發酵液具有7至9，優選 7. 5 至 8. 5 的 pH。17.根據主題1至16中任一項的方法，其特征在于使用含醚提取劑在室溫，優選在 20至30°C進行提取。18.根據主題12至17中任一項的方法，其特征在于通過重結晶和/或層析處理將環孢菌素-醚-溶劑化物分離為單獨的環孢菌素A-Z。19.結晶環孢菌素A-甲基叔丁基醚-溶劑化物，其具有包含7.0° +/-0.1°， 8.2° +/-0.1°，11.0° +/-0.1° 和 20.5° +/-0.1° 的 2 θ 角頂點(峰)，特別另外包含 7.3° +/-0.1°，11.8° +/-0.1°，13.3° +/-0.1° 和 16.5° +/-0.1° 的 2Θ 角頂點的 X-光粉末衍射圖。20.結晶環孢菌素A-甲基叔丁基醚-溶劑化物，其中至少90%結晶具有大于 10 μ m的結晶大小(通過激光衍射測量，Malvern Mastersizer 2000)。21.環孢菌素A，其包含以重量計低于0.05%的異環孢菌素A，優選包含以重量計 0. 04-0. 005%的異環孢菌素A。22.環孢菌素A，其中其環孢菌素H和環孢菌素T的總含量低于以重量計的0. 5%， 優選以重量計的0. 1-0.4%。23.包含以重量計0.04-0. 005%異環孢菌素A的環孢菌素A，其中環孢菌素H和環孢菌素τ的額外總含量為以重量計的0. 1-0. 4%。24.結晶環孢菌素-醚-溶劑化物在環孢菌素大規模生產中的用途。25.根據主題對的用途，用于排除副產物，即異環孢菌素A，環孢菌素H和環孢菌素T。26.在25°C不與水混合的液體含醚提取劑在從全部發酵液中提取微生物生產中積聚的非極性環狀寡肽，優選環孢菌素，更優選環孢菌素A中的用途。附圖描述
圖1 結晶環孢菌素A-甲基叔丁基醚-溶劑化物的X-光粉末衍射2 結晶環孢菌素A-甲基叔丁基醚-溶劑化物的紅外光譜
實施例以下實施例詳細描述了本發明的特定實施方案；然而，它們無意限制本發明。實施例1 從發酵液中提取環孢菌素A如通過發酵例如膨大彎頸霉也可得到2000g含環孢菌素A的發酵液，使用2000ml 甲基叔丁基醚(MTBE)在4000ppm Clariant MD07/049聚丙烯酸酯存在下分別提取2次。 在分液漏斗中分離醚相并合并。在分液漏斗中用200ml具有pH約7的水洗滌含環孢菌素 A的醚相一次，在過濾后通過共沸蒸餾在約53°C濃度濃縮醚相以得到150g/kg的環孢菌素濃度。之后將溫度降低至恰好低于沸點的值，保持此溫度2小時，通過更換新蒸餾頭使MTBE 選出。之后，在正常壓力下在53°C濃縮溶液以得到300g/kg的環孢菌素濃度。在共沸蒸餾前為以重量計約1.4%的殘留水含量此時低于以重量計的0. 1%。在120分鐘內小心的將溶液從53°C冷卻至45°C，在另外60分鐘內冷卻至40°C，在另外60分鐘內冷卻至30°C，60 分鐘內冷卻至0°C。得到理論總產量為約82%的白色結晶環孢菌素A-MTBE溶劑化物。圖 2顯示了所得結晶的紅外光譜，圖1顯示了所得結晶的粉末X-光衍射圖(XRPD)。干涉顯微鏡分析顯示了高度結晶物質，具有平均約65 μ m結晶粒度的大、雙折射結晶。實施例2 從發酵液中大規模提取環孢菌素A510kg含環孢菌素A的發酵液使用510L甲基叔丁基醚(MTBE)分別提取2次， 同時加入2. ^cg Clariant MD07/049聚丙烯酸酯。醚相在300L分離器中貫穿進給 (throughfeed)進行分離并合并。用700L具有pH約7的純水洗滌含環孢菌素A的醚相一次，在分離器中再次分離一次相，在1000L薄層蒸發器中在約53°C通過共沸蒸餾濃縮醚相以得到100g/kg的環孢菌素濃度。之后將溫度降低至恰好低于沸點的值，保持此溫度2小時，通過更換新蒸餾頭使MTBE選出。之后，在正常壓力下在53°C濃縮溶液以得到300g/kg 的環孢菌素濃度。在共沸蒸餾前為以重量計約1.4%的殘留水含量此時低于以重量計的 0.1%。在120分鐘內小心的將溶液從53°C冷卻至45°C，在另外60分鐘內冷卻至40°C，在另外60分鐘內冷卻至30°C,60分鐘內冷卻至0°C。得到理論總產量為約87%的8. 55kg白色結晶環孢菌素A-MTBE溶劑化物。異環孢菌素A含量為以重量計的0. 008%，環孢菌素H 和環孢菌素T的總含量為以重量計的0.觀％，與使用醋酸丁酯的提取方法相比，這些污染物的含量有非常顯著的降低。
權利要求
1.加工微生物生產的、非極性環狀寡肽的方法，其包含以下步驟a)用在25°C不與水混合的液體含醚提取劑提取在微生物生產中積聚的全部發酵液， 其中提取劑的量足夠與全部發酵液形成兩相系統。
2.根據權利要求1的方法，其中非極性環狀寡肽為環孢菌素A。
3.根據權利要求1或2的方法，其中含醚提取劑基本上由甲基叔丁基醚組成，及所述方法包含另外的步驟b)將提取物中溶解的殘留水含量降低至低于以重量計的1%，優選低于以重量計的 0.3%，更優選低于以重量計的0. 15%。
4.根據權利要求3的方法，其中步驟b)通過共沸蒸餾進行。
5.根據權利要求3至4中任一項的方法，其中非極性環狀寡肽為環孢菌素A，及所述方法包含另外的步驟c)將環孢菌素結晶為環孢菌素A-甲基叔丁基醚-溶劑化物。
6.結晶環孢菌素A-甲基叔丁基醚-溶劑化物，其具有包含7.0°+/-0.1°， 8.2° +/-0.1°，11.0° +/-0.1° 和 20.5° +/-0.1° 的 2Θ 角頂點(峰)，特別另外包含 7.3° +/-0.1°，11. 8° +/-0.1°，13. 3° +/-0.1° 和 16. 5° +/-0.1° 的2Θ 角頂點的 X-光粉末衍射圖。
7.結晶環孢菌素A-甲基叔丁基醚-溶劑化物，其中至少90%結晶具有大于10μ m的晶粒大小。
8.包含以重量計0.04-0. 005%異環孢菌素A的環孢菌素A，其中環孢菌素H和環孢菌素T的額外總含量為以重量計的0. 1-0. 4%。
9.結晶環孢菌素-醚-溶劑化物在環孢菌素大規模生產中的用途。
10.根據權利要求9的用途，用于排除副產物異環孢菌素A，環孢菌素H和環孢菌素T。
全文摘要
本發明涉及加工微生物生產的、非極性環狀寡肽的方法，其包含以下步驟a)用不與水混合的液體含醚提取劑提取在微生物生產中產生的全部發酵液，其中提取劑的量足夠與全部發酵液形成兩相系統，本發明還涉及新的環孢菌素A和甲基叔丁基醚的溶劑化物。
文檔編號C30B7/06GK102164944SQ200980137840
公開日2011年8月24日 申請日期2009年7月29日 優先權日2008年7月29日
發明者S·貝特爾 申請人:桑多斯股份公司