專利名稱：去甲斑蝥素緩釋微球及其制備方法
技術領域：
本發明屬納米材料和生物醫藥技術領域，具體涉及一種去甲斑蝥素緩釋微球及其制備方法。
背景技術：
去甲斑蝥素是我國首先合成的新型抗腫瘤藥物，它同時具有的提高白細胞、保護肝細胞、調節免疫等作用使其日益受到重視。相信隨著分子生物學技術的發展，其抗癌作用的分子機制將逐步得到闡明。然而.由于去甲斑蝥素仍有一定的臟器毒性，限制了其臨床使用的劑量，影響了抗癌效果；所以，開發新的高效低毒衍生物或研制增效減毒新劑型是去甲斑蝥素進一步推廣使用的有效途徑，大量資料顯示，包裹率高和粒徑小是降低毒性，提高療效的必要條件。目前，國內已經上市的去甲斑蝥素制劑有普通注射液、去甲斑蝥素片、去甲斑蝥酸鈉氯化鈉注射液等，這些產品不具備生物降解性，也沒有良好的緩釋性能，仍然存在毒性高，需頻繁服藥的缺點。
孫銘等采用可降解的聚乳酸-聚乙醇酸共聚物(PLGA)材料作輔料，以超聲乳化法和去溶劑固化法制成去甲斑蝥素抗腫瘤藥物靜脈制劑。首先形成含有藥物的PLGA微液滴，再利用聚合物電性能加入的凝聚劑，使液滴凝膠化制成超微小的納米粒子。經高速離心分離并充分洗滌，制得的納米粒子，將其分裝冷凍保存即可。該法利用聚合物的電性能形成微球，需要加入凝聚劑，故操作方法較為復雜。(孫銘，張立等.去甲斑蝥素納米控釋制劑抗腫瘤的實驗研究[J].腫瘤學雜志，2001年7(6)期第321～325頁。)張愛國等用溶劑揮發法制得的去甲斑蝥素/聚乳酸微球具有肺靶向緩釋作用。該方法是采用溶劑揮發法，但包裹的親水性藥物效果欠佳。(張愛國，楊金巨.去甲斑蝥素靶向性微球的制備及其小鼠體內分布[J].山東醫藥工業，2000年第19(3)期第10～11頁。)陳堅等報道采用一種新型的藥物輔助材料泊洛沙姆(P407)作為藥物控釋載體，制成去甲斑蝥素-泊洛沙姆407(NCTD-P407)緩釋制劑。用該方法得到的緩釋微球釋放時間比較短。(陳堅，陳喆等.去甲斑蝥素-泊洛沙姆407緩釋制劑局部注射治療原發性肝癌25例[J].安徽中醫學院學報，2000年19(1)期第5～7頁。)程宇慧等報道，用乳化固化法制備了去甲斑蝥酸鈉/白蛋白微球。去甲斑蝥酸鈉微球的平均大小為0.43±0.12μm。用該法制備的微球粒徑比較大，在400nm左右。(程宇慧，李栗等.去甲斑蝥酸鈉白蛋白微球的研究[J].要學學報，1993年第28(5)期第384～388頁。)國外對去甲斑蝥素的研究主要是針對藥理的研究，對于劑型的研究仍為空白。
發明內容
本發明的目的在于提出一種去甲斑蝥素緩釋微球及其制備方法。
本發明提出的一種去甲斑蝥素緩釋微球，包裹的藥物為去甲斑蝥素，藥物的載體為可生物降解的聚合物，微球的粒徑在150nm以下，穩定釋放60個小時以上。
本發明中，所述可生物降解的聚合物為聚乳酸(PLA)、聚(乳酸-乙二醇)(PLA-PEG)、聚(乳酸-乙醇酸)(PLGA)、聚(乳酸-乙醇酸-乙二醇)(PLGA-PEG)、聚己內酯、聚(己內酯-乳酸)，聚羥基烷基酸酯、聚β-羥基丁酸酯之一種。
本發明中，所述可生物降解的聚合物的重均分子量為5000-50000。
本發明中提出的去甲斑蝥素緩釋微球的制備方法，具體步驟如下聚合物的二氯甲烷或者乙酸乙酯溶液作為油相，加入表面活性劑的去甲斑蝥素的水溶液作為水相，水相與油相兩者混合，攪拌，形成初乳；將該初乳加入到含有聚乙烯醇的水溶液中，攪拌或者蒸發，得到復乳，再將復乳進行透析，除去未包封藥物，最后將其冷凍干燥成粉，密封保存即可；具體條件為聚合物在二氯甲烷中的濃度為1-20mg/ml，在乙酸乙酯中的濃度為1-30mg/ml；去甲斑蝥素在水溶液中濃度為3.0-20.0mg/ml；表面活性劑在水相中濃度為20-70mg/ml；形成初乳時，油相與水相的體積比為2∶1-10∶1；形成初乳時攪拌的轉速為5000-30000轉/分，時間為1-30分鐘；水相與油相混合時，溫度為2-30℃；聚乙烯醇水溶液濃度為0.3g/ml-3g/ml；初乳與聚乙烯醇水溶液的體積比為1∶4-1∶40。
本發明中，在水相中，所述表面活性劑為失水山梨醇脂肪酸酯類、聚氧乙烯(20)失水山梨醇脂肪酸酯類或者聚乙烯醇之一種。具體可以為司班80、吐溫80、聚乙烯醇(PEA)等。
本發明中，所述聚乙烯醇分子量為7000-14000。
本發明所采用的聚合物，不僅具有生物可降解性，而且提高了親水性，并發現可以通過調節疏水和親水鏈段的組成來控制降解速度、親疏水性以及相對分子量等。以聚(乳酸-乙二醇)為例，該共聚物具有親水性和柔軟性，可用作藥物控釋體系中的表面活性劑、微球表面修飾劑。另外，以PEG-PLA嵌段共聚物制備的微球由于表面的親水性羥基存在，能降低巨噬細胞的作用，從而提高在血液中的循環時間并提高靶向性。
本發明的優點在于制備操作簡單，對水溶性藥物包封率高，可獲得穩定性藥物緩釋微球，所獲得的微球具有可生物降解性，無粘連，微球為光滑球形，具有核殼結構，包封率為10-50％，且釋放穩定，在60個小時以上，緩釋性能可調，可滿足更多的使用要求。
具體實施例方式
下面結合實例作進一步詳細說明實施例1聚合物采用聚(乳酸-乙二醇)，其中聚乙二醇分子量為4000，乳酸與乙二醇共聚比例為5/1，聚合物投料量為0.1505g，溶解在60ml二氯甲烷中形成油相；40mg去甲斑蝥素溶解在12ml水中，加入表面活性劑吐溫80，其加入量為0.8g，形成水相；將油相與水相混合，溫度控制在28℃，高速攪拌7000轉/分，攪拌時間18分鐘，形成初乳；向初乳中加入0.3g/mlPVA水溶液120ml，攪拌，形成復乳，再將復乳置于透析袋中進行透析，除去未包封藥物，最后將其冷凍干燥成粉，密封保存；所得去甲斑蝥素緩釋微球粒徑為96.9±91nm，包封率為30％，穩定釋放達到72小時。
實施例2聚合物采用聚(乳酸-乙二醇)，其中乙二醇分子量為6000，乳酸與乙二醇共聚比例為5/1，聚合物投料量為0.4020g，溶解在60ml二氯甲烷中形成油相；80mg去甲斑蝥素溶解在12ml水中，加入表面活性劑司班80，其加入量為0.4g，形成水相；將油相與水相混合，溫度控制在5℃，高速攪拌25000轉/分，攪拌時間3分鐘，形成初乳；向初乳中加入1g/mlPVA水溶液150ml，攪拌，形成復乳，再將復乳置于透析袋中進行透析，除去未包封藥物，最后將其冷凍干燥成粉，密封保存；所得去甲斑蝥素緩釋微球粒徑為61.6±1nm，包封率為23.5％。
實施例3形成初乳的水油比1∶10時，其它條件同實施例1，所得微球粒徑為94.2±52nm，去甲斑蝥素包封率為27.6％，穩定釋放長達70個小時以上。
實施例4聚合物采用聚(乳酸-乙二醇)，其中乙二醇分子量為8000，乳酸與乙二醇共聚比例為5/1，聚合物投料量為1.4020g，溶解在60ml乙酸乙酯中形成油相；120mg去甲斑蝥素溶解在6ml水中，加入表面活性劑吐溫80，其加入量為0.3g，形成水相；將油相與水相混合，溫度控制在15℃，高速攪拌7500轉/分，攪拌時間18分鐘，形成初乳；向初乳中加入到3mg/ml聚乙烯醇水溶液180ml，旋轉蒸發，形成復乳，再將復乳置于透析袋中進行透析，除去未包封藥物，最后將其冷凍干燥成粉，密封保存；所得去甲斑蝥素緩釋微球粒徑為81.6±1nm，包封率為33.6％。
實施例5聚合物采用聚(乳酸-乙醇酸)，聚合物的分子量為14000，聚合物投料量為0.5080g，溶解在60ml乙酸乙酯中形成油相；40mg去甲斑蝥素溶解在6ml水中，加入表面活性劑聚乙烯醇，其加入量為0.2g，形成水相；將油相與水相混合，溫度控制在10℃，高速攪拌9000轉/分，攪拌時間15分鐘，形成初乳；向初乳中加入2g/ml聚乙烯醇水溶液240ml，攪拌，形成復乳，再將復乳置于透析袋中進行透析，除去未包封藥物，最后將其冷凍干燥成粉，密封保存；所得去甲斑蝥素緩釋微球粒徑為89.0±15nm，包封率為40.6％。
實施例6聚合物采用聚己內酯，聚合物的分子量為8000，聚合物投料量為0.6020g，溶解在36ml二氯甲烷中形成油相；40mg去甲斑蝥素溶解在4ml水中，加入表面活性劑吐溫80，其加入量為0.15g，形成水相；將油相與水相混合，溫度控制在12℃，高速攪拌10000轉/分，攪拌時間15分鐘，形成初乳；向初乳中加入3g/mlPVA水溶液400ml，攪拌，形成復乳，再將復乳置于透析袋中進行透析，除去未包封藥物，最后將其冷凍干燥成粉，密封保存；所得去甲斑蝥素緩釋微球粒徑為101.0±13nm，包封率為35.7％。
實施例7聚合物采用聚β-羥基丁酸酯，聚合物的分子量為6000，聚合物投料量為0.4052g，溶解在20ml二氯甲烷中形成油相；40mg去甲斑蝥素溶解在10ml水中，加入表面活性劑吐溫80，其加入量為0.6g，形成水相；將油相與水相混合，溫度控制在15℃，高速攪拌8000轉/分，攪拌時間20分鐘，形成初乳；向初乳中加入到3g/mlPVA水溶液210ml，形成復乳，再將復乳置于透析袋中進行透析，除去未包封藥物，最后將其冷凍干燥成粉，密封保存；所得去甲斑蝥素緩釋微球粒徑為98.0±15nm，包封率為27.3％。
權利要求
1.一種去甲斑蝥素緩釋微球，其特征在于包裹的藥物為去甲斑蝥素，藥物的載體為可生物降解的聚合物，緩釋微球的粒徑在150nm以下，穩定釋放60個小時以上。
2.根據權利要求1所述的去甲斑蝥素緩釋微球，其特征在于所述可生物降解的聚合物為聚乳酸、聚(乳酸-乙二醇)、聚(乳酸-乙醇酸)、聚(乳酸-乙醇酸-乙二醇)、聚己內酯、聚(己內酯-乳酸)，聚羥基烷基酸酯、聚β-羥基丁酸酯之一種。
3.根據權利要求1或2所述的去甲斑蝥素緩釋微球，其特征在于可降解的聚合物的重均分子量為5000-50000。
4.一種如權利要求1所述的去甲斑蝥素緩釋微球的制備方法，其特征在于具體步驟如下聚合物的二氯甲烷或者乙酸乙酯溶液作為油相，加入表面活性劑的去甲斑蝥素的水溶液作為水相，水相與油相兩者混合，攪拌，形成初乳；將該初乳加入到含有聚乙烯醇的水溶液中，攪拌或者蒸發，得到復乳，再將復乳進行透析，除去未包封藥物，最后將其冷凍干燥成粉，密封保存即可；具體條件為聚合物在二氯甲烷中的濃度為1-20mg/ml，在乙酸乙酯中的濃度為1-30mg/ml；去甲斑蝥素在水溶液中濃度為3.0-20.0mg/ml；表面活性劑在水相中濃度為20-70mg/ml；形成初乳時，油相與水相的體積比為2∶1-10∶1；形成初乳時，攪拌的轉速為5000-30000轉/分，時間為1-30分鐘；水相與油相混合時，溫度為2-30℃；聚乙烯醇水溶液濃度為0.3g/ml-3g/ml；初乳與聚乙烯醇水溶液的體積比為1∶4-1∶40。
5.根據權利要求4所述的去甲斑蝥素緩釋微球的制備方法，其特征在于所述表面活性劑為失水山梨醇脂肪酸酯類、聚氧乙烯(20)失水山梨醇脂肪酸酯類或者是聚乙烯醇之一種。
6.根據權利要求4所述的去甲斑蝥素緩釋微球的其制備方法，其特征在于所述聚乙烯醇分子量為7000-14000。
全文摘要
本發明屬納米材料和生物醫藥技術領域，具體涉及一種去甲斑蝥素緩釋微球及其制備方法。本發明以可生物降解的聚合物為藥物載體，以去甲斑蝥素為載藥，制備一種可生物降解的納米緩釋微球。具體是聚合物的二氯甲烷或者乙酸乙酯溶液作為油相，加入表面活性劑的去甲斑蝥素的水溶液作為水相，水相與油相兩者混合，攪拌，形成初乳；將該初乳加入到含有聚乙烯醇的水溶液中，攪拌或者蒸發，得到復乳，再將復乳進行透析，除去未包封藥物，最后將其冷凍干燥成粉，密封保存即可。得到的緩釋微球具有可生物降解性，成球性好，具有核殼結構，粒徑在150nm以下，包封率為10－50％，并且具有很好的緩釋性能。
文檔編號A61K9/16GK1723889SQ20051002777
公開日2006年1月25日 申請日期2005年7月15日 優先權日2005年7月15日
發明者任杰, 郁曉, 任天斌, 袁華 申請人:同濟大學