以知母總皂苷元為活性成分的藥物組合物及其制備方法和用途的制作方法

專利名稱：以知母總皂苷元為活性成分的藥物組合物及其制備方法和用途的制作方法
技術領域：
知母為百合科植物知母Anemarrhena asphodeloides Bge.的干燥根莖，知母總皂苷元由知母藥材經水解提取的總皂苷元精制而成，具有清熱瀉火，生津潤燥，止渴除煩作用。但關于以知母總皂苷元為活性成分的藥物組合物及其醫藥用途未見報道。

發明內容
本發明提供了以知母總皂苷元為活性成分的藥物組合物本發明提供了知母總皂苷元在制備治療或預防更年期綜合征的藥物中的用途。
本發明提供了知母總皂苷元在制備治療或預防女性更年期綜合征和男性更年期綜合征的藥物中的用途。
本發明提供了知母總皂苷元在制備治療或預防骨質疏松的藥物中的應用。
本發明提供了知母總皂苷元在制備治療或預防血管性癡呆的藥物中的應用。
本發明提供的藥物組合物，知母總皂苷元中含有薩爾薩皂苷元和知母皂苷元等，總皂苷元含量在50％以上，優選在70％以上。
本發明所述的知母總皂苷元由知母總皂苷經酸水解制得，知母總皂苷與酸的比例為1∶20～100，水解反應溫度為65～95℃，反應時間0.5～2小時。酸可以是鹽酸、硫酸或高氯酸中的一種或幾種。知母總皂苷是由知母藥材加入5～10倍量的20％～80％乙醇提取后，用正丁醇萃取或大孔吸附樹脂柱分離獲得。
知母總皂苷元用于上述用途時的有效劑量范圍為12～1200mg。
具體實施例方式
制備例1制備知母總皂苷元取知母藥材，加入5～10倍量的20％～80％乙醇，優選7～8倍量，乙醇濃度優選50％～60％，提取知母總皂苷，可提取1次，也可提取2～3次。合并提取液，濃縮，回收乙醇。殘留液體用正丁醇萃取知母總皂苷，回收正丁醇后的膏狀物經過干燥，獲得知母總皂苷(A)。也可以用回收乙醇的殘留液體加水稀釋后，通過大孔吸附樹脂柱，再用水洗脫至無明顯成分后，用50％～95％乙醇洗脫，回收含乙醇的洗脫液，濃縮，干燥，獲得知母總皂苷(A)。
取A樣品，用稀鹽酸或稀硫酸水溶液水解，即1份A，加20～100份的稀鹽酸或稀硫酸，稀酸重量百分比濃度為1～10％。A樣加熱攪拌水解，加熱溫度控制在65～95℃，水解反應時間控制在0.5～2小時之間，濾取沉淀物，干燥，得知母總皂苷元(B)。B主要含有薩爾薩皂苷元，知母總皂苷元。經紫外分光光度法檢測，B中總皂苷元含量在50％以上。
薩爾薩皂苷元 知母皂苷元試驗例1 知母總皂苷元對去卵巢大鼠內分泌功能紊亂的治療作用1材料知母總皂苷元按制備例1制備。
乙烯雌酚上海利生制藥廠生產；動物普通級Wistar大鼠，雌性，體重250g-280g，山東省天然藥物工程技術研究中心實驗動物中心提供，合格證號魯動質字200106005號；血清雌二醇放免測定試劑盒天津九鼎醫學生物工程有限公司。
2方法大鼠60只，按體重分為假手術組、模型組、乙烯雌酚組、知母總皂苷元小劑量組(2mg/kg)、知母總皂苷元中劑量組(50mg/kg)、知母總皂苷元大劑量組(100mg/kg)；大鼠進行切除雙側卵巢手術，制作大鼠去卵巢模型。假手術不切除卵巢。手術7天后開始i.g.給藥，1次/天，連續28天。末次給藥后24h，大鼠水合氯醛麻醉，腹主動脈采血，檢測血漿促腎上腺皮質激素(ACTH)，血清促黃體生成素(LH)，雌二醇(E2)含量。數據以X±s表示，組間t-test檢驗。
3結果如表1所示，去卵巢大鼠血漿ACTH明顯高于假手術組，血清E2含量顯著低于假手術組，LH明顯高于假手術組；知母總皂苷元能明顯抑制去卵巢大鼠ACTH、LH的升高和E2的降低。
表1知母總皂苷元對去卵巢大鼠內分泌功能紊亂的影響

**P＜0.01VS假手術組；△P＜0.05，△△P＜0.01，VS△△△P＜0.01模型對照組試驗例2知母總皂苷元對去卵巢小鼠中樞神經系統的保護作用1材料知母總皂苷元由山東省天然藥物工程技術研究中心提供。
動物清潔級級昆明種小鼠，雌性，體重22g～25g，由山東省天然藥物工程技術研究中心實驗動物中心提供，動物合格證魯動質字200106003號；更年安天津樂仁堂制藥廠生產；小鼠自主活動記錄儀中國醫學科學院生產。
2方法與結果2.1知母總皂苷元對去卵巢小鼠睡眠時間的影響60只小鼠，按體重隨機分為假手術組、模型組、更年安組、知母總皂苷元小劑量組(4mg/kg)、知母總皂苷元中劑量組(100mg/kg)、知母總皂苷元大劑量組(200mg/kg)；對小鼠進行切除雙側卵巢手術，制作小鼠去卵巢模型。假手術不切除卵巢。手術7天后開始i.g.給藥，1次/天，連續28天。末次給藥后24h，各組小鼠分別i.p 35mg/kg戊巴比妥鈉，以翻正反射消失為評價標準，觀察其催眠入睡時間及睡眠持續時間。數據以X±s表示，組間t-test檢驗。
結果如表2所示，知母總皂苷元明顯延長小鼠經戊巴比妥鈉催眠的睡眠時間。
表2知母總皂苷元對去卵巢小鼠睡眠時間的影響

**P＜0.01VS假手術組；△P＜0.05，△△P＜0.01，VS△△△P＜0.01模型對照組2.2知母總皂苷元對苯丙胺引起去卵巢小鼠自主活動增加的影響60只小鼠，按體重隨機分為假手術組、模型組、更年安組、知母總皂苷元小劑量組(4mg/kg)、知母總皂苷元中劑量組(100mg/kg)、知母總皂苷元大劑量組(200mg/kg)；對小鼠進行切除雙側卵巢手術，制作小鼠去卵巢模型。假手術不切除卵巢。手術7天后開始i.g.給藥，1次/天，連續28天。末次給藥后24h，各組小鼠分別i.p苯丙胺3mg/kg，20min后在自主活動記錄儀中記錄其5min內自主活動次數。數據以X±s表示，組間t-test檢驗。結果如表3所示，知母總皂苷元能抑制苯丙胺引起的去卵巢小鼠自主活動的增加。
表3知母總皂苷元對苯丙胺所致去卵巢小鼠自主活動的影響

**P＜0.01VS假手術組；△P＜0.05，△△P＜0.01，VS△△△P＜0.01模型對照組2.3知母總皂苷元對4-氨基吡啶誘發去卵巢小鼠激怒發生率的影響120只小鼠，按體重隨機均分為假手術組、模型組、更年安組、知母總皂苷元小劑量組(4mg/kg)、知母總皂苷元中劑量組(100mg/kg)、知母總皂苷元大劑量組(200mg/kg)；對小鼠進行切除雙側卵巢手術，制作小鼠去卵巢模型。假手術不切除卵巢。手術7天后開始i.g.給藥，1次/天，連續28天。末次給藥后24h，各組小鼠分別i.p 6mg/kg 4-氨基吡啶，放入8×8×6cm3的木盒內，觀察10min內小鼠激怒(活動增多、豎耳對峙、相互追逐、抓打撕咬)發生率。
結果如表4顯示，知母皂苷元劑量依賴性減少去卵巢小鼠因4-氨基吡啶誘發激怒的發生率。
表4知母總皂苷元對4-氨基吡啶所致去卵巢小鼠激怒發生率的影響

**P＜0.01VS假手術組；△P＜0.05，△△P＜0.01，VS△△△P＜0.01模型對照組2.4知母總皂苷元對去卵巢小鼠跳臺試驗的影響60只小鼠，按體重隨機分為假手術組、模型組、更年安組、知母總皂苷元小劑量組(4mg/kg)、知母總皂苷元中劑量組(100mg/kg)、知母總皂苷元大劑量組(200mg/kg)；對小鼠進行切除雙側卵巢手術，制作小鼠去卵巢模型。假手術不切除卵巢。手術7天后開始i.g.給藥，1次/天，連續28天。末次給藥后24h，進行小鼠跳臺試驗測定，計錄平臺停留期(T)及錯誤次數(N)。數據以X±s表示，組間t-test檢驗。
結果如表5顯示，模型組小鼠較正常對照組小鼠平臺停留期明顯縮短，錯誤次數明顯增加，知母總皂苷元兩個劑量組可顯著延長小鼠平臺停留期，減少錯誤次數。
表5知母總皂苷元對去卵巢小鼠跳臺試驗的影響

***P＜0.01VS假手術組；△P＜0.05，△△P＜0.01VS模型對照組試驗例3知母總皂苷元對雄性去勢大鼠內分泌功能紊亂的治療作用1材料知母總皂苷元由山東省天然藥物工程技術研究中心提供。
動物普通級Wistar大鼠，雌性，體重250g-280g，山東省天然藥物工程技術研究中心實驗動物中心提供，合格證號魯動質字200106005號。
血清睪酮放免測定試劑盒天津九鼎醫學生物工程有限公司。
2方法大鼠50只，按體重分為假手術組、模型組、知母總皂苷元小劑量組(2mg/kg)、知母總皂苷元中劑量組(50mg/kg)、知母總皂苷元大劑量組(100mg/kg)；對大鼠進行去勢手術，制作大鼠去勢模型手術7天后開始i.g.給藥，1次/天，連續28天。末次給藥后24h，大鼠水合氯醛麻醉，腹主動脈采血，檢測血清促黃體生成素，睪酮含量。數據以X±s表示，組間t-test檢驗。
3結果結果如表6所示，知母總皂苷元能明顯抑制去勢大鼠促黃體生成素和睪酮的降低。
表6知母總皂苷元對雄性去勢大鼠內分泌功能紊亂

*P＜0.05，**P＜0.01VS正常對照組；△P＜0.05，△△P＜0.01VS模型對照組試驗例4知母總皂苷元對氫化可的松所致陽虛小鼠中樞神經系統及抗應激能力的影響1材料知母總皂苷元由山東省天然藥物工程技術研究中心提供。
動物清潔級級昆明種小鼠，雌性，體重22g～25g，由山東省天然藥物工程技術研究中心實驗動物中心提供，動物合格證魯動質字200106003號。
小鼠自主活動記錄儀中國醫學科學院生產2方法與結果
2.1知母總皂苷元對氫化可的松所致陽虛小鼠睡眠時間的影響50只小鼠，按體重隨機分為正常對照組、模型組、知母總皂苷元小劑量組(4mg/kg)、知母總皂苷元中劑量組(100mg/kg)、知母總皂苷元大劑量組(200mg/kg)；小鼠肌注氫化可的松1mg/只/天，連續10天，制作小鼠陽虛模型。正常對照組注射等容量生理鹽水。同時動物i.g.給藥，1次/天，連續28天。末次給藥后24h，各組小鼠分別i.p 35mg/kg戊巴比妥鈉，以翻正反射消失為評價標準，觀察其催眠入睡時間及睡眠持續時間。數據以X±s表示，組間t-test檢驗。
結果如表7所示，知母總皂苷元明顯延長陽虛小鼠經戊巴比妥鈉催眠的睡眠時間。
表7知母總皂苷元對氫化可的松所致陽虛小鼠睡眠時間的影響

**P＜0.01VS正常對照組；△P＜0.05，△△P＜0.01，VS△△△P＜0.01模型對照組2.2知母總皂苷元對氫化可的松所致陽虛小鼠抗應激能力的影響按2.1所述方法給藥、造模，末次給藥后24h，每只小鼠尾部負重為體重10％的鉛塊，放入水深25cm，水溫(36±0.5)℃的水糟中，從入水開始至鼻孔沉下水面所需時間(min)計為小鼠游泳時間。數據以X±s表示，組間t-test檢驗。
按2.1所述方法給藥、造模，末次給藥后24h，將小鼠放入盛有鈉石灰的25ml密閉玻璃瓶內，每瓶放小鼠一只，瓶蓋周圍涂凡士林，小鼠缺氧死亡時間表示為常壓耐缺氧時間。數據以X±s表示，組間t-test檢驗。
結果如表8所示，知母總皂苷元明顯延長陽虛小鼠游泳時間和存活時間表8知母總皂苷元對氫化可的松所致陽虛小鼠抗應激能力的影響

**P＜0.01VS正常對照組；△P＜0.05，△△P＜0.01，VS△△△P＜0.01模型對照組試驗例5知母總皂苷元對維甲酸所致雌性大鼠骨質疏松癥的治療作用1.材料知母總皂苷元由山東省天然藥物工程技術研究中心提供。
維甲酸膠囊，重慶華邦制藥公司生產，批號990701；低鈣飼料，中國醫學科學院動物所生產。
普通級Wistar大鼠，雌性，3～4月齡，體重150～210g，由山東省天然藥物工程技術研究中心動物實驗中心提供。合格證號魯動質字200106005號。
SX-2.5-10型馬福爐(天津市中環實驗電爐有限公司生產)；BP210S型電子分析天平(德國sartorius公司生產)；QDR-4000型雙能線骨密度測定儀(美國HOLOGIC公司生產)；CSS-1101C電子萬能試驗機(長春試驗機研究所生產)。
2.方法2.1大鼠骨質疏松模型的制備、動物分組及用藥取健康3～4月齡雌性大鼠，隨機分為6組正常對照組，骨質疏松模型組，知母總皂苷元小劑量組(2mg/kg)、知母總皂苷元中劑量組(50mg/kg)、知母總皂苷元大劑量組(100mg/kg)，每組10只。除正常對照組外，各組大鼠均以維甲酸70mg/kg劑量灌胃給藥，1次/日，連續三周。造模三周后，停服維甲酸，各組動物分別按上述藥物劑量灌胃給藥。1次/日，連續給藥一個月。正常對照組和骨質疏松模型組給予與給藥組等容量的生理鹽水(10ml/kg)。飼養室溫度22℃～25℃，濕度50％～70％，喂以低鈣飼料(含鈣量＜0.3％)，自由飲水。
2.2大鼠活動能力的測定末次給藥24h后，取大鼠置于實驗盒中，記錄5min內大鼠自主活動次數。
2.3大鼠骨密度測定末次給藥24h后，以10％水合氯醛(350mg/kg，i.p.)麻醉大鼠，置于QDR-4000型雙能線骨密度測定儀探頭下，仰位固定于檢測臺上，頭與身體呈直線，線球管對準身體縱軸中點，選擇大鼠骨質疏松敏感區域單側(左側)股骨中點(F50)的皮質骨和第三腰椎骨測定骨密度。
2.4大鼠骨指數、骨礦成分(骨Ca、P)的測定末次給藥24h后，取大鼠右側股骨于120℃烘箱中干燥2h，電子天平測定骨重量(W)、游標卡尺測定骨長(L)、骨直徑(D)，計算表觀線密度(W/L)，表觀面密度(W/LD)。將上述股骨置于800℃馬福爐中灰化8h，使骨呈白色粉末狀，稱灰重(Wash)，其灰重即為無機物質重量。用等離子光量計測定骨灰中鈣、磷等元素的含量，并計算骨灰分的灰分表觀線密度(Wash/L)及灰分表觀面密度(Wash/LD)。
2.5大鼠骨生物力學的測定末次給藥24h后，左側股骨、脛骨剔除肌肉和周圍組織，放入液體石蠟中7天之內測定其生物力學特征，用電子萬能試驗機做三點折斷試驗，參數為標定1/50，加載速度6mm/min，最大負荷200牛頓(N)，跨距20mm，描記負荷—變形曲線，計算最大負荷及結構強度(引起1mm變形需要的負荷，相當于曲線上的斜率)。
2.6數據統計數據以X±s表示，組間t-test檢驗。
3結果3.1知母總皂苷元對骨質疏松大鼠自主活動次數的影響由表9可見，與正常組相比，模型組大鼠自主活動次數顯著下降；知母總皂苷元各劑量組均能顯著提高骨質疏松大鼠自主活動次數。
表9知母總皂苷元對骨質疏松大鼠自主活動次數的影響

**P＜0.01VS正常組；△P＜0.05，△△P＜0.01VS模型組3.2知母總皂苷元對骨質疏松大鼠骨密度的影響由表10可見，與正常組相比模型組大鼠股骨密度和椎骨密度顯著下降，知母總皂苷元各劑量組均能顯著提高骨質疏松大鼠股骨密度和椎骨密度。
表10知母總皂苷元對骨質疏松大鼠骨密度的影響

**P＜0.01VS正常組；△P＜0.05，△△P＜0.01VS模型組3.3知母總皂苷元對骨質疏松大鼠骨指數的影響由表11可見，與正常組相比模型組大鼠股骨重量、長度、表觀線密度、表觀面密度均明顯下降，知母總皂苷元各劑量組均能顯著提高骨質疏松大鼠股骨密度和椎骨密度。
表11知母總皂苷元對骨質疏松大鼠股骨灰分指數的影響

**P＜0.01VS正常組；△P＜0.05，△△P＜0.01VS模型組3.4知母總皂苷元對骨質疏松大鼠骨礦成分含量的影響由表12可見，與正常組相比模型組大鼠股骨Ca、P含量顯著降低，知母總皂苷元各劑量組均能顯著提高骨質疏松大鼠股骨Ca、P含量。
表12知母總皂苷元對骨質疏松大鼠股骨灰分指數的影響

**P＜0.01VS正常組；△P＜0.05，△△P＜0.01VS模型組3.5知母總皂苷元對骨質疏松大鼠股骨、脛骨生物力學的測定由表13可見，與正常組相比模型組大鼠股骨和脛骨的最大負荷、結構強度顯著降低，知母總皂苷元各劑量組均能顯著提高骨質疏松大鼠股骨和脛骨的最大負荷、結構強度。
表13知母總皂苷元對骨質疏松大鼠股骨、脛骨生物力學的影響

**P＜0.01VS正常組；△P＜0.05，△△P＜0.01VS模型組試驗例6知母總皂苷元對切除睪丸所致大鼠腎虛骨質疏松癥的治療作用1.材料知母總皂苷元按制備例制備。
維甲酸膠囊，重慶華邦制藥公司生產，批號990701；低鈣飼料，中國醫學科學院動物所生產。
普通級Wistar大鼠，雄性，3～4月齡，體重150～210g，由山東省天然藥物工程技術研究中心動物實驗中心提供。合格證號魯動質字200106005號。
SX-2.5-10型馬福爐(天津市中環實驗電爐有限公司生產)；BP210S型電子分析天平(德國sartorius公司生產)；QDR-4000型雙能線骨密度測定儀(美國HOLOGIC公司生產)；CSS-1101C電子萬能試驗機(長春試驗機研究所生產)。
2.方法2.1大鼠骨質疏松模型的制備、動物分組及用藥動物隨機分為假手術組，骨質疏松模型組，知母總皂苷元小劑量組(2mg/kg)、知母總皂苷元中劑量組(50mg/kg)、知母總皂苷元大劑量組(100mg/kg)，每組10只。大鼠水合氯醛(350mg/kg，i.p.)麻醉，仰位固定，碘酒消毒陰囊部，沿陰囊正中縱行切開一小口，分開切口，卵圓形睪丸即露出，絲線結扎，在結扎線與睪丸之間剪下睪丸，縫合切口，用75％酒精棉球消毒。假手術組動物用同法剝離出睪丸，但不摘除，放回縫合。手術三周后各組動物分別按上述藥物劑量灌胃給藥。1次/日，連續給藥一個月。正常對照組和骨質疏松模型組給予與給藥組等容量的生理鹽水(10ml/kg)。飼養室溫度22℃～25℃，濕度50％～70％，喂以低鈣飼料(含鈣量＜0.3％)，自由飲水。
2.2大鼠活動能力的測定末次給藥24h后，取大鼠置于實驗盒中，記錄5min內大鼠自主活動次數。
2.3大鼠骨密度測定末次給藥24h后以10％水合氯醛(350mg/kg，i.p.)麻醉大鼠，置于QDR-4000型雙能線骨密度測定儀探頭下，仰位固定于檢測臺上，頭與身體呈直線，線球管對準身體縱軸中點，選擇大鼠骨質疏松敏感區域單側(左側)股骨中點(F50)的皮質骨和第三腰椎骨測定骨密度。
2.4大鼠骨指數、骨礦成分(骨Ca、P)的測定末次給藥24h后，取大鼠右側股骨于120℃烘箱中干燥2h，電子天平測定骨重量(W)、游標卡尺測定骨長(L)、骨直徑(D)，計算表觀線密度(W/L)，表觀面密度(W/LD)。將上述股骨置于800℃馬福爐中灰化8h，使骨呈白色粉末狀，稱灰重(Wash)，其灰重即為無機物質重量。用等離子光量計測定骨灰中鈣、磷等元素的含量，并計算骨灰分的灰分表觀線密度(Wash/L)及灰分表觀面密度(Wash/LD)。
2.5大鼠骨生物力學的測定末次給藥24h后，左側股骨、脛骨剔除肌肉和周圍組織，放入液體石蠟中7天之內測定其生物力學特征，用電子萬能試驗機做三點折斷試驗，參數為標定1/50，加載速度6mm/min，最大負荷200牛頓(N)，跨距20mm，描記負荷—變形曲線，計算最大負荷及結構強度(引起1mm變形需要的負荷，相當于曲線上的斜率)。
2.6數據統計數據以X±s表示，組間t-test檢驗。
3.結果3.1知母總皂苷元對骨質疏松大鼠自主活動次數的影響由表14可見，與正常組相比，模型組大鼠自主活動次數顯著下降；知母總皂苷元各劑量組均能顯著提高骨質疏松大鼠自主活動次數。
表14知母總皂苷元對骨質疏松大鼠自主活動次數的影響

**P＜0.01VS正常組；△P＜0.05，△△P＜0.01VS模型組
3.2知母總皂苷元對骨質疏松大鼠骨密度的影響由表15可見，與正常組相比模型組大鼠股骨密度和椎骨密度顯著下降，知母總皂苷元各劑量組均能顯著提高骨質疏松大鼠股骨密度和椎骨密度。
表15知母總皂苷元對骨質疏松大鼠骨密度的影響

**P＜0.01VS正常組；△P＜0.05，△△P＜0.01VS模型組3.3知母總皂苷元對骨質疏松大鼠骨指數的影響由表16可見，與正常組相比模型組大鼠股骨重量、長度、表觀線密度、表觀面密度均明顯下降，知母總皂苷元各劑量組均能顯著提高骨質疏松大鼠股骨密度和椎骨密度。
表16知母總皂苷元對骨質疏松大鼠股骨灰分指數的影響

**P＜0.01VS正常組；△P＜0.05，△△P＜0.01VS模型組3.4知母總皂苷元對骨質疏松大鼠骨礦成分含量的影響由表17可見，與正常組相比模型組大鼠股骨Ca、P含量顯著降低，知母總皂苷元各劑量組均能顯著提高骨質疏松大鼠股骨Ca、P含量。
表17知母總皂苷元對骨質疏松大鼠股骨灰分指數的影響

**P＜0.01VS正常組；△P＜0.05，△△P＜0.01VS模型組3.5知母總皂苷元對骨質疏松大鼠股骨、脛骨生物力學的測定由表18可見，與正常組相比模型組大鼠股骨和脛骨的最大負荷、結構強度顯著降低，知母總皂苷元各劑量組均能顯著提高骨質疏松大鼠股骨和脛骨的最大負荷、結構強度。
表18知母總皂苷元對骨質疏松大鼠股骨、脛骨生物力學的影響

**P＜0.01VS正常組；△P＜0.05，△△P＜0.01VS模型組試驗例7知母總皂苷元對東莨菪堿所致小鼠記憶獲得性障礙的影響1材料知母總皂苷元按制備例制備。
氫溴酸東莨菪堿上海禾豐制藥有限公司產品，批號為0005017。
哈伯因(石杉堿甲，Huperzine A)，河南竹林眾生制藥股份有限公司豫中制藥廠產品，批號為0008036。
YYE50小鼠跳臺儀，北京醫科大學儀器廠生產。
Y型水迷宮裝置，中國醫學科學院藥物所生產。
動物清潔級昆明種小鼠，雌雄各半，體重22g～25g，由山東省天然藥物工程技術研究中心實驗動物中心提供，動物合格證魯動質字200106003號。
2方法與結果2.1知母總皂苷元對東莨菪堿所致記憶獲得性障礙小鼠跳臺試驗的影響取小鼠60只，隨機分為正常對照組，模型對照組，知母總皂苷元小劑量組(4mg/kg)、知母總皂苷元中劑量組(100mg/kg)、知母總皂苷元大劑量組(200mg/kg)，哈伯因組(0.2mg·kg-1)，分別灌胃相應藥物，每天1次，連續30天。末次給藥后1h，小鼠腹腔注射東莨菪堿2mg/kg，正常對照組注射等容量生理鹽水。20min后按文獻潘思源，韓怡凡，徐秋萍，等.莨菪類生物堿對18、28及38日齡小鼠的行為和記憶障礙作用.中國藥理學報，1998，19(2)112～6所述小鼠跳臺試驗方法進行測定，記錄平臺停留期(T)及錯誤次數(N)。數據以X±s表示，組間t-test檢驗。
結果如表19所示，模型組小鼠較正常對照組小鼠平臺停留期明顯縮短，錯誤次數明顯增加，知母總皂苷元可顯著延長小鼠平臺停留期，減少錯誤次數。
表19知母總皂苷元對東莨菪堿所致記憶獲得性障礙小鼠跳臺試驗的影響

**P＜0.01vs正常對照組；△P＜0.05，△△P＜0.01vs模型對照組試驗例8知母總皂苷元對血管性癡呆大鼠學習記憶的影響1材料知母總皂苷元按制備例1制備。
尼莫地平片由正大青春寶藥業有限公司生產，批號000605，每片20mg。
硝普鈉由北京雙鶴現代醫藥技術有限責任公司生產，批號005071。
大鼠跳臺裝置，北京醫科大學儀器廠生產。
Y型水迷宮裝置，中國醫學科學院藥物所產品。
動物普通級Wistar大鼠，雌雄各半，體重250g-280g，山東省天然藥物工程技術研究中心實驗動物中心提供，合格證號魯動質字200106005號。
2方法與結果2.1知母總皂苷元對血管性癡呆大鼠跳臺試驗的影響取大鼠60只，隨機分為假手術組，模型組，尼莫地平組(10mg/kg)，知母總皂苷元小劑量組(2mg/kg)、知母總皂苷元中劑量組(50mg/kg)、知母總皂苷元大劑量組(100mg/kg)，分別灌胃相應藥物，每天1次，3天后按文獻周小青，劉旺華，李花，等.丹龍醒腦片對血管性癡呆大鼠學習記憶及腦組織興奮性氨基酸影響的實驗研究.湖南中醫學院學報，2002，22(2)4-7所述血管性癡呆大鼠模型建立方法，將水合氯醛麻醉的大鼠腹腔注射0.05％硝普鈉(5ml/kg)，常規消毒，分離雙側頸總動脈，用無創動脈夾夾閉，10min后，再通10min，再夾閉10min。再通后，傷口嚴格消毒，縫合，回籠室溫(27±0.5)℃飼養并灌胃相應藥物，每天1次，連續30天。假手術組麻醉及手術過程同模型組，但不阻斷雙側頸總動脈，不注射硝普鈉。
造模后第11天開始按文獻周小青，劉旺華，李花，等.丹龍醒腦片對血管性癡呆大鼠學習記憶及腦組織脂質過氧化和鈣超載的影響.湖南中醫學院學報，2002，22(3)1-5所述方法進行學習訓練。訓練前先將動物放入箱中自由活動3min，熟悉環境，然后將動物置于圓臺上，接通銅柵電源，記錄動物3min內錯誤次數(動物跳下圓臺次數)及受電擊總時間，作為學習訓練成績。24h后直接將動物置于圓臺上，記錄其放入至第1次下臺受到電擊的時間(潛伏期)、3min內錯誤次數及受電擊總時間，作為記憶測試成績。
數據以X±s表示，組間t-test檢驗。
結果如表20顯示，模型組大鼠的學習成績、記憶成績與假手術組相比，錯誤次數及受電擊時間顯著增多，潛伏期(記憶成績)明顯縮短。中、大劑量知母總皂苷元組、尼莫地平組與模型組比較，錯誤次數、受電擊時間均明顯減少；潛伏期(記憶成績)明顯延長。
表20知母總皂苷元對血管性癡呆大鼠跳臺試驗的影響

**P＜0.01vs假手術組；△P＜0.05，△△P＜0.01vs模型對照組
權利要求
1.以知母總皂苷元為活性成分的藥物組合物。
2.根據權利要求1所述的藥物組合物，知母總皂苷元中含有薩爾薩皂苷元，知母皂苷元，總皂苷元含量在50％以上。
3.根據權利要求2所述的藥物組合物，總皂苷元含量在70％以上。
4.根據權利要求1-3任一所述的藥物組合物，知母總皂苷元由知母總皂苷經酸水解制得，知母總皂苷與酸的比例為1∶20～100，水解反應溫度為65～95℃，反應時間0.5～2小時。
5.根據權利要求4所述的藥物組合物，酸可以是鹽酸、硫酸或高氯酸中的一種或幾種。
6.根據權利要求4所述的藥物組合物，知母總皂苷是由知母藥材加入5～10倍量的20％～80％乙醇提取后，用正丁醇萃取或大孔吸附樹脂柱分離獲得。
7.知母總皂苷元在制備治療或預防更年期綜合癥的藥物中的應用。
8.知母總皂苷元在制備治療或預防骨質疏松的藥物中的應用。
9.知母總皂苷元在制備治療或預防血管性癡呆的藥物中的應用。
10.根據權利要求7-9任一所述的應用，知母總皂苷元的有效劑量范圍為12～1200mg。
全文摘要
本發明提供了以知母總皂苷元為活性成分的藥物組合物，以及以知母總皂苷元為活性成分的藥物組合物的制備方法，本發明還提供了其在制備藥物方面的用途，具體提供了其在制備治療或預防更年期綜合癥、骨質疏松和血管性癡呆的藥物中的應用。
文檔編號A61P19/00GK1732955SQ20051008924
公開日2006年2月15日 申請日期2005年8月1日 優先權日2004年8月3日
發明者姜永濤, 田京偉, 孫芳, 馬雙剛, 白景, 范秀玉, 傅風華, 劉珂 申請人:山東綠葉天然藥物研究開發有限公司