專利名稱：：迷迭香酸在制備治療或預防肝纖維化和腎纖維化的藥物中的應用的制作方法
技術領域：
：本發明涉及一種藥物新用途，具體地涉及迷迭香酸在制備預防或治療肝纖維化和腎纖維化的藥物中的應用。
背景技術：
：肝纖維化是慢性肝病重要的病理特征。病毒、乙醇、自身免疫性疾病等病因均可引起肝細胞壞死、再生和持續性纖維增生，最終導致肝硬化。現已證實肝纖維化是可逆病變，肝硬化則是不可逆的。因此，在慢性肝病的治療過程中，肝纖維化的防治占有重要地位。腎纖維化(包括腎間質纖維化和腎小球硬化)是各種原因引起的腎臟損害最后階段的主要病理基礎，腎纖維化發生機制較為復雜，與多種因素有關，其中主要與細胞外基質細胞產生細胞的增殖和活化，血管活性物質、細胞因子以及細胞外基質轉換失衡有關，腎間質纖維化幾乎是所有原發或繼發腎臟疾病進展到終末期腎衰竭的共同途徑。迷迭香酸(Rosmarinicacid)的化學名為R(+)2-((3-(3，4-二羥基苯基-(-氧化-2-丙烯基)氧基)3，4-二羥基苯丙酸)。迷迭香酸是水溶性的多酚類化合物。具有抗炎、抗氧化活性、免疫抑制、抗血栓和抗血小板聚集作用等多種活性[劉鷹翔，計志忠.迷迭香酸藥理作用的研究進展，國外醫藥*植物分冊，1993，8(6):248~251.;陳淑珍，付陽平，等.迷迭香酸對大鼠中性粒細胞自由基生成和溶酶體釋放的影響，藥學學報，1999，34(12):881~885.;PeakeP.W.PussellB.A，MartynP，etal.The，inhibitoneffectofRosmarinicacidoncomplementinvolvestheC5convertase.IntJImmunoPharmacol13:853-857，1997.;鄒正午，徐理納，田金英.迷迭香酸抗血栓和血小板聚集作用，藥學學報，1993，28(4):241245.]。但迷迭香酸在制備預防或治療肝纖維化和腎纖維化的藥理作用未見報道。本發明人驚奇地發現迷迭香酸在預防或治療肝纖維化和腎纖維化方面有明顯的作用。基于此，本發明人發明了迷迭香酸在預防或治療肝纖維化和腎纖維化的應用。
發明內容本發明提供了迷迭香酸在制備預防或治療肝、腎纖維化的藥物中的應用。本發明提供了迷迭香酸在制備預防或治療肝纖維化的藥物中的應用。本發明提供了迷迭香酸在制備治療或預防腎纖維化藥物中的應用。本發明提供的藥物在用于肝纖維化和腎纖維化時，其注射時使用劑量范圍是50mg1500mg;優選50750mg，口服時使用劑量范圍是100mg3000mg;優選1001500mg。本發明還提供了由迷迭香酸和藥學上可接受的載體或輔料組成的藥物，該藥物可以以藥學常規方法制備成片劑、膠囊劑、滴丸劑、注射液、凍干粉針或注射用乳劑，優選以片劑、滴丸或凍干粉針形式存在。具體實施例方式實施例l迷迭香酸凍干粉針制備取迷迭香酸50.0g，加注射用水2000ml使其溶解，以NaOH調pH=5.5~7.5，加甘露醇8g，攪拌溶解，超濾，得到無熱源的澄清液，灌入10ml西林瓶中，2ml/只，按凍干粉針工藝凍干，制成每支含迷迭香酸50.0mg的凍干粉針。實施例2迷迭香酸片劑制備處方迷迭香酸糖粉乳糖羧甲基淀粉鈉3WPVPk3o水溶液硬脂酸鎂100.0g35.0g40.0g23.0g共制成1000片操作稱取處方量的迷迭香酸、糖粉、乳糖和羧甲基淀粉鈉充分混合均勻后過100目篩，加入3免PVPK3。水溶液適量制軟材，20目篩制粒，6(TC干燥3小時，18目篩整粒，加入處方量的硬脂酸鎂，混合均勻后淺凹沖壓片，調節片重約200mg，即得。試驗例l:迷迭香酸對肝纖維化的影響1.1藥品與試劑迷迭香酸由山東省天然藥物工程技術研究中心提供，含量95%以上，批號041205;文迪雅(馬來酸羅格列酮片，GlaxoSmithKline公司，批號051023)HA(透明質酸)、LN(層粘連蛋白)及PcIII(III型膠原)放免試劑盒購買于上海海研醫學中心；羥脯氨酸檢測試劑盒購自南京建成生物工程研究所。實驗動物普通級Wistar大鼠，雄性，體重150-200g,SD大鼠，山東綠葉天然藥物研究開發公司實驗動物中心提供，合格號SYXK(魯)20030020。1.2實驗方法大鼠130只，隨機分為13組，即正常對照組、模型組、羅格列酮組灌胃8mg/kg組、迷迭香酸靜脈注射2.5mg/kg組、迷迭香酸靜脈注射5rag/kg組、迷迭香酸靜脈注射25mg/kg組、迷迭香酸靜脈注射75mg/kg組、迷迭香酸靜脈注射150mg/kg組、迷迭香酸灌胃5mg/kg組、迷迭香酸灌胃10mg/kg組、迷迭香酸灌胃50mg/kg組、迷迭香酸灌胃150mg/kg組、迷迭香酸灌胃300mg/kg組，每組10只。大鼠肝纖維化模型復制及各組處置方法參考吳孟超等復制大鼠肝纖維化模型的方法吳孟超，楊廣順.大鼠肝硬變模型復制的研究.中華實驗外科雜志，1984，1(4):145—147，除正常對照組外，各組每3d每100g體重皮下注射40先四氯化碳油溶液0.3ml，首劑量加倍，正常對照組大鼠每3d皮下注射油溶液0.3nil/100g體重，6周后,各組開始給藥，連續給藥6周，給藥結束后用20%烏拉坦溶液腹腔注射麻醉，解剖，腹主動脈采血，留取肝組織，部分用10%中性福爾馬林溶液固定，24—48h內制石蠟塊。肝組織病理學檢查采用HE染色，纖維增生程度分為0-4級栗坤，趙玉珍，朱秋霜等.川芎嗪對老齡小鼠心、肝超氧化物歧化酶活力的影響.黑龍江醫藥科學，1998;21:4—5，對血清中HA(透明質酸)、LN(層粘連蛋白)及PcIIl(m型膠原)、及肝中HYP(羥脯氨酸)進行測定，HA、LN、PcIII、HYP按檢測試劑盒測定方法測定。1.3實驗結果病理學檢査正常對照組大鼠肝臟結構正常；模型組大鼠肝臟12周均出現明顯的纖維化；迷迭香酸各組中纖維化程度均較模型組輕。光鏡觀察HE常規染色和VG膠原染色肝組織切片顯示，肝纖維化模型對照組大鼠肝組織中可見肝細胞脂肪變性，壞死，炎細胞浸潤；匯管區內膠原纖維沉積，Heimy管增生；纖維結締組織增生明顯，纖維間隔增粗，并有典型假小葉形成。迷迭香酸治療組大鼠肝組織纖維結締組織增生程度減輕，纖維間隔變細，假小葉形成不明顯。對各組纖維增生程度分值進行秩和檢驗。結果見表l，迷迭香酸靜脈注射5mg/kg組、迷迭香酸靜脈注射25mg/kg組、迷迭香酸靜脈注射75mg/kg組、迷迭香酸靜脈注射150mg/kg組、迷迭香酸灌胃10mg/kg組、迷迭香酸灌胃50nig/kg組、迷迭香酸灌胃150mg/kg組、迷迭香酸灌胃300mg/kg組明顯降低纖維增生程度(與模型對照組比較，p〈0.05或0.01)。電鏡觀察正常對照組大鼠肝細胞間緊密相連，細胞內各種細胞器分布規整，結構典型。血竇排列整齊，Disse腔內可見肝貯脂細胞，細胞質內有脂滴。模型對照組大鼠肝組織中則出現典型的肝細胞損傷結構，相鄰肝細胞間隙增寬，肝細胞變性壞死，核固縮，細胞質內出現大小不等、分布不規則的脂滴。肝組織中存在輕重不等的纖維化病變。肝竇毛細血管化，Disse間隙內可見較多成纖維細胞(活化的肝貯脂細胞)，且周圍有大量膠原纖維沉積。匯管區內可出現大量的膠原纖維。迷迭香酸治療組中，肝細胞損傷有不同程度的減輕，肝細胞間隙較緊密，細胞質內脂肪小滴減少，細胞內結構趨向正常。肝纖維化病變不明顯，肝血竇和Disse間隙內膠原纖維沉積及成纖維樣細胞數量減少。對各組HA、LN、Pcffl、HYP進行T檢驗。結果見表2，迷迭香酸靜脈注射5mg/kg組、迷迭香酸靜脈注射25mg/kg組、迷迭香酸靜脈注射75mg/kg組、迷迭香酸靜脈注射150mg/kg組、迷迭香酸灌胃10mg/kg組、迷迭香酸灌胃50mg/kg組、迷迭香酸灌胃150mg/kg組、迷迭香酸灌胃300mg/kg組明顯降低HA、LN、PcIII、HYP水平(與模型對照組比較，p<0.05或0.01)。迷迭香酸灌胃150mg/kg組降低HA、LN、PcIII、HYP水平與迷迭香酸灌胃300mg/kg組比較，無顯著性差異；迷迭香酸靜脈注射75mg/kg組降低HA、LN、PcIII、HYP水平與迷迭香酸靜脈注射150mg/kg組比較，無顯著性差異。表1迷迭香酸對大鼠肝纖維化病理形態的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>與模型組比較，AP<0.05;"P<0.01。表2迷迭香酸對肝纖維化大鼠肝組織HYP含量及血清HA、LN及PCin含量的影響組別劑量證PCIIIHA(mg/kg)("g/L)(wg/L)"g/L)WU正常對照組——760±9014.2±2.840.7±7.531.3±6.9模型組NS1769±13042.6±8.5130.4±24.187.6±19.4羅格列酮ia81259±153"26.5±9.6"88.9±20.5"63.6±16.8"迷迭香靜脈2.51704±12438.2±7.8115.2±24.179.6±19.0注射組51630±110A34.2±7.6A106.3±23.4A68.3±17.9A251578土113"31.4±7.8"97.5±23.6"62.0±20.0"751'278士121"26.5±9.1"77.9±20.7"57.6±16.8"1501217土143"25.7±7.8"74.6±18.9"55.3±14.6"迷迭香酸灌51724±12138.0±7.5113.8±24.879.1±19.4胃組101614±121*33.7±7.3A104.3±26.4A69.3±16.9*501535±125"31.6±7.2"97.0±24.6"61.0±20.6"1501299±153"27.5±9.6"84.9±20.5"59.6±16.8"3001250±174"26.9±10.5"80.7±18.6"57.3±18.6"與模型組比較，<0.05;"P<0.01。試驗2迷迭香酸對單側輸尿管結扎大鼠腎間質纖維化的影響2.1材料迷迭香酸由山東省天然藥物工程技術研究中心提供，含量95%以上，批號041205;苯那普利，北京諾華制藥有限公司生產，批號040306;羥脯氨酸(HYP)試劑盒，南京建成生物公司，批號050906;纖維連結蛋白(FN)試劑盒購自上海生物制品所。實驗動物普通級Wistar大鼠，雄性，體重150-200g，SD大鼠，山東綠葉天然藥物研究開發公司實驗動物中心提供，合格號SYXK(魯)20030020。2.2試驗方法與結果大鼠130只，隨機分為13組，即假手術組、模型組、苯那普利組灌胃10mg/kg組、迷迭香酸靜脈注射2.5mg/kg組、迷迭香酸靜脈注射5mg/kg組、迷迭香酸靜脈注射25mg/kg組、迷迭香酸靜脈注射75mg/kg組、迷迭香酸靜脈注射150mg/kg組、迷迭香酸灌胃5mg/kg組、迷迭香酸灌胃10mg/kg組、迷迭香酸灌胃50呢/kg組、迷迭香酸灌胃150mg/kg組、迷迭香酸灌胃300mg/kg組，動物喂養1周，各大鼠以10%水合氯醛3.OmL/kg腹腔注射麻醉后，將大鼠右側臥位固定于手術臺上，剪毛后用碘酒、75%酒精消毒手術區，行左側腹切口，逐層切開皮膚、肌肉及腹壁各層，暴露并分離左側輸尿管，假手術組僅切開腹腔并游離左側輸尿管，但不結扎和剪斷，其他各組大鼠用4-0絲線結扎兩道，上一道結扎點位于左腎下極水平，然后在兩道結扎點間剪斷輸尿管，逐層縫合，術后10天10%水合氯醛麻醉后處死各組動物，取血，按纖維連結蛋白測定說明測定纖維聯接蛋白(FN)。生理鹽水反復灌洗后留取左側腎臟，腎組織經4%的多聚甲醛緩沖液固定。切取適量腎組織，按羥脯氨酸試劑盒測定說明測定羥脯氨酸。常規病理學檢査①肉眼檢查假手術組腎臟顏色鮮紅，表面光滑，包膜光澤，無粘連。其他各組腎臟體積增大，顏色蒼白，表面呈顆粒狀，類似人體大白腎，少數區域腎包膜粘連。②光鏡檢査假手術組腎單位結構清晰，腎小球囊無擴張或縮小，腎小管上皮細胞無明顯變性及壞死，管腔內無脫落上皮細胞或管型，間質中無血管擴張或炎細胞浸潤。模型對照組大片腎小管壞死，腎間質纖維細胞增生，腎小管擴張，內有大量棕黃色折光物質或壞死脫落的上皮細胞，腎小球數目減少，部分腎小球纖維化并與包曼氏囊壁粘連，囊腔消失。給藥各組病變與模型對照組類似，但均有不同程度的形態學改善，尤以迷迭香酸灌胃大劑量各組顯著，與模型對照組比較有明顯差異。對各組FN、HYP進行T檢驗。結果見表3，迷迭香酸靜脈注射5呢/kg組、迷迭香酸靜脈注射25mg/kg組、迷迭香酸靜脈注射75rag/kg組、迷迭香酸靜脈注射150mg/kg組、迷迭香酸灌胃10mg/kg組、迷迭香酸灌胃50mg/kg組、迷迭香酸灌胃150mg/kg組、迷迭香酸灌胃300mg/kg組明顯降低FN、HYPP水平(與模型對照組比較，p<0.05或0.01)。迷迭香酸灌胃150mg/kg組降低FN、HYP水平與迷迭香酸灌胃300mg/kg組比較，無顯著性差異；迷迭香酸靜脈注射75mg/kg組降低FN、HYP水平與迷迭香酸靜脈注射150mg/kg組比較，無顯著性差異。表3迷迭香酸對單側輸尿管結扎大鼠腎間質纖維化的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>權利要求1.迷迭香酸在制備治療或預防肝纖維化的藥物中的應用。2.迷迭香酸在制備治療或預防腎纖維化的藥物中的應用。3.根據權利要求1或2所述的應用，其可以注射給藥，也可以口服給藥。4.根據權利要求3所述的應用，其注射給藥劑量為50-1500mg,口服給藥劑量為100-3000mg。5.根據權利要求4所述的應用，注射給藥優選劑量為50-750mg，口服給藥優選劑量為100-1500mg。全文摘要本發明提供了迷迭香酸在制備治療或預防肝、腎纖維化的藥物中的應用。其可以口服給藥，也可以注射給藥，其注射給藥時給藥劑量為50-1500mg，口服給藥時給藥劑量為100-3000mg。文檔編號A61P1/16GK101095668SQ20061004537公開日2008年1月2日申請日期2006年6月29日優先權日2006年6月29日發明者曲桂武,田京偉,蔣王林申請人:山東綠葉天然藥物研究開發有限公司