專利名稱：Tc、的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種葡萄糖衍生物配合物及其制備方法，特別涉及一種99mTc、188Re或186Re標記的葡萄糖衍生物配合物及其制備方法。
背景技術：
葡萄糖是動物細胞的主要能量來源，葡萄糖代謝對于維持生物的正常生命功能起著重要作用。
目前，18FDG(18F-2-脫氧-2-氟-D-葡萄糖)這種正電子核素標記的葡萄糖類似物被廣泛地用于腫瘤的診斷，在臨床上具有重要意義。18FDG的腫瘤顯像機理是由于腫瘤細胞與正常細胞相比，生長活躍，細胞異常增殖，對能量需求大，糖酵解加速，因此，腫瘤對葡萄糖及其類似物的攝取比正常細胞更高，18FDG可以與葡萄糖一樣被腫瘤細胞膜上的葡萄糖轉運蛋白GLUTs(glucose transporters)通過易化擴散的方式轉運到細胞內，經HK(己糖激酶)磷酸化，在細胞內代謝為18FDG-6-PO4。但是，對于繼續進行糖代謝的酶即磷酸己糖變構酶、葡萄糖脫氫酶及葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)來說，18FDG-6-PO4不是最適合的底物，因而18FDG-6-PO4既不能像葡萄糖-6-磷酸一樣，在上述酶的作用下進入三羧酸循環，也不能經戊糖支路代謝，從而滯留在腫瘤細胞內可被探測到。
雖然18FDG在腫瘤診斷中顯示出很高的特異性和敏感性，但是存在著費用較高、需要醫用回旋加速器和PET顯像儀器(設備不普及)、半衰期較短(18F半衰期為108min)等缺陷。
楊大衛等人在《放射學》雜志2003年第226期第465-473頁(DavidJ.Yang，Chang-Guhn Kim，et alRadiology，2003，226465-473)公開了一種99mTc標記的葡萄糖類似物99mTc-EC-DG用于腫瘤的診斷。配位體EC-DG的結構是 但上述99mTc標記的葡萄糖類似物的缺點是腫瘤的絕對攝取值較低，同時腫瘤的攝取/血的攝取的比值較低，原因目前尚未確定。
因此研制一種價格低廉、方便易得、半衰期和能量均適宜、更高的靶/非靶比值、設備普及并且腫瘤攝取高的葡萄糖衍生物配合物作為腫瘤顯像劑就成為本技術領域急待解決的問題。
發明內容
本發明的目的之一是提供一種價格低廉、方便易得、半衰期和能量均適宜、更高的靶/非靶比值并且設備普及的用作腫瘤顯像劑的葡萄糖衍生物配合物——99mTc或188/186Re標記的葡萄糖衍生物配合物。
本發明的目的是通過以下技術方案達到的方案一一種99mTc、188Re或186Re標記的葡萄糖衍生物配合物，其核心為[99mTcO]3+、[188ReO]3+、[186ReO]3+、[99mTcN]2+、[188ReN]2+、[186ReN]2+、[99mTc(CO)3(H2O)3]1+、[188Re(CO)3(H2O)3]1+或[186Re(CO)3(H2O)3]1+，其配位體為下述通式(1)
方案二一種99mTc、188Re或186Re標記的葡萄糖衍生物配合物，其核心為[99mTcN]2+、[188ReN]2+或[186ReN]2+，其共配體為99mTcN-PNP、188ReN-PNP或186ReN-PNP，其配位體為下述通式(1)
所述PNP為下述結構之一 本發明的另一目的是提供上述99mTc、188Re或186Re標記的葡萄糖衍生物配合物的制備方法。
本發明的上述目的是通過以下技術方案達到的方案一一種99mTc、188Re或186Re標記的葡萄糖衍生物配合物的制備方法，其步驟如下
(1)葡萄糖衍生物的合成 (2)[99mTcN]2+、[188ReN]2+、[186ReN]2+核中間體的制備西林瓶中加入SDH(丁二酰二酰肼，結構是NH2NHCOCH2CH2CONHNH2)和PDTA(1，2-丙二胺四乙酸)，其結構如下
再加入適量NaOH和去離子水使之溶解，用HCl調pH＝7.4；加入Na99mTcO4或Na188Re O4或Na186Re O4溶液后，迅速加入SnCl2溶液，室溫下反應，得核中間體；(3)99mTc或188Re或186Re標記的葡萄糖衍生物配合物的制備調節步驟(2)所得核中間體的pH＝8.0，加入步驟(1)合成的葡萄糖衍生物的水-乙醇溶液，室溫下反應，得99mTc或188Re或186Re標記的葡萄糖衍生物配合物。
方案二一種99mTc、188Re或186Re標記的葡萄糖衍生物配合物的制備方法，其步驟如下(1)葡萄糖衍生物的合成
(2)[99mTcO]3+、[188ReO]3+、[186ReO]3+標記的葡萄糖衍生物配合物的制備在步驟(1)合成的葡萄糖衍生物的水溶液中加入Na99mTcO4、Na188Re O4或Na186Re O4溶液，迅速加入SnCl2溶液，調pH＝8.0～8.5，分別得[99mTcO]3+、[188ReO]3+、[186ReO]3+標記的葡萄糖衍生物配合物。
方案三一種99mTc、188Re或186Re標記的葡萄糖衍生物配合物的制備方法，其步驟如下(1)葡萄糖衍生物的合成
(2)[99mTc(CO)3(H2O)3]1+、[188Re(CO)3(H2O)3]1+或[186Re(CO)3(H2O)3]1+核中間體的制備將酒石酸鈉鉀和碳酸鈉加入到西林瓶中，再迅速加入硼氫化鈉，加水，壓蓋密封，通一氧化碳；加入Na99mTcO4或Na188Re O4或Na186Re O4溶液，在再80℃下反應，得核中間體；(3)99mTc或188Re或186Re標記的葡萄糖衍生物配合物的制備調節步驟(2)所得核中間體的pH＝8.0，加入步驟(1)合成的葡萄糖衍生物的溶液，65～75℃反應，再冷卻至室溫，得99mTc或188Re或186Re標記的葡萄糖衍生物配合物。
方案四一種99mTc、188Re或186Re標記的葡萄糖衍生物配合物的制備方法，其步驟如下
(2)葡萄糖衍生物的合成 (2)[99mTcN]2+、[188ReN]2+或[186ReN]2+核心中間體的制備西林瓶中加入SDH(丁二酰二酰肼，結構是NH2NHCOCH2CH2CONHNH2)和PDTA(1，2-丙二胺四乙酸)，其結構如下
再加入適量NaOH和去離子水使之溶解，用HCl調pH＝7.4；加入Na99mTcO4或Na188Re O4或Na186Re O4溶液后，迅速加入SnCl2溶液，室溫下反應，得核心中間體；(3)99mTc、188Re或186Re標記的葡萄糖衍生物配合物的制備調節步驟(2)所得核中間體的pH＝7.5～8.0，加入步驟(1)合成的葡萄糖衍生物的水-乙醇溶液(濃度50％)和PNP5或PNP6或L6之一，溶液與PNP5或PNP6或L6之間的重量比為1∶1，在80℃水浴下反應，得99mTc或188Re或186Re標記的葡萄糖衍生物配合物。
有益效果本發明的99mTc、188Re或186Re標記的葡萄糖衍生物配合物價格低廉、方便易得、半衰期和能量均適宜(T1/2＝6.0h；γ；150keV)，且通過SPECT顯像，設備普及率高。
本發明合成的[99mTcO]3+/[188/186ReO]3+、[99mTcN]2+/[188/186ReN]2+、99mTcN-PNP/188/186ReN-PNP(3)、[99mTc(CO)3(H2O)3]1+[188/186Re(CO)3(H2O)3]1+的葡萄糖衍生物配合物具有一定的腫瘤攝取，可用于腫瘤診斷顯像或治療。其荷瘤鼠實驗證明，比美國正處于研發階段的99mTc標記的葡萄糖類似物99mTc-EC-DG(6)的腫瘤攝取更高。而肝、腎和血液等非靶器官和組織的攝取更低，具有更好的靶/非靶比值(即靶器官與非靶器官的對放射性藥物攝取的比值，對于腫瘤顯像劑來說就是腫瘤與其他組織和器官對放射性藥物攝取的比值，)，是具有良好應用前景的葡萄糖衍生物腫瘤顯像劑。
下面通過具體實施方式
對本發明做進一步說明，但并不意味著對本發明保護范圍的限制。
具體實施例方式
(一)、葡萄糖衍生物的合成化合物1的合成R＝H 將3.0g葡萄糖(0.015mol)加入到12.0mL水合肼(0.247mol)中，在氬氣條件下室溫反應20h，然后減壓旋轉蒸發至最小體積(減壓旋轉蒸發至體積不再減少)。冰鹽浴條件下加入4mLCS2(0.067mol)和含有0.6gNaOH(0.015mol)的甲醇溶液，反應劇烈，放出氣體，放熱停止后，室溫繼續反應24h，減壓旋轉蒸發除去未反應的CS2；得淺綠色固體，抽濾，用甲醇重結晶，得淺黃色固體。
產物產率54％；產物元素分析結果實測值N 9.12，C 28.43和H 4.83％；理論值N 9.58，C 28.76和H 4.48％；質譜分析MS(ESI)實測值269.0[M-Na]-，理論值269.0；H1-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ(ppm)7.17(d，1H，J1,2＝6.89Hz)，6.65(s，1H)，4.26(d，1H，J＝7.72Hz)，3.73(m，1H)，3.63(m，1H)，3.56(m，1H)，3.24(m，1H)，3.16(m，1H)，2.51(broad s，5H)；IR(KBr)3374，2930，1635，1412，1343，1250，1081，1049cm-1。
化合物2的合成R＝CH3- 化合物的制備方法將3.0g葡萄糖(0.015mol)加入到13.1mL甲基肼中，在氬氣條件下室溫反應24h，然后減壓旋轉蒸發至最小體積(減壓旋轉蒸發至體積不再減少)。冰鹽浴條件下加入4mLCS2(0.067mol)和含有0.6gNaOH(0.015mol)的甲醇溶液，反應劇烈，放出氣體，放熱停止后，室溫繼續反應24h，減壓旋轉蒸發除去未反應的CS2得淺綠色固體，抽濾，用甲醇重結晶，得淺黃色固體。
產物產率51％；產物元素分析結果實測值N 8.97，C 31.61和H 4.72％；理論值N 9.14，C 31.37和H 4.94％；質譜分析MS(ESI)實測值283.0[M-Na]-，理論值283.0；H1-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ(ppm)7.42(d，1H，J1.2＝6.92Hz)，4.22(d，1H，J＝7.78Hz)，3.75(m，1H)，3.68(m，1H)，3.54(m，1H)，3.27(m，1H)，3.17(m，1H)，2.54(s，3H)，2.51(broad s，5H)；IR(KBr)3392，2943，1616，1427，1374，1217，1154，1061cm-1。
化合物3的合成R＝CH3CH2- 化合物的制備方法將0.25mol乙基肼草酸鹽加入到適量甲醇中，在攪拌下加入0.5mol三乙胺，30min后，加入3.0g葡萄糖(0.015mol)，氬氣保護下室溫反應24h，然后減壓旋轉蒸發至最小體積(減壓旋轉蒸發至體積不再減少)。冰鹽浴條件下加入4mlLCS2(0.067mol)和含有0.6gNaOH(0.015mol)的甲醇溶液，反應較劇烈，待放熱停止后，室溫繼續反應24h，減壓旋轉蒸發除去未反應的CS2得淺綠色固體，抽濾，用甲醇重結晶，得淡黃色固體。
產物產率46％；產物元素分析結果實測值N 8.57，C 33.52和H 5.72％；理論值N 8.74，C 33.74和H 5.35％；質譜分析MS(ESI)實測值297.0[M-Na]-，理論值297.0；H1-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ(ppm)7.50(d，1H，J＝6.78Hz)，4.27(d，1H，J＝7.75Hz)，3.77(m，1H)，3.65(m，1H)，3.51(m，1H)，3.30(m，1H)3.19(m，1H)，2.71(m，2H)，2.51(broad s，5H)，1.32(t，3H，J＝7.14Hz)；IR(KBr)3390，2960，1589，1463，1375，1209，1131，1055cm-1。
化合物4的合成R＝CH3CH2CH2- 化合物的制備方法將0.25mol丙基肼草酸鹽加入到適量甲醇中，在攪拌下加入0.5mol三乙胺，30min后，加入3.0g葡萄糖(0.015mol)，氬氣保護下室溫反應24h，然后減壓旋轉蒸發至最小體積(減壓旋轉蒸發至體積不再減少)。冰鹽浴條件下加入4mlLCS2(0.067mol)和含有0.6gNaOH(0.015mol)的甲醇溶液，反應較劇烈，待放熱停止后，室溫繼續反應24h，減壓旋轉蒸發除去未反應的CS2得淺綠色固體，抽濾，用甲醇重結晶，得淡黃色固體。
產物產率48％；產物元素分析結果實測值N 8.43，C 36.21和H 5.51％；理論值N 8.38，C 35.92和H 5.73％；質譜分析MS(ESI)實測值311.0[M-Na]-，理論值311.0；H1-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ(7.58(d，1H，J＝6.88Hz)，4.19(d，1H，J＝7.70Hz)，3.81(m，1H)，3.69(m，1H)，3.55(m，1H)，3.29(m，1H)，3.13(m，1H)，2.69(t，2H，J＝7.21Hz)，2.51(broad s，5H)，1.66(m，2H)，1.03(t，3H，J＝7.32Hz)；
IR(KBr)3387，2925，1588，1461，1375，1214，1151，1076cm-1。
化合物5的合成R＝CH3(CH2)3- 化合物的制備方法將0.25mol丁基肼鹽酸鹽加入到適量甲醇中，在攪拌下加入0.5mol三乙胺，30min后，加入3.0g葡萄糖(0.015mol)，氬氣保護下室溫反應24h，然后40℃減壓旋轉蒸發至最小體積(減壓旋轉蒸發至體積不再減少)。冰鹽浴條件下加入4mL CS2(0.067mol)和含有0.6gNaOH(0.015mol)的甲醇溶液，待反應放熱停止后，室溫繼續反應24h，減壓旋轉蒸發除去未反應的CS2.得淺綠色固體，抽濾，用甲醇重結晶，得黃色固體。
產物產率48％；產物元素分析結果實測值N 8.22，C 38.17和H 5.81％；理論值N 8.04，C 37.92和H 6.08％；質譜分析MS(ESI)實測值325.0[M-Na]-，理論值325.0；H1-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ(7.61(d，1H，J＝6.93Hz)，4.24(d，1H，J＝7.71Hz)，3.87(m，1H)，3.65(m，1H)，3.56(m，1H)，3.30(m，1H)，3.19(m，1H)，2.67(t，2H，J＝7.19Hz)，2.51(broad s，5H)，1.57(m，2H)，1.38(m，2H)，0.99(t，3H，J＝7.36Hz)；IR(KBr)3393，2939，1582，1471，1378，1201，1124，1049cm-1。
(二)葡萄糖衍生物配合物的制備實施例之一[99mTcN]2+或[188/186ReN]2+葡萄糖衍生物配合物的制備1.[99mTcN]2+葡萄糖衍生物配合物的結構 1.1.[99mTcN]2+核中間體的制備西林瓶中加入5mgSDH(丁二酰二酰肼，結構是NH2NHCOCH2CH2CONHNH2)和5mgPDTA(1，2-丙二胺四乙酸)，其結構如下
再加入適量1N NaOH和去離子水使之溶解，用1N HCl調pH＝7.4。將Na99mTcO4溶液(0.3～0.5mL，1～20mCi)加入，迅速加入30μl SnCl2溶液(1mg/mL，1N HCl)，室溫下反應15min。TLC監測(乙腈/聚酰胺；生理鹽水/聚酰胺)，計算標記率。標記率大于99％。HPLC監測(HPLC條件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。[99mTcN]2+核中間體的HPLC保留時間為3.00min。
1.2.[99mTcN]2+葡萄糖衍生物配合物的制備調節上述99mTcN核中間體的pH＝8.0，加入1mL葡萄糖衍生物的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2mg/mL)，室溫下反應15min。TLC監測(乙腈/聚酰胺；生理鹽水/聚酰胺)，計算標記率。HPLC監測(HPLC條件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。
實施例1.1[99mTcN]2+核標記化合物1調節上述99mTcN核中間體的pH＝8.0，加入1mL化合物1的水溶液(2mg/mL)，室溫下反應15min。TLC(薄層色譜)監測(乙腈/聚酰胺；生理鹽水/聚酰胺)，計算標記率，標記率99.82％。HPLC(高效液相色譜)監測(HPLC條件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留時間為16.60min，99.82％(放射化學純度)。
實施例1.2[99mTcN]2+核標記化合物2調節上述99mTcN核中間體的pH＝8.0，加入1mL化合物2的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2mg/mL)，室溫下反應15min。TLC監測(乙腈/聚酰胺；生理鹽水/聚酰胺)，計算標記率，標記率99.65％。HPLC監測(HPLC條件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留時間為16.60min，放射化學純度99.31％。
實施例1.3[99mTcN]2+核標記化合物3調節上述99mTcN核中間體的pH＝8.0，加入1mL化合物3的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2mg/mL)，室溫下反應15min。TLC監測(乙腈/聚酰胺；生理鹽水/聚酰胺)，計算標記率，標記率大于99％。HPLC監測(HPLC條件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留時間為17.20min，放射化學純度99.43％。
實施例1.4[99mTcN]2+核標記化合物5調節上述99mTcN核中間體的pH＝8.0，加入1mL化合物5的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2mg/mL)，室溫下反應15min。TLC監測(乙腈/聚酰胺；生理鹽水/聚酰胺)，計算標記率，標記率99.36％。HPLC監測(HPLC條件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留時間為22.10min，放射化學純度99.56％。
實施例1.5[99mTcN]2+核標記化合物4標記方法同上，將化合物5替換為化合物4。標記率99.57％，HPLC保留時間為18.10min，放射化學純度99.26％。
2.[188/186ReN]2+核心標記化合物的結構 2.1.[188/186ReN]2+核中間體的制備西林瓶中加入5mgSDH(丁二酰二酰肼，結構是NH2NHCOCH2CH2CONHNH2)和5mgPDTA(1，2-丙二胺四乙酸)，其結構如下
再加入適量1N NaOH和去離子水使之溶解，用1N HCl調pH＝7.4。將Na188/186Re O4溶液(0.3～0.5mL，1～20mCi)加入，迅速加入30μlLSnCl2溶液(1mg/mL，1N HCl).室溫下反應15min。TLC(薄層色譜)監測(乙腈/聚酰胺；生理鹽水/聚酰胺)，計算標記率。標記率大于99％。HPLC(高效液相色譜)監測(HPLC條件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。[188/186Re N]2+核中間體的HPLC保留時間為3.20min。
2.2.[188/186ReN]2+核標記化合物的制備調節上述[188/186ReN]2-核中間體的pH＝8.0，加入1mL化合物的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2mg/mL)，室溫下反應15min。TLC(薄層色譜)監測(乙腈/聚酰胺；生理鹽水/聚酰胺)，計算標記率。HPLC(高效液相色譜)監測(HPLC條件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。
實施例2.1[188/186ReN]2+核標記化合物1調節上述[188/186ReN]2+核中間體的pH＝8.0，加入1mL化合物1的水溶液(2mg/mL)，室溫下反應15min。TLC監測(乙腈/聚酰胺；生理鹽水/聚酰胺)，計算標記率，標記率大于99％。HPLC監測(HPLC條件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留時間為16.60min，99.56％。
實施例之二[99mTcN]3+或[188/186ReN]2+核心與PNP、化合物(1～5)
混配的99mTc配合物制備1.[99mTcN]3+-PNP配合物的結構 R1＝H，CH3-，CH3CH2-，CH3(CH2)2-，CH3(CH2)3-PNP＝PNP5，PNP6，L6 實施例3.1[99mTcN]2+核心與PNP6、化合物1混配的99mTc配合物制備調節上述99mTcN核中間體的pH＝7.5～8.0，加入1mL化合物1的水溶液(2mg/mL)和1mgPNP6，在80℃水浴下反應10min。TLC監測(乙腈/聚酰胺；生理鹽水/聚酰胺)，計算標記率，標記率大于99％。HPLC監測(HPLC梯度條件A相0.1％的三氟乙酸水溶液；B相0.1％的三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留時間為21.50min。
實施例3.2[99mTcN]2+核心與PNP6、化合物2混配的99mTc配合物制備調節上述99mTcN核中間體的pH＝7.5～8.0，加入1mL化合物2的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2mg/mL)和2mgPNP6，在80℃水浴下反應10min。TLC監測(乙腈/聚酰胺；生理鹽水/聚酰胺)，計算標記率，標記率99.16％。HPLC監測(HPLC條件A相0.1％的三氟乙酸水溶液；B相0.1％的三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留時間為22.10min。
實施例3.3[99mTcN]2+核心與PNP6、化合物5混配的99mTc配合物制備調節上述99mTcN核中間體的pH＝7.5～8.0，加入1mL化合物5的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2mg/mL)和2mgPNP6，在80℃水浴下反應10min。TLC監測(乙腈/聚酰胺；生理鹽水/聚酰胺)，計算標記率，標記率大于98％。HPLC監測(HPLC條件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留時間為23.60min。
實施例3.4[99mTcN]2+核心與PNP5、化合物1混配的99mTc配合物制備調節上述99mTcN核中間體的pH＝7.5～8.0，加入1mL化合物1的水溶液(2～3mg/mL)和2mg PNP5，在80～90℃水浴下反應10min。TLC監測(乙腈/聚酰胺；生理鹽水/聚酰胺)，計算標記率，標記率98.65％。HPLC監測(HPLC條件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留時間為18.60min。
實施例3.5[99mTcN]2+核心與PNP5、化合物2混配的99mTc配合物制備調節上述99mTcN核中間體的pH＝7.5～8.0，加入1mL化合物2的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2mg/mL)和2mg PNP5，在80～90℃水浴下反應10min。TLC監測(乙腈/聚酰胺；生理鹽水/聚酰胺)，計算標記率，標記率大于98％。HPLC監測(HPLC條件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留時間為19.30min。
實施例3.6[99mTcN]2+核心與L6、化合物5混配的99mTc配合物制備調節上述99mTcN核中間體的pH＝8.0，加入1mL化合物5的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2mg/mL)和2mg L6，在80～90℃水浴下反應10min。TLC監測(乙腈/聚酰胺；生理鹽水/聚酰胺)，計算標記率，標記率大于97％。HPLC監測(HPLC條件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留時間為21.20min。
2.[188/186ReN]2+-PNP配合物結構 R1＝H，CH3-，CH3CH2-，CH3(CH2)2-，CH3(CH2)3-PNP＝PNP5，PNP6，L6 實施例3.7[188ReN]2+核心與PNP6、化合物1混配的188Re配合物制備調節上述[188ReN]2+核中間體的pH＝7.5～8.0，加入1mL化合物1的水溶液(2mg/mL)和1mgPNP6，在80℃水浴下反應10min。TLC監測(乙腈/聚酰胺；生理鹽水/聚酰胺)，計算標記率，標記率大于98％。HPLC監測(HPLC梯度條件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留時間為21.20min。
實施例3.8[188ReN]2+核心與PNP5、化合物1混配的188Re配合物制備調節上述[188ReN]2+核中間體的pH＝7.5～8.0，加入1mL化合物1的水溶液(2～3mg/mL)和2mg PNP5，在80～90℃水浴下反應10min。TLC監測(乙腈/聚酰胺；生理鹽水/聚酰胺)，計算標記率，標記率98.65％。HPLC監測(HPLC條件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留時間為18.30min。
實施例之三.[99mTcO]3+或[188/186ReO]3+核標記化合物的制備[99mTcO]3+核標記化合物的結構 實施例4.1[99mTcO]3+核標記化合物1在1mL化合物1的水溶液(2～3mg/mL)中加入新淋洗的Na99mTcO4溶液(5～10mCi/mL)0.5mL，迅速加入0.4～0.5mLSnCl2溶液(0.1MHCl中加入10～12mg SnCl2)，調pH＝8.0～8.5，室溫反應30min，測標記率，標記率99.37％；HPLC監測(HPLC條件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留時間為2.60min，9％；16.60min，90％。(已知在此HPLC條件下，Na99mTcO4的保留時間是4.1min)。
實施例4.2[99mTcO]3+核標記化合物2在1mL化合物2的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2mg/mL)中加入新淋洗的Na99mTcO4溶液(5～10mCi/mL)0.5ml，迅速加入0.4～0.5mLSnCl2溶液(0.1MHCl中加入10～12mg SnCl2)，調pH＝8.0～8.5，室溫反應30min，測標記率，標記率99.24％；HPLC監測(HPLC條件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留時間為2.70min，10％；18.10min，89％。(已知在此HPLC條件下，Na99mTcO4的保留時間是4.1min)。
實施例4.3[99mTcO]3+核標記化合物5在1mL化合物5的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2mg/mL)中加入新淋洗的Na99mTcO4溶液(5～10mCi/mL)0.5mL，迅速加入0.4～0.5mLSnCl2溶液(0.1MHCl中加入10～12mg SnCl2)，調pH＝8.0～8.5，室溫反應30min，測標記率，標記率99.16％；HPLC監測(HPLC條件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留時間為2.70min，8％；23.20min，90％。(已知在此HPLC條件下，Na99mTcO4的保留時間是4.1min)。[188/186ReO]3+核標記化合物的結構 實施例4.4[188ReO]3+核標記化合物1在1mL化合物1的水溶液(2～3mg/mL)中加入新淋洗的Na188ReO4溶液(5～10mCi/mL)0.5mL，迅速加入0.4～0.5mLSnCl2溶液(0.1MHCl中加入10～12mg SnCl2)，調pH＝8.0～8.5，室溫反應30min，測標記率，標記率大于99％；HPLC監測(HPLC條件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留時間為2.70min，7.62％；16.60min，91.87％。(已知在此HPLC條件下，Na99mTcO4的保留時間是4.1min)。
實施例之四.[99mTc(CO)3(H2O)3]1+核標記化合物的制備1.[99mTc(CO)3(H2O)3]1+核標記化合物的結構
[99mTc(CO)3(H2O)3]1+核中間體的制備酒石酸鈉鉀20mg，碳酸鈉4.7～4.9mg加入到10ml西林瓶中，再迅速加入7.4～7.5mg硼氫化鈉，加1mL水，壓蓋密封，通一氧化碳30～40min。加入Na99mTcO4溶液(0.3～0.6mL，20mCi/mL)，再80℃反應40min.TLC監測(乙睛/聚酰胺體系)；HPLC監測(HPLC條件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。99mTc(CO)3核中間體的HPLC保留時間為13.90min，16.70min兩組寬峰。
1+核標記化合物的制備將制備的[99mTc(CO)3(H2O)3]1+中間體用1N HCl和0.1N HCl調節pH＝8.0，加入到配體溶液中(2mg/mL)，65～75℃反應10min.冷卻至室溫。TLC監測(氯仿/甲醇＝9/1，聚酰胺)，計算標記率；HPLC監測(HPLC條件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。
實施例5.1[99mTc(CO)3(H2O)3]1+核標記化合物1將制備的[99mTc(CO)3(H2O)3]1+中間體用1N HCl和0.1N HCl調節pH＝8.0，加入到1mL化合物1的溶液中(2mg/mL)，65～75℃反應10min.冷卻至室溫。TLC監測(氯仿/甲醇＝9/1，聚酰胺)，計算標記率，標記率大于95％；HPLC監測(HPLC條件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留時間為3.00min，99.90％。
實施例5.2[99mTc(CO)3(H2O)3]1+核標記化合物3將制備的[99mTc(CO)3(H2O)3]1+中間體用1N HCl和0.1N HCl調節pH＝8.0，加入到1mL化合物3的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2mg/mL)中，65～75℃反應10min.冷卻至室溫。TLC監測(氯仿/甲醇＝9/1，聚酰胺)，計算標記率，標記率大于94％；HPLC監測(HPLC條件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留時間為3.40min，99.56％。
實施例5.3[99mTc(CO)3(H2O)3]1+核標記化合物5將制備的[99mTc(CO)3(H2O)3]1+中間體用1N HCl和0.1N HCl調節pH＝8.0，加入到1mL化合物5的水-乙醇(1/1，V/V)溶液(2mg/mL)中，65～75℃反應10min.冷卻至室溫。TLC監測(氯仿/甲醇＝9/1，聚酰胺)，計算標記率，標記率大于95％；HPLC監測(HPLC條件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留時間為3.70min，99.34％。
2.[188/186Re(CO)3(H2O)3]1+核標記化合物的結構 實施例5.4[188/186Re(CO)3(H2O)3]1+核標記化合物1的188Re配合物的制備(5)5mg氨基硼烷配合物加入到西林瓶中，壓蓋密封，通一氧化碳氣體10-15min，加入4.5μLH3PO4(85％)和Na188/186ReO4的生理鹽水溶液(0.3～0.5mL，1～10mCi/mL)，瓶蓋插一個注射器以補償氣體膨脹，加熱至60℃反應15min，調pH＝8.0，取0.2mL加入到化合物1的水溶液(2mg/mL)中，在60℃反應15min。測標記率，大于95％。HPLC監測(HPLC條件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留時間為3.2min，98.25％。
(三)、荷瘤鼠實驗一、[99mTcN]2+核標記化合物1的荷EMT-6腫瘤小鼠體內分布實驗(n＝3)荷EMT-6腫瘤小鼠于雌性BACB/C小鼠前左腋下植入2×106腫瘤細胞，生長約10天后腫瘤直徑為13～15mm；1.標記調節99mTcN核中間體的pH＝8.0，加入1mL化合物1的水溶液(2mg/mL)，室溫下反應15min。TLC監測(乙腈/聚酰胺；生理鹽水/聚酰胺)，計算標記率，標記率99.92％。HPLC監測(HPLC條件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙睛溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留時間為16.60min，99.79％。
2.動物實驗將標記產物溶液用純水稀釋到0.3mCi/mL。取出0.1mL稀釋后產物溶液，加入9.9mL生理鹽水，混勻后取出0.1mL，作為標準溶液。荷EMT-6腫瘤小鼠尾靜脈注射0.1mL產物溶液(約30μCi)，分別于注射后1、2、4h斷頸處死，取腫瘤、血、心、肝、脾、肺、腎、腦、肌肉、骨等組織，稱重并測定放射性計數，計算ID％/g。
99mTcN-化合物1配合物的荷EMT-6腫瘤小鼠生物分布
對比99mTc-EC-DG的肺癌荷瘤鼠生物分布
二、[99mTcO]3+核標記化合物2的荷EMT-6腫瘤小鼠體內分布實驗(n＝3)荷EMT-6腫瘤小鼠于雌性BACB/C小鼠前左腋下植入2×106腫瘤細胞，生長約10天后腫瘤直徑為13～15mm；1.標記[99mTcO]3+核標記化合物2在1mL化合物2的水溶液(2～3mg/mL)中加入新淋洗的Na99mTcO4溶液(5～10mCi/mL)0.5mL，迅速加入0.4～0.5mLSnCl2溶液(0.1MHCl中加入10～12mg SnCl2)，調pH＝8.0～8.5，室溫反應30min，測標記率，標記率99.37％；HPLC監測(HPLC條件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留時間為2.60min，9％；16.60min，90％。(已知在此HPLC條件下，Na99mTcO4的保留時間是4.1min)。
2.動物實驗將標記產物溶液用純水稀釋到0.3mCi/mL。取出0.1mL稀釋后產物溶液，加入9.9mL生理鹽水，混勻后取出0.1mL，作為標準溶液。荷EMT-6腫瘤小鼠尾靜脈注射0.1mL產物溶液(約30μCi)，分別于注射后1、2、4h斷頸處死，取腫瘤、血、心、肝、脾、肺、腎、腦、肌肉、骨等組織，稱重并測定放射性計數，計算ID％/g。
3+-化合物2配合物的荷EMT-6腫瘤小鼠生物分布
三、[188Re N]2+核標記化合物4的荷EMT-6腫瘤小鼠體內分布實驗(n＝3)荷EMT-6腫瘤小鼠于雌性BACB/C小鼠前左腋下植入2×106腫瘤細胞，生長約10天后腫瘤直徑為12～15mm；1.標記[188ReN]2+核標記化合物4調節上述[188ReN]2+核中間體的pH＝8.0，加入1mL化合物4的水溶液(2mg/mL)，室溫下反應15min。TLC監測(乙腈/聚酰胺；生理鹽水/聚酰胺)，計算標記率，標記率大于99％。HPLC監測(HPLC條件A相0.1％三氟乙酸水溶液；B相0.1％三氟乙酸的乙腈溶液；梯度0～10minA＝100％，B＝0；10～20minA＝50％，B＝50％；20～30minA＝0，B＝100％)。HPLC保留時間為18.50min，99.36％。
2.動物實驗將標記產物溶液用純水稀釋到0.3mCi/mL。取出0.1mL稀釋后產物溶液，加入9.9mL生理鹽水，混勻后取出0.1mL，作為標準溶液。荷EMT-6腫瘤小鼠尾靜脈注射0.1mL產物溶液(約30μCi)，分別于注射后1、2、4h斷頸處死，取腫瘤、血、心、肝、脾、肺、腎、腦、肌肉、骨等組織，稱重并測定放射性計數，計算ID％/g。
2+核標記化合物4配合物的荷EMT-6腫瘤小鼠生物分布
對比可知99mTcN-化合物1配合物和[99mTcO]3+-化合物2配合物以及[188ReN]2+-化合物4配合物的腫瘤攝取都高于99mTc-EC-DG；而99mTcN-化合物1配合物和[99mTcO]3+-化合物2配合物以及[188ReN]2+-化合物4配合物的非靶組織和器官如血液、肝、腎的攝取則低于99mTc-EC-DG，具有更好的靶/非靶比值，是一類潛在的良好的99mTc標記的葡萄糖衍生物腫瘤顯像劑。
相對于18FDG而言，由于用于制備18FDG的18F是由加速器制得，價格較高，而且用于顯像的正電子發射斷層掃描儀(PET)非常昂貴，普及率不高(全國60余臺)。此外，18F半衰期短(T1/2＝109分鐘)，對藥物的制備和顯像限制較多。與之對比，99mTc由99Mo/99mTc發生器制備，方便易得，價格低廉；SPECT顯像設備價格相對較低，普及率高；同時99mTc的半衰期T1/2＝6.0h，這為放射性藥物的制備和在生物體內靶器官的濃集提供了充分的時間，同時可盡量減少病人所受輻射劑量；發射γ射線；射線能量為150keV，能量適宜。)
權利要求
1.一種99mTc、188Re或186Re標記的葡萄糖衍生物配合物，其核心為[99mTcO]3+、[188ReO]3+、[186ReO]3+、[99mTcN]2+、[188ReN]2+、[186ReN]2+、[99mTc(CO)3(H2O)3]1+、[188Re(CO)3(H2O)3]1+或[186Re(CO)3(H2O)3]1+，其配位體為下述通式(1) R＝H，CH3-，CH3CH2-，CH3(CH2)2-，CH3(CH2)3-(1)
2.一種99mTc、188Re或186Re標記的葡萄糖衍生物配合物，其核心為[99mTcN]2+、[188ReN]2+或[186ReN]2+，其共配體為99mTcN-PNP、188ReN-PNP或186ReN-PNP，其配位體為下述通式(1) R＝H，CH3-，CH3CH2-，CH3(CH2)2-，CH3(CH2)3-(1)其中所述PNP為下述結構之一
3.一種99mTc、188Re或186Re標記的葡萄糖衍生物配合物的制備方法，其步驟如下(3)葡萄糖衍生物的合成 R＝H，CH3-，CH3CH2-，CH3(CH2)2-，CH3(CH2)3-(2)[99mTcN]2+、[188ReN]2+、[186ReN]2+核中間體的制備西林瓶中加入丁二酰二酰肼，再加入適量NaOH和去離子水使之溶解，用HCl調pH＝7.4；加入Na99mTcO4或Na188Re O4或Na186Re O4溶液后，迅速加入SnCl2溶液，室溫下反應，得核中間體；(3)99mTc或188Re或186Re標記的葡萄糖衍生物配合物的制備調節步驟(2)所得核中間體的pH＝8.0，加入步驟(1)合成的葡萄糖衍生物的水-乙醇溶液，室溫下反應，得99mTc或188Re或186Re標記的葡萄糖衍生物配合物。
4.一種99mTc、188Re或186Re標記的葡萄糖衍生物配合物的制備方法，其步驟如下(1)葡萄糖衍生物的合成 R＝H，CH3-，CH3CH2-，CH3(CH2)2-，CH3(CH2)3-(2)[99mTcO]3+、[188ReO]3+、[186ReO]3+標記的葡萄糖衍生物配合物的制備在步驟(1)合成的葡萄糖衍生物的水溶液中加入Na99mTcO4、Na188ReO4或Na186Re O4溶液，迅速加入SnCl2溶液，調pH＝8.0～8.5，分別得[99mTcO]3+、[188ReO]3+、[186ReO]3+標記的葡萄糖衍生物配合物。
5.一種99mTc、188Re或186Re標記的葡萄糖衍生物配合物的制備方法，其步驟如下(1)葡萄糖衍生物的合成 R＝H，CH3-，CH3CH2-，CH3(CH2)2-，CH3(CH2)3-(2)[99mTc(CO)3(H2O)3]1+、[188Re(CO)3(H2O)3]1+或[186Re(CO)3(H2O)3]1+核中間體的制備將酒石酸鈉鉀和碳酸鈉加入到西林瓶中，再迅速加入硼氫化鈉，加水，壓蓋密封，通一氧化碳；加入Na99mTcO4或Na188Re O4或Na186ReO4溶液，在再80℃下反應，得核中間體；(3)99mTc或188Re或186Re標記的葡萄糖衍生物配合物的制備調節步驟(2)所得核中間體的pH＝8.0，加入步驟(1)合成的葡萄糖衍生物的溶液，65～75℃反應，再冷卻至室溫，得99mTc或188Re或186Re標記的葡萄糖衍生物配合物。
6.一種99mTc、188Re或186Re標記的葡萄糖衍生物配合物的制備方法，其步驟如下(4)葡萄糖衍生物的合成 R＝H，CH3-CH3CH2-，CH3(CH2)2-，CH3(CH2)3-(2)[99mTcN]2+、[188ReN]2+或[186ReN]2+核心中間體的制備西林瓶中加入丁二酰二酰肼，再加入適量NaOH和去離子水使之溶解，用HCl調pH＝7.4；加入Na99mTcO4或Na188Re O4或Na186ReO4溶液后，迅速加入SnCl2溶液，室溫下反應，得核心中間體；(3)99mTc、188Re或186Re標記的葡萄糖衍生物配合物的制備調節步驟(2)所得核中間體的pH＝7.5～8.0，加入步驟(1)合成的葡萄糖衍生物的水-乙醇溶液(濃度為50％)和PNP5或PNP6或L6，所述水-乙醇溶液與所述PNP5、PNP6或L6之間的重量比為1∶1，在80℃水浴下反應，得99mTc或188Re或186Re標記的葡萄糖衍生物配合物。
全文摘要
本發明涉及一種
文檔編號A61K51/02GK101020696SQ200610114498
公開日2007年8月22日 申請日期2006年11月10日 優先權日2006年11月10日
發明者朱霖, 劉錳, 劉亞靜, 余媛 申請人:北京師范大學