專利名稱：一種防治心腦血管疾病的中藥有效部位組合物及制備方法
技術領域：
本發明涉及醫藥技術領域，具體涉及一種防治心腦血管疾病的中藥有效部位的復方制劑及其制備方法，具體的說是由人參總皂苷、麥冬/山麥冬總皂苷、五味子木脂素配比組合而成的藥物組合物及其制備方法。
背景技術：
缺血性心腦血管疾病是現代文明病的一種，不僅發病率高，而且患者有低齡化趨勢，嚴重危害人類健康并影響其生活質量。已有研究顯示，該類疾病核心病理實質是多種因素引起的受累組織發生復雜的、連續的微循環障礙而造成的組織缺血、缺氧。其發病機理復雜，目前尚未完全闡明，已經提出的病理機制有興奮性氨基酸釋放增多、細胞內鈣超載、氧自由基生成增加和代謝性酸中毒等學說。但是根據這些學說而采取的治療措施和研制的治療藥物目前均不能獲得理想的療效，有的甚至產生嚴重的不良反應。迄今為止尚無十分理想的治療缺血性心腦血管疾病有效藥物，研究和開發防治缺血性心腦血管疾病損傷的新型藥物顯得十分緊迫和必要。
生脈散來源于《醫學啟源》，具有益氣生津、養陰復脈的功效，廣泛應用臨床治療多種疾病。目前已有的生脈注射液是由紅參、麥冬和五味子為原料，進行有效組分提取后制備的水針劑，用于治療心源性、感染性休克、心肌病、冠心病、腦梗塞等心腦血管性疾病。但現有的生脈注射液存在提取工藝不完善，有效組分提取不全，產品質量控制難度大，制劑質量標準低且不完善的缺點。中國專利CN 1078152A公開了一種生脈注射液及其制備工藝、CN1157162也公開了一種生脈注射液及其制備方法，CN1628738公開了一種注射用生脈及其制備方法。這些專利雖然涉及不同的制備方法，但其共同之處都是將紅參、麥冬和五味子用水或乙醇提取，提取液濃縮后即制備成注射液，或添加Tween80等表面活性劑制備成凍干粉。這些技術都是通過簡單的提取得到的初提物，因此雜質含量較大，指標成分也不明確，制劑質量標準低且不完善，注射劑的安全性存在一定的隱患。
發明內容
本發明公開了一種以人參總皂苷、麥冬總皂苷或山麥冬總皂苷、五味子總木脂素作為活性成分的中藥有效部位復方藥物組合物，本發明的復方藥物組合物療效高，副作用小，能有效防治心腦血管疾病。
發明人在生脈散基礎上，分別提取三味藥材的有效部位，經過實驗篩選優化比例，將三種有效部位組合，結果發現，其具有較好的防治心腦血管疾病功效，特別是對心腦缺血療效顯著，由于是三種有效部位的組合，因此，與生脈散相比，本發明的有效部位復方組合物質量易于控制、療效好，副作用低，毒性更低。
人參總皂苷和麥冬總皂苷的提取方法均有文獻報道，一般地，用水或醇提取，過大孔樹脂，得到人參總皂苷或麥冬總皂苷提取物，經濃縮過干燥后，一般總皂苷含量大于40％，約40～80％。總皂苷可以自己提取，市場也有銷售。五味子總木脂素的提取方法也有文獻報道，一般地，經水或醇提取后，過大孔樹脂，所得總木脂素的含量一般大于40％，約40～80％。
本發明將生脈散中三味藥材的有效部位組合成一個復方藥物組合物，研究發現，本發明的有效部位復方藥物組合物以較少的生藥量即能產生相當于生脈散注射液的藥效，另外，在制備成制劑時，若藥材量相同，則本發明活性成分的總重量遠遠低于生脈散的活性成分總重量，這對制備成制劑提供了很大的方便，尤其是在制備液體制劑時，有利于藥物的溶解，雜質含量減少，澄明度提高，藥物的安全性進一步提高。
發明人還發現，如果將生脈散中的麥冬替換為山麥冬，山麥冬經提取后的山麥冬總皂苷再與人參總皂苷和五味子總木脂素組合成復方藥物組合物，這樣的組合藥效相當生脈散中三味藥材的有效部位的組合。
另外，發明人還對生脈有效部位人參總皂苷、麥冬/山麥冬總皂苷以及五味子木脂素的配伍比例進行較系統的篩選和驗證，優選出抗心腦缺血的最佳配伍比例，在保證療效的基礎同時降低服藥劑量，有利于制成現代劑型的以組分配伍的現代復方中藥。
本發明的中藥有效部位復方藥物組合物，含有由人參總皂苷、麥冬或山麥冬總皂苷和五味子木脂素組成的活性成分及藥學上可接受的載體。三個有效部位中其中兩個有效部位是人參總皂苷和五味子總木脂素，第三個有效部位可以是麥冬總皂苷，也可以是山麥冬總皂苷，還可以是部分麥冬總皂苷和部分山麥冬總皂苷的組合，為了制備時的簡化，優選用其中的一種，優選山麥冬總皂苷。三組分的重量份數比優選是人參總皂苷1～20份，麥冬或山麥冬總皂苷0.5～10份，五味子總木脂素1～20份。進一步優選的三組分的重量份數比是人參總皂苷4～8份，麥冬或山麥冬總皂苷1～4份，五味子總木脂素4～8份。
上述藥學上可接受的載體可以是藥劑學上常用的惰性輔料，如制備成口服固體制劑，則這些惰性輔料是崩解劑、稀釋劑、粘合劑、潤滑劑等，這是本領域的公知技術。如果制備成液體制劑則惰性輔料可以是水等溶劑。在對本發明組合物制備成注射劑的研究中發現，當加入環糊精作為助溶劑時，本發明的有效部位復方藥物組合物溶解性好，溶解度優于加入一些表面活性劑如吐溫等作為助溶劑的溶解度，因此優選環糊精作為助溶劑。本發明的組合物可以制備成口服制劑，也可加入環糊精制備成液體制劑或凍干制劑。環糊精的用量優選為溶液總體積的2-5％(為重量體積百分比g/ml)，所述溶液總體積即為制備液體制劑時制劑的總體積，或凍干制劑凍干前溶液的體積。
本發明的三種有效部位制備方法簡單，人參總皂苷的制備如下將人參用水和/或乙醇滲漉或回流提取，提取液經大孔樹脂純化，即得人參總皂苷。優選的是用70-80％乙醇提取。經大孔樹脂后，優選用30～80％乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮干燥即得。麥冬或山麥冬總皂苷也可用類似方法制備，優選用70-80％提取，大孔樹脂吸附后，優選用30～80％乙醇洗脫。五味子總木脂素的提取方法也和上面兩種有效部位提取方法類似，優選五味子用60～80％的乙醇回流提取，經大孔樹脂純化，得總木脂素。用這些方法制備得到的人參總皂苷提取物中，總皂苷含量約40～80％，為重量百分比(下同)。麥冬總皂苷、山麥冬總皂苷或五味子總木脂素的含量約40～80％。本發明的有效部位藥物組合物中三個有效部位可以用上述方法制備，也可以在市場上分別購買后再將三種組分混合。所述大孔樹脂為苯乙烯型弱極性或非極性樹脂，如可以選自D101，HP-100及AB-8型，較優選的是D101。
下面是本發明有效部位復方藥物組合物的部分藥理學試驗及結果一、生脈有效部位人參總皂苷、麥冬總皂苷以及五味子總木脂素的配伍比例的篩選研究及藥理活性驗證試驗研究為確定生脈有效部位人參總皂苷、麥冬總皂苷以及五味子總木脂素的配伍比例，采用正交設計的實驗方法，對人參總皂苷、麥冬總皂苷、五味子總木脂素部位進行多指標藥效分析，采用三因素九水平的正交表頭L9(34)安排實驗，三水平設計成0、1、2的劑量，以此正交表格可以形成9種不同組合的組方，應用幾種心腦缺氧小鼠模型進行篩選，以期確定有效部位的最佳配比，并進行驗證實驗。下列藥理試驗中所用到的生脈注射液組是按照生脈注射液的制備方法將注射液換算成干燥或濃縮后提取物的量。
1.心腦缺氧小鼠模型的制作參照文獻報道方法進行1.1異丙腎上腺素所致的小鼠心肌缺氧實驗小鼠隨機分成生脈注射液組、給藥組、正常組，每組10只，iv給藥0.1ml/kg，30min后sc異丙腎上腺素(20mg/kg)，正常組給予生理鹽水，15min后，放入盛有15g鈉石灰的250ml廣口瓶中，密閉，觀察并記錄小鼠死亡時間。
1.2NaNO2中毒性缺氧實驗小鼠隨機分成生脈注射液組、給藥組，每組10只，iv給藥0.1ml/kg 30min后立即ip注射NaNO2350mg/kg，0.1ml/kg，以ip結束時間開始，觀察并記錄死亡時間。
1.3小鼠急性腦缺血缺氧喘息(斷頭呼吸)實驗小鼠隨機分成生脈注射液組、給藥組，每組10只，iv給藥0.1ml/kg，30min后沿耳中縫線稍后快速斷頭。觀察并記錄張口喘息的持續時間。
試驗結果1、異丙腎上腺素所致的小鼠心肌缺氧、NaNO2組織中毒性缺氧和斷頭呼吸模型正交篩選新組方的結果方差分析見表1和表2，根據不同模型的正交實驗結果進行分析，求出各味藥的保護率，由于每個模型代表了不同的缺氧機制，因此每個實驗的權重系數為1，將實驗保護率的平均值再次綜合進行正交綜合分析，確定有效部位組合最優選的是由人參總皂苷4～8份，麥冬或山麥冬總皂苷1～4份，五味子木脂素4～8份組成。
表1不同缺血缺氧模型正交篩選新組方的結果
表2缺血缺氧模型正交篩選新組方的方差分析結果
與空白組比，*P＜0.05；**P＜0.01二、小鼠急性腦缺血缺氧喘息模型考察以麥冬總皂苷與山麥冬總皂苷組成的新組方活性取昆明種小鼠隨機分組，每組10只生理鹽水組，空白溶媒組，含麥冬皂苷新組方，含山麥冬皂苷新組方，生脈注射液5.5g/kg，iv給藥0.1ml/kg，給藥30min后沿耳中縫線稍后快速斷頭。在小鼠斷頭時記時，并記錄最后一次呼吸的時間以計算喘息的持續時間。其中含麥冬皂苷組組成見實施例4，含山麥冬皂苷組組成見實施例5。
試驗結果見表3，數據顯示麥冬總皂苷與山麥冬總皂苷組成的新組方，均可明顯延長斷頭后小鼠的喘息時間(P＜0.01)，含山麥冬皂苷的新組方保護率略優于含麥冬總皂苷的新組方。
表3麥冬或山麥冬總皂苷組成的新組方對小鼠斷頭呼吸時間的影響
*P＜0.05**P＜0.01表示給藥組與空白對照顯著性比較三、本發明組方驗證與比較實驗3.1小鼠急性腦缺血缺氧喘息模型考察幾個組方活性取昆明種小鼠隨機分組，每組10只生理鹽水組，空白溶媒組，葛根素組100mg/kg，生脈注射液5.5g/kg，燈盞花素4mg/kg，金納多組13mg/kg，幾個比例的新組方120mg/kg、40mg/kg，依達拉奉組5mg/kg，iv給藥0.1ml/kg，給藥30min后沿耳中縫線稍后快速斷頭。在小鼠斷頭時記時，并記錄最后一次呼吸的時間以計算喘息的持續時間。
試驗結果見表4，數據顯示，新組方高低劑量組均可明顯延長斷頭后小鼠的喘息時間，且高劑量與對照組比較具有極顯著性差異(P＜0.01)，臨床常用腦缺血用藥生脈注射液、尼莫地平、金納多、燈盞花素與對照相比均有顯著性差異，新組方抗腦缺氧作用分別優于生脈注射液、依達拉奉、金納多注射液，兩兩比較具有顯著性差異(P＜0.05)。
表4XZF對小鼠急性腦缺血缺氧喘息模型的影響(n＝10，x±SD)
*P＜0.05，**P＜0.01，與空白對照比較；#P＜0.05，與新組方高劑量比較3.2以大鼠反復缺血再灌模型考察新組方作用取雄性SD大鼠，250-300克，禁食12-14h，隨機分組，每組10只，分別為假手術組、模型組，本發明組60、20mg/kg組及生脈注射液2.75g/kg生藥/kg組及尼莫地平注射液1mg/kg組，分別iv溶劑對照及各藥物后0.5h，大鼠腹腔注射3％水合氯醛10ml/kg進行麻醉，大鼠仰臥固定，展平頸部，剪毛，常規消毒，在喉頭與胸骨之間正中線處作一縱向切口，長約2.5cm，沿胸鎖乳突肌內側緣鈍性分離肌肉，暴露雙側頸總動脈，分離兩側頸總動脈穿線備用，斷流缺血20min，再灌20min，再斷流缺血20min，假手術組只分離動脈，不進行缺血再灌處理。手術后6h及23.5h各iv給藥1次，共給藥3次。末次給藥后半小時，大鼠放血4000rpm離心15min分離血清，測定SOD、MDA、NO等生化指標。放血后迅速斷頭取腦，用濾紙吸干腦皮質表面的水分，準確稱取腦組織濕重，再分別稱左半腦濕重，并將該組織置于100℃烘箱內48h，烘至恒重后，取出準確稱取腦組織干重，即可以計算出其含水量(％)＝(腦組織濕重-腦組織干重)/腦組織濕重*100。取大鼠右半腦100mg左右以冷0.5％HTAB手動勻漿，300mg左右以冷NS電動勻漿，4℃，4000rpm離心15min分離上清，參照試劑盒說明書測定SOD、MDA、LDH等生化指標，Griess法測定NO含量。取大鼠右半腦100mg左右以冷0.5％HTAB手動勻漿，蝸旋混勻，超聲30s，反復凍融3次，12,000g，4度20min離心，收集上清。取100μl加2.9ml MPO反應液(pH6.0KH2PO4緩沖液內含16.7mg鄰聯茴香胺和終濃度為0.00005％H2O2，)，測定2min內460nm吸光度，計算其變化率，并折算為腦組織髓過氧化物酶(MPO)U/mg組織蛋白。
結果由表5-7可見，大鼠頸總動脈反復缺血再灌注損傷后，腦含水量明顯升高，血清和勻漿SOD活性明顯降低，MDA含量明顯增加，提示出現明顯的氧化損傷，同時腦組織勻漿MPO活性明顯升高，LDH明顯減少，提示有白細胞浸潤增多現象，并伴有能量代謝障礙，于手術前0.5h及手術后6h及23.5h共iv3次給予新組方2個劑量組，對上述損傷均有明顯改善作用，其活性與陽性對照藥相當。
表5對雙側頸總動脈反復缺血再灌注大鼠模型凝血時間和腦含水量的影響
注x±s，n＝8-10，##P＜0.01與假手術組比較；*P＜0.05，**P＜0.01與模型組比較表6對雙側頸總動脈反復缺血再灌注損傷大鼠血清生化指標的影響
注x±s，n＝8-10，##P＜0.01與假手術組比較；*P＜0.05，**P＜0.01與模型組比較表7對雙側頸總動脈反復缺血再灌注損傷大鼠腦勻漿氧化相關指標的影響
注x±s，n＝8-10，#P＜0.05，##P＜0.01與假手術組比較；*P＜0.05，**P＜0.01與模型組比較綜上所述，本發明的中藥有效部位組合而成的復方，具有明顯的抗缺血缺氧、抗氧化、抗炎性損傷等活性，為用以防治心腦血管疾病提供藥理學依據。
具體實施例方式
實施例11.人參總皂苷的制備人參加10倍量的70％乙醇，浸泡1h，煮沸1h，趁熱過濾。殘渣加10倍量的以上溶劑，煎煮1h，過濾，合并濾液，提取物溶于水后上D101大孔樹脂，靜態吸附12h，用水沖至無色，費林試劑檢查無還原糖反應，換用30％的乙醇沖2個柱體積，再換用70％的乙醇沖2個柱體積，收集70％乙醇洗脫部位，回收乙醇，用薄層色譜法鑒別皂苷(按2005藥典方法)，將有皂苷的部分合并，揮至無醇味，放至-70℃冰箱冷凍，凍成干粉，得率為4％。
2.麥冬冬總皂苷的制備取麥冬或山麥冬藥材須根以80％乙醇浸潤過夜，以10倍量溶劑滲漉。收集所得提取液，濃縮至無醇味，上大孔樹脂D101柱，分別采用水、40％乙醇、80％乙醇洗脫，收集80％乙醇部分，濃縮后，水浴蒸干，所得總皂苷部位為褐色粉末，得率為4‰。
3.山麥冬總皂苷的制備取山麥冬藥材須根以以10倍量80％乙醇浸泡2h，回流提取2次，每次2h，過濾，合并收集濾液，提取物溶于水后上D101大孔樹脂，分別采用水、40％乙醇、80％乙醇洗脫，收集80％乙醇部分，濃縮后，水浴蒸干，所得總皂苷部位為褐色粉末，得率為4‰。
4.五味子木脂素的制備取五味子加10倍量的75％乙醇浸泡1h，回流1h，過濾，藥渣加8倍量的75％乙醇回流2次，每次1h，過濾，合并三次濾液，上D101大孔樹脂。先用水沖至無費林試劑反應，再用30％的乙醇沖，沖至無色；再用75％乙醇沖3BV，75％乙醇洗脫部位得率3％。
實施例21.人參總皂苷的制備人參加10倍量的水，浸泡1h，加熱回流提取2次，每次1h，趁熱過濾。過濾，合并濾液，提取物溶于水后上D101大孔樹脂，靜態吸附12h，用水沖至無色，費林試劑檢查無還原糖反應，換用40％的乙醇沖2個柱體積，再換用60％的乙醇沖2個柱體積，收集60％乙醇洗脫部位，回收乙醇，用薄層色譜法鑒別皂苷(按2005藥典方法)，將有皂苷的部分合并，揮至無醇味，放至-70℃冰箱冷凍，凍成干粉，得率為3％。
2.麥冬總皂苷的制備取麥冬藥材須根以80％乙醇浸潤過夜，以10倍量溶劑滲漉。收集所得提取液，濃縮至無醇味，上大孔樹脂D101柱，分別采用水、40％乙醇、80％乙醇洗脫，收集80％乙醇部分，濃縮后，水浴蒸干，所得總皂苷部位為褐色粉末，得率為3‰。
3.山麥冬總皂苷的制備取山麥冬藥材須根以80％乙醇浸潤過夜，以10倍量溶劑滲漉。收集所得提取液，濃縮至無醇味，上大孔樹脂D101柱，分別采用水、40％乙醇、80％乙醇洗脫，收集80％乙醇部分，濃縮后，水浴蒸干，所得總皂苷部位為褐色粉末，得率為4‰。
4.五味子總木脂素的制備取五味子加10倍量的水浸泡1h，加熱回流提取2次，每次1h，趁熱過濾。合并濾液。上D101大孔樹脂。先用水沖至無費林試劑反應，再用40％的乙醇沖，沖至無色；再用75％乙醇沖3BV，75％乙醇洗脫部位得率2％。
實施例3取實施例1方法制備的人參總皂苷1.5g、麥冬總皂苷0.6g以及五味子總木脂素0.8g，加入β-CYD 20g以注射用水加熱攪拌溶解，并加甘露醇適量，按照常規的凍干工藝凍干，即得注射用凍干粉。
實施例4取實施例1方法制備的人參總皂苷5.0g、麥冬總皂苷1.0g以及五味子總木脂素6.0g，加入β-CYD 50g，以注射用水加熱攪拌以充分溶解，再加水至1000ml，調節pH值至中性，攪勻，過濾分裝于中性玻璃容器中，用流通蒸汽100℃30min滅菌，過濾，精濾，灌封，滅菌，檢驗，得注射液。
實施例5取實施例1方法制備的人參總皂苷5.0g、山麥冬總皂苷1.0g以及五味子總木脂素6.0g，加入β-CYD 50g，以注射用水加熱攪拌以充分溶解，再加水至1000ml，調節pH值至中性，攪勻，過濾分裝于中性玻璃容器中，用流通蒸汽100℃30min滅菌，過濾，精濾，灌封，滅菌，檢驗，得注射液。
實施例6取實施例1方法制備的人參總皂苷3.0g、山麥冬總皂苷0.5g以及五味子總木脂素4.0g，加入β-CYD 50g，以適量注射用水加熱攪拌以充分溶解，再加水至1000ml，調節pH值至中性，攪勻，過濾分裝于中性玻璃容器中，用流通蒸汽100℃30min滅菌，過濾，精濾，灌封，滅菌，檢驗，得注射液。
實施例7
取實施例2方法制備的人參總皂苷8.0g、麥冬總皂苷2.0g以及五味子木脂素6.0g，加入β-CYD 50g，以適量注射用水加熱攪拌以充分溶解，加入葡萄糖50g，再加水至1000ml，溶解完全，調pH值至中性，過濾、滅菌、檢驗，得輸液制劑。
實施例8取實施例2方法制備的人參總皂苷8.0g、山麥冬總皂苷2.0g以及五味子木脂素6.0g，加入β-CYD 50g，以適量注射用水加熱攪拌以充分溶解，加入葡萄糖50g，再加水至1000ml，溶解完全，調pH值至中性，，過濾、滅菌、檢驗，得輸液制劑。
實施例9取實施例1方法制備的人參總皂苷5.0g、山麥冬總皂苷1.0g以及五味子木脂素7.0g，加入淀粉、微晶纖維素、滑石粉、5％淀粉漿適量，混勻，制成顆粒，干燥，裝入膠囊，質檢包裝即得。
實施例10取實施例2方法制備的人參總皂苷6.0g、山麥冬總皂苷2.0g以及五味子木脂素4.0g，加入淀粉、微晶纖維素、滑石粉、5％淀粉漿適量，混勻，制成顆粒，干燥，裝入膠囊，質檢包裝即得。
權利要求
1.一種中藥有效部位復方藥物組合物，其特征是含有由人參總皂苷、麥冬總皂苷或山麥冬總皂苷、五味子總木脂素組成的活性成分及藥學上可接受的載體。
2.權利要求1的復方藥物組合物，其中人參總皂苷中皂苷含量大于40％、麥冬總皂苷或山麥冬總皂苷中皂苷含量大于40％，五味子總木脂素中木脂素的含量大于40％，均為重量百分比。
3.權利要求1的復方藥物組合物，其中活性成分中三組分的重量份數比是人參總皂苷1～20份，麥冬或山麥冬總皂苷0.5～10份，五味子總木脂素1～20份。
4.權利要求3的復方藥物組合物，其中活性成分中三組分的重量份數比是人參總皂苷4～8份，麥冬或山麥冬總皂苷1～4份，五味子總木脂素4～8份。
5.權利要求1至4中任一項的復方藥物組合物的制備方法，包括將人參、麥冬或山麥冬須根分別用水和/或乙醇滲漉或回流提取，提取液經大孔樹脂純化，即得人參總皂苷、麥冬或山麥冬總皂苷；五味子用60～80％的乙醇回流提取，經大孔樹脂純化，得總木脂素，將三種有效部位提取物與藥學上可接受的載體混合，制備成各種制劑。
6.權利要求5的制備方法，其中提取溶劑為乙醇時乙醇濃度為70-80％，經大孔樹脂純化后，用30-80％乙醇洗脫，收集30-80％乙醇洗脫液。
7.權利要求1的復方藥物組合物，其中還含有助溶劑β-環糊精。
8.權利要求1至4中任一項的復方藥物組合物用于制備治療心腦血管疾病的藥物的用途。
9.權利要求8的用途，其中心腦血管疾病是腦梗塞、腦缺血、冠心病、心絞痛、心肌缺血、心肌梗死、心衰或心律失常。
全文摘要
本發明涉及醫藥技術領域，涉及一種防治心腦血管疾病的中藥有效部位的復方制劑及其制備方法，具體公開的是由人參總皂苷、麥冬/山麥冬總皂苷、五味子總木脂素配比組合而成的藥物組合物及其制備方法。
文檔編號A61P9/00GK101028437SQ20071002090
公開日2007年9月5日 申請日期2007年4月3日 優先權日2007年4月3日
發明者寇俊萍, 張建宏, 朱丹妮, 戚進, 余伯陽, 嚴永清 申請人:中國藥科大學