專利名稱：一種提取黃柏總生物堿的方法
技術領域：
本發明涉及一種植物提取方法，具體地說是一種提取黃柏總生物 堿的方法。
背景技術：
黃柏為云香科植物P/ze〃oofe"(ira" c/w'"e we Schneid.的干燥樹皮， 俗稱"川黃柏"。黃柏總生物堿是黃柏樹皮經提取純化而得到的總生物 堿，主要含有小檗堿(Berberine),其它生物堿有巴馬汀(Palmatine)、 藥根堿(Jatrorrhizine)、 黃柏堿(Hellodendrine)、 蝙蝠葛任堿 (Menisperine)、白瓜簍堿(Candicine)、木蘭花堿(Magnoflorine)等。其 性寒、味苦，具有清熱燥濕、瀉火除蒸，解毒療瘡。用于熱濕瀉痢， 黃疸，帶下，熱淋，腳氣，痿別，骨蒸勞熱，盜汗，遺精，瘡瘍腫毒， 濕熱瘙癢。
現代藥理研究表明黃柏及其提取物具有抗病原微生物、免疫抑 制、抗潰瘍、降壓、抗心律失常、抗炎等作用。
黃柏總生物堿中各種生物堿的作用有如下報道
(1) 抗病原微生物作用磷酸小檗堿于體外對白色念珠菌及新型隱 球菌均有明顯的抑制作用。小檗堿在體外及體內均有抗阿米巴作用。
(2) 抗炎作用小檗堿對角叉菜膠引起的大鼠石跖腫脹、慢性棉球 肉芽腫均有明顯抑制作用。小檗堿、藥根堿有顯著抗炎作用。小檗堿 能抑制某些活性物質引起的小鼠毛細血管通透性增加。小檗堿抗炎作 用機制可能與抑制中性粒細胞趨化及產生活性氧的功能、抑制自由基 產生、降低PLA2活性、減少炎癥組織中PGE2產生等多種因素有關。
(3) 對心血管功能的影響①小檗堿在一定計量范圍內，對動物離 體心臟及整體心臟均顯示出正性肌力作用，其作用于其增加心肌細胞 內C^+濃度有關。②給清醒大鼠注射小檗堿能引起心律先反射性地加快而后緩慢持久地下降。(D小檗堿加快房內及室內傳導，但當劑量增 大時，對心臟傳導系統有嚴重的抑制作用。④小檗堿能計量依賴性地 降低兔竇房結、房室結、細胞動作電位4項除極化速率，從而降低慢 反映細胞的自律性；小檗堿對快反映細胞也有延長動作電位時程和有 效不應期作用，但需要較高的濃度。⑤小檗堿具有顯著的抗心律失常
的作用。小檗堿預防再灌心律失常作用可能與其對心肌Ca^內流油雙 向調節作用有關。 降壓作用給大鼠注射小檗堿能產生明顯的降壓 作用，小檗堿對on和(X2受體均有阻滯作用；藥根堿對麻醉、清醒大 鼠以及腎性高血壓大鼠也有顯著的降壓作用，其降壓作用機制也與a 受體阻斷引起外周血管阻力降低有關。⑦小檗堿對缺血性心肌具有保 護作用。⑧小檗堿可以顯著提高mEC業的心臟保存效果。
(4) 抗缺血作用小檗堿能擴張麻醉小鼠腦膜血管，增加局部血流 量；明顯加快血流速度，顯示小檗堿對腦組織有一定的保護作用，小 檗堿的抗自由基既降低c-fos-mRNA水平的作用可能使其抗缺血作用 機制之一。
(5) 降血脂作用小檗堿能降低喂高膽固醇如即引起的小鼠血清膽 固醇水平升高。
(6) 抗血小板聚集作用小檗堿對ADP、花生四烯酸(AA)、膠原 II(COn)及鈣離子載體(A23187 )誘發的家兔血小板聚集和ATP釋放 均有不同程度的抑制作用。小檗堿能拮抗八23187誘導血小板聚集和釋 放作用，提示其抗血小板作用與(^2+拮抗作用有關。
(7) 鈣拮抗作用小檗堿有抑制電壓控制的鈣通道的作用。
(8) 降血糖作用小檗堿可降低四氧嘧啶糖尿病小鼠及自發性糖尿 病KK小鼠的血糖，改善KK小鼠的葡萄糖耐量，并能對抗外源葡萄 糖或腎上腺素引起的小鼠血糖升高。
(9) 抗潰瘍及抗腹瀉作用小檗堿抑制大鼠基礎胃酸的分泌，胃酸 總排出量明顯減少，對大鼠醋酸性胃潰瘍有愈合作用。
4(抑抗癌作用在活體實驗中，小檗堿與BC-NU連用也顯示出細 胞毒性相加作用；另報鹽酸小檗堿在一定程度上具有促進癌細胞分化 的作用。
(ll)對免疫功能的影響硫酸小檗堿可以增強小鼠非特意免疫反
應，抑制細胞和體液免疫功能。
肪其它作用小檗堿具有抗缺氧、益智等作用。 對于黃柏總生物堿的提取，目前采用的方法基本上有四種，有酸
提法、堿提法、醇提法、酸醇法，提取后的總生物堿釆用鹽析的方法
純化，總生物堿含量最高占提取物總量的31.87%，有效部位占提取
物的含量達不到50%。
發明內容
針對上述不足，本發明提供一種提取黃柏總生物堿的方法，以提 高總生物堿及其有效部位的含量。
為實現上述目的，本發明釆用乙醇提取法，再經大孔樹脂分離純 化，得到黃柏總生物堿提取物。
具體地說，包括如下步驟
(1) 將黃柏粉碎；
(2) 乙醇回流提取；
(3) 減壓回收乙醇，并加水沉淀；
(4) 離心，上清液用苯乙烯型大孔樹脂柱純化；
(5) 濃縮，調節pH,冷藏放置過夜；
(6) 離心，沉淀減壓干燥，得黃柏總生物堿。
其中，步驟(l)優選為，將黃柏切成5mm絲或最粗粉；
其中，步驟(2)優選為用6~10倍量55~95%的乙醇回流提取
1~4次，每次提取l 2h，合并得粗提液；
其中，步驟(3)優選為，將粗提液減壓濃縮至0.25 ~ 0.5 g生藥
/mL,相對密度為1.005 ~ 1.030(60°C)，力口1 6倍水，冷藏放置過夜；其中步驟(4)中所用的大孔樹脂為AB-8型大孔樹脂，將離心 得到的上清液上柱，用5%~ 10%乙醇1 4柱體積沖洗，再用30%~ 95%乙醇18-30柱體積洗脫，得洗脫液；
其中，步驟(5)將洗脫液縮至濃度2.00 2.80g'mL",相對密度 為1.020 ~ L030(60。C)，調節pH至l 2，冷藏放置過夜。
黃柏為云香科植物P/2e〃06fe"dra" c/n'werae Schneid.的干燥樹皮， 按《中國藥典》(2005版)規定黃柏藥材中小檗堿的含量以鹽酸小檗 堿的含量計算不得低于3.0%。
釆用本發明方法提取，總生物堿提取率可達3~4%，在提取物中， 總生物堿可達55%以上。此外，根據所要得到總生物堿的含量要求， 通過調節洗脫液濃縮的濃度和pH值，可以得到不同含量的黃柏總生 物堿，滿足不同醫藥產品的需求。
具體實施例方式
下面結合實施例進一步說明本發明。應當理解，這些實施例僅用 于說明本發明，而不能限制本發明的范圍。
除非特別指明，實施例中所用的實驗方法和試劑均為本領域所知 的常規方法或試劑，例如，減壓干燥的方法，測定總生物堿含量的方 法。
實施例1
黃柏藥材粉碎成最粗粉500 g，加生藥6倍量的80%乙醇，回流 提取4次，每次提取2h，合并藥液，回收乙醇，藥液濃縮成0.33g 生藥.mU1,加入藥液體積的6倍量水沉淀，攪拌均勻，放入冰箱過 夜。藥液離心，取上清液于AB-8大孔樹脂柱，5。/。乙醇洗4BV,洗 脫液棄掉，50。/。乙醇洗20BV，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮至 2.40g.mL/1,加HCl至pH為1，冷藏放置過夜，藥液離心，沉淀減壓 干燥，得黃柏總生物堿，含量測定黃柏總生物堿為68.79%,提取率 達3.26%。實施例2
黃柏藥材破碎成5mm的細絲500g,加生藥10倍量60%乙醇，回 流提取3次，每次提取1.5h，合并藥液，回收乙醇，藥液濃縮成0.25g 生藥，mL-、加入藥液體積的4倍量水沉淀，攪拌均勻，放入冰箱過 夜。藥液離心，取上清液于AB-8大孔樹脂柱，10。/。乙醇洗2BV，洗 脫液棄掉，95。/。乙醇洗18BV，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮至 2.60g'mL",加HCl至pH為2，冷藏放置過夜，藥液離心，沉淀減壓 干燥，得黃柏總生物堿，含量測定黃柏總生物堿為65.40%，提取率 達3.48%。 實施例3
黃柏藥材粉碎成最粗粉500g,加生藥9倍量90%乙醇，回流提取 2次，每次提取lh,合并藥液，回收乙醇,藥液濃縮成0.4g生藥'mL—1， 加入藥液體積的3倍量水沉淀，攪拌均勻，放入冰箱過夜。藥液離心， 取上清液于AB-8大孔樹脂柱，10。/。乙醇洗3BV,洗脫液棄掉，60% 乙醇洗30BV,收集洗脫液，回收乙醇，濃縮至2.00g'mL"，力口 HC1 至pH為l，冷藏放置過夜，藥液離心，沉淀減壓干燥，得黃柏總生 物堿，含量測定黃柏總生物堿為58.23%，提取率達3.78%。 實施例4
黃柏藥材粉碎成最粗粉500g，加生藥7倍量75%乙醇，回流提取 4次，每次提取2.0h,合并藥液，回收乙醇,藥液濃縮成0.29g生藥'mU1, 加入藥液體積的5倍量水沉淀，攪拌均勻，放入冰箱過夜。藥液離心， 取上清液于AB-8大孔樹脂柱，5。/。乙醇洗2BV，洗脫液棄掉，40%乙 醇洗25BV，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮至2.40g'm1/1,加HC1至 pH為2，冷藏放置過夜，藥液離心，沉淀減壓干燥，得黃柏總生物 堿，含量測定黃柏總生物堿為72.19%，提取率達3.69%。 實施例5
黃柏藥材粉碎成最粗粉500g，加生藥8倍量55%乙醇，回流提取
73次，每次提取1.5h，合并藥液，回收乙醇,藥液濃縮成0.4g生藥'mL", 加入藥液體積的4倍量水沉淀，攪拌均勻，放入冰箱過夜。藥液離心， 取上清液于AB-8大孔樹脂柱，10。/。乙醇洗3BV,洗脫液棄掉，30% 乙醇洗28BV，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮至2.80g'mU1，加HC1 至pH為l,冷藏放置過夜，藥液離心，沉淀減壓干燥，得黃柏總生 物堿，含量測定黃柏總生物堿為60.05%，提取率達3.53%。
權利要求
1、一種提取黃柏總生物堿的方法，其包括步驟(1)將黃柏粉碎；(2)乙醇回流提取；(3)減壓回收乙醇，并加水沉淀；(4)離心，上清液用苯乙烯型大孔樹脂柱純化。
2、 如權利要求l所述的方法，其進一步包括將步驟(4)得到的洗脫液濃縮，調節pH，冷藏放置過夜，再經離心，沉淀減壓干燥，得黃柏總生物堿。
3、 如權利要求l或2所述的方法，其中步驟(1)為將黃柏切成5mm絲或最粗粉。
4、 如權利要求1或2所述的方法，其中步驟(2)為用6~10倍量55~95%的乙醇回流提取1~4次，每次提取l 2h，合并得提取液。
5、 如權利要求l或2所述的方法，其中步驟(3)為將步驟(2)得到的提取減壓濃縮至0.25-0.5 g生藥/mL,力口1 6倍量的水，冷藏放置過夜。
6、 如權利要求1或2所述的方法，其中步驟(4)中所用的大孔樹脂為AB-8型大孔樹脂。
7、 如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述步驟(4)分離純化的方法是將離心得到的上清液上柱，用5%~10%乙醇1~4柱體積沖洗，再用30%~95%乙醇18 30柱體積洗脫，得洗脫液。
8、 如權利要求2所述的方法，其特征在于，將洗脫液縮至濃度 "，調節pH至l 2,冷藏放置過夜，再經離心，沉淀減壓干燥，得黃柏總生物堿。
全文摘要
本發明提供了一種提取黃柏總生物堿的方法，其包括乙醇提取，以及苯乙烯型大孔樹脂分離純化等步驟。本發明的方法通過調節洗脫液濃縮的濃度和pH值，獲得不同含量的黃柏總生物堿，從而滿足了不同藥物產品制備的需求。
文檔編號A61K36/756GK101461858SQ20071017981
公開日2009年6月24日 申請日期2007年12月18日 優先權日2007年12月18日
發明者劉麗梅, 劉鳳華, 王瑞海, 許劍琴, 琳 陳 申請人:北京農學院