羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白提高β-細胞增殖、胰島素分泌、胰島素敏感性、葡萄糖耐量并...的制作方法

專利名稱：羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白提高β-細胞增殖、胰島素分泌、胰島素敏感性、葡萄糖耐量并 ...的制作方法
技術領域：
本發明涉及(i)在動物中治療或預防肥胖癥的方法，包括對有此需要的動物施用治療有效量的降低成骨細胞中γ-羧化酶表達或活性的藥劑，與治療前水平相比，所述治療有效量足以引起體重增加減少、脂肪量減少或體重減輕；(ii)在動物中治療或預防葡萄糖不耐受的方法，包括對有此需要的動物施用有效量的降低成骨細胞中γ-羧化酶表達或活性的藥劑，與治療前水平相比，所述治療有效量足以提高葡萄糖耐量；或(iii)在動物中提高胰島素敏感性的方法，包括對有此需要的動物施用治療有效量的降低成骨細胞中γ-羧化酶表達或活性的藥劑，與治療前水平相比，所述治療有效量足以提高葡萄糖敏感性。優選動物是人。在本發明的一個實施方案中，該藥劑是分離的核酸，其選自cDNA、反義DNA、反義RNA和小干擾RNA，所述核酸與編碼γ-羧化酶的基因或mRNA充分互補，以允許與該基因或mRNA特異性雜交，其中所述雜交阻止或降低成骨細胞中γ-羧化酶的表達。在本發明的另一實施方案中，核酸與磷酸基或其它靶向配體綴合，以便于被成骨細胞攝取。
在本文所述的方法中，應當理解“治療”疾病不僅包括改善疾病或其癥狀，而且包括延緩疾病的發展或減輕疾病。
本發明還包括基因療法用于治療代謝綜合征的用途，所述代謝綜合征包括肥胖癥、2型糖尿病、葡萄糖不耐受、動脈粥樣硬化和1型糖尿病。這可如下實現根據本領域多種已知的方法，向載體中引入編碼骨鈣蛋白或其生物活性片段或變體的基因，并用該載體轉染或感染來自患有該疾病或有高風險發生該疾病的患者的細胞。可通過離體或體內方法轉染或感染細胞。
腺相關病毒(AAV)是最有希望用于基因療法的載體之一，并且可用于本發明的方法中。基因轉移和基因療法的常規方法描述于例如Gene TherapyPrinciples and Applications，T.Blackenstein編輯，Springer Verlag，1999；Gene Therapy Protocols(Methods in MolecularMedicine)，P.D.Robbins編輯，Humana Press，1997；和Retro-vectors forHuman Gene Therapy，C.P.Hodgson編輯，Springer Verlag，1996中。AVV是用于人基因療法的很有吸引力的載體體系，因為它對人是非致病性的，具有高整合率并且能夠感染不分裂的細胞，從而使其可用于將基因遞送進組織培養物和完整動物中的哺乳動物細胞。Muzyczka，Curr.Top.Microbiol.Immunol.，15897-129，1992。近期研究證明AAV是基因遞送的有用載體。LaFace等，Viology，162483-486，1998；Zhou等，Exp.Hematol.(NY)，21928-933，1993；Flotte等，PNAS 9010613-10617，1993；和Walsh等，Blood 841492-1500，1994。重組AAV載體已被成功地用于體外和體內轉導標記物基因(Kaplitt等，Nature Genetics，8148-154，1994；Lebkowski等，Mol.Cell.Biol.83988-3996，1988；Samulski等，J.Virol.，633822-3828，1989；Shelling，A.N.和Smith，M.G.，Gene Therapy，1165-169，1994；Yoder等，Blood，82suppl.1347A，1994；Zhou等，J.Exp.Med.，1791867-1875，1994；Hermonat，P.L.和Muzyczka，N.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.，816466-6470，1984；Tratschin等，Mol.Cell.Biol.，42072-2081，1984；McLaughlin等，J.Virol.，621963-1973，1988)以及涉及人疾病的基因(Flotte等，Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.，7349-356，1992；Luo等，Blood，82suppl.1，303A，1994；Ohi等，Gene，89L27914282，1990；Walsh等，PNAS 897257-7261，1992；Wei等，Gene Therapy，1261-268，1994)。
在某些其它的實施方案中，可使用逆轉錄病毒載體將目的基因(例如骨鈣蛋白)轉移進靶細胞內。逆轉錄病毒是指屬于逆轉錄病毒科的病毒，包括腫瘤病毒、泡沫病毒(Russell，D.W.和Miller，A.D.，J.Virol.1996，70217-222；Wu，M.等，J.Virol.1999，734498-4501)和慢病毒(例如HIV-1(Naldini，L.等，Science 1996，272263-267；Poeschla，E.等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1996，9311395-11399；Srinivasakumar，N.等，J.Virol.1997，715841-5848；Zufferey，R.，等Nat.Biotechnol.1997，15871-875；Kim，V.N.，等，J.Virol.1998，72811-816)和貓免疫缺陷病毒(Johnston，J.C.等，J.Virol.1999，734991-5000；Johnston，J.和Power，C，J.Virol.1999，732491-2498；Poeschla，E.M.等，Nat.Med.1998，4354-357))。利用逆轉錄病毒載體治療多種疾病的大量基因療法是本領域公知的(參閱如美國專利No.4,405,712和4,650,764；Friedmann，1989，Science，2441275-1281；Mulligan，1993，Science，260926-932，R.Crystal，1995，Science270404-410，和美國專利No.6,899,871，Kasahara，等，各自通過參考整體并入本文)。越來越多的這些方法目前被用于人類臨床試驗中(Morgan，R.，1993，BioPharm，6(l)32-35；也見The Development ofHuman Gene Therapy，Theodore Friedmann編輯，Cold Spring HarborLaboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.，1999.ISBN0-87969-528-5，其通過參考整體并入本文)。
可通過確定該方法是否減輕所治疾病的任何癥狀來監測本文所述治療方法的效力。或者，可以監測血清羧化不足/未羧化骨鈣蛋白(絕對值，或羧化不足/未羧化骨鈣蛋白/總骨鈣蛋白的比值)和/或血清脂連蛋白和/或血清胰島素的水平，所述水平應當響應于治療而提高。或者可通過監測受治受試者中的糖血來衡量效力。
診斷 本發明提供了診斷病癥(例如與羧化不足/未羧化骨鈣蛋白水平降低相關的病癥)的方法和組合物。這類病癥包括但不僅限于代謝綜合征、葡萄糖不耐受、1型和2型糖尿病、動脈粥樣硬化和肥胖癥。
在本發明的一個具體的實施方案中，提供了診斷患者有發生葡萄糖不耐受或糖尿病之風險的方法，包括(i)測定取自該患者的生物樣品中羧化不足/未羧化骨鈣蛋白的患者水平，以及來自未患有葡萄糖不耐受或糖尿病的受試者生物樣品中羧化不足/未羧化骨鈣蛋白的對照水平，(ii)將患者水平與對照水平比較，和(iii)如果患者水平低于測試水平，則推斷該患者有發生葡萄糖不耐受或糖尿病的風險。在本發明的一個實施方案中，糖尿病為1型或2型。
“生物樣品”包括固體和體液樣品。本發明的生物樣品可包括組織，器官，細胞，細胞的蛋白質或膜提取物，血或生物流體如血、血清、腹水或腦流體(例如腦脊液)。
在本發明的另一個實施方案中，提供了診斷患者有發生葡萄糖不耐受或糖尿病之風險的方法，包括(i)測定取自該患者的生物樣品中羧化不足/未羧化骨鈣蛋白的患者水平；和(ii)將患者水平與標準水平比較；其中如果患者水平低于標準水平，則該患者有發生糖尿病的風險。在對人實施該方法的情況下，標準水平可以是先前已測定為對于無發生糖尿病風險的人而言是正常范圍的羧化不足/未羧化骨鈣蛋白水平。在一些優選的實施方案中，生物樣品是血、血清、血漿、腦脊液、尿、細胞樣品或組織樣品。在本發明的一個實施方案中，糖尿病是1型或2型。
人中羧化不足/未羧化骨鈣蛋白的“標準水平”包括以下值0.1ng/ml到10ng/ml，優選0.2ng/ml到7.5ng/ml，更優選0.5ng/ml到5ng/ml，進一步更優選1ng/ml到5ng/ml。人中羧化不足/未羧化骨鈣蛋白的標準水平也可包括約0.1ng/ml、約0.5ng/ml、約1ng/ml、約2ng/ml、約3ng/ml、約4ng/ml、約5ng/ml、約6ng/ml、約7ng/ml或約10ng/ml。
在本發明的另一實施方案中，提供了診斷患者有發生葡萄糖不耐受或糖尿病之風險的方法，包括(i)測定取自該患者的生物樣品中羧化不足/未羧化骨鈣蛋白與總骨鈣蛋白的比值；和(ii)將該比值與標準比值進行比較；其中，如果患者的比值低于標準比值，則該患者有發生葡萄糖不耐受或糖尿病的風險。在某些實施方案中，標準比值為5％-10％、10％-15％、15％-20％、20％-25％、25％-30％或30％-35％。在某些實施方案中，標準比值約為5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％或35％。優選患者為人。在優選的實施方案中，生物樣品為血、血清、血漿、腦脊液、尿、細胞樣品或組織樣品。在本發明的一個實施方案中，糖尿病為1型或2型。
本發明還提供了診斷患者具有發生動脈粥樣硬化之風險的方法，包括(i)測定取自該患者的生物樣品中羧化不足/未羧化骨鈣蛋白的患者水平，以及取自未患動脈粥樣硬化受試者的生物樣品中羧化不足/未羧化骨鈣蛋白的對照水平，(ii)將患者水平與對照水平比較，和(iii)如果患者水平低于測試水平，則推斷該患者有發生動脈粥樣硬化的風險。
在本發明的另一個實施方案中，提供了診斷患者具有發生動脈粥樣硬化之風險的方法，包括(i)測定取自該患者的生物樣品中羧化不足/未羧化骨鈣蛋白的患者水平；和(ii)將患者水平與標準水平比較；其中如果患者水平低于標準水平，則該患者有發生動脈粥樣硬化的風險。在對人實施該方法的情況下，標準水平可以是先前已測定為對于無發生動脈粥樣硬化風險的人而言是正常范圍的羧化不足/未羧化骨鈣蛋白水平。在優選的實施方案中，生物樣品是血、血清、血漿、腦脊液、尿、細胞樣品或組織樣品。優選患者是人。
在本發明的另一個實施方案中，提供了診斷患者具有發生動脈粥樣硬化之風險的方法，包括(i)測定取自該患者的生物樣品中羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白與總骨鈣蛋白的比值；和(ii)將該比值與標準比值比較；其中如果患者比值低于標準比值，則該患者有發生動脈粥樣硬化的風險。在某些實施方案中，標準比值是5％-10％、10％-15％、15％-20％、20％-25％、25％-30％或30％-35％。在某些實施方案中，標準比值是5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％或35％。優選患者是人。在優選的實施方案中，生物樣品是血、血清、血漿、腦脊液、尿、細胞樣品或組織樣品。
在本發明的另一個實施方案中，提供了診斷患者具有發生代謝綜合征之風險的方法，包括(i)測定取自該患者的生物樣品中羧化不足/未羧化骨鈣蛋白的患者水平，以及取自未患代謝綜合征受試者的生物樣品中羧化不足/未羧化骨鈣蛋白的對照水平，(ii)將患者水平與對照水平進行比較，和(iii)如果患者水平低于測試水平，則推斷該患者有發生代謝綜合征的風險。
在本發明的另一個實施方案中，提供了診斷患者具有發生代謝綜合征之風險的方法，包括(i)測定取自該患者的生物樣品中羧化不足/未羧化骨鈣蛋白的患者水平；和(ii)將患者水平與標準水平進行比較；其中如果患者水平低于標準水平，則該患者有發生代謝綜合征的風險。在對人實施該方法的情況下，標準水平可以是先前已測定為對無發生代謝綜合征風險的人而言是正常范圍的羧化不足/未羧化骨鈣蛋白水平。在優選的實施方案中，生物樣品是血、血清、血漿、腦脊液、尿、細胞樣品或組織樣品。優選患者是人。
在本發明的另一個實施方案中，提供了診斷患者具有發生代謝綜合征之風險的方法，包括(i)測定來自患者的生物樣品中羧化不足/未羧化骨鈣蛋白與總骨鈣蛋白的比值；和(ii)將該比值與標準比值進行比較；其中如果患者比值低于標準比值，則該患者有發生代謝綜合征的風險。在某些實施方案中，標準比值是5％-10％、10％-15％、15％-20％、20％-25％、25％-30％或30％-35％。在某些實施方案中，標準比值是5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％或35％。優選患者是人。在優選的實施方案中，生物樣品是血、血清、血漿、腦脊液、尿、細胞樣品或組織樣品。
在本發明的另一方面中，提供了診斷患者有發生肥胖癥之風險的方法，包括(i)測定取自該患者的生物樣品中羧化不足/未羧化骨鈣蛋白的患者水平，以及取自未患肥胖癥受試者的生物樣品中羧化不足/未羧化骨鈣蛋白的對照水平，(ii)將患者水平與對照水平進行比較，和(iii)如果患者水平低于測試水平，則推斷該患者有發生肥胖癥的風險。
在本發明的另一實施方案中，提供了診斷患者有發生肥胖癥之風險的方法，包括(i)測定取自該患者的生物樣品中羧化不足/未羧化骨鈣蛋白的患者水平；和(ii)將患者水平與標準水平進行比較；其中如果患者水平低于標準水平，則該患者有發生肥胖癥的風險。在對人實施該方法的情況下，標準水平可以是先前已被測定為對無發生肥胖癥風險下的人而言是正常范圍的羧化不足/未羧化骨鈣蛋白水平。在優選的實施方案中，生物樣品是血、血清、血漿、腦脊液、尿、細胞樣品或組織樣品。優選患者是人。
在本發明的另一實施方案中，提供了診斷患者有發生肥胖癥之風險的方法，包括(i)測定來自患者的生物樣品中羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白與總骨鈣蛋白的比值；和(ii)將該比值與標準比值進行比較；其中如果患者比值低于標準比值，則該患者有發生肥胖癥的風險。在某些實施方案中，標準比值是5％-10％、10％-15％、15％-20％、20％-25％、25％-30％或30％-35％。在某些實施方案中，標準比值是5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％或35％。優選患者是人。在優選的實施方案中，生物樣品是血、血清、血漿、腦脊液、尿、細胞樣品或組織樣品。
在本發明的另一實施方案中，提供了診斷患者具有發生選自葡萄糖不耐受、胰腺β-細胞增殖受損、胰島素分泌受損和胰島素敏感性受損之疾病的風險的方法，包括(i)測定取自該患者的生物樣品中羧化不足/未羧化骨鈣蛋白的患者水平，以及取自未患該疾病受試者的生物樣品中羧化不足/未羧化骨鈣蛋白的對照水平，(ii)將患者水平和對照水平進行比較，和(iii)如果患者水平低于測試水平，則推斷該患者有發生該疾病的風險。
在本發明的另一個實施方案中，提供了診斷患者具有發生選自葡萄糖不耐受、胰腺β-細胞增殖受損、胰島素分泌受損和胰島素敏感性受損之疾病的風險的方法，包括(i)測定取自該患者的生物樣品中羧化不足/未羧化骨鈣蛋白的患者水平；和(ii)將患者水平與標準水平比較；其中如果患者水平低于標準水平，則該患者有發生選自葡萄糖不耐受、胰腺β-細胞增殖受損、胰島素分泌受損和胰島素敏感性受損之疾病的風險。在對人實施該方法的情況下，標準水平可以是先前已測定為對無發生下述疾病的風險下的人而言是正常范圍的羧化不足/未羧化骨鈣蛋白水平，所述疾病選自葡萄糖不耐受、受損的胰腺β-細胞增殖、受損的胰島素分泌和受損的胰島素敏感性。在優選的實施方案中，生物樣品是血、血清、血漿、腦脊液、尿、細胞樣品或組織樣品。優選患者是人。
在本發明的另一個實施方案中，提供了診斷患者具有發生選自葡萄糖不耐受、胰腺β-細胞增殖受損、胰島素分泌受損和胰島素敏感性受損之疾病的風險的方法，包括(i)測定取自該患者的生物樣品中羧化不足/未羧化骨鈣蛋白與總骨鈣蛋白的比值；和(ii)將該比值與標準比值進行比較；其中如果患者比值低于標準比值，則該患者有發生選自葡萄糖不耐受、胰腺β-細胞增殖受損、胰島素分泌受損和胰島素敏感性受損之疾病的風險。在某些實施方案中，標準比值是5％-10％、10％-15％、15％-20％、20％-25％、25％-30％或30％-35％。在某些實施方案中，標準比值是5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％或35％。優選患者是人。在優選的實施方案中，生物樣品是血、血清、血漿、腦脊液、尿、細胞樣品或組織樣品。
除了測定羧化不足/未羧化骨鈣蛋白水平以外，本發明還提供了用于診斷與脂連蛋白水平降低相關之病癥的方法和組合物。這些病癥包括但不僅限于代謝綜合征、葡萄糖不耐受、1型和2型糖尿病、動脈粥樣硬化和肥胖癥。在本發明的一個具體的實施方案中，提供了診斷患者具有發生肥胖癥之風險下的方法，包括(i)測定取自該患者的生物樣品中脂連蛋白的患者水平，以及取自未患肥胖癥受試者的生物樣品中脂連蛋白的對照水平，(ii)將患者水平和對照水平進行比較，和(iii)如果患者水平低于測試水平，則推斷該患者有發生肥胖癥的風險。
在某些實施方案中，測量脂連蛋白和胰島素二者的血清水平，如果患者中脂連蛋白和胰島素的血清水平均低于未患病受試者中的水平，則該患者有發生疾病的風險。在另一實施方案中，測量患者的血清脂連蛋白和糖血指數，如果患者中的脂連蛋白血清水平低于未患病受試者中的水平并且患者還患有高糖血(high glycemia)，則該患者有發生疾病的風險。或者，可測量血清脂連蛋白和未羧化骨鈣蛋白，或者可測量血清脂連蛋白、未羧化骨鈣蛋白和胰島素，并與對照進行比較，用于診斷代謝綜合征、其組分或1型糖尿病。
如上文所公開的，在實施本發明的診斷方法時，生物樣品選自血、血清、血漿、腦脊液、細胞樣品或組織樣品。在另一實施方案中，樣品來自于人。
用于檢測蛋白質表達水平的測定法是本領域技術人員公知的。這些測定包括例如基于抗體的免疫測定法。如本文所述使用抗體的方法尤其適用于下述細胞、組織和病癥，所述細胞、組織和病癥差異性表達骨鈣蛋白、OST-PTP或γ-羧化酶，或者與本文中其他部分所討論的病癥有關。所述方法使用與目的蛋白及其片段或變體特異性結合的抗體。對治療性應用而言，優選下述抗體，其識別OST-PTP并降低其與γ-羧化酶結合或使其脫磷酸化的能力。對診斷性用途而言，優選針對羧化不足/未羧化骨鈣蛋白、γ-羧化酶、脂連蛋白和維生素K的抗體。即便抗體還結合與目的蛋白質不基本同源的其它蛋白質，也認為是選擇性結合。這些其它蛋白質與目的蛋白的片段或結構域共有同源性。特定區域的保守性導致抗體通過同源序列結合兩種蛋白質。在這種情況下，應當理解，結合目的蛋白質的抗體仍然是選擇性的。然而在某些實施方案中，抗體不與除目的蛋白之外的蛋白質顯著結合。
可通過諸如放射免疫測定、免疫放射測定和/或酶免疫測定的測定法來測定生物樣品中的抗原(例如骨鈣蛋白或其它目的蛋白)量。“放射免疫測定”是使用經標記(例如放射性標記)的抗原形式來檢測和測量抗原濃度的技術。用于抗原的放射性標記的實例包括3H、14C和125I。如下測量樣品(例如生物樣品)中的抗原(例如骨鈣蛋白)濃度使樣品中的抗原與經(例如放射性)標記抗原競爭結合該抗原的抗體。為了確保經標記抗原和未標記抗原之間的競爭性結合，經標記抗原以足以飽和抗體結合位點的濃度存在。樣品中抗原的濃度越高，與抗體結合的經標記抗原的濃度就越低。
在放射免疫測定中，為了測定與抗體結合的經標記抗原濃度，必須將抗原-抗體復合體與游離抗原分開。將抗原-抗體復合體與游離抗原分開的一種方法是用抗同種型抗血清沉淀抗原-抗體復合體。將抗原-抗體復合體與游離抗原分開的另一種方法是以用甲醛殺死的金黃色葡萄球菌(S.aureus)來沉淀抗原-抗體復合體。將抗原-抗體復合體與游離抗原分開的又一種方法是進行“固相放射免疫測定”，其中抗體與瓊脂糖珠、聚苯乙烯孔、聚氯乙烯孔或微量滴定板孔連接(例如共價連接)。通過將結合抗體的經標記抗原濃度與基于已知抗原濃度樣品的標準曲線進行比較，可以測定生物樣品中的抗原濃度。
“免疫放射測定”(Immunoradiometric Assay，IRMA)是其中抗體試劑被放射性標記一種免疫測定法。IRMA需要通過諸如與蛋白質(例如兔血清白蛋白(RSA))綴合的技術產生多價抗原綴合物。所述多價抗原綴合物中每個分子必須含有至少2個抗原殘基，并且抗原殘基之間的距離必須足夠遠，以允許至少兩個抗體與抗原結合。例如，在IRMA中，多價抗原綴合物可附著至固體表面(如塑料球)。向含有包被有多價抗原綴合物的球的試管中添加未標記“樣品”抗原和針對抗原的放射性標記抗體。樣品中的抗原與多價抗原綴合物競爭抗原-抗體結合位點。在孵育適當的時間后，洗滌去除未結合的反應物，并測定固相上放射性的量。結合的放射性抗體量與樣品中的抗原濃度成反比。
最常見的酶免疫測定法是“酶聯免疫吸附測定(ELISA)”。“酶聯免疫吸附測定(ELISA)”是使用標記(例如與酶連接)形式的抗體來檢測和測量抗原濃度的技術。在“夾心ELISA”中，抗體(例如骨鈣蛋白抗體)與固相(例如微量滴定板)連接，并與含有抗原(例如骨鈣蛋白)的生物樣品接觸。然后洗滌固相以去除未結合的抗原。然后將經標記(例如與酶連接)的抗體與已結合的抗原(如果存在的話)結合，形成抗體-抗原-抗體夾心。可與抗體連接的酶的實例為堿性磷酸酶、辣根過氧化物酶、螢光素酶、脲酶和β-半乳糖苷酶。與酶連接的抗體與底物反應，產生可以被測定的有色反應產物。
在“競爭性ELISA”中，將抗體與含有抗原(例如骨鈣蛋白)的樣品一起孵育。然后將抗原-抗體混合物與包被有抗原的固相(例如微量滴定板)接觸。樣品中存在的抗原越多，則可與固相結合的游離抗體就越少。然后向固相中添加經標記(例如與酶連接)的第二抗體，以測定與固相結合的第一抗體的量。
在“免疫組織化學測定法”中，測試組織切片中特定的蛋白質，這通過將該組織接觸與被測蛋白質具有特異性的抗體來實現。然后通過多種方法中的任意方法使抗體顯現，以確定蛋白質的存在與否和存在量。用于顯現抗體的方法的實例為例如通過與該抗體連接的酶(例如螢光素酶、堿性磷酸酶、辣根過氧化物酶或β-半乳糖苷酶)，或化學方法(例如DAB/底物發色團)。
除了檢測蛋白質表達水平以外，本發明的診斷測定法還可利用設計成檢測RNA表達水平的方法。RNA表達水平可通過使用本領域技術人員公知的方法測定，包括例如使用Northern印跡、RT-PCR或原位雜交。
骨鈣蛋白的羧化賦予對羥磷灰石的更高親和力。通常，通過與羥磷灰石一起孵育并離心然后進行免疫測定來測量總骨鈣蛋白。然后使用相同的免疫測定法測量上清液，其中含有未吸附至羥磷灰石的骨鈣蛋白。該方法的結果可表述為絕對濃度，或者表述為羧化不足骨鈣蛋白與羧化骨鈣蛋白的比值。
另一方法使用單克隆抗體，所述抗體區分骨鈣蛋白中所有或一些Glu/Gla殘基的羧化狀態。例如，GluOC4-5(TaKaRa目錄號M171)與21和24位上帶有(脫羧的)谷氨酸殘基的人骨鈣蛋白反應，而不與Gla型骨鈣蛋白反應。
骨鈣蛋白測量方法的綜述見Lee等，2000，Ann.Clin.Biochem.37，432-446。
藥物篩選和測定 提供了基于細胞和不基于細胞的藥物篩選方法，以鑒定降低OST-PTP或γ-羧化酶之活性或表達或者提高羧化不足/未羧化骨鈣蛋白之活性或表達水平的候選藥劑。這些藥劑可用于治療或預防與能量代謝和OST-PTP信號轉導途徑相關的病癥。這些病癥包括代謝綜合征、葡萄糖不耐受、1型或2型糖尿病、動脈粥樣硬化或肥胖癥。這些藥劑可用于治療下述病癥，所述病癥的特征是胰島素產生降低、胰島素敏感性降低和葡萄糖耐量降低或脂肪量增加。這些測定也可用于測定藥劑在治療或預防OST-PTP途徑相關病癥方面的有效性。
提供了不基于細胞的篩選方法來鑒定結合OST-PTP、γ-羧化酶或骨鈣蛋白并因而調控所述蛋白質活性的化合物。
提供了鑒定或測定結合OST-PTP的藥劑的篩選方法，所述方法包括以下步驟(i)提供包含OST-PTP或者其片段或變體的混合物，(ii)將所述混合物與藥劑接觸，(iii)確定該藥劑是否與OST-PTP結合，和(iv)如果藥劑與OST-PTP或其片段或變體結合，則對該藥劑進行鑒定。該方法還可包括確定該藥劑是否降低OST-PTP使γ-羧化酶脫磷酸之能力的步驟。
提供了鑒定或測定結合OST-PTP中磷酸酶1結構域的藥劑的篩選方法，所述方法包括步驟(i)提供包含OST-PTP磷酸酶1結構域或者其片段或變體的混合物，(ii)將所述混合物與藥劑接觸，(iii)測定該藥劑是否與OST-PTP磷酸酶1結構域結合，和(iv)如果該藥劑與OST-PTP磷酸酶1結構域或其片段或變體結合，則對該藥劑進行鑒定。該方法還可包括確定該藥劑是否降低OST-PTP使γ-羧化酶脫磷酸之能力的步驟。
提供了鑒定或測定結合γ-羧化酶的藥劑的篩選方法，所述方法包括步驟(i)提供包含γ-羧化酶或者其片段或變體的混合物，(ii)將該混合物與藥劑接觸，(iii)測定該藥劑是否與γ-羧化酶結合，和(iv)如果該藥劑與γ-羧化酶或其片段或變體結合，則對該藥劑進行鑒定。該方法還可包括確定該藥劑是否降低γ-羧化酶活性的步驟。
提供了鑒定或測定結合骨鈣蛋白的藥劑的篩選方法，所述方法包括步驟(i)提供包含骨鈣蛋白或者其片段或變體的混合物，(ii)將所述混合物與藥劑接觸，(iii)測定該藥劑是否與骨鈣蛋白結合，和(iv)如果該藥劑與骨鈣蛋白或其片段或變體結合，則對該藥劑進行鑒定。該方法還可包括確定該藥劑是否提高骨鈣蛋白活性的步驟。
可通過使用競爭性結合測定法來測定藥劑的結合。競爭劑是已知與靶分子(即多種蛋白質之一)結合的結合部分，如抗體、肽、結合配偶體、配體等。在某些情況下，藥劑與結合部分之間可能存在競爭性結合，結合部分取代了該藥劑。
藥劑可以是標記的。首先，向蛋白質中添加藥劑或競爭劑之一種或二者均添加，直至時間足夠允許結合(如果有結合的話)。可在有助于實現最佳活性的任何溫度下進行孵育，通常在4℃和40℃之間。孵育時間針對最佳活性進行選擇，但也可進行優化以便于進行快速高通量篩選。通常0.1至1小時就足夠。通常去除或洗去過量的試劑。然后添加第二種組分，隨后追蹤經標記組分是否存在，以指示結合。
使用這些測定法，可首先添加競爭劑，然后添加藥劑。對競爭劑的取代表明藥劑與多種蛋白質之一發生了結合，因此能與其結合并可能調控其活性。在該實施方案中，可標記任一組分。因此，例如，如果標記競爭劑，則洗滌液中存在標記表示被藥劑取代。或者如果標記藥劑，則支持物上存在標記表示發生了取代。
在另一實例中，首先添加藥劑、孵育并洗滌，然后添加競爭劑。競爭劑結合的缺失可能表示藥劑以高親和力與多種蛋白質之一結合。因此，如果標記藥劑，則支持物上存在標記與缺乏競爭劑結合一起可表明該藥劑能夠結合多種蛋白質之一。
該方法可包括差異性篩選，以鑒定能調控多種蛋白質之一的活性的藥劑。在這種情況下，該方法包括在第一樣品中將蛋白質與競爭劑組合。第二樣品包含藥劑、蛋白質和競爭劑。藥劑的添加在允許調控多種蛋白質之一的條件下進行。對兩種樣品測定競爭劑結合，兩種樣品之間結合的改變或差異表示存在能結合多種蛋白質之一并可能調控其活性的藥劑。也就是說，如果競爭劑結合在第二樣品中與第一樣品不同，則該藥劑能夠結合多種蛋白質之一。
在測定中可使用陽性對照和陰性對照。優選所有對照和測試樣品均至少一式三份進行，以獲得有統計學意義的結果。所有樣品的孵育均持續足以使藥劑與蛋白質結合的時間。孵育后，將所有樣品洗滌至不含非特異性結合的材料，并測定結合的(一般是經標記的)藥劑量。例如，使用放射性標記時，可在閃爍計數器中計數樣品，以測定已結合化合物的量。
篩選測定中可包含多種其它試劑。它們包括如可用于優化蛋白質-蛋白質結合和/或降低非特異性或背景相互作用的試劑，如鹽、中性蛋白質(例如白蛋白)、去污劑等。也可使用以其它方式改善測定效率的試劑，如蛋白酶抑制劑、核酸酶抑制劑、抗微生物劑等。可以以提供必要結合的任何順序添加組分混合物。
也可以不基于細胞來篩選調控多種蛋白質之一的活性的藥劑。用于能調控多種蛋白質之一活性的藥劑的方法包括以下步驟如上向多種蛋白質之一的樣品中添加藥劑，并測定所述多種蛋白質之一的生物活性改變。“調控多種蛋白質之一的活性”包括活性提高、活性降低，或者所存在活性類型或種類的改變。因此，藥劑應當既與蛋白質結合(盡管這可能不是必需的)又改變其如本文定義的生物活性或生化活性。
因此，在一個實例中，該方法包括將蛋白質樣品和藥劑組合，并評價其對OST-PTP、γ-羧化酶或骨鈣蛋白的影響。酶活性(特別是OST-PTP或γ-羧化酶活性)或本文中的語法等同的表述表示與酶相關的一種或多種生物活性。對OST-PTP而言，該活性優選地是使γ-羧化酶或胰島素受體的脫磷酸；對γ-羧化酶而言，其為使骨鈣蛋白羧化。篩選測定被設計成尋找這樣的藥劑，所述藥劑在來自轉化動物或細胞的生物樣品中降低OST-PTP或者γ-羧化酶活性或提高羧化不足/未羧化骨鈣蛋白和脂連蛋白水平。
具體地，提供了鑒定或測定降低OST-PTP活性的篩選方法，所述方法包括以下步驟(a)提供包含OST-PTP或者其片段或變體的對照和測試混合物，(b)將所述混合物與活性劑接觸，(c)測定測試混合物和對照中OST-PTP的活性水平，和(d)如果測試混合物中的OST-PTP活性水平低于對照中的水平，則選擇該生物活性劑。
提供了鑒定或測定降低γ-羧化酶活性的篩選方法，所述方法包括以下步驟(a)提供包含γ-羧化酶或者其片段或變體的對照和測試混合物，(b)在允許生物活性劑結合γ-羧化酶或者其片段或變體的條件下，向測試混合物中添加生物活性劑，(c)測定測試混合物和對照中γ-羧化酶的活性水平，和(d)如果測試混合物中的γ-羧化酶活性水平低于對照中的水平，則選擇該生物活性劑。
提供了用于篩選或測定藥劑的基于細胞的篩選方法，所述藥劑降低編碼OST-PTP的Esp基因或編碼γ-羧化酶的基因的表達水平。或者可使用藥物篩選測定法來鑒定或測定提高骨鈣蛋白基因表達水平的藥劑。
本發明還提供鑒定使骨鈣蛋白脫羧的藥劑的篩選方法，所述方法包括以下步驟(a)提供包含羧化骨鈣蛋白的對照和測試混合物，(b)向測試混合物中添加藥劑，(c)測定測試混合物和對照中的羧化骨鈣蛋白水平，和(d)如果測試混合物中羧化骨鈣蛋白水平低于對照中的活性，則選擇該藥劑。
提供了鑒定或測定藥劑的基于細胞的方法，所述藥劑降低OST-PTP基因的表達，所述方法包括步驟(a)測定細胞中OST-PTP的第一表達水平，(b)在與測試藥劑接觸后測定OST-PTP的第二表達水平；和(c)將第一表達水平與第二表達水平進行比較，其中如果第一表達水平高于第二表達水平，則鑒定出了能夠降低OST-PTP表達的藥劑。可通過測量所產生的OST-PTP mRNA量或所產生的OST-PTP蛋白量來測定OST-PTP基因的表達水平。
提供了鑒定或測定下述藥劑的基于細胞的方法，所述藥劑降低γ-羧化酶基因表達，所述方法包括步驟(a)測定細胞中γ-羧化酶的第一表達水平，(b)在與測試藥劑接觸后測定γ-羧化酶的第二表達水平；和(c)將第一表達水平與第二表達水平進行比較，其中如果第一表達水平高于第二表達水平，則鑒定出了能夠降低γ-羧化酶表達的藥劑。可通過測量所產生的γ-羧化酶mRNA量或所產生的γ-羧化酶蛋白量來測定γ-羧化酶基因的表達水平。
提供了鑒定或測定下述藥劑的基于細胞的方法，所述藥劑提高骨鈣蛋白基因表達，所述方法包括步驟(a)測定細胞中骨鈣蛋白的第一表達水平，(b)在與測試藥劑接觸后測定骨鈣蛋白的第二表達水平；和(c)將第一表達水平與第二表達水平進行比較，其中如果第一表達水平低于第二表達水平，則鑒定出了能夠提高骨鈣蛋白表達的藥劑。可通過測量所產生的骨鈣蛋白mRNA量或所產生的骨鈣蛋白蛋白量來測定骨鈣蛋白基因的表達水平。
可利用報告基因來篩選能夠調控基因表達的藥劑。在這些測定中，產生含有基因構建體的細胞，所述構建體中報告基因的表達被置于天然目的基因(即OST-PTP、γ-羧化酶或骨鈣蛋白基因)的天然基因表達調節元件的控制下。報告基因包括但不僅限于CAT、LacZ、螢光素酶或GFP。
提供了篩選或測定下述藥劑的基于細胞的方法，所述藥劑降低OST-PTP基因的表達，所述方法包括以下步驟(a)測定細胞中報告基因的第一表達水平，其中所述報告基因的表達處于天然OST-PTP基因表達調節元件控制下，(b)在與測試藥劑接觸后測定報告基因的第二表達水平；和(c)將第一表達水平與第二表達水平進行比較，其中如果第一表達水平高于第二表達水平，則鑒定出了能夠降低報告基因表達的藥劑。
提供了篩選或測定下述藥劑的基于細胞的方法，所述藥劑降低γ-羧化酶基因的表達，所述方法包括以下步驟(a)測定細胞中報告基因的第一表達水平，其中所述報告基因的表達處于天然γ-羧化酶基因表達調節元件控制下，(b)在與測試藥劑接觸后測定報告基因的第二表達水平；和(c)將第一表達水平與第二表達水平進行比較，其中如果第一表達水平高于第二表達水平，則鑒定出了能夠降低γ-羧化酶基因表達的藥劑。
提供了篩選或測定下述藥劑的基于細胞的方法，所述藥劑提高骨鈣蛋白基因的表達，所述方法包括以下步驟(a)測定細胞中報告基因的第一表達水平，其中所述報告基因的表達處于天然骨鈣蛋白基因表達調節元件控制下，(b)在與測試藥劑接觸后測定報告基因的第二表達水平；和(c)將第一表達水平與第二表達水平進行比較，其中如果第一表達水平低于第二表達水平，則鑒定出了能夠提高骨鈣蛋白基因表達的藥劑。
提供了用于篩選降低OST-PTP或γ-羧化酶活性的藥劑的基于細胞的篩選測定法。
具體地，提供了篩選下述藥劑的基于細胞的方法，所述藥劑降低OST-PTP活性，所述方法包括以下步驟(a)測定表達OST-PTP磷酸酶1結構域的第一細胞中的第一活性水平，(b)將表達OST-PTP磷酸酶1結構域的第二細胞與藥劑接觸，(c)測定表達OST-PTP磷酸酶1結構域的第二細胞中的第二活性水平；和(d)將第一活性水平與第二活性水平進行比較，其中如果第一活性水平高于第二活性水平，則該藥劑降低OST-PTP活性。可通過測量γ-羧化酶的活性水平來測定OST-PTP的活性水平。可通過測量骨鈣蛋白羧基化水平來測定OST-PTP的活性水平。
提供了篩選或測定降低下述藥劑的基于細胞的方法，所述藥劑降低γ-羧化酶活性，所述方法包括以下步驟(a)測定表達γ-羧化酶的第一細胞中的第一活性水平，(b)將表達γ-羧化酶的第二細胞與藥劑接觸，(c)測定表達γ-羧化酶的第二細胞中的第二活性水平；和(d)將第一活性水平與第二活性水平進行比較，其中如果第一活性水平高于第二活性水平，則該藥劑降低γ-羧化酶活性。測量γ-羧化酶活性的測定法是本領域技術人員已知的(見例如Hubbard等，(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 866893-6897；Rehemtulla等，(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 904611-4615)。
γ-羧化酶催化骨鈣蛋白中特定的谷氨酸殘基發生翻譯后修飾，形成γ-羧基谷氨酸。在本發明的一個實施方案中，通過測量骨鈣蛋白的羧化水平來測定γ-羧化酶活性或脫羧酶活性水平。
提供了篩選下述藥劑的基于細胞的方法，所述藥劑使骨鈣蛋白脫羧，所述方法包括步驟(a)測定表達骨鈣蛋白的第一細胞中羧化骨鈣蛋白的第一水平，(b)將表達羧化骨鈣蛋白的第二細胞與藥劑接觸，(c)測定羧化骨鈣蛋白的第二水平，和(d)將羧化骨鈣蛋白的第一水平與羧化骨鈣蛋白的第二水平進行比較，其中如果羧化骨鈣蛋白的第一水平高于第二水平，則該藥劑使骨鈣蛋白脫羧。
待用于篩選或測定方法的細胞包括天然表達OST-PTP、γ-羧化酶或骨鈣蛋白的細胞；經遺傳修飾而表達(或過表達)OST-PTP、OST-PTP的磷酸酶1結構域、γ-羧化酶或骨鈣蛋白的細胞，以及來自本發明的轉基因動物的細胞。這些細胞包括過表達OST-PTP或γ-羧化酶的轉化成骨細胞。
提供了測試藥劑在提高脂肪細胞中脂連蛋白表達方面的有效性的方法，包括(a)將成骨細胞和脂肪細胞共培養，(b)將成骨細胞與候選藥劑接觸，(c)測定該候選藥劑是否將脂連蛋白或者其片段或變體的表達或分泌水平提高至高于對照共培養物中測量的對照水平，所述對照共培養物中成骨細胞不與候選藥劑接觸，和(d)如果該候選藥劑將脂連蛋白表達或分泌水平提高至高于對照水平，則選擇該候選藥劑作為在脂肪細胞中提高脂連蛋白表達或分泌的藥劑。
提供了測試藥劑在提高胰腺β-細胞中胰島素表達或分泌方面的有效性的方法，包括(a)將成骨細胞和胰腺β-細胞共培養，(b)將成骨細胞與候選藥劑接觸，(c)測定該候選藥劑是否將胰島素表達或分泌水平提高至高于對照共培養物中測量的胰島素表達的對照水平，所述對照共培養物中成骨細胞不與候選藥劑接觸，和(d)如果該候選藥劑將胰島素表達或分泌水平提高至高于對照水平，則選擇該候選藥劑作為在胰腺β-細胞中提高胰島素表達或分泌的藥劑。
提供了測定候選藥劑在動物中治療或預防代謝綜合征或與代謝綜合征相關表型方面之能力的方法，所述表型選自1型或2型糖尿病的素因(predisposition)、葡萄糖不耐受、胰島素產生降低、胰島素敏感性降低、葡萄糖耐量降低、動脈粥樣硬化和脂肪量提高，所述方法包括(a)提供測試動物和對照動物，(b)對測試動物施用候選藥劑，(c)將測試動物中的羧化不足/未羧化骨鈣蛋白水平與對照動物中的羧化不足/未羧化骨鈣蛋白水平進行比較，和(d)如果測試動物中的羧化不足/未羧化骨鈣蛋白水平高于對照動物中的羧化不足/未羧化骨鈣蛋白水平，則選擇該候選藥劑。在本發明的一個具體的實施方案中，測量成骨細胞中羧化不足/未羧化骨鈣蛋白水平。
在一個實例中，測量成骨細胞中羧化不足/未羧化骨鈣蛋白的水平。候選藥劑可與有利于被成骨細胞攝取的磷酸基結合。
提供了測定候選藥劑在動物中治療或預防代謝綜合征或與代謝綜合征相關表型方面之能力的方法，所述表型選自2型糖尿病的素因、葡萄糖不耐受、胰島素產生降低、胰島素敏感性降低、葡萄糖耐量降低、動脈粥樣硬化和脂肪量提高，所述方法包括(a)提供第一動物和第二動物，(b)對所述第一動物施用候選藥劑，(c)將步驟(b)中給予候選藥劑的第一動物中的OST-PTP表達或活性水平與步驟(a)中未施用所述候選藥劑的第二動物中的OST-PTP水平進行比較；其中選擇降低OST-PTP表達或活性水平的候選藥劑作為有效治療代謝綜合征或與之相關表型的藥劑。
可測量成骨細胞中的OST-PTP表達或活性水平。另外，候選藥劑可與有利于被成骨細胞攝取的磷酸基結合。
提供了測定候選藥劑在動物中治療或預防代謝綜合征或與代謝綜合征相關表型方面之能力的方法，所述表型選自1型或2型糖尿病的素因、葡萄糖不耐受、胰島素產生降低、胰島素敏感性降低、葡萄糖耐量降低、動脈粥樣硬化和脂肪量提高，所述方法包括(a)提供第一動物和第二動物，(b)對所述第一動物施用候選藥劑，(c)將步驟(b)中給予候選藥劑的第一動物中骨鈣蛋白的表達或活性或分泌水平與步驟(a)中未施用所述候選藥劑的第二動物中骨鈣蛋白的表達或活性水平進行比較；其中選擇提高骨鈣蛋白或其片段或變體的表達或活性或分泌的候選藥劑作為有效治療代謝綜合征或與之相關表型的藥劑。
提供了測定候選藥劑在動物中治療或預防代謝綜合征或與代謝綜合征相關表型方面之能力的方法，所述表型選自1型或2型糖尿病的素因、葡萄糖不耐受、胰島素產生降低、胰島素敏感性降低、葡萄糖耐量降低、動脈粥樣硬化和脂肪量提高，所述方法包括(a)提供第一動物和第二動物，(b)對所述第一動物施用候選藥劑，(c)將步驟(b)中給予候選藥劑的第一動物中脂連蛋白的或其片段或變體表達或分泌水平與步驟(a)中未施用所述候選藥劑的第二動物中脂連蛋白的表達或分泌水平進行比較；其中選擇提高脂連蛋白或其片段或變體的表達或分泌水平的候選藥劑作為有效治療代謝綜合征或與之相關表型的藥劑。在這樣的方法中，在脂肪細胞或血清中測量脂連蛋白的表達或分泌水平。
提供了篩選候選藥劑在骨鈣蛋白缺陷型小鼠中治療或預防代謝綜合征之能力的方法，其中所述骨鈣蛋白缺陷型小鼠與野生型小鼠相比顯示出選自以下的表型骨鈣蛋白表達降低、1型或2型糖尿病素因、胰島素分泌降低、動脈粥樣硬化、胰島素敏感性降低、脂連蛋白或者其片段或變體的表達或分泌降低、葡萄糖耐量降低和脂肪量提高，所述方法包括(a)提供第一和第二骨鈣蛋白缺陷型小鼠，它們均與所述骨鈣蛋白缺陷型小鼠來自于相同的品系；(b)對所述第一骨鈣蛋白缺陷型小鼠施用候選藥劑，(c)將步驟(b)中給予候選藥劑的第一骨鈣蛋白缺陷型小鼠的表型與步驟(a)中未施用所述候選藥劑的所述第二骨鈣蛋白缺陷型小鼠的表型進行比較；其中選擇降低或改善該表型的候選藥劑作為有效治療代謝綜合征的藥劑。
提供了篩選候選藥劑在脂連蛋白缺陷型小鼠中治療或預防代謝綜合征之能力的方法，其中所述脂連蛋白缺陷型小鼠與野生型小鼠相比顯示出選自以下的表型1型或2型糖尿病素因、胰島素分泌降低、胰島素敏感性降低、動脈粥樣硬化、葡萄糖耐量降低和脂肪量提高，所述方法包括(a)提供第一和第二脂連蛋白缺陷型小鼠，其均來自于相同的品系；(b)對所述第一脂連蛋白缺陷型小鼠施用候選藥劑，(c)將步驟(b)中給予候選藥劑的第一脂連蛋白缺陷型小鼠的表型與步驟(a)中未施用所述候選藥劑的所述第二脂連蛋白缺陷型小鼠的表型進行比較；其中選擇降低或改善該表型的候選藥劑作為有效治療代謝綜合征的藥劑。
提供了在懷疑降低成骨細胞中OST-PTP活性或表達的藥劑中篩選用于治療或預防下述疾病的治療劑的方法，所述疾病選自代謝綜合征、I或II型糖尿病、胰島素分泌降低、胰島素敏感性降低、葡萄糖耐量降低、脂肪量提高和動脈粥樣硬化，所述方法包括a)獲得在成骨細胞中選擇性過表達OST-PTP的對照轉基因小鼠，和來自與對照相同品系的第二轉基因小鼠，b)對第一小鼠使用安慰劑，對第二小鼠使用治療劑，c)測定來自第一和第二小鼠的成骨細胞樣品中的OST-PTP活性水平，d)將第一小鼠中測定的OST-PTP活性水平與第二小鼠中的水平進行比較，和e)如果第一小鼠中的水平高于第二小鼠中的水平，則推斷該藥劑可用作治療或預防該疾病的治療化合物。
提供了在懷疑降低成骨細胞中γ-羧化酶活性或表達的藥劑中篩選用于治療或預防下述疾病的治療劑的方法，所述疾病選自代謝綜合征、I或II型糖尿病、胰島素分泌降低、胰島素敏感性降低、葡萄糖耐量降低、脂肪量提高和動脈粥樣硬化，所述方法包括a)獲得在成骨細胞中選擇性過表達γ-羧化酶的對照轉基因小鼠，和來自與對照相同品系的第二轉基因小鼠，b)在允許治療化合物發揮作用的相同條件下，對第一小鼠使用安慰劑，對第二小鼠使用治療化合物，c)測定來自第一和第二小鼠的成骨細胞樣品中γ-羧化酶活性水平，d)將第一小鼠中測定的γ-羧化酶活性水平與第二小鼠中的水平進行比較，e)如果第一小鼠中的水平高于第二小鼠中的水平，則推斷該生物活性劑可用作降低成骨細胞中γ-羧化酶活性的治療化合物。所述生物活性劑可以是酶抑制劑。
提供了篩選可能具有治療或預防下述疾病的治療用途的藥劑的方法，所述疾病選自代謝綜合征、I或II型糖尿病、胰島素分泌降低、胰島素敏感性降低、葡萄糖耐量降低、脂肪量提高和動脈粥樣硬化，所述方法包括(a)提供患有該疾病的動物，(b)測定取自該動物的處理前生物樣品中的羧化不足/未羧化骨鈣蛋白量，(c)在允許藥劑發揮作用的條件下對測試動物施用生物活性劑，(d)測定取自該動物的處理后生物樣品中的羧化不足/未羧化骨鈣蛋白量，和(e)如果與處理前樣品相比，該生物活性劑提高處理后生物樣品中羧化不足/未羧化骨鈣蛋白的量，則推斷該藥劑具有該治療用途。
提供了篩選可能具有治療或預防下述疾病的治療用途的生物活性劑的方法，所述疾病選自代謝綜合征、I或II型糖尿病、胰島素分泌降低、胰島素敏感性降低、葡萄糖耐量降低、脂肪量提高和動脈粥樣硬化，所述方法包括(a)提供患有該疾病的動物，(b)測定取自該動物的處理前生物樣品中脂連蛋白的量，(c)在允許活性劑發揮作用的條件下對測試動物施用生物活性劑，(d)測定取自該動物的處理后生物樣品中脂連蛋白的量，和(e)如果與處理前樣品相比，該生物活性劑提高處理后生物樣品中脂連蛋白的量，則推斷該藥劑具有該治療用途。
本文中使用術語“藥劑”或“外源化合物”包括能夠直接或間接改變多種蛋白質(OST-PTP、γ-羧化酶、骨鈣蛋白)之一的生物活性的任何分子，例如蛋白質、寡肽、小有機分子、多糖、多核苷酸、脂質等，或其混合物。一些藥劑可用于治療。一般以不同的藥劑濃度同時測試多種測定混合物，以獲得對多種濃度的不同應答。通常，這些濃度之一用作陰性對照，即處于零濃度或低于檢測水平。
篩選中使用的藥劑包括大量化學品類型，盡管它們通常是有機分子，優選地是具有下述分子量的小有機化合物，所述分子量高于100并低于約2,500道爾頓，優選低于約500道爾頓。藥劑包含與蛋白質發生結構相互作用(尤其是氫鍵鍵合)所需的官能團，并通常包含至少胺、羰基、羥基或羧基，優選地至少兩個所述化學官能團。藥劑經常包含環狀碳結構或雜環結構和/或芳香族或多芳香族結構，所述結構被一個或多個上述官能團取代。藥劑還存在于生物分子中，包括肽、糖、脂肪酸、類固醇、嘌呤、嘧啶、其衍生物、結構類似物或其組合。尤其優選的是肽。
可從大量來源獲得高純度小有機配體和肽激動劑的文庫，所述配體和激動劑具有已充分證明的藥理學活性。一個實例是含有1,866種藥物樣化合物(小的，中度疏水性)的NCI多樣性集合。另一個實例是已知生物活性劑(467種化合物)的化學及細胞生物學研究所(Institute of Chemistryand Cell Biology，ICCB；由Harvard Medical School維護)集合，其包含許多擴展的柔性化合物。ICCB文庫的一些其它實例是Chem BridgeDiverSet E(16,320種化合物)；Bionet 1(4,800種化合物)；CEREP(4,800種化合物)；Maybridge 1(8,800種化合物)；Maybridge 2(704種化合物)；Maybridge HitFinder(14,379種化合物)；Peakdale 1(2,816種化合物)；Peakdale 2(352種化合物)；ChemDiv Combilab and International(28,864種化合物)；Mixed Commercial Plate 1(352種化合物)；MixedCommercial Plate 2(320種化合物)；Mixed Commercial Plate 3(251種化合物)；Mixed Commercial Plate 4(331種化合物)；ChemBridgeMicroformat(50,000種化合物)；Commercial Diversity Set1(5,056compounds)。其它NCI集合為Structural Diversity Set，第2版(1,900種化合物)；Mechanistic Diversity Set(879種化合物)；Open Collection 1(90,000種化合物)；Open Collection 2(10,240種化合物)；KnownBioactives CollectionsNINDS Custom Collection(1,040種化合物)；ICCBBioactives 1(489種化合物)；SpecPlus Collection(960種化合物)；ICCBDiscretes Collections。以下的ICCB化合物各自收集自ICCB、哈佛和其它合作機構的化學家ICCB1(190種化合物)；ICCB2(352種化合物)；ICCB3(352種化合物)；ICCB4(352種化合物)。天然產物提取物NCIMarine Extracts(352孔)；有機級—NCI植物和真菌提取物(1,408孔)；菲律賓植物提取物1(200孔)；ICCB-ICG Diversity Oriented Synthesis(DOS)Collections；DDS1(DOS Diversity Set)(9600孔)。化合物文庫也可得自商業供應商，如ActiMol、Albany Molecular、Bachem、Sigma-Aldrich、TimTec等。
可對篩選中鑒定出的已知藥劑和新藥劑進一步進行定向的或隨機的化學修飾，如酰化、烷基化、酯化、酰胺化(amidification)，以產生結構類似物。
篩選、設計或修飾化合物時，要考慮的其它因素包括Lipinski的五規則(不多于5個氫鍵供體(OH和NH基團)；不多于10個氫鍵受體(特別是N和O)；分子量在500g/mol以下；分配系數log P低于5)和Veber準則，它們是制藥領域所公認的，并涉及使分子更像藥物或更不像藥物的特性和結構特征。
藥劑可以是蛋白質。本文上下文中“蛋白質”表示至少兩個共價連接的氨基酸，包括蛋白質、多肽、寡肽和肽。蛋白質可由天然氨基酸和肽鍵構成，或著由合成的擬肽結構(peptidomimetic structures)構成。因此本文使用“氨基酸”或“肽殘基”指天然氨基酸以及合成氨基酸。例如，高苯丙氨酸(homo-phenylalanine)、瓜氨酸和正亮氨酸(noreleucine)被認為是用于本發明目的的氨基酸。“氨基酸”還包括亞氨基酸殘基如脯氨酸和羥脯氨酸。側鏈可以是(R)或(S)構型。在一個優選的實施方案中，氨基酸為(S)或L-構型。如果使用非天然側鏈，則可使用非氨基酸取代基，例如用于防止或延緩體內降解。
藥劑可以是天然蛋白質或天然蛋白質的片段或變體。因此，可使用例如含有蛋白質的細胞提取物，或蛋白質細胞提取物的隨機或定向消化物。藉此，可制造原核蛋白質和真核蛋白質的文庫，用于針對多種蛋白質之一進行篩選。可使用細菌、真菌、病毒和哺乳動物蛋白質的文庫，優選后者，特別優選人蛋白質。
藥劑可以是從約5個到約30個氨基酸的肽，優選從約5個到約20個氨基酸，尤其優選從約7個到約15個氨基酸。肽可以是如上文所述的天然蛋白質消化物、隨機肽、或“偏向(biased)”隨機肽。“隨機化”或本文中在語法上等同的表述表示各個核酸和肽基本上分別由隨機的核苷酸和氨基酸組成。因為通常這些隨機肽(或核酸，在下文討論)是化學合成的，所以它們可在任何位置上摻入任何核苷酸或氨基酸。合成方法可被設計成產生隨機化的蛋白質或核酸，以允許形成在該序列全長上所有或大部分可能的組合，從而形成隨機化藥劑生物活性蛋白質藥劑的文庫。
文庫可以是完全隨機化的，在任何位置上都沒有序列偏好，也不保持恒定。文庫可以是偏向的。也就是說，序列中的一些位置保持不變，或選自數目有限的可能性。例如，核苷酸或氨基酸殘基在確定的類別內(例如疏水氨基酸、親水殘基、立體偏向(或小或大)殘基中)進行隨機化，以傾向于產生用于交聯的半胱氨酸，用于SH-3結構域的脯氨酸，用于磷酸化位點等的絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸或組氨酸等，或針對嘌呤等。
藥劑可以是分離的核酸，優選反義、siRNA或cDNA，其與編碼目的蛋白的基因或其mRNA結合，以分別阻斷基因表達或mRNA翻譯。“核酸”或“寡核苷酸”或本文中的語法等同表述表示共價連接在一起的至少兩個核苷酸。這些核酸通常含有磷酸二酯鍵，盡管在一些情況下(如下文所述)包括可具有其他主鏈的核酸類似物，其包含例如磷酰胺(Beaucage等，Tetrahedron 49)10)1925(1993)及其參考文獻；Letsinger，J.Org.Chem.353800(1970)；Sprinzl等，Eur.J.Biochem.81579(1977)；Letsinger等，Nucl.Acids Res.143487(1986)；Sawai等，Chem.Lett.805(1984)，Letsinger等，J.Am.Chem.Soc.1104470(1988)；以及Pauwels等，Chemica Scripta 2614191986))、硫代磷酸酯(Mag等，Nucleic Acids Res.191437(1991)；和美國專利No.5,644,048)、二硫代磷酸酯(Briu等，J.Am.Chem.Soc.1112321(1989))、O-甲基亞磷酰胺鍵(O-methylphophoroamidite)(見Eckstein，Oligonucleotides andAnaloguesA Practical Approach，Oxford University Press)和肽核酸主鏈和鍵(見Egholm，J.Am.Chem.Soc.1141895(1992)；Meier等，Chem.Int.Ed.Engl.311008(1992)；Nielsen，Nature，365566(1993)；Carlsson等，Nature 380207(1996)，均通過參考并入本文)。
其它類似物核酸包括具有正電主鏈(Denpcy等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 926097(1995))；非離子主鏈(美國專利號Nos.5,386,023、5,637,684、5,602,240、5,216,141和4,469,863；Kiedrowshi等，Angew.Chem.Intl.Ed.English 30423(1991)；Letsinger等，J.Am.Chem.Soc.1104470(1988)；Letsinger等，Nucleoside & Nucleoside 131597(1994)；第2和3章，ASCSymposium Series 580，″Carbohydrate Modifications in AntisenseResearch″，Y.S.Sanghui和P.Dan Cook編輯；Mesmaeker等，Bioorganic& Medicinal Chem.Lett.4395(1994)；Jeffs等，J.Biomolecular NMR3417(1994)；Tetrahedron Lett.37743(1996))和非核糖主鏈(包括美國專利No.5,235,033和5,034,506，和第6和7章，ASC Symposium Series 580，″Carbohydrate Modifications in antisense Research″，Y.S.Sanghui和P.Can Cook編輯中所述)的類似物核酸。含有一個或多個碳環糖的核酸也包括在核酸的定義中(見Jenkins等，Chem.Soc.Rev.(1995)pp 169-176)。多種核酸類似物描述于Rawls，C & E News Jun.2，1997第35頁。所有這些參考文獻明確地通過參考并入本文。可對核糖-磷酸主鏈進行這些修飾以有利于加入其他部分(如標記)，或提高這些分子在生理環境中的穩定性和半衰期。另外，可以制造天然酸與類似物的混合物。或者，可以制造不同核酸類似物的混合物，和天然核酸與類似物的混合物。如所述，核酸可以是單鏈或雙鏈的，或同時含有雙鏈或單鏈的部分。核酸可以是DNA(基因組和cDNA)、RNA或雜交體，其中所述核酸含有脫氧核糖核苷酸和核糖核苷酸的任何組合以及堿基的任何組合，所述堿基包括尿嘧啶、腺嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶、鳥嘌呤、肌苷、黃嘌呤、次黃嘌呤、異胞嘧啶(isocytosine)、異鳥嘌呤(isoguanine)等。
如上文針對蛋白質所一般描述的，核酸藥劑可以是天然核酸、隨機核酸、或“偏向的”隨機核酸。例如，可如上文針對蛋白質所述那樣使用原核或真核基因組的消化物。
藥劑可得自組合化學品文庫，大量所述文庫可在文獻中獲得。“組合化學品文庫”在本文中表示以確定或隨機的方式(通常通過化學合成)產生的不同化合物的集合。通過組合混合可合成數百萬種化合物。
可以以多種方式完成藥劑與多種蛋白質之一結合的測定。在一個優選的實施方案中，將藥劑標記，并直接測定結合。例如，這可如下完成將多種蛋白質之一的全部或部分附著于固體支持物上，添加經標記的藥劑(例如包含熒光標記的藥劑)、洗去過量的試劑，并測定該標記是否存在于固體支持物上。可使用本領域已知的多種封閉和洗滌步驟。
“標記的”在本文中表示用提供可檢測信號的標記直接或間接地標記藥劑，所述標簽例如放射性同位素(如3H、14C、32P、33P、35S或125I)、熒光或化學發光化合物(如異硫氰酸熒光素、羅丹明或螢光素)、酶(如堿性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或辣根過氧化物酶)、抗體、顆粒如磁性顆粒，或特異性結合分子等。特異性結合分子包括結合對，如生物素和鏈霉親和素、地高辛和抗地高辛等。對特異性結合成員而言，其互補成員通常應當根據如上文所列的已知步驟用提供檢測的分子進行標記。標記可直接或間接地提供可檢測的信號。可以僅標記一種組分。或者，可用不同的標記來標記多于一種組分。
序列表 下文列出與本申請相關的全部核酸和氨基酸序列表。可使用本領域已知和本文所述的常規方法(包括敲入和敲除小鼠)，產生過表達或低表達任何所列核酸(Esp、骨鈣蛋白、脂連蛋白、γ-羧化酶、載脂蛋白E的cDNA)的轉基因小鼠和從它們分離而來的細胞(特別是成骨細胞和脂肪細胞)。在某些情況下，將核酸插入宿主生物的基因組中，所述核酸與啟動子和調節元件(內源或異源的)有效連接并處于其控制下，所述啟動子和調節元件會導致所述生物過表達該核酸基因或mRNA。帶有待擴增基因的轉染載體中所包含內源/異源啟動子的一個實例是α1(I)膠原。許多這樣的啟動子是本領域已知的。可以用帶有人Esp或人骨鈣蛋白cDNA(或其片段或變體)的載體轉染人成骨細胞，所述cDNA與引起被轉染的人成骨細胞過表達骨鈣蛋白(或其片段或變體)的已知啟動子和調節元件有效連接。本文公開了過表達骨鈣蛋白(或其片段或變體)、OST-PTP或γ-羧化酶的轉基因小鼠和小鼠細胞，和轉染的人細胞。本文還公開了缺失骨鈣蛋白、Esp、γ-羧化酶和脂連蛋白的一個或全部兩個等位基因的雙重突變體小鼠，以及雙重突變體的多種組合。本文還公開了帶有編碼蛋白質的cDNA或mRNA的載體，用于插入靶動物或細胞的基因組中。這些載體可任選地包含與cDNA或mRNA有效連接的啟動子和調節元件。“有效連接”表示啟動子和調節元件與cDNA或mRNA以使得該cDNA或mRNA的表達在該啟動子和調節元件的控制之下的方式連接。
可產生分別與編碼OST-PTP或γ-羧化酶的基因和mRNA特異性雜交的反義和小干擾RNA，用于降低OST-PTP和γ-羧化酶的表達，從而在動物中治療或預防代謝綜合征或其組分或1型糖尿病。小鼠(OST-PTP，Ptprv)cDNA的序列在SEQ ID NO18中公開。(OST-PTP，Ptprv)蛋白質的氨基酸序列在SEQ ID NO19中公開。該cDNA會與OST-PTP的mRNA雜交并由此干擾其翻譯。降低OST-PTP表達會提高羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白。小鼠γ-羧化酶的cDNA示于SEQ ID NO12，其氨基酸序列為SEQED NO13。該cDNA會與γ-羧化酶的mRNA雜交并由此干擾其翻譯，并且是一個優選的實施方案。人γ-羧化酶的cDNA示于SEQ ID NO10，其氨基酸序列為SEQ ID NO11。人γ-羧化酶cDN可用于治療，以降低γ-羧化酶表達，從而治療或預防代謝綜合征及其組分和1型或2型糖尿病。
實施例 在本文中通過上述實驗和以下的實施例來闡述本發明，它們不應被理解為限制。本申請通篇中引用的所有參考文獻、未決專利申請和公開專利的內容通過參考明確地并入本文。本領域技術人員會理解，本發明可以許多不同形式實施，并且不應被理解為僅限于本文公開的實施方案。相反，提供這些實施方案用于將本公開內容完全傳達給本領域的技術人員。鑒于前述說明書中存在的教導，本發明所屬領域的技術人員會明白本發明的許多修改和其它實施方案。盡管使用了一些特定的術語，但是除非另有說明，否則它們均以本領域中的含義使用。
材料和方法 Esp-nLacZ小鼠是指Esp缺陷型小鼠模型，其中該動物的所有細胞中OST-PTP的一個(+/-)或兩個(-/-)等位基因已被失活。nLacZ(或LacZ)小鼠通過靶向的OST-PTP等位基因與轉基因的同源重組來產生，所述轉基因具有編碼核定位LacZ盒的序列，其同源重組進OST-PTP等位基因的外顯子6中，以使該轉基因與OST-PTP基因框內融合，并且該轉基因的表達與OST-PTP等位基因的天然基因表達調節序列有效連接。Esp KI(敲入)＝Esp nLacZ(-/-)小鼠。
使用靶向載體產生Esp-nLacZ小鼠，所述靶向載體被設計成向外顯子6中插入核定位的LacZ(nLacZ)盒，使得LacZ與OST-PTP序列框內融合(Dacquin等，2004；Ducy等，1996)。使用小鼠cDNA片段從小鼠基因組文庫(129ola品系)分離跨越整個小鼠Ptprv基因的基因組克隆(Lee等，[1996])。構建靶向載體，其包含HPRT次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖基轉移酶小基因選擇盒、內部核糖體進入位點(Mountford等，1994)以及含有與LacZ基因融合的SV40核定位序列(nLacZ)的報告基因。向其中克隆進與來自基因5′端的4.4kb同源性序列和來自基因3′端的1.9kb同源性序列。使用標準技術(Joyner，1999)在E14Tg2A飼養細胞(feeder)非依賴性胚胎干(ES)細胞(Hooper等，1987)中進行基因打靶。如先前所述(Thompson等，1989)將經打靶的ES細胞在HAT(10μM次黃嘌呤、9μM氨基蝶呤、20μM胸苷)選擇培養基中進行選擇。組織培養基是補充了10％胎牛血清(FCS)、0.1mM 2-巰基乙醇、1mM丙酮酸鈉和約103U/ml白血病抑制因子的GMEM(Glasgow Modified Eagles Media；Gibco)。使用Gene Pulser(Bio-Rad)，在800V和3μFD下，在800微升磷酸鹽緩沖液(PBS)中用20微克經NotI線性化的載體DNA對總計5×106個細胞進行電穿孔，并鋪板在明膠包裹的10cm組織培養板上。48小時后，將細胞轉移至HAT選擇培養基中。使用與靶向載體中整合位點5′和3′同源性序列以外的區域互補的放射性標記cDNA片段，通過Southern雜交鑒定經打靶的ES細胞克隆，并通過使用LacZ探針檢驗單拷貝整合。向C57BL/6胚泡中注射經打靶的ES細胞，隨后將其轉移進代孕母體中。將嵌合體雄性與MF1品系雌性交配，并使用來自灰色后代的尾尖DNA的Southern印跡分析或聚合酶鏈式反應(PCR)來鑒定雜合體動物。將突變與MF1品系雜交五代，以提供用于隨后分析的雜合體小鼠。該突變導致缺失大部分OST-PTP胞外結構域、其跨膜和胞內結構域(1)。這種突變體等位基因被稱作Esp nLacZ突變體等位基因或Esp KI(敲入)突變體基因。在Esp nLacZ突變體小鼠中，該動物所有細胞中OST-PTP的一個(+/-)或全部兩個(-/-)等位基因被失活，從而干擾OST-PTP表達。
“Esp osb突變體小鼠”是Esp缺陷型小鼠模型，其中僅從該動物的成骨細胞中缺失或敲除了一個(+/-)或兩個(-/-)OST-PTP等位基因，從而選擇性地阻斷成骨細胞中的OST-PTP合成。這不應與缺乏一個或全部兩個瘦素等位基因的ob突變體混淆。Esp osb小鼠在一個或兩個內源OST-PTP等位基因中帶有破壞，其中在一個(+/-)或兩個(-/-)OST-PTP等位基因中編碼OST-PTP等位基因磷酸酶結構域的外顯子24到35已被缺失并替換成側翼為loxP位點(floxed)的新霉素抗性基因。
將內含子23和35中帶有LoxP位點以及側翼為loxP位點的新霉素抗性盒的靶向載體電穿孔進ES細胞中。將經打靶的ES細胞注射進129Sv/EV胚泡細胞中，產生帶有側翼為loxP位點之等位基因(Espflox)的嵌合小鼠。將Espflox/+小鼠與a1(I)膠原-Cre小鼠雜交，產生Espob-/+小鼠，并將其后代互交獲得Espob-/-小鼠。可將帶有側翼為loxP位點之Esp等位基因的小鼠與在任何目的啟動子控制下表達重組酶的轉基因小鼠交配，以在該啟動子具有活性的細胞中特異性失活Esp基因。在Espob中，僅在成骨細胞中失活OST-PTP的一個(/-)或全部兩個(-/-)等位基因，從而僅在這些細胞中干擾OST-PTP的表達。分子分析顯示，重組在成骨細胞的Esp基因座上高頻率發生，但是在任何其它組織或細胞類型(包括睪丸、脂肪細胞或胰腺β-細胞)中則不然(

圖1C和1D)。Northern印跡分析證實這是無效等位基因，而使用Southern印跡雜交證明了成骨細胞中Esp切除的效力(圖1C)。定量RT-PCR和Western分析在Espob-/-小鼠的骨中分別未能檢測到Esp mRNA或OST-PTP蛋白，而Esp mRNA和OST-PTP蛋白質在Esposb-/-小鼠的睪丸中都存在(圖1D)。這些數據表明實現了成骨細胞特異性Esp失活。
本文使用的“Esp缺陷型小鼠”表示任何這兩種轉基因小鼠品系其中骨睪丸蛋白質酪氨酸磷酸酶OST-PTP(由Esp基因編碼)的兩個等位基因像Esposb-/-小鼠那樣均被缺失(敲除)，或像Esp-nLacz-/-小鼠那樣均被破壞或(敲入)。
圖22顯示了產生Esposb-/-小鼠方法的某些細節和Esp-/-動物中正常的骨形成。圖23關于將1月齡WT與Esp-/-小鼠在多種代謝和生理參數方面進行比較Esp-/-小鼠中C-肽的血清水平(A)；血清胰高血糖素水平(左)和胰腺中胰高血糖素含量(右)(B)；和IGF-1(C)、PYY(D)和胰淀素(E)的血清水平；(F)10周齡WT和Esp-/-小鼠中通過質子磁共振波譜(1H-MRS)計算的肌肉量相對于體重的比值；(G)10周齡WT和Esp-/-小鼠的質子1H-MRS的代表性圖像；(H)1月齡和3月齡Esp-/-和WT小鼠的每日食物攝入；(I和J)1月齡Esp-/-和WT小鼠中TNF-α(左)和IL-6(右)通過實時PCR進行的表達水平比較(I)和血清水平(J)的比較；和(K)1月齡Esp-/-和WT小鼠中血清瘦素(左)和抵抗素(右)的水平。在所有圖中，數據表示實驗的均值±SD。＊，P＜0.01(t檢驗)。
圖24顯示GTG對VMH核破壞的解剖學情況。圖25顯示共培養測定期間不存在細胞轉分化。圖26顯示骨鈣蛋白表達是骨特異性的。18.5dpc胚胎的胰腺中骨鈣蛋白和Esp表達的原位雜交分析顯示，這兩個基因均不在胰腺中表達。使用胰島素表達作為陽性對照。使用鄰近切片的蘇木精-伊紅染色來評價組織完整性。從1月齡WT小鼠中收集的成骨細胞、脂肪細胞和胰島中骨鈣蛋白表達的實時PCR分析顯示，骨鈣蛋白在脂肪細胞和胰島中不表達。
產生膠原α1(I)-PTP和膠原α1(I)-PTPED轉基因小鼠。產生下述轉基因小鼠，其過表達全長Esp cDNA(α1(I)膠原-OST-PTP)，或過表達僅編碼OST-PTP胞外結構域(在本文中也稱作可溶結構域)的截短形式的該cDNA(α1(I)膠原-OST-PTPEC小鼠)。所述胞外結構域在本文中也稱作可溶結構域(SD)。這些cDNA基因處于α1(I)膠原的成骨細胞特異性調節元件的控制下，以產生體內在成骨細胞中過表達ESP(OST-PTP)或OST-PTP胞外結構域的小鼠。
在1月齡時，α1(I)膠原-Esp轉基因小鼠顯示在禁食后和喂飼后血清葡萄糖均提高、喂飼后胰島素血清水平降低，和能量消耗降低。相應地，葡萄糖耐量測試(GTT)顯示α1(I)膠原-Esp小鼠是葡萄糖不耐受的，而胰島素耐量測試(ITT)確定它們是胰島素抗性的(圖4)。總之，該轉基因小鼠的表型是在Esp-缺陷型小鼠中所觀察到表型的鏡像(相反)。另外，該EspcDNA全轉錄本轉基因糾正了Esp-缺陷型糖尿病抗性小鼠中的所有代謝異常。轉基因小鼠過表達全長Esp cDNA(α1(I)膠原-Esp)，或過表達僅編碼OST-PTP胞外結構域(在本文中稱作可溶結構域)的截短形式的該cDNA(α1(I)膠原-Esp EC小鼠)。
產生ApoE-PTP、ApoE-PTPSD(也稱作ApoE-PTPED)轉基因小鼠。將全長小鼠Esp cDNA或編碼胞外結構域(ED)的1到1111位氨基酸的Esp小鼠cDNA片段克隆進載體中，所述載體使用ApoE基因的啟動子指導肝特異性表達。與OST-PTP的全cDNA轉錄本的表達相反，表達僅編碼OST-PTP胞外結構域的截短形式該cDNA的載脂蛋白E-OST-PTPEC轉基因小鼠與野生型小鼠是不可區分的。這些實驗進一步證明了OST-PTP通過其細胞內磷酸酶結構域調節能量代謝。
產生骨鈣蛋白缺陷型(也稱作Ocn-/-或Bgp-/-)小鼠。“骨鈣蛋白缺陷型小鼠”指其中兩個骨鈣蛋白等位基因均被缺失的品系。在本文所述的骨鈣蛋白缺陷型轉基因小鼠中，編碼成熟蛋白的骨鈣蛋白基因1(OG1)外顯子4和整個骨鈣蛋白基因2(OG2)序列被缺失，而留下了骨鈣蛋白相關基因(osteocalcin-related gene，ORG)。正確的打靶導致整個成熟的骨鈣蛋白編碼序列被替換為pGKNeo選擇盒。
先前報道了骨鈣蛋白-/-小鼠的產生(Ducy等，1996)。編碼成熟蛋白的骨鈣蛋白基因1(OG1)外顯子4和整個骨鈣蛋白基因2(OG2)序列被缺失，而留下了骨鈣蛋白相關基因(ORG)。正確的打靶導致整個成熟的骨鈣蛋白編碼序列被替換為pGKNeo選擇盒。這些小鼠的分析在圖5-7和表1中報道。
產生脂連蛋白缺陷型小鼠和Ocn+/-；脂連蛋白+/-小鼠。根據先前描述的策略(Maeda等，2002)產生脂連蛋白缺陷型小鼠，其中脂連蛋白基因的一個(+/-)或全部兩個(-/-)等位基因的外顯子2和3被缺失。然后將脂連蛋白/-或-/-與Ocn-/-或+/-小鼠雜交，產生脂連蛋白+/-；Ocn+/-小鼠。這些小鼠的分析在圖6中報道。
產生SAP-脂連蛋白轉基因小鼠。可產生過表達脂連蛋白的轉基因小鼠。這樣的轉基因小鼠的基因組中帶有編碼脂連蛋白的異源cDNA，其處于小鼠血清淀粉樣蛋白(serum amyloid protein，SAP)基因的調節元件的控制下，這相對于野生型效果產生選自以下的效果脂連蛋白的產生、分泌和活性提高。在一些情況下，cDNA由SEQ ID NO8定義。用于產生這樣的小鼠的構建體包括下述構建體，所述構建體包含處于血清淀粉樣蛋白啟動子控制下的脂連蛋白cDNA，該構建體稱作pSAP-Adipo。可從這些轉基因動物中分離細胞，包括脂肪細胞。
為了產生過表達脂連蛋白的小鼠，將脂連蛋白的小鼠cDNA亞克隆進含有人SAP啟動子和兔β-珠蛋白非編碼外顯子/內含子的盒的上游(圖28)。在每種性別的3月齡WT和脂連蛋白轉基因幼仔和小鼠中測量脂肪墊重量(圖28D)。評價WT和Sap-脂連蛋白轉基因小鼠中的食物攝入和能量消耗，以確定是否在Esp缺陷型小鼠中觀察到的能量消耗提高僅僅是因為其脂連蛋白血清水平提高。還證實了提高的血清脂連蛋白水平不會影響食欲。為此，使用代謝籠和設備。在WT和Sap-脂連蛋白轉基因小鼠中于出生時、2、4、8和16周齡時測量血清葡萄糖水平。在成年小鼠中，這在禁食后和喂飼后進行。在相同的樣品中，測量血清胰島素和脂連蛋白水平(圖28C和28E)。在成年小鼠的血清中測量血清瘦素水平。通過胰島素耐量測試評價胰島素敏感性(圖28F)使小鼠禁食6小時，腹膜內注射胰島素(0.2U/kg體重)，并如所述指定的時間測量葡萄糖水平(Mauvais-Jarvis等，2002)。ITT數據表示為初始血糖濃度的百分比。通過在葡萄糖腹膜內注射后進行的葡萄糖耐量測試以及葡萄糖刺激的胰島素分泌二者來測定胰島素分泌。在腹膜內注射2g/kg葡萄糖后0、2、5、15和30分鐘獲取血樣用于GSIS，0、15、30、60和120分鐘獲取血樣用于GTT。使用自動化葡萄糖檢測儀測定全血葡萄糖值。組織學分析。我們觀察到，盡管Esp缺陷型小鼠更大，但是其中存在的脂肪細胞比WT小鼠更少，提示它們不能釋放脂肪。可在1月和2月齡WT和Sap-脂連蛋白轉基因小鼠中進行相同的分析。為了證實大脂肪細胞尺寸揭示了它們不能夠釋放脂肪，可使WT、Esp缺陷型和Sap-脂連蛋白的1月齡小鼠禁食16到24小時，并測量游離脂肪酸(FFA)的血清水平。預計在Esp缺陷型和Sap-脂連蛋白小鼠中FFA水平不會像在WT小鼠中那樣提高。
產生Sap-胰島素轉基因小鼠。本文中公開了一種轉基因小鼠，其基因組帶有編碼全長小鼠胰島素的cDNA，所述cDNA處于小鼠血清淀粉樣蛋白(SAP)基因啟動子和調節元件的控制下，其相對于野生型產生包括提高胰島素表達和分泌在內的效果。
為了產生過表達胰島素的小鼠，將小鼠胰島素cDNA亞克隆進含有人SAP啟動子和兔β-珠蛋白非編碼外顯子/內含子的盒的上游。使用相同的代謝/分子測試組分析這些轉基因小鼠，包括用于研究Sap-脂連蛋白轉基因小鼠的測試組。這些研究展示在圖29中。
底物捕獲。如下制備用于底物捕獲實驗的質粒將編碼第一磷酸酶結構域(1116-1412位氨基酸)的大鼠OST-PTP序列克隆進編碼GST(谷胱甘肽S-轉移酶)的pGEX 4T3(Amersham)的BamHI位點。使用該構建體(GST-PTP)通過定點誘變產生Asp1316Ala GST-PTP DA，其為導致酶-底物相互作用穩定化的催化性突變體。在已知介導這類磷酸酶的脫磷酸功能的磷酸酶1結構域中產生突變。與野生型GST-PTP相比，GST-PTPD1316A突變體具有降低的磷酸酶活性，但是具有提高的底物結合能力。因此，其與野生型蛋白相比能夠更好地保留(即“捕獲”)底物。表達突變體OST-PTPD1316A的細胞會捕獲作為OST-PTP通常靶標的任何底物，但是該突變體酶不能使底物脫磷酸。因此，其保持在底物上而不釋放底物。然后通過離心將各實驗條件的蛋白質復合體離心下來，洗滌4次并通過western印跡進行分析。
對底物捕獲實驗而言，在裂解緩沖液(50mM Tris-HCl，pH 7.5、5mM EDTA、150mM NaCl、1％Triton、0.1％CHAPS、5mM碘乙酸、10mM磷酸鈉、10mM NaF)中裂解細胞。將細胞裂解物與GST、GST-PTPWT(GST與OST-PTP磷酸酶結構域I的融合物)或GST-PTPD1316A(磷酸酶結構域I的Asp的捕獲突變體)孵育。將重組蛋白與瓊脂糖珠在4℃下結合1小時(胰島素受體捕獲)或在4℃下結合2小時(γ-羧化酶底物捕獲)。將沉淀物收集、用裂解緩沖液洗滌4次并用SDS-PAGE分離，隨后進行western印跡。使用兔抗胰島素受體抗體(Santa-Cruz，C-19)檢測胰島素受體(InsR)，并通過小鼠抗-GST抗體(Santa-Cruz)檢測GST。使用兔抗γ-羧化酶抗體檢測γ-羧化酶。
OST-PTP的底物是胰島素受體和γ-羧化酶。為了確定OST-PTP是否通過γ-羧化酶發揮作用，我們在原代成骨細胞中進行底物捕獲實驗。在補充有抗壞血酸(100μg/ml)和β-磷酸甘油(5mM)的αMEM/10％胎牛血清(FBS)中將分化的原代成骨細胞(d10)培養10天。然后在僅補充了1％FBS的相同培養基中使其饑餓24小時，并用不可逆的蛋白酪氨酸磷酸酶抑制劑過釩酸鹽(pervanadate)(100μM)和20％FBS處理30分鐘。將細胞裂解物在4℃下與GST、GST-PTPWT或GST-PTPD1316A孵育2小時。還上樣不同量的細胞提取物作為對照。
過表達全長或截短的OST-PTP的轉化細胞。使用表達經flag標記的全長OST-PTP或者僅含有其胞外結構域(OST-PTPEC)的經flag標記的截短OST-PTP的真核表達載體，在用這些經flag標記的載體轉染的ROS(兔成骨細胞)17/2.8成骨細胞中進行DNA永久轉染實驗，并在COS7細胞中進行實驗作為陰性對照。選擇并分離染色體中整合了兩個基因(經flag標記的全長OST-PTP或僅含有其胞外結構域的經flag標記的截短OST-PTP)中每一個的細胞克隆后，分別使用細胞裂解物的RT-PCR和Western印跡分析來證實基因被轉錄并產生了蛋白質。然后在無血清培養基中過夜培養細胞。分離用空載體轉染或用編碼全長或截短的Esp cDNA的載體轉染的細胞的上清液，并使用市售的抗-Flag抗體進行Western分析。
用于產生骨鈣蛋白的細菌表達載體。我們產生了用于GST標記的小鼠骨鈣蛋白、GST標記的人骨鈣蛋白、GST標記的小鼠和人骨鈣蛋白突變體和GST標記的小鼠和人骨鈣蛋白截短突變體的原核表達載體。
膳食和GTG誘導的肥胖癥和2型糖尿病。對膳食誘導的肥胖癥而言，用正常膳食或45％脂肪、35％碳水化合物和20％蛋白質的“西方”膳食之一，將雄性和雌性的6周齡WT和骨鈣蛋白缺陷型小鼠(每組n＝10)喂飼4、6、8或12周。對GTG誘導的肥胖癥而言，用0.5mg/kg GTG注射雄性和雌性4周齡WT和骨鈣蛋白缺陷型小鼠(每組n＝10)并在12周齡時處死。在兩種實驗中，均如下分析WT和突變體小鼠。體格檢查在實驗開始時和之后每周測量每只小鼠的總體重，直至處死。食物攝入評價該參數尤其為了證實GTG病變誘導了食物攝入的提高。為此，使用代謝籠和設備。代謝研究在禁食過夜后和喂飼后測量血清葡萄糖和胰島素水平。還測量每只小鼠中的血清脂連蛋白和瘦素水平。通過在葡萄糖腹膜內注射后進行的葡萄糖耐量測試(GTT)和/或葡萄糖刺激的胰島素分泌測試(GSIS)來測定胰島素分泌。在腹膜內注射2g/kg葡萄糖后0、2、5、15和30分鐘獲取血樣，或在0、15、30、60和120分鐘后獲取血樣用于GTT。使用自動化葡萄糖檢測儀測定全血葡萄糖值。分子分析測量各個實驗結束時肝細胞、脂肪細胞和成肌細胞中多種胰島素敏感性標志物的表達。
共培養成骨細胞和脂肪細胞，以研究骨鈣蛋白對脂連蛋白表達/分泌的調節。對成骨細胞和脂肪細胞進行共培養測定，以分析脂連蛋白表達的改變。在該測定法中，我們將來自WT、Esp缺陷型或骨鈣蛋白缺陷型小鼠的成骨細胞與取自任意這些相同小鼠的原代脂肪細胞一起使用。作為陰性對照，我們將各種基因型的小鼠胚胎成纖維細胞與脂肪細胞共培養。根據在過去十二年實驗室中常規使用的標準方案，制備成骨細胞和成纖維細胞(Ducy和Karsenty 1995，其通過參考并入本文)，視同已在本文中完全公開)。在開始實驗前36小時，將成骨細胞或成纖維細胞以70％的匯合接種在αMEM 10％胎牛血清(FBS)上。添加脂肪細胞前，更換培養基，將FBS濃度降低至1％。第二天早晨加入脂肪細胞0、2、4、8或12小時。在實驗結束時，通過離心培養基收集作為貼壁細胞存在的脂肪細胞。使用脂肪細胞提取RNA，并通過實時PCR測量脂連蛋白和可能的由脂肪細胞產生的其它激素(包括瘦素)的表達。使用培養基測量骨鈣蛋白、脂連蛋白、胰島素和其它脂肪因子(adipokine)的水平。
共培養成骨細胞和β-細胞，以研究骨鈣蛋白對胰島素表達/分泌的調節。進行成骨細胞和胰腺β-細胞的共培養測定，以分析胰島素表達的改變。來自WT、Esp缺陷型或骨鈣蛋白缺陷型的小鼠與來自任何這些相同小鼠的胰腺β-細胞一起使用。作為陰性對照，將各基因型的小鼠胚胎成纖維細胞與脂肪細胞共培養。根據在過去十二年實驗室中常規使用的標準方案，制備成骨細胞和成纖維細胞。(Ducy和Karsenty 1995，通過參考并入本文，視同已在本文中完全公開)。在開始實驗前36小時，將成骨細胞或成纖維細胞以70％的匯合接種在αMEM 10％胎牛血清(FBS)上。添加β-細胞前，更換培養基，將FBS濃度降低至1％。在第二天早晨添加β-細胞0、2、4、8或12小時。在實驗結束時，通過離心培養基收集作為貼壁細胞存在的β-細胞。使用β-細胞提取RNA，并通過實時PCR測量胰島素和其它β-細胞所產生激素的表達，以及已知調節胰島素表達和細胞增殖之分子的表達。使用培養基測量骨鈣蛋白、脂連蛋白、胰島素和其它細胞因子水平。
代謝研究。對葡萄糖耐量測試(GTT)而言，在過夜禁食后腹膜內(IP)注射葡萄糖(2g/kg體重)，并使用血糖試紙和Accu-Check血糖測定儀(Roche)在指定的時間監測血糖。對葡萄糖刺激的胰島素分泌的測試(GSIS)而言，在過夜禁食后腹膜內注射葡萄糖(3g/kg BW)；從尾部收集血清并如所述測量胰島素(Mauvais-Jarvis等，2000)。對胰島素耐量測試(ITT)而言，使小鼠禁食六小時，腹膜內注射胰島素(0.2U/kg BW)并如所述在指定的時間測量血糖水平(Mauvais-Jarvis等，2002)。ITT數據表示為初始血糖濃度的百分比。在禁食過夜后腹膜內注射金硫葡萄糖(600mg/kg BW，USP)，3個月后處死小鼠用于分析。腹膜內注射鏈唑霉素(150mg/ml單次注射，Sigma)，之后每2天如上所述測量血糖。8天后分離胰腺，如先前所述測量胰島素含量(Mauvais-Jarvis等，2000)。使用代謝籠測量食物攝入，其為每日的食物重量改變。使用與熱量計(Columbus Instrument)相連的代謝籠測量能量消耗。在2天期間記錄熱值(Kcal/Hr)并針對每個小鼠BW進行報告。
實驗室測量。在喂飼和禁食狀態下通過對經異氟烷麻醉的小鼠進行心臟穿刺來收集血。使用比色測定法測量游離脂肪酸(Wako Chemicals)和甘油三酯(Sigma)的血清水平。通過ELISA定量胰島素(Crystal Chem Inc.試劑盒)、脂連蛋白(Linco試劑盒)、瘦素(Crystal Chem Inc.試劑盒)和抵抗素(Linco試劑盒)的血清水平，通過IRMA(Immunotopics試劑盒)測量骨鈣蛋白水平。沒有IRA、IRMA或ELISA被設計成區分小鼠中羧化的骨鈣蛋白與羧化不足的骨鈣蛋白。現有的試劑盒測量總骨鈣蛋白，但不能特異性識別羧化不足的骨鈣蛋白。因此，使用羥磷灰石(HA)樹脂分離這兩種形式。羧化形式是惟一結合HA的形式。
分離小鼠胰島和脂肪細胞。使用Histopaque梯度(1077，Sigma)分離胰島。簡言之，在通向十二指腸的入口處夾緊總膽管后，向管內注射M199培養基(GIBCO)中的1mg/ml膠原酶P(Sigma)。手術取出腫脹的胰腺并在37℃下孵育17分鐘。通過吸打分散經消化的胰腺并用相同的培養基洗滌兩次。將組織懸液濾過Spectra-篩(400μm)后，將經消化的組織重懸于Histopaque中并用M199培養基覆蓋。然后將樣品在1,700g離心20分鐘，并從界面處收集胰島。用冷的M199培養基將回收的材料洗滌兩次，重懸于M199/1％NCS或αMEM/1％FBS(GIBCO)培養基中，并在37℃下于5％CO2中培養。
通過膠原酶消化從附睪脂肪墊中分離原代脂肪細胞。簡言之，以lmg/ml膠原酶P在KRP緩沖液(20mM HEPES、120mM NaCl、6mM KCl、1.2mM MgSO4、1mM CaCl2、0.6mM Na2HPO4、0.4mM NaH2PO4、2.5mMD-葡萄糖、2％BSA，pH 7.4)中于37℃下將剪碎的脂肪組織消化1小時。用KRP緩沖液將分離的細胞洗滌兩次，之后在αMEM/1％FBS中于37℃下5％CO2中培養。
細胞培養實驗。如先前所述(Ducy等，2000a)從5日齡幼仔的顱蓋中制備原代成骨細胞，并在100μg/ml抗壞血酸和5mM β-磷酸甘油存在下于αMEM/10％FBS中培養5天。通過膠原酶消化(0.5mg/ml)分離皮膚成纖維細胞，并在αMEM/10％FBS中培養。添加原代胰島(或脂肪細胞)前二十四小時，將成骨細胞(或成纖維細胞)置于αMEM/1％FBS中。對華法林處理而言，將ROS 17/2.8成骨細胞維持在DMEM/F12/10％FBS中，直至在與脂肪細胞共培養前48小時補充DMEM/F12/1％FBS中的50μM華法林或賦形劑。在存在或不存在(1μm)培養小室(culture insert)(Falcon)共培養4小時后收集胰島(或脂肪細胞)，用于使用TRIZOL(Invitrogen)分離RNA。
基因表達分析。所有的基因表達分析均使用實時PCR進行。用Superscript III試劑盒(Invitrogen)將經DNAse I-處理的總RNA轉化為cDNA。使用帶有ROX的Taq SYBR Green Supermix(Biorad)在MX3000儀器(Stratagene)上進行實時PCR；使用β-肌動蛋白擴增作為每種樣品的內參。所有的引物均來自SuperArray。
骨鈣蛋白/羥磷灰石(HA)結合測定。向HA懸漿中添加來自1月齡小鼠、肥胖癥患者的血清或來自經華法林處理的成骨細胞培養物的上清液，達到25mg漿/ml的終濃度。15分鐘(小鼠血清、上清液)或30分鐘(人血清)后，通過離心沉淀HA珠，并用0.5M磷酸鈉鹽緩沖液，pH 8.0洗脫與HA結合的骨鈣蛋白。通過IRMA測量洗脫液和原始樣品中存在的骨鈣蛋白。數值表示與HA結合的骨鈣蛋白相對于初始骨鈣蛋白含量的百分比。Hauschka，P.V.，等，Physiol Review 69，990-1047(1989)。
統計學分析。除了在圖2B和5F中顯示均值±標準誤以外，結果均作為均值±標準差給出。使用未配對的、雙因素Student’s t檢驗或ANOVA檢驗之后是事后檢驗進行統計學分析。除非另有說明，否則認為p值＜0.05是顯著的，并且在所有圖中用星號標明。
重組的骨鈣蛋白。由細菌產生重組的骨鈣蛋白，并根據標準步驟在谷胱甘肽珠子上純化。然后使用凝血酶消化從GST亞基上切下骨鈣蛋白。使用親和柱去除凝血酶污染。通過SDS-PAGE定性評價產物的純度。細菌不具有γ-羧化酶基因。因此，在細菌中產生的重組骨鈣蛋白總是在所有三個位點上均完全羧化不足。可以用本領域已知的許多方式(包括化學合成)產生骨鈣蛋白，因為可在化學合成時將其制成無γ-羧化。
人類研究。該研究納入了一組肥胖癥和非肥胖癥白人女性，她們參與了在Center of Research on Human Nutrition，Hotel-Dieu Hospital，Paris，France(PHRC方案N°A0R076)進行的臨床研究。該研究由EthicsCommittees of Hotel-Dieu(Paris)批準。所有的受試者均給出知情同意。受試者在研究日之前體重至少穩定3個月。在早晨(上午8:00)在空腹狀態下評價臨床和生化參數。
組織學測定。將肝的冷凍切片冷凍包埋(cryoembedded)，以5μm切片并用油紅O染色。將脂肪和胰腺組織在10％中性甲醛中固定過夜，包埋在石蠟中，并以5μm切片。用蘇木精和伊紅(H&E)染色組織切片。使用兔抗胰島素(SantaCruz，1∶100)和小鼠抗-Ki67(Vector，1∶100)抗體和ABCElite試劑盒(Vector)進行免疫組織化學測定。如所述(Takeda等，2002)進行下丘腦組織學測定。為了評價細胞大小或數量，使用40×物鏡在裝有CCD照相機(SONY)的Leica顯微鏡上分析5到10個切片(各距離50微米)。使用Osteomeasure軟件加工圖像。β-細胞面積代表胰島素免疫染色陽性的表面除以總胰腺表面積。β-細胞量被計算為β-細胞面積乘以胰腺重量。每個條件至少分析3只小鼠。將脛前肌(Tibia anterior muscle)在4％PFA/2％戊二醛/0.1M二甲胂酸鈉ph 7.3中固定，在1％四氧化鋨中后固定，并包埋于環氧樹脂(Epon)中。將超薄切片在4％水性乙酸雙氧鈾中染色，在Reynolds′檸檬酸鉛中染色2分鐘，并用JEOL 2000FX檢查。對每只小鼠數字化十張電子顯微圖，并使用ImageJ軟件分析每個可清楚區分的線粒體的面積。在每種基因型的4只小鼠中測量15到25個個體線粒體。
結果 Esp-/-小鼠模型的產生和圍產期致死。為了研究OST-PTP，以經典方式(Esp-nLacZ)(Dacquin等，2004)和成骨細胞特異性方式(Espob-/-)破壞Esp使用LoxP/Cre重組酶技術缺失編碼磷酸酶結構域的外顯子24到35(圖22A)。將帶有側翼為LoxP的Esp等位基因的小鼠與α1(1)膠原-Cre小鼠(Dacquin等，2002)雜交，產生成骨細胞特異性Esp缺陷型小鼠(Espob-/-)(圖22B)。Southern印跡分析顯示，重組以高頻率發生于成骨細胞中Esp基因座上(圖1C)。相應地，Esp表達在Espob-/-成骨細胞中被降低幾乎90％，而在Esp表達的另一部位——睪丸中未受影響(圖1D)。在脂肪細胞或胰腺β-細胞中未能檢測到Esp表達(數據未顯示)。這些數據確定了已實現Esp的成骨細胞特異性失活。為了清楚起見，研究Esp-nLacZ和Espob-/-小鼠時均稱為Esp-/-小鼠。
在斷乳時分析時，129Sv/EV或C57BL/6遺傳背景的Esp-/-小鼠的互交僅產生約25％的Esp-/-小鼠(圖1F)。為了確定這種明顯的早期出生后致死現象是否是由于骨骼發育延遲，將新生野生型(WT)和Esp-/-幼仔的骨骼制備物染色。未檢測到可解釋該致死現象的骨形成異常(圖22D-22F)。進行實驗來確定是否Esp-/-幼仔致死現象是由于母體效應(可能為體液異常)。如果是這種情況，則由純合突變體母體所生出的突變體幼仔會比雜合母體所生出的幼仔死亡率更高。這正是所觀察到的情況。然而，Esp+/-母體所生出的Esp-/-幼仔的致死率從未達到在斷乳前死亡的由Esp-/-母體所生出的Esp-/-幼仔的15％至35％(圖1F)。這些數據表明，Esp-/-幼仔的致死現象部分地由母體效應引起。
Esp-/-小鼠中提高的β-細胞增殖和胰島素分泌。為了確定導致Esp-/-小鼠圍產期致死現象的母體效應是否由體液異常引起，在乳攝食之前測量新生幼仔中的代謝參數。無論遺傳背景、性別和進行的缺失類型如何，Esp-/-幼仔僅顯示一種異常血糖水平降低3倍(圖1G)。在一些突變體幼仔中，血糖水平甚至過低而檢測不到。雖然嚴重程度較低，但是在喂飼后的1月齡和3月齡Esp-/-小鼠中也觀察到血糖水平的顯著降低(圖1G)。這種低血糖由新生、1月齡和3月齡喂飼后的Esp-/-小鼠中顯著的高胰島素血癥得到解釋(圖1H)。另一方面，胰高血糖素(由胰腺β-細胞分泌的激素)的表達是正常的(圖23B)，從而表明Esp突變特異地影響β-細胞。
為了更肯定地確定Esp-/-小鼠中存在胰島素分泌的提高，在1月和3月齡時進行腹膜內(IP)葡萄糖刺激的胰島素分泌測試(GSIS)。這些測定顯示，OST-PTP的缺少增強了胰島素分泌(圖1H和1L)。為了評價這種胰島素分泌的提高如何影響去除葡萄糖負荷的能力，在過夜禁食后IP注射葡萄糖(2g/kg體重)后進行葡萄糖耐量測試(GTT)。這些測試顯示，與WT小鼠相比，1月齡和3月齡的Esp-/-小鼠具有顯著更高的葡萄糖耐量(圖1J)。
組織學和免疫化學分析顯示了Esp-/-胰腺中胰島素含量、胰島數量、胰島尺寸和總β-細胞量的提高(圖1K和1L)。TUNEL測定檢測不到任何異常的細胞凋亡，在5日齡幼仔(P5)和1月齡小鼠中進行的Ki67免疫染色顯示，Esp-/-小鼠中β-細胞增殖提高60％到300％(圖1M)。這些數據證明成骨細胞中表達的OST-PTP影響調節β-細胞增殖的途徑。
Esp-/-小鼠中提高的胰島素敏感性。為了確定Esp-/-小鼠中增強的葡萄糖負荷處理能力是由于胰島素敏感性提高，進行了胰島素耐量測試(ITT)。與WT小鼠相比，在1月齡和3月齡Esp-/-小鼠中胰島素敏感性(通過IP注射胰島素后血糖水平的降低來定義)均顯著提高(圖2A)。因此，與WT小鼠相比，Esp-/-中脂肪(PPARα，PPARγ)、肝(Foxa2，PPARα)和骨骼肌(Pgc-lα，Nrf-1，Mcad)中胰島素敏感性分子標志物的表達也顯著提高。Esp-/-肝中Pepck表達降低表明在該器官中糖異生被抑制(圖2E)。推測由于這些分子事件，Esp-/-小鼠中的能量消耗提高(圖2G)。在所有分析中，雜合Esp+/-小鼠表現與其WT同窩仔(littermates)相同。
實驗數據顯示，Esp(OST-PTP)失活引起與胰島素分泌和敏感性提高相關的低血糖，這在新生幼仔中可能是致死的。在Esp-nLacZ-/-和Espob-/-小鼠中以相同程度觀察到這些異常，這確定了是在成骨細胞中表達而不在任何其它細胞或組織中表達的Esp基因導致了這種代謝表型。
1月齡和3月齡Esp-/-小鼠顯示另一種表型異常；它們的脂肪墊比其WT同窩仔顯著更輕(圖2F)。與WT小鼠相比，在Esp-/-中血清甘油三酯水平也更低(圖2H)。因為Esp不在脂肪中表達，而且在Esp-/-小鼠中食物攝入是正常的(圖23H)，所以這種脂肪量下降是由于胰島素敏感性提高。盡管在Esp-/-中存在的脂肪細胞比WT小鼠中更少(WT，93.2±10.7×103個脂肪細胞/脂肪墊(n＝5)；Esp-/-，37±5.1×103個脂肪細胞/脂肪墊(n＝3))，但是它們更大(圖2I)。為了了解這種表型，研究了多種分子標志物的表達。在Esp-/-和WT脂肪細胞中，C/EBPα、Srebplc、脂肪酸合酶(FAS)和脂蛋白脂酶(LPL)表達相似，顯示脂肪形成、脂肪生成、和脂肪攝取未被該突變顯著影響(圖2J)。相反，胰島素敏感性的分子標志物(PPARγ和脂肪氧化PPARα的調節因子)表達提高，因此解釋了胰島素敏感性增強而無脂肪積累。另外，與WT脂肪細胞相比，Esp-/-中兩種抗脂解蛋白質圍脂滴蛋白和甘油三酯脂酶(TGL)的表達顯著降低(圖2J)，表明在Esp-/-小鼠中脂解作用被抑制。因此，在Esp-/-小鼠中，禁食過夜后游離脂肪酸的血清水平沒有像在其WT同窩仔中一樣提高(圖2K)。提高的胰島素敏感性和脂肪氧化與脂肪細胞釋放脂肪被抑制相組合，協同作用產生在Esp-/-小鼠中觀察到的具有大脂肪細胞的低肥胖表型。這些結果與Esp缺陷型小鼠中胰島素分泌的提高相一致，因為胰島素是脂解作用的有效抑制劑。
Esp-/-小鼠中提高的脂連蛋白表達。進行了實驗以確定對于在Esp-/-小鼠中觀察到的胰島素敏感性提高而言是否存在體液基礎。抵抗素(介導胰島素抗性的一種脂肪因子)的表達和血清水平基本上未受Esp缺失的影響。對瘦素而言也是如此，瘦素是一種胰島素致敏激素(insulin-sensitizinghormone)(Friedman和Halaas，1998；Steppan等，2001)(圖2L和23K)。后一觀察結果與Esp-/-小鼠中食物攝入正常的事實一致(圖23H)。相反，脂連蛋白(能夠增強對胰島素敏感性的一種脂肪因子(Yamauchi等，2001))的表達和血清水平在出生時、1月齡和3月齡的Esp-/-小鼠中分別提高三倍和兩倍，無論其性別和遺傳背景如何(圖2L和23M)。相應地，觀察到在Esp-/-小鼠中脂連蛋白靶基因如脂酰-CoA氧化酶、PPARcc和Ucp2的表達提高(圖2N)(Kadowaki和Yamauchi，2005)。這種脂連蛋白表達和血清水平的提高提供了解釋在Esp-/-小鼠中觀察到的胰島素敏感性提高的一種機制。
總之，Esp失活在外周組織中導致由β-細胞增殖提高、胰島素分泌增強和胰島素敏感性提高造成的低血糖，以及肥胖度(adiposity)降低。在Esp-nLacZ-/-和Espob-/-小鼠中均觀察到這些異常，這證明骨骼通過成骨細胞參與葡萄糖內穩態的調節。
Esp-/-小鼠被保護免于發生肥胖癥和葡萄糖不耐受。特征為胰島素分泌和敏感性提高的Esp-/-小鼠帶來了這樣的前景這些突變體小鼠可被保護免于發生肥胖癥和糖尿病。Esp-nLacZ-/-和Espob-/-顯示相同的代謝和分子異常。在一些實驗中，只測試了一種或另一種模型，因此為清楚起見，我們在這種情況下表示為Esp-/-。
首先，在1月齡小鼠中注射金硫葡萄糖(GTG)，從而在腹內側下丘腦中誘導特定的病變(Brecher等，1965)。如所預計地，GTG在WT和Esp-/小鼠中均誘導腹內側下丘腦損傷(圖24)和飲食過量(圖3A)。在注射后3個月進行分析時，經GTG處理的WT小鼠是肥胖的，并且其脂肪墊質量和血清甘油三酯水平顯著提高。GTT和ITT分析顯示葡萄糖不耐受和胰島素抗性也提高了(圖3E-3F)。相反，經GTG處理的Esp-/-小鼠不肥胖，具有與經PBS處理的WT小鼠相似的脂肪墊質量和血清甘油三酯水平，并且它們沒有顯示葡萄糖不耐受或胰島素不敏感的跡象(圖3E-3F)。
接著，用高脂肪膳食(HFD)(58％脂肪千卡)將1月齡的WT和Esp缺陷型小鼠喂飼六周。發現在六周結束時，Esp-nLacZ-/-小鼠中體重顯著低于WT小鼠(圖3G-3I)。葡萄糖耐量測試(GTT)證明，喂飼HFD六周后，Esp-nLacZ-/-小鼠保持對葡萄糖的正常耐量，并且通過ITT測定的胰島素敏感性保持正常。相反，在喂飼高脂肪膳食(HFD)的WT小鼠中這些參數改變了。
測定了胰島素敏感性的提高是否會保護Esp-/-小鼠免于發生胰腺β-細胞衰竭。為此，對小鼠注射鏈脲佐菌素(STZ)，從而引發如2型糖尿病中觀察到的β-細胞細胞中的氧化應激和細胞死亡(Le May等，2006)。在兩種基因型中STZ處理均可觀地降低胰腺胰島素含量和胰島素血清水平(圖3J和3K)。STZ注射后八天，7只經STZ處理的WT小鼠中3只死亡，并且所有存活的小鼠具有高于500mg/dl的血清葡萄糖水平(圖3L和3M)。另一方面，這期間只有一只經STZ處理的Esp-/-小鼠死亡，并且存活小鼠的血葡萄糖水平不超過250mg/dl。與經STZ處理的WT小鼠不同，在經STZ注射的Esp-/-小鼠尿中未能檢測到葡萄糖(圖3N)。因為經STZ處理的WT和Esp-/-小鼠都有胰島中胰島素含量的大幅降低，所以經STZ處理的Esp-/-小鼠中無明顯糖尿病表型，這顯示其胰島素敏感性的提高不依賴于其胰島素分泌提高。這些結果確定，在小鼠中發生肥胖癥和葡萄糖不耐受需要Esp的功能(OST-PTP)。
Esp影響成骨細胞所分泌分子的生物活性。下一個問題是Esp如何能夠通過其在成骨細胞中的表達來調節胰島素分泌和敏感性。基于細胞的測定法未能提供OST-PTP胞外結構域可以獨立于磷酸酶結構域而被切割和分泌或表達的證據。因此，用表達全長的flag標記OST-PTP或僅表達flag標記的胞外結構域的載體來轉染通常不表達Esp的COS細胞。使用本領域公知的標準磷酸鈣方法轉染細胞。在實驗結束時，收集上清液，裂解細胞，并對上清液和細胞裂解物都檢測OST-PTP的存在。然后使用細胞裂解物或細胞上清液進行Western印跡分析。在細胞裂解物中檢測到重組的全長或截短蛋白質，但在上清液中則沒有，顯示OST-PTP胞外結構域通常不被細胞分泌。制備針對OST-PTP胞外結構域的抗體，從而能夠進行這些實驗；本發明的某些實施方案涉及這種抗體和結合OST-PTP胞外結構域的其它抗體。OST-PTP胞外結構域可被抗體接近，因為其不被隔離在細胞膜內。也存在針對OST跨膜結構域的抗體。這兩種抗體均為多克隆抗體，并可施用給動物以抑制OST-PTP，從而提高骨鈣蛋白活性，這進而提高脂連蛋白產生并從脂肪細胞中分泌出來，這又進而提高胰島素的產生和敏感性。當然，同樣可使用單克隆抗體。
為了進一步研究OST-PTP功能，產生并分析了在成骨細胞中表達全長OST-PTP或僅表達其胞外結構域的轉基因小鼠。制備在成骨細胞中選擇性過表達全長Esp cDNA的轉基因小鼠(α1(I)-OST-PTP小鼠)，其在喂飼狀態下顯示降低的β-細胞增殖、更低的β-細胞量、低胰島素血癥，并且應答于葡萄糖的胰島素分泌受損(圖4A-C)。它們還顯示更低的脂連蛋白血清濃度(圖4B)。因此，采取常規食物的α1(I)-OST-PTP小鼠發生高血糖癥、葡萄糖不耐受和胰島素抗性(圖4B、4D和4E)。僅在過表達全長OST-PTP的轉基因小鼠中觀察到該表型(在Esp-/-小鼠中所觀察到的表型的鏡像)的這一事實顯示，影響葡萄糖內穩態需要OST-PTP的磷酸酶活性。另外，這些小鼠在成骨細胞中過表達Esp的事實進一步支持下述結論OST-PTP調節成骨細胞所產生分泌性分子的生物活性，這些分子進一步調節葡萄糖內穩態。相反，僅表達OST-PTP胞外結構域的α1(I)膠原-Espsd小鼠不具有任何類型的能量代謝異常。這些結果與已充分描述的OST-PTP磷酸酶結構域是活性結構域的這一事實結合在一起，顯示了OST-PTP通過其磷酸酶結構域而不是胞外結構域來調節胰島素分泌和脂連蛋白表達，并且進一步證實了OST-PTP通過其在成骨細胞中表達而作用于能量代謝的調節。
還產生了載脂蛋白E-OST-PTPEC轉基因小鼠，其表達OST-PTP胞外結構域并將其釋放進大循環中。使用載脂蛋白E啟動子指導肝細胞中的Esp表達，從而導致OST-PTP胞外結構域釋放進入大循環。這些轉基因小鼠與野生型小鼠不可區分，進一步證實OST-PTP通過其細胞內磷酸酶結構域及其在成骨細胞中的表達來調節能量代謝。
為了進一步證實成骨細胞能分泌作用于胰腺β-細胞細胞和脂肪細胞的因子，將成骨細胞(其為貼壁細胞)與胰島或脂肪細胞(其為非貼壁細胞)共培養。將已分化WT成骨細胞與分離自WT小鼠的胰島共培養將胰島中的胰島素表達提高40％(圖4F)。與Esp-/-小鼠中觀察到的胰島素分泌提高完全一致，Esp-/-成骨細胞進一步增強了胰島素表達(圖4F)。還將成骨細胞或成纖維細胞與脂肪細胞共培養。WT成骨細胞而不是成纖維細胞提高脂連蛋白的表達，并且Esp-/-成骨細胞在增強脂連蛋白表達方面的效力是WT成骨細胞的兩倍(圖4G)。在該測定法中，脂連蛋白是唯一表達受到影響的脂肪因子(圖4G)。使用與Esp-/-胰島或脂肪細胞共培養的WT成骨細胞的對照實驗在胰島素和脂連蛋白表達方面顯示出與使用WT胰島或脂肪細胞時觀察到的相同的提高(圖4H)。
為了確定成骨細胞通過釋放分泌性分子來影響胰島素和脂連蛋白表達，進行額外的實驗。首先，將成骨細胞與胰島或脂肪細胞共培養，使用濾器防止細胞-細胞接觸。其次，在原代成骨細胞培養物上清液存在下共培養胰島和脂肪細胞。在兩種情況下均觀察到胰島素和脂連蛋白的顯著提高(圖4I和4J)。總之，這些數據表明，成骨細胞所表達的Esp調節了影響β-細胞和脂肪細胞中胰島素和脂連蛋白表達的分泌性分子的表達或活性。
骨鈣蛋白是成骨細胞產生的提高增殖、胰島素分泌和胰島素敏感性的分泌性分子。為了鑒定成骨細胞所分泌的調節葡萄糖內穩態的分子，在缺失骨鈣蛋白(存在于血清中的成骨細胞特異性分泌性分子)的突變體小鼠品系中分析能量代謝參數。在較早的研究中，觀察到oc-/-小鼠在產生后是異常肥胖的。Ducy等Nature 1996，其通過參考并入本文。當時沒有解釋為何這些動物如此肥胖，因此這些小鼠的肥胖癥方面被觀察到，但未公開。制備了純合(Oc-/-)和雜合(Oc+/-)的品系。
骨鈣蛋白是由成骨細胞生產的主要非膠原蛋白質之一，也是成骨細胞特異性分子。與許多分泌性蛋白質(包括肽激素)一樣，骨鈣蛋白作為前-原-骨鈣蛋白產生，并在被分泌前在胞質中發生切割和翻譯后修飾。另外，骨鈣蛋白屬于gla蛋白家族，其中一些谷氨酸殘基被γ-羧化酶羧化形成gla殘基。因此，骨鈣蛋白的另一名稱是骨gla蛋白(BGP)。Gla殘基賦予gla蛋白質對礦物離子的高親和力。
骨鈣蛋白-/-小鼠具有比WT小鼠更高的血糖和更低的胰島素血漿水平(圖5A和5B)。與能量消耗一樣，在骨鈣蛋白-/-小鼠中通過GSIS、GTT和ITT分析的胰島素分泌和敏感性以及葡萄糖耐量都是降低的(圖5C-5E和5G)。相應地，在骨骼肌和肝中，參與胰島素作用的基因表達被降低，而Pepck表達被提高(圖5H)。在骨鈣蛋白-/-小鼠中，胰島大小和數量、β-細胞量、胰腺胰島素含量和胰島素免疫反應性均顯著提高(圖5I)。在P5幼仔和3月齡的骨鈣蛋白-/-胰腺中，通過Ki67免疫染色測量的β-細胞增殖降低兩倍(圖5I)。與這種β-細胞增殖、胰島素分泌和敏感性的顯著降低相伴隨的是脂肪墊質量、脂肪細胞數(WT，93.2±10.7×103個脂肪細胞/脂肪墊(n＝5)；骨鈣蛋白-/-，125.6±10.6×103個脂肪細胞/脂肪墊(n＝3))和血清甘油三酯水平的提高(圖5J和5K)。脂連蛋白表達和血清水平在骨鈣蛋白-/-中顯著低于WT小鼠，特別是考慮到它們提高的脂肪墊質量，而其它脂肪因子的表達未受影響(圖5L和5M)。骨鈣蛋白-/-小鼠中脂連蛋白作用的分子靶標的表達降低(圖5N)。然而，骨鈣蛋白+/-小鼠與WT同窩仔是不可區分的(數據未顯示)。小鼠脂連蛋白的cDNA序列是SEQ IDNO8；也可以通過氨基酸SEQ ID NO9來表示。人脂連蛋白的cDNA序列是SEQ ID NO6，也可以通過氨基酸SEQ ID NO7來表示。
為了證明骨鈣蛋白是成骨細胞分泌的影響胰島素和脂連蛋白表達的分子，進行了其它共培養實驗。與WT成骨細胞不同，骨鈣蛋白-/-成骨細胞未能分別增強胰島和脂肪細胞中胰島素和脂連蛋白的表達(圖5O和5P)。在相反的實驗中，骨鈣蛋白在COS細胞中的強制性表達(forcedexpression)允許這些細胞提高胰島中的胰島素表達和脂肪細胞中的脂連蛋白表達(圖5Q)。將不表達骨鈣蛋白的WT未成熟成骨細胞(Ducy等，2000b)與胰島或脂肪細胞共培養。這些細胞未能誘導胰島素表達或脂連蛋白表達(圖5R)。總之，這些數據提供了遺傳和細胞證據，表明骨鈣蛋白是分化成骨細胞分泌的調節胰島素和脂連蛋白表達的分子。
骨鈣蛋白通過脂連蛋白調節胰島素敏感性。為了確定胰島素和脂連蛋白是否均彼此獨立地促進了骨鈣蛋白-/-小鼠的代謝表型，研究了兩個相關的問題。首先，骨鈣蛋白調節脂連蛋白表達是否獨立于其對胰島素分泌的作用，以及如果是的話，骨鈣蛋白-/-小鼠中觀察到的脂連蛋白表達降低是否解釋了胰島素敏感性的降低？如果兩種假設都是正確的，則復合雜合子骨鈣蛋白+/-；脂連蛋白+/-小鼠應當比WT同窩仔具有更低的脂連蛋白表達，并應當顯示與骨鈣蛋白-/-或脂連蛋白-/-小鼠中觀察到的相似的胰島素敏感性降低(Maeda等，2002)。某些實施方案涉及這些雜合的轉基因品系。
如圖6A-D中所示，在骨鈣蛋白+/-；脂連蛋白+/-小鼠中，胰島素敏感性顯著降低，而通過GSIS測試測定的血糖水平、胰島素血清水平和胰島素分泌保持在正常范圍內。與WT或單雜合子小鼠相比，骨鈣蛋白+/-；脂連蛋白+/-小鼠中脂連蛋白血清水平也顯著降低(圖6E)。這些觀察結果與下述觀點是一致的骨鈣蛋白至少部分通過調節脂連蛋白表達和分泌來調節胰島素敏感性。
為了顯示在Esp缺陷型小鼠中觀察到的胰島素敏感性提高和脂肪重量降低是由于脂連蛋白表達的提高，產生了血清脂連蛋白水平提高為兩倍的Sap-脂連蛋白轉基因小鼠，這與在Esp缺陷型小鼠中觀察到的提高相似。Sap-脂連蛋白轉基因小鼠還顯示低脂肪墊重量、高能量消耗的表型，以及與在Esp缺陷型小鼠中現象相似的胰島素敏感性提高的代謝和分子證據(圖22)。該結果顯示，脂連蛋白表達的提高是Esp缺陷型小鼠中胰島素產生和敏感性提高的主要的可識別原因。本發明的某些實施方案因此涉及轉染有脂連蛋白基因的人細胞，所述基因在導致細胞過表達脂連蛋白的啟動子控制之下。
OST-PTP通過間接影響骨鈣蛋白的羧化來調節其生物活性。骨鈣蛋白-/-小鼠的代謝表型是在Esp-/-小鼠中所觀察到表型的鏡像，這提示在后者中獲得了骨鈣蛋白活性。為了進一步證明Esp缺陷型小鼠(OST-PTP-/-)是獲得骨鈣蛋白活性的模型，通過向Esp缺陷型轉基因小鼠中引入額外的突變來制備雙重突變體，特別是將其制備為骨鈣蛋白+/-。
推測可通過降低骨鈣蛋白表達逆轉Esp-/-小鼠的代謝異常。這正是所觀察到的缺乏一個骨鈣蛋白等位基因的Esp-/-小鼠顯示其所有代謝異常如血糖、胰島素和脂連蛋白的血清水平、葡萄糖耐量、胰島素分泌和敏感性均顯著逆轉(圖7A-F)。Ki67染色顯示這些突變體小鼠中β-細胞增殖也被降低(圖7G)。
事實上，Esp-/-；Ocn+/-小鼠與未缺失任何骨鈣蛋白的Esp-/-小鼠相比顯示胰島素合成和敏感性的降低，顯示使Esp-/-小鼠中與WT小鼠相比的所有代謝異常均完全糾正/正常化。該實驗在遺傳上確定了，OST-PTP和骨鈣蛋白在同一信號級聯中，并且Espob-/-小鼠表型是獲得骨鈣蛋白活性的模型。換言之，在Espob-/-小鼠中觀察到的代謝表型是由于骨鈣蛋白活性的提高。
因為Esp-/-小鼠中骨鈣蛋白表達和血清水平是正常的，所以排除了骨鈣蛋白對OST-PTP表達的調節(圖20)。相反，Esp-/-小鼠顯示血清羧化骨鈣蛋白與總骨鈣蛋白的比值降低(圖7H)。羧化骨鈣蛋白比羧化不足的骨鈣蛋白對羥磷灰石(HA)具有更高的親和力(Hauschka等，1989；Price，1989)。使用下述測定法，其中羧化骨鈣蛋白以能夠結合羥磷灰石(HA)的總骨鈣蛋白的％來衡量。該測定顯示與wt小鼠相比，在Esp-/-小鼠中該值降低20％。在存在等量的總骨鈣蛋白時，這表示與WT相比Esp-/-小鼠中羧化不足的骨鈣蛋白提高20％。
該實驗提示，OST-PTP通過調節骨鈣蛋白的γ-羧化程度來影響骨鈣蛋白功能，并且調節葡萄糖內穩態的是羧化不足的骨鈣蛋白形式。為了確定情況是否如此，進行兩種額外的實驗。在共培養測定之前和期間，用γ-羧化抑制劑華法林(Bergner，2005)處理WT原代成骨細胞。該處理導致與HA結合的骨鈣蛋白百分比顯著降低，表明如所預計地，這些成骨細胞分泌更少的羧化骨鈣蛋白(圖7I)。然而，盡管比WT成骨細胞分泌更少的骨鈣蛋白(+賦形劑，10ng/ml；+華法林，2ng/ml)(Hauschka等，1989)，但是華法林處理的成骨細胞與賦形劑處理的成骨細胞相比，將脂連蛋白表達水平誘導至顯著更高的程度(圖7J)。其次，在基于細胞的測定中使用了羧化的骨鈣蛋白和由細菌生產的未羧化小鼠骨鈣蛋白。羧化的骨鈣蛋白未能誘導脂連蛋白表達，而細菌生產的骨鈣蛋白則能夠(圖7K)。同樣，羧化不足的骨鈣蛋白誘導胰島素表達以及細胞周期蛋白D1(β-細胞增殖的分子標志物(Kushner等，2005))的表達(圖7L)。最后，我們研究了患有高胰島素血癥但未患糖尿病的人肥胖患者(圖7M)。在這些患者中，未羧化的骨鈣蛋白量顯著提高，但是骨鈣蛋白血清水平未受影響(圖7M-O)。這些數據一起表明，OST-PTP通過增強骨鈣蛋白羧化程度而影響其生物活性。
OST-PTP影響參與羧化過程的酶。任何細胞類型每種功能中的一個強制性事件(mandatory event)是胞內蛋白質被蛋白激酶磷酸化和/或被蛋白質磷酸酶脫磷酸化的能力。具體地，酪氨酸殘基的磷酸化占總細胞磷酸氨基酸含量的0.1％；因此，蛋白質酪氨酸磷酸酶(protein tyrosinephosphatease，PTP)是極為重要的細胞內蛋白質(23)。
蛋白質酪氨酸磷酸酶可大致分為四類經典的受體樣PTP，其具有有時被切割的胞外結構域(RPTP)；OST-PTP是一種受體樣PTP。其它種類包括經典的非受體PTP、雙特異性PTP和低分子量PTP(24)。人基因組中存在約20種RPTP。主要位于質膜中的RPTP可參與細胞之間的功能、細胞-細胞粘附和激素信號轉導。然而，仍有關于它們生物學情況的兩個問題未被解答。一個是確定它們磷酸酶活性底物的身份，另一個是鑒定它們的配體。
結果提示，OST-PTP能夠使存在于成骨細胞中的特定底物脫磷酸化，從而提高該底物的表達和/或活性。然后該底物可被成骨細胞釋放，并對胰腺β-細胞和脂肪細胞傳遞信號，從而影響胰島素分泌和敏感性。盡管就生理學而言骨鈣蛋白是OST-PTP邏輯上的靶標候選者，但是骨鈣蛋白不被磷酸化。因此排除其作為直接靶標。
為了闡明OST-PTP可能怎樣影響骨鈣蛋白活性，我們研究它是否調節骨鈣蛋白的γ-羧化，所述γ-羧化是該分子已知的主要翻譯后修飾(Hauschka等，1989)。該翻譯后修飾在嚙齒動物和人中均發生；Poser等分析了人骨鈣蛋白的一級結構，并報道人骨鈣蛋白是17位為谷氨酸的Glu7骨鈣蛋白(本文中稱作“Oc-glu”，)與17位為γ-羧基谷氨酸的Gla7骨鈣蛋白(本文中稱作“BGP”，也稱作骨Gla蛋白)的混合物[PoSer，J.W.等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.，255，8685-8691(1980)]。Gla殘基通常賦予蛋白質對礦物離子的高親和力。然而，功能喪失和獲得實驗未能體內鑒定骨鈣蛋白在細胞外基質礦化中的功能(Ducy等，1996；Murshed等，2004)。
OST-PTP底物包括胰島素受體和γ-羧化酶。計算機檢索揭示，γ-羧化酶(也稱為維生素K依賴性γ-谷氨酰基羧化酶)具有PTP共有位點。該酶催化底物蛋白質(如骨鈣蛋白)中的谷氨酸轉化成γ-羧基谷氨酸。為了確定OST-PTP是否作用于γ-羧化酶，在COS細胞、Ros17/2.8成骨細胞和分化的原代成骨細胞中進行底物捕獲實驗。將d10骨衍生的細胞在補充有抗壞血酸(100μg/ml)和β-甘油磷酸酯(5mM)的αMEM/10％胎牛血清(FBS)中培養10天。然后在僅補充了1％FBS的αMEM培養基中使其饑餓24小時，并用不可逆的蛋白質-酪氨酸磷酸酶抑制劑過釩酸鹽(100mM)和20％FBS處理30分鐘。將細胞裂解物在4℃下與GST、GST-PTPWT或GST-PTPD1316A中任一種孵育2小時。還上樣不同量的總細胞提取物作為對照。
圖9中的結果顯示，突變體酶GST-PTPD1316A捕獲γ-羧化酶，從而證明γ-羧化酶是OST-PTP的底物。然而，這不表示γ-羧化酶是OST-PTP的唯一底物。GST泳道中不存在結合，因為沒有轉染PTP。這是對照，以顯示如果有捕獲的話，也不是由于任何GST融合蛋白中的GST部分。使用GST-PTPWT時也不存在捕獲，因為這種形式使底物γ-羧化酶脫磷酸化，隨后所述底物γ-羧化酶被釋放。在具有突變體GST-PTPD1316A的泳道中清楚地看到一個條帶，因為突變為OST-PTP磷酸酶活性帶來缺陷，這允許底物與酶不可逆結合并被酶保留。
這些結果顯示，γ-羧化酶是成骨細胞中OST-PTP的底物。這使得能夠闡明OST-PTP調節骨鈣蛋白生物活性的生物化學途徑的一部分OST-PTP使γ-羧化酶脫磷酸化，從而將其活化。活化的γ-羧化酶進而引起羧化的骨鈣蛋白提高。在OST-PTP-缺陷型小鼠中脫磷酸化的活性γ-羧化酶更少，這導致分泌更多羧化不足的骨鈣蛋白。這解釋了OST-PTP缺陷型小鼠為什么具有提高的羧化不足骨鈣蛋白水平，這一提高自身引起了對代謝綜合征和糖尿病的抗性。
使用相同的底物捕獲測定法，還發現在成骨細胞中表達的胰島素受體是OST-PTP的底物(圖8)。該底物捕獲實驗的結果顯示突變的OST-PTP(GST-PTP DA)與COS細胞(左上圖)和ROS 17/2.8成骨細胞(右上圖)中表達的胰島素受體(InsR)相互作用(第三泳道)。相反，WT OST-PTP(GST-PTP WT)不與胰島素受體相互作用(第二泳道)。使用相同量的GST融合蛋白進行底物捕獲。
人患者數據。圖7O顯示患有高胰島素血癥但未患糖尿病的人肥胖患者與正常患者相比具有顯著提高的羧化不足骨鈣蛋白水平(高約30％)，盡管骨鈣蛋白血清水平(7M)大致相同。這顯示在小鼠和人中，骨鈣蛋白的羧化水平影響其生物活性。圖7O還顯示肥胖的非糖尿病患者與肥胖且患有糖尿病的患者相比羧化不足的骨鈣蛋白提高。在來自不服藥的正常患者、肥胖的非糖尿病患者和肥胖的糖尿病患者的血清中，測量羧化的骨鈣蛋白與總骨鈣蛋白的比值。
進行體內實驗，其中監測羧化不足的骨鈣蛋白對糖血的作用。用3種不同量的小鼠重組羧化不足骨鈣蛋白或安慰劑(PBS)對野生型小鼠皮下輸注28天(0.3、1和3ng/小時)。與輸注安慰劑的對照動物相比，所有三種羧化不足的骨鈣蛋白劑量均在28天的時間中降低體內糖血(圖10)。
在另一個體內實驗中，研究未羧化的骨鈣蛋白對葡萄糖耐量的作用。用0.3或3ng/小時劑量的重組未羧化的骨鈣蛋白或PBS對野生型小鼠皮下輸注14天，之后接受單次葡萄糖注射。之后在指定的時間測量血糖。結果顯示葡萄糖注射后120分鐘的時間中，未羧化的骨鈣蛋白劑量均提高葡萄糖耐量高于對照水平(圖11)。
還檢查了未羧化的骨鈣蛋白對胰島素敏感性的作用。用0.3或3ng/小時劑量的重組骨鈣蛋白或PBS對野生型小鼠皮下輸注18天，之后接受單次胰島素注射。之后在注射后0-120分鐘中的指定時間測量血糖。結果顯示兩種劑量的未羧化的骨鈣蛋白均提高胰島素敏感性(圖12)。
在另一個體內實驗中，監測未羧化的骨鈣蛋白對體重和脂肪墊質量的作用(圖13)。以0.3、1或3ng/小時對野生型小鼠皮下輸注PBS或未羧化的骨鈣蛋白28天。結果顯示未羧化的骨鈣蛋白輕微降低體重，最高的劑量最有效。(圖13)28天后測量的性腺脂肪墊質量被3ng/小時未羧化的骨鈣蛋白處理降低約18％。該時間中其它劑量未顯著降低脂肪墊量。
研究了未羧化的骨鈣蛋白對GTG誘導的肥胖癥的作用(圖14)。對野生型小鼠注射金硫葡萄糖(GTG)以誘導飲食過多和肥胖癥，或注射賦形劑。兩周后，對其植入皮下滲透泵，所述滲透泵輸注1ng/hr重組未羧化骨鈣蛋白或PBS，持續28天。在檢驗的第一時間點(7天)時兩種劑量的未羧化骨鈣蛋白均顯著降低了體重增加，并且在整個28天周期中均保持低于對照。在28天中，未羧化的骨鈣蛋白處理將體重減少約15％。
未羧化骨鈣蛋白的片段是有生物活性的。進行實驗以測試在體外刺激小鼠脂肪細胞分泌脂連蛋白時，截短的骨鈣蛋白是否與全長未羧化骨鈣蛋白同樣有效。用重組的全長骨鈣蛋白(1-46)或截短形式(1-36)(C端前10個氨基酸缺失)或賦形劑將野生型脂肪細胞處理4小時。然后通過實時PCR定量脂連蛋白表達。結果顯示，全長的未羧化骨鈣蛋白產生約1.5倍的提高，未羧化骨鈣蛋白的1-36片段產生約1.8倍的提高(圖15)。因此，生物活性不需要全長分子；至少可從小鼠骨鈣蛋白分子的C端缺失多達10個氨基酸，而對脂肪細胞和β-細胞達到相同的生物效應。本發明的某些實施方案涉及其中C端前10個氨基酸被缺失的骨鈣蛋白，優選人骨鈣蛋白，優選羧化不足的骨鈣蛋白。
骨鈣蛋白的一級序列在物種間高度保守，并且是人體中十種最大量的蛋白質之一(圖21)，提示其功能在進化中被保留。重要的是，保守性特征包括17、21和24位上三個Gla殘基，Cys23和Cys29之間的二硫鍵，并且大部分物種在9位上含有羥脯氨酸。骨鈣蛋白的N-端與該分子的其它部分相比顯示最高的序列變異。人和小鼠骨鈣蛋白的高保守程度強調了小鼠在健康和疾病兩種狀態下作為用于人的動物模型的相關性，并確認了我們對骨鈣蛋白用于治療或預防代謝綜合征或其任何組分和1型糖尿病的治療和診斷用途的主張。
維生素K和他汀類提高骨鈣蛋白。維生素K是γ-羧化所需要的。華法林和其它

衍生物阻斷維生素K依賴性γ-羧化，從而提高活性羧化不足骨鈣蛋白的水平。這與下述數據一致，所述數據顯示與經賦形劑處理的成骨細胞相比，經華法林處理的成骨細胞產生提高的羧化不足骨鈣蛋白水平(圖7I)。還已顯示，與無維生素K治療的對照相比，用維生素K治療骨質疏松患者4周導致羧化不足骨鈣蛋白的百分比均值顯著降低85％。維生素D單獨或與維生素K一起施用時不具有顯著的作用。Takahashi等，Clinical Endocrinology(2001)54，291-224。還見Sugiyama，T.，J Bone Miner Metabolism(2001)19，146-159。該觀察結果提示，華法林或另一種

衍生物可用于阻斷維生素K依賴性γ-羧化，并提高患者中羧化不足的骨鈣蛋白水平，目標是治療/預防代謝病癥。
以商品名

出售的華法林作為口服抗凝血劑使用，其抑制凝固因子的合成，從而預防血塊形成。然而，

可引起出血和皮膚壞死(壞疽)。許多藥物(包括處方藥和非處方藥(OTC))能夠影響

的抗凝血作用。一些藥物可增強

的作用并引起過度的血稀釋(blood thinning)和危及生命的出血。這些藥物的少量實例包括阿司匹林、

醇、布洛芬

西米替丁

氧雄龍(oxandrolone)

某些維生素和抗生素。
其它人顯示，治療四周后他汀

(人中20mg/天辛伐他汀)顯著提高骨鈣蛋白的血清水平(p值小于0.05)，盡管羧化不足的骨鈣蛋白與完整的骨鈣蛋白無法區分。Chan，M.H.，等，J Clin Endocrinology andMetabolism(2001)Vol 86(9)，4556-59。盡管沒有他汀類提高羧化不足的骨鈣蛋白水平的實驗證據，但是骨鈣蛋白總體表達的顯著提高能導致γ-羧化酶活性飽和，并且導致不能羧化所有產生的骨鈣蛋白。因此，他汀類可間接提高血中釋放的羧化不足骨鈣蛋白的量。另外，將他汀類與阻斷γ-羧化的藥物(如華法林(其阻斷維生素K))或者OST-PTP和γ-羧化酶的抑制劑一起施用能夠共同作用，提高血清未羧化骨鈣蛋白并具有治療作用。他汀類和維生素K抑制劑可在單個制劑或獨立的制劑中施用。
因此，本發明的某些方面涉及維生素K抑制劑和他汀類用于提高血清中羧化不足的骨鈣蛋白水平的用途，以及它們在治療代謝綜合征及其多種組分中的治療性用途。
交感神經系統正調節OST-PTP表達。發現交感神經系統(SNS)活性正調節成骨細胞中的Esp表達。事實上，圖16顯示，用β-腎上腺素能受體激動劑異丙腎上腺素刺激SNS信號轉導在4小時中將Esp表達提高約80％，并且這種提高甚至在8小時時仍保持穩定。然而，提高的SNS活性未提高γ-羧化酶(ggcx)、vkor(參與維生素K再循環的酶，其對于ggcx活性是必需的)或骨鈣蛋白的表達。該實驗顯示，SNS信號轉導正調節成骨細胞中的Esp表達。因此，降低交感神經活性會導致Esp表達降低，進而導致羧化不足的活化形式骨鈣蛋白提高。
使用具有低交感神經活性的ob/ob小鼠進行的體內實驗證實了這一假說，并顯示在瘦素(ob基因的產物)與骨鈣蛋白之間存在遺傳聯鎖。已經顯示瘦素通過SNS向成骨細胞傳遞信號。因此，ob/ob小鼠是成骨細胞上降低的SNS信號轉導的模型。ob/ob小鼠在發生任何其它代謝異常之前顯示胰島素的提高。該提高可能是由于SNS對成骨細胞的活性降低，因此會表達更少的OST-PTP并分泌更多有生物活性的羧化不足骨鈣蛋白，導致提高的胰島素表達。在具有多種基因型的1周齡小鼠中測量血清胰島素水平WT小鼠、ob-/+小鼠(對肥胖癥是半合子(hemizygous))、ob/ob小鼠、Bgp-/+(對骨鈣蛋白是半合子)、BGP-/-小鼠和也是Bgp-/-的ob/ob小鼠(Ocn缺陷型)。選擇1周齡小鼠是因為ob/ob小鼠在1周時尚未肥胖，并且它們除了具有高血清胰島素水平以外在代謝上是相對正常的。結果顯示，ob/ob小鼠事實上具有提高的血清胰島素水平，但是如果ob/ob小鼠中Bgp基因(編碼骨鈣蛋白)的兩個等位基因均被缺失，則其血清胰島素水平回歸正常。圖17。該實驗證明，在ob/ob小鼠中觀察到的胰島素提高依賴于骨鈣蛋白。
上文所述結果一起表明施用降低SNS活性的β-阻斷劑會降低Esp表達，從而提高羧化不足的骨鈣蛋白水平。因此，它們可通過提高骨鈣蛋白活性而用于預防/治療代謝病癥。β-阻斷劑在臨床上已長期使用，因此用于人類用途的安全量是確定的。常規實驗可確定實現羧化不足骨鈣蛋白血清水平提高所需施用的具體β-阻斷劑的最適量。也可開發更優先靶向骨骼細胞的新的β-阻斷劑，以更為特異地提高骨鈣蛋白活性并降低副作用的風險。
表2 p≤0.05，Student’s t-檢驗，ND，未進行。
通過高血胰島素-正常血糖鉗分析3月齡的Esp-/-和Ocn-/-小鼠。
表3

參考文獻
Berkner，K.L.(2005).The vitamin K-dependent carboxylase.Annu Rev Nutr 25，127-149.
Brecher，G.，Laqueur，G.L.，Cronkite，E.P.，Edelman，P.M.，and Schwartz，I.L.(1965).TheBrain Lesion of Goldthioglucose Obesity.J Exp Med 121，395-401.
Cousin，W.，Courseaux，A.，Ladoux，A.，Dani，C.，and Peraldi，P.(2004).Cloning of hOST-PTPthe only example of a protein-tyrosine-phosphatase the function of which has been lostbetween rodent and human.Biochem Biophys Res Commun 321，259-265.
Dacquin，R.，Mee，P.J.，Kawaguchi，J.，Olmsted-Davis，E.A.，Gallagher，J.A.，Nichols，J.，Lee，K.，Karsenty，G.，and Smith，A.(2004).Knock-in of nuclear localised beta-galactosidasereveals that the tyrosine phosphatase Ptprv is specifically expressed in cells of the bonecollar.Dev Dyn 229，826-834.
Dacquin，R.，Starbuck，M.，Schinke，T.，and Karsenty，G.(2002).Mouse alphal(I)-collagenpromoter is the best known promoter to drive efficient Cre recombinase expression inosteoblast.Dev Dyn 224，245-251.
Ducy，P.，Amling，M.，Takeda，S.，Priemel，M.，Schilling，A.F.，Beil，F.T.，Shen，J.，Vinson，C.，Rueger，J.M.，and Karsenty，G.(2000a).Leptin inhibits bone formation through ahypothalamic relaya central control of bone mass.Cell 100，197-207.
Ducy，P.，Desbois，C.，Boyce，B.，Pinero，G.，Story，B.，Dunstan，C.，Smith，E.，Bonadio，J.，Goldstein，S.，Gundberg，C.，et al.(1996).Increased bone formation in osteocalcin-deficientmice.Nature 382，448-452.
Ducy，P.，Schinke，T.，and karsenty，G.(2000b).The osteoblastA sophisticated fibroblastunder central surveillance.Science 289，1501-1504.
Flint，A.J.，Tiganis，T.，Barford，D.，and Tonks，N.K.(1997).Development of″substrate-trapping″mutants to identify physiological substrates of protein tyrosine phosphatases.ProcNatl Acad Sci U S A 94，1680-1685.
Friedman，J.M.，and Halaas，J.L.(1998).Leptin and the regulation of body weight inmammals.Nature 395，763-770.
Harada，S.，and Rodan，G.A.(2003).Control of osteoblast function and regulation of bonemass.Nature 423，349-355.
Hauschka，P.V.，Lian，J.B.，Cole，D.E.，and Gundberg，C.M.(1989).Osteocalcin and matrixGla proteinvitamin K-dependent proteins in bone.Physiol Rev 69，990-1047.
Herman，M.A.，and Kahn，B.B.(2006).Glucose transport and sensing in the maintenance ofglucose homeostasis and metabolic harmony.J Clin Invest 116，1767-1775.
Kadowaki，T.，and Yamauchi，T.(2005).Adiponectin and adiponectin receptors.Endocr Rev26，439-451.
Karsenty，G.(2006).Convergence between bone and energy homeostasesLeptin regulationof bone mass.Cell Metab 4，341-348.
Kasuga，M.(2006).Insulin resistance and pancreatic beta-cell failure.J Clin Invest 116，1756-1760.
Kushner，J.A.，Ciemerych，M.A.，Sicinska，E.，WartschoW，L.M.，Teta，M.，Long，S.Y.，Sicinski，P.，and White，M.F.(2005).Cyclins D2 and D1 are essential for postnatal pancreaticbeta-cell growth.Mol Cell Biol 25，3752-3762.
Le May，C.，Chu，K.，Hu，M.，Ortega，C.S.，Simpson，E.R.，Korach，K.S.，Tsai，M.J.，andMauvais-Jarvis，F.(2006).Estrogens protect pancreatic beta-cells from apoptosis and preventinsulin-deficient diabetes mellitus in mice.Proc Natl Acad Sci U S A 103，9232-9237.
Maeda，N.，Shimomura，I.，Kishida，K.，Nishizawa，H.，Matsuda，M.，Nagaretani，H.，
Furuyama，N.，Kondo，H.，Takahashi，M.，Arita，Y.，et al.(2002).Diet-induced insulinresistance in mice lacking adiponectin/ACRP30.Nat Med 8，731-737.
Mauro，L.J.，Olmsted，E.A.，Skrobacz，B.M.，Mourey，R.J.，Davis，A.R.，and Dixon，J.E.(1994).Identification of a hormonally regulated protein tyrosine phosphatase associated withbone and testicular differentiation.J Biol Chem 269，30659-30667.
Mauvais-Jarvis，F.，Ueki，K.，Fruman，D.A.，Hirshman，M.F.，Sakamoto，K.，Goodyear，L.J.，Iannacone，M.，Accili，D.，Cantley，L.C.，and Kahn，C.R.(2002).Reduced expression of themurine p85alpha subunit of phosphoinositide 3-kinase improves insulin signaling andameliorates diabetes.J Clin Invest 109，141-149.
Mauvais-Jarvis，F.，Virkamaki，A.，Michael，M.D.，Winnay，J.N.，Zisman，A.，Kulkarni，R.N.，and Kahn，C.R.(2000).A model to explore the interaction between muscle insulinresistance and beta-cell dysfunction in the development of type 2 diabetes.Diabetes 49，2126-2134.
Murshed，M.，Schinke，T.，McKee，M.D.，and Karsenty，G.(2004).Extracellular matrixmineralization is regulated locally；different roles of two gla-containing proteins.J Cell Biol165，625-630.
Price，P.A.(1989).Gla-containing proteins of bone.Connect Tissue Res 21，51-57；discussion 57-60.
Rosato，M.T.，Schneider，S.H.，and Shapses，S.A.(1998).Bone turnover and insulin-likegrowth factor I levels increase after improved glycemic control in noninsulin-dependentdiabetes mellitus.Calcif Tissue Int 63，107-111.
Spiegelman，B.M.，and Flier，J.S.(2001).Obesity and the regulation of energy balance.Cell104，531-543.
Steppan，C.M.，Bailey，S.T.，Bhat，S.，Brown，E.J.，Banerjee，R.R.，Wright，C.M.，Patel，H.R.，Ahima，R.S.，and Lazar，M.A.(2001).The hormone resistin links obesity to diabetes.Nature 409，307-312.
Takayanagi，H.(2006).Osteoimmunologythe integrated understanding of the bone andimmune systems.Nat Rev Genet In press.
Takeda，S.，Elefteriou，F.，Levasseur，R.，Liu，X.，Zhao，L.，Parker，K.L.，Armstrong，D.，Ducy，P.，and Karsenty，G.(2002).Leptin regulates bone formation via the sympatheticnervous system.Cell 111，305-317.
Teitelbaum，S.L.，and Ross，F.P.(2003).Genetic regulation of osteoclast development andfunction.Nat Rev Genet 4，638-649.
Urakawa，I.，Yamazaki，Y.，Shimada，T.，Iijima，K.，Hasegawa，H.，Okawa，K.，Fujita，T.，Fukumoto，S.，and Yamashita，T.(2006).Klotho converts canonical FGF receptor into aspecific receptor for FGF23.Nature.
Watanabe，M.，Houten，S.M.，Mataki，C.，Christoffolete，M.A.，Kim，B.W.，Sato，H.，Messaddeq，N.，Harney，J.W.，Ezaki，O.，Kodama，T.，et al.(2006).Bile acids induce energyexpenditure by promoting intracellular thyroid hormone activation.Nature 439，484-489.
Yamauchi，T.，Kamon，J.，Waki，H.，Terauchi，Y.，Kubota，N.，Hara，K.，Mori，Y.，Ide，T.，Murakami，K.，Tsuboyama-Kasaoka，N.，et al.(2001).The fat-derived hormone adiponectinreverses insulin resistance associated with both lipoatrophy and obesity.Nat Med 7，941-946.
Zacchigna，L.，Vecchione，C.，Notte，A.，Cordenonsi，M.，Dupont，S.，Maretto，S.，Cifelli，G.，Ferrari，A.，Maffei，A.，Fabbro，C.，et al.(2006).Emilinl links TGF-beta maturation to bloodpressure homeostasis.Cell 124，929-942.
序列表
SEQ ID NO.1
人骨鈣蛋白cDNA
cgcagccacc gagacaccat gagagccctc acactcctcg ccctattggc cctggccgca ctttgcatcg ctggccaggc
aggtgcgaag cccagcggtg cagagtccag caaaggtgca gcctttgtgt ccaagcagga gggcagcgag gtagtgaaga
gacccaggcg ctacctgtat caatggctgg gagccccagt cccctacccg gatcccctgg agcccaggag ggaggtgtgt
gagctcaatc cggactgtga cgagttggct gaccacatcg gctttcagga ggcctatcgg cgcttctacg gcccggtcta
gggtgtcgct ctgctggcct ggccggcaac cccagttctg ctcctctcca ggcacccttc tttcctcttc cccttgccct
tgccctgacc tcccagccct atggatgtgg ggtccccatc atcccagctg ctcccaaata aactccagaa gaggaatctg
aaaaaaaaaa aaaaaaaa
SEQ ID NO.2
人骨鈣蛋白氨基酸序列
MRALTLLALL ALAALCIAGQ AGAKPSGAES SKGAAFVSKQ EGSEVVKRPR
RYLYQWLGAP VPYPDPLEPR REVCELNPDC DELADHIGFQ EAYRRFYGPV
SEQ ID NO.3
小鼠骨鈣蛋白基因1cDNA
agaacagaca agtcccacac agcagcttgg cccagaccta gcagacacca tgaggaccat ctttctgctc actctgctga
ccctggctgc gctctgtctc tctgacctca cagatgccaa gcccagcggc cctgagtctg acaaagcctt catgtccaag
caggagggca ataaggtagt gaacagactc cggcgctacc ttggagcctc agtccccagc ccagatcccc tggagcccac
ccgggagcag tgtgagctta accctgcttg tgacgagcta tcagaccagt atggcttgaa gaccgcctac aaacgcatct
atggtatcac tatttaggac ctgtgctgcc ctaaagccaa actctggcag ctcggctttg gctgctctcc gggacttgat
cctccctgtc ctctctctct gccctgcaag tatggatgtc acagcagctc caaaataaag ttcagatgag gaagtgcaaa
aaaaaaaaaa aaaa
SEQ ID NO.4
小鼠骨鈣蛋白基因2cDNA
gaacagacaa gtcccacaca gcagcttggt gcacacctag cagacaccat gaggaccctc tctctgctca ctctgctggc
cctggctgcg ctctgtctct ctgacctcac agatcccaag cccagcggcc ctgagtctga caaagccttc atgtccaagc
aggagggcaa taaggtagtg aacagactcc ggcgctacct tggagcctca gtccccagcc cagatcccct ggagcccacc
cgggagcagt gtgagcttaa ccctgcttgt gacgagctat cagaccagta tggcttgaag accgcctaca aacgcatcta
cggtatcact atttaggacc tgtgctgccc taaagccaaa ctctggcagc tcggctttgg ctgctctccg ggacttgatc
ctccctgtcc tctctctctg ccctgcaagt atggatgtca cagcagctcc aaaataaagt tcagatgagg
SEQ ID NO.5
小鼠骨鈣蛋白基因1和2蛋白質氨基酸序列
MRTLSLLTLL ALAALCLSDL TDPKPSGPES DKAFMSKQEG NKVVNRLRRY
LGASVPSPDP LEPTREQCEL NPACDELSDQ YGLKTAYKRI YGITI
SEQ ID NO.6
人脂連蛋白cDNA
aggctgttga ggctgggcca tctcctcctc acttccattc tgactgcagt ctgtggttct gattccatac cagaggggct
caggatgctg ttgctgggag ctgttctact gctattagct ctgcccggtc atgaccagga aaccacgact caagggcccg
gagtcctgct tcccctgccc aagggggcct gcacaggttg gatggcgggc atcccagggc atccgggcca taatggggcc
ccaggccgtg atggcagaga tggcacccct ggtgagaagg gtgagaaagg agatccaggt cttattggtc ctaagggaga
catcggtgaa accggagtac ccggggctga aggtccccga ggctttccgg gaatccaagg caggaaagga gaacctggag
aaggtgccta tgtataccgc tcagcattca gtgtgggatt ggagacttac gttactatcc ccaacatgcc cattcgcttt
accaagatct tctacaatca gcaaaaccac tatgatggct ccactggtaa attccactgc aacattcctg ggctgtacta
ctttgcctac cacatcacag tctatatgaa ggatgtgaag gtcagcctct tcaagaagga caaggctatg ctcttcacct
atgatcagta ccaggaaaat aatgtggacc aggcctccgg ctctgtgctc ctgcatctgg aggtgggcga ccaagtctgg
ctccaggtgt atggggaagg agagcgtaat ggactctatg ctgataatga caatgactcc accttcacag gctttcttct
ctaccatgac accaactgat caccactaac tcagagcctc ctccaggcca aacagcccca aagtcaatta aaggctttca
gtacggttag gaagttgatt attatttagt tggaggcctt tagatattat tcattcattt actcattcat ttattcattc attcatcaag
taactttaaa aaaatcatat gctatgttcc cagtcctggg gagcttcaca aacatgacca gataactgac tagaaagaag
tagttgacag tgctattttg tgcccactgt ctctcctgat gctcatatca atcctataag gcacagggaa caagcattct
cctgttttta cagattgtat cctgaggctg agagagttaa gtgaatgtct aaggtcacac agtattaagt gacagtgcta
gaaatcaaac ccagagctgt ggactttgtt cactagactg tgccctttta tagaggtaca tgttctcttt ggagtgttgg
taggtgtctg tttcccacct cacctgagag ccattgaatt tgccttcctc atgaattaaa acctccccca agcagagctt
cctcagagaa agtggttcta tgatgaagtc ctgtcttgga aggactacta ctcaatggcc cctgcactac tctacttcct
cttacctatg tcccttctca tgcctttccc tccaacgggg aaagccaact ccatctctaa gtgctgaact catccctgtt
cctcaaggcc acctggccag gagcttctct gatgtgatat ccactttttt tttttttgag atggagtctc actctgtcac
ccaggctgga gtacagtgac acgacctcgg ctcactgcag cctccttctc ctgggtccaa gcaattattg tgcctcagcc
tcccgagtag ctgagacttc aggtgcattc caccacacat ggctaatttt tgtattttta gtagaaatgg ggtttcgtca
tgttggccag gctggtctcg aactcctggc ctaggtgatc cacccgcctc gacctcccaa agtgctggga ttacaggcat
gagccaccat gcccagtcga tatctcactt tttattttgc catggatgag agtcctgggt gtgaggaaca cctcccacca
ggctagaggc aactgcccag gaaggactgt gcttccgtca cctctaaatc ccttgcagat ccttgataaa tgcctcatga
agaccaatct cttgaatccc atatctaccc agaattaact ccattccagt ctctgcatgt aatcagtttt atccacagaa acattttcat
tttaggaaat ccctggtttt aagtatcaat ccttgttcag ctggacaata tgaatctttt ccactgaagt tagggatgac tgtgattttc
agaacacgtc cagaattttt catcaagaag gtagcttgag cctgaaatgc aaaacccatg gaggaattct gaagccattg
tctccttgag taccaacagg gtcagggaag actgggcctc ctgaatttat tattgttctt taagaattac aggttgaggt
agttgatggt ggtaaacatt ctctcaggag acaataactc cagtgatgtt cttcaaagat tttagcaaaa acagagtaaa
tagcattctc tatcaatata taaatttaaa aaactatctt tttgcttaca gttttaaatt ctgaacaatt ctctcttata tgtgtattgc
taatcattaa ggtattattt tttccacata taaagctttg tctttttgtt gttgttgttg tttttaagat ggagtttccc tctgttgcca
ggctagagtg cagtggcatg atctcggctt actgcaacct ttgcctccca ggttcaagcg attcttctgc ctcagcctcc
cgagtagctg ggaccacagg tgcctaccac catgccaggc taatttttgt atttttagta aagacagggt ttcaccatat
tggccaggct ggtctcgaac tcctgacctt gtgatctgcc cgcctccatt tttgttgtta ttttttgaga aagatagata
tgaggtttag agagggatga agaggtgaga gtaagccttg tgttagtcag aactctgtgt tgtgaatgtc attcacaaca
gaaaacccaa aatattatgc aaactactgt aagcaagaaa aataaaggaa aaatggaaac atttattcct ttgcataata
gaaattacca gagttgttct gtctttagat aaggtttgaa ccaaagctca aaacaatcaa gacccttttc tgtatgtcct
tctgttctgc cttccgcagt gtaggcttta ccctcaggtg ctacacagta tagttctagg gtttccctcc cgatatcaaa
aagactgtgg cctgcccagc tctcgtatcc ccaagccaca ccatctggct aaatggacat catgttttct ggtgatgccc
aaagaggaga gaggaagctc tctttcccag atgccccagc aagtgtaacc ttgcatctca ttgctctggc tgagttgtgt
gcctgtttct gaccaatcac tgagtcagga ggatgaaata ttcatattga cttaattgca gcttaagtta ggggtatgta
gaggtatttt ccctaaagca aaattgggac actgttatca gaaataggag agtggatgat agatgcaaaa taatacctgt
ccacaacaaa ctcttaatgc tgtgtttgag ctttcatgag tttcccagag agacatagct ggaaaattcc tattgatttt ctctaaaatt
tcaacaagta gctaaagtct ggctatgctc acagtctcac atctggttgg ggtgggctcc ttacagaaca cgctttcaca
gttaccctaa actctctggg gcagggttat tcctttgtgg aaccagaggc acagagagag tcaactgagg ccaaaagagg
cctgagagaa actgaggtca agatttcagg attaatggtc ctgtgatgct ttgaagtaca attgtggatt tgtccaattc
tctttagttc tgtcagcttt tgcttcatat attttagcgc tctattatta gatatataca tgtttagtat tatgtcttat tggtgcattt
actctcttat cattatgtaa tgtccttctt tatctgtgat aattttctgt gttctgaagt ctactttgtc taaaaataac atacgcactc
aacttccttt tctttcttcc ttcctttctt tcttccttcc tttctttctc tctctctctc tttccttcct tccttcctcc ttttctttct ctctctctct
ctctctcttt ttttgacaga ctctcgttct gtggccctgg ctggagttca gtggtgtgat cttggctcac tgctacctct
accatgagca attctcctgc ctcagcctcc caagtagctg gaactacagg ctcatgccac tgcgcccagc taatttttgt
atttttcgta gagacggggt ttcaccacat tcgtcaggtt ggtttcaaac tcctgacttt gtgatccacc cgcctcggcc
tcccaaagtg ctgggattac aggcatgagc catcacacct ggtcaacttt cttttgatta gtgtttttgt ggtatatctt tttccatcat
gttactttaa atatatctat attattgtat ttaaaatgtg tttcttacag actgcatgta gttgggtata atttttatcc agtctaaaaa
tatctgtctt ttaattggtg tttagacaat ttatatttaa taaaattgtt gaatttaaaa aaaaaaaaaa aa
SEQ ID NO.7
人脂連蛋白蛋白質氨基酸序列
MLLLGAVLLL LALPGHDQET TTQGPGVLLP LPKGACTGWM AGIPGHPGHN
GAPGRDGRDG TPGEKGEKGD PGLIGPKGDI GETGVPGAEG PRGFPGIQGR
KGEPGEGAYV YRSAFSVGLE TYVTIPNMPI RFTKIFYNQQ NHYDGSTGKF
HCNIPGLYYF AYHITVYMKD VKVSLFKKDK AMLFTYDQYQ ENNVDQASGS
VLLHLEVGDQ VWLQVYGEGE RNGLYADNDN DSTFTGFLLY HDTN
SEQ ID NO.8
小鼠脂連蛋白cDNA
TAAGCTGGGG TCTGCCTGTC CCCATGAGTA CCAGACTAAT GAGACCTGGC
CACTTTCTCC TCATTTCTGT CTGTACGATT GTCAGTGGAT CTGACGACAC
CAAAAGGGCT CAGGATGCTA CTGTTGCAAG CTCTCCTGTT CCTCTTAATC
CTGCCCAGTC ATGCCGAAGA TGACGTTACT ACAACTGAAG AGCTAGCTCC
TGCTTTGGTC CCTCCACCCA AGGGAACTTG TGCAGGTTGG ATGGCAGGCA
TCCCAGGACA TCCTGGCCAC AATGGCACAC CAGGCCGTGA TGGCAGAGAT
GGCACTCCTG GAGAGAAGGG AGAGAAAGGA GATGCAGGTC TTCTTGGTCC
TAAGGGTGAG ACAGGAGATG TTGGAATGAC AGGAGCTGAA GGGCCACGGG
GCTTCCCCGG AACCCCTGGC AGGAAAGGAG AGCCTGGAGA AGCCGCTTAT
GTGTATCGCT CAGCGTTCAG TGTGGGGCTG GAGACCCGCG TCACTGTTCC
CAATGTACCC ATTCGCTTTA CTAAGATCTT CTACAACCAA CAGAATCATT
ATGACGGCAG CACTGGCAAG TTCTACTGCA ACATTCCGGG ACTCTACTAC
TTCTCTTACC ACATCACGGT GTACATGAAA GATGTGAAGG TGAGCCTCTT
CAAGAAGGAC AAGGCCGTTC TCTTCACCTA CGACCAGTAT CAGGAAAAGA
ATGTGGACCA GGCCTCTGGC TCTGTGCTCC TCCATCTGGA GGTGGGAGAC
CAAGTCTGGC TCCAGGTGTA TGGGGATGGG GACCACAATG GACTCTATGC
AGATAACGTC AACGACTCTA CATTTACTGG CTTTCTTCTC TACCATGATA
CCAACTGACT GCAACTACCC ATAGCCCATA CACCAGGAGA ATCATGGAAC
AGTCGACACA CTTTCAGCTT AGTTTGAGAG ATTGATTTTA TTGCTTAGTT
TGAGAGTCCT GAGTATTATC CACACGTGTA CTCACTTGTT CATTAAACGA
CTTTATAAAA AATAATTTGT GTTCCTAGTC CAGAAAAAAA GGCACTCCCT
GGTCTCCACG ACTCTTACAT GGTAGCAATA ACAGAATGAA AATCACATTT
GGTATGGGGG CTTCACAATA TTCGCATGAC TGTCTGGAAG TAGACCATGC
TATTTTTCTG CTCACTGTAC ACAAATATTG TTCACATAAA CCCTATAATG
TAAATATGAA ATACAGTGAT TACTCTTCTC ACT
SEQ ID NO.9
小鼠脂連蛋白蛋白質氨基酸序列
MLLLQALLFL LILPSHAEDD VTTTEELAPA LVPPPKGTCA GWMAGIPGHP
GHNGTPGRDG RDGTPGEKGE KGDAGLLGPK GETGDVGMTG AEGPRGFPGT
PGRKGEPGEA AYMYRSAFSV GLETRVTVPN VPIRFTKIFY NQQNHYDGST
GKFYCNIPGL YYFSYHITVY MKDVKVSLFK KDKAVLFTYD QYQEKNVDQA
SGSVLLHLEV GDQVWLQVYG DGDHNGLYAD NVN STFTGF LLYHDTN
SEQ ID NO.10
人γ-谷氨酰羧化酶cDNA
gtgacccacc tgcctcctcc gcagagcaat ggcggtgtct gccgggtccg cgcggacctc gcccagctca gataaagtac
agaaagacaa ggctgaactg atctcagggc ccaggcagga cagccgaata gggaaactct tgggttttga gtggacagat
ttgtccagtt ggcggaggct ctgaatcgac caacggaccc tgcaagctta gctgtctttc gttttctttt tgggttcttg
atggtgctag acattcccca ggagcggggg ctcagctctc tggaccggaa gggctggatg tgtgccgctt ccccttgctg
gatgccctac gcccactgcc atgtatcttg tctacaccat catgtttctg ggggcactgg gcatgatgct taccggataa
gctgtgtgtt attcctgctg ccatactggt atgtgtttct cctggacaag acatcatgga acaaccactc ctatctgtat
gggttgttgg cctttcagct gatgcaaacc actactggtc tgtggacggt ctgctgaatg cccataggag gtgccccttt
ggaactatgc agtgctccgt ggccagatct tcattgtgta cttcattgcg ggtgtgaaaa agctggatgc agactgggtt
gaaggctatt ccatggaata tttgtcccgg cactggctct tcagtccctt caaactgctg ttgtctgagg agctgactag
cctgctggtc gtgcactggg gtgggctgct gcttgacctc tcagctggtt tcctgctctt ttttgatgtc tcaagatcca
ttggcctgtt ctttgtgtcc tacttccact gcatgaattc ccagcttttc agcattggta tgttctccta cgtcatgctg
gccagcagcc ctctcttctg ctcccctgag tggcctcgga agctggtgtc ctactgcccc cgaaggttgc aacaactgtt
gcccctcaag gcagcccctc agcccagtgt ttcctgtgtg tataagagga gccggggcaa aagtggccag aagccagggc
tgcgccatca gctgggagct gccttcaccc tgctctacct cctggagcag ctattcctgc cctattctca ttttctcacc
cagggctata acaactggac aaatgggctg tatggctatt cctgggacat gatggtgcac tcccgctccc accagcacgt
gaagatcacc taccgtgatg gccgcactgg cgaactgggc taccttaacc ctggggtatt tacacagagt cggcgatgga
aggatcatgc agacatgctg aagcaatatg ccacttgcct gagccgcctg cttcccaagt ataatgtcac tgagccccag
atctactttg atatttgggt ctccatcaat gaccgcttcc agcagaggat ttttgaccct cgtgtggaca tcgtgcaggc
cgcttggtca ccctttcagc gcacatcctg ggtgcaacca ctcttgatgg acctgtctcc ctggagggcc aagttacagg
aaatcaagag cagcctagac aaccacactg aggtggtctt cattgcagat ttccctggac tgcacttgga gaattttgtg
agtgaagacc tgggcaacac tagcatccag ctgctgcagg gggaagtgac tgtggagctt gtggcagaac agaagaacca
gactcttcga gagggagaaa aaatgcagtt gcctgctggt gagtaccata aggtgtatac gacatcacct agcccttctt
gctacatgta cgtctatgtc aacactacag agcttgcact ggagcaagac ctggcatatc tgcaagaatt aaaggaaaag
gtggagaatg gaagtgaaac agggcctcta cccccagagc tgcagcctct gttggaaggg gaagtaaaag ggggccctga
gccaacacct ctggttcaga cctttcttag acgccaacaa aggctccagg agattgaacg ccggcgaaat actcctttcc
atgagcgatt cttccgcttc ttgttgcgaa agctctatgt ctttcgccgc agcttcctga tgacttgtat ctcacttcga aatctgatat
taggccgtcc ttccctggag cagctggccc aggaggtgac ttatgcaaac ttgagaccct ttgaggcagt tggagaactg
aatccctcaa acacggattc ttcacattct aatcctcctg agtcaaatcc tgatcctgtc cactcagagt tctgaagggg
gccagatgtt gggtgcagat gtagaagcag ccagtcacag acccattcta tgcaatggac atttatttga aaaaaattct
caaaagtttt tttttttttt ttgggggggc ggggttctaa agctgttttt aactccgaga ttacaactta gaggaaccaa
ggaaataaag caaataagat ttaacaaccc aagattaaga ggccaggaag aggttagacg caatgtgaaa ctgtcctcct
aggataaggt ttaaagtggc tttttggggg ctgggtgccg tggctcacgc ctgtaatccc agcattttgg gaggctgagg
tgggcagatc acttgaggcc aggagttcga gaccagcctg gccaacatgg caaaacccct tctctactaa aaatacaaaa
attagccaga cgtggtggtg ggtgcctgta atccaactac ccaggaggct gaggcatgag aatcgcttgg gcccaggagg
tggaggttgc agtgagccga gatcgagcca ctgcactcct gggcaacaga gcaagacttc gtctcaaaat aaataaataa
agtggctctt ggggaaaagc aatttaatgt accacgatga atagctaact gttcccaagt gtttgctatg tgcaacacac
cgcgtgagca gtgttacctg cattattaca ttaggctgag aggtaaaata atttgcccga agacatacag ctagtgacga
atggactgat ggtttgaact taacgtctat ttgacttaag gtcctgcacc ctgccacttg taattttcag aatcactgat
aatctgaaat aatgcagctt aaaacatgtt ttcttaatta aaagtataaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaa
SEQ ID NO.11
人γ-谷氨酰羧化酶蛋白質氨基酸序列
MAVSAGSART SPSSDKVQKD KAELISGPRQ DSRIGKLLGF EWTDLSSWRR
LVTLLNRPTD PASLAVFRFL FGFLMVLDIP QERGLSSLDR KYLDGLDVCR
FPLLDALRPL PLDWMYLVYT IMFLGALGMM LGLCYRISCV LFLLPYWYVF
LLDKTSWNNH SYLYGLLAFQ LTFMDANHYW SVDGLLNAHR RNAHVPLWNT
AVLRGQIFIV YFIAGVKKLD ADWVEGYSME YLSRHWLFSP FKLLLSEELT
SLLVVHWGGL LLDLSAGFLL FFDVSRSIGL FFVSYFHCMN SQLFSIGMFS
YVMLASSPLF CSPEWPRKLV SYCPRRLQQL LPLKAAPQPS VSCVYKRSRG
KSGQKPGLRH QLGAAFTLLY LLEQLFLPYS HFLTQGYNNW TNGLYGYSWD
MMVHSRSHQH VKITYRDGRT GELGYLNPGV FTQSRRWKDH ADMLKQYATQ
LSRLLPKYNV TEPQIYFDIW VSINDRFQQR IFDPRVDIVQ AAWSPFQRTS
WVQPLLMDLS PWRAKLQEIK SSLDNHTEVV FIADFPGLHL ENFVSEDLGN
TSIQLLQGEV TVELVAEQKN QTLREGEKMQ LPAGEYHKVY TTSPSPSCYM
YVYVNTTELA LEQDLAYLQE LKEKVENGSE TGPLPPELQP LLEGEVKGGP
EPTPLVQTFL RRQQRLQEIE RRRNTPFHER FFRFLLRKLY VFRRSFLMTC
ISLRNLILGR PSLEQLAQEV TYANLRPFEA VGELNPSNTD SSHSNPPESN
PDPVHSEF
SEQ ID NO.12
小鼠γ-谷氨酰羧化酶cDNA
agacagcaag tctaagtctg gaggttccac tgggtccgac ctggctgcag agaggctcac ctgtccctgc agtcatggct
gtgcaccgcg gctccgcact ggttgctccc gcctcagata aagtacagaa aaacaagtct gcacagacat caggactgaa
acagggcagc cgaatggaga aaattttagg gtttgaatgg acagatttat ctagctggca gagtgtcgtg accctgctta
acaaaccaac ggaccctgca aacctggctg tctttcgttt tctctttgct ttcttgatgc tgctggacat tccccaggaa
cgcggcctta gctccctgga ccgaaaatac ttggatgggc tggatgtgtg ccgtttcccc ttgctggatg ccttgcgccc
actgccactg gactggatgt atcttgtcta caccatcatg tttctggggg cactgggcat gatgctgggg ctatgctacc
ggctaagctg tgtgttattc ctgctaccgt actggtacgt gtttctcctg gacaagactt cgtggaacaa tcactcctat
ctgtatggtt tgttggcctt tcagttgaca ttcatggatg caaaccacta ctggtctgtg gatggcttgc tgaatgcccg
aaagaagaat gctcacgtgc ccctttggaa ctacacagtt ctgcgtggcc agatcttcat cgtgtacttc atcgcgggtg
tgaagaagct cgatgctgac tgggttgggg gctactccat ggagcacctg tcccggcact ggctcttcag tcccttcaag
ctggtgttgt cggaggagct gacaagcctg ctggtagtac actggtgtgg gcttctcctt gacctctcgg ctggcttcct
gctcttcttt gatgcctcca gacccgtcgg cctgttcttc gtgtcctact ttcactgcat gaactcgcag ctcttcagca
tcgggatgtt tccctatgtc atgctggcca gcagccctct cttctgctca gctgaatggc ctcggaagtt ggtagcccga
tgcccgaaaa ggctgcaaga gctgctgccc accaaagccg ctcctcggcc tagtgcttcc tgtgtgtata agaggtcccg
gggcaaagct ggcccgaagc ccgggctgcg ccaccagctg ggagccatct tcaccctgct ctacctccta gagcagctct
tcctgcccta ttcccacttc ctgacccagg gttacaataa ctggacaaat gggctgtatg gctattcctg ggacatgatg
gtgcactccc gctcccacca gcacgtaaag atcacctacc gcgacggcct cacgggcgag ctaggctacc ttaaccctgg
ggtattcaca cagagccggc gatggaagga tcatgcagac atgctgaagc aatatgccac ttgcctgagc ctcctgcttc
ccaagtacaa tgtcactgag ccccagatct actttgatat ttgggtctcc atcaatgacc gcttccagca gaggcttttt
gaccctcgtg tggacatcgt gcaggctgtc tggtccccct tccagcgcac accttgggtg cagccactct tgatggattt
atctccctgg aggaccaagt tacaggatat taagagcagt ctggacaacc acaccgaggt ggtcttcatt gcagatttcc
ctgggcttca cttggagaat tttgtgagtg aagacctggg caacactagc atccagctgc tgcagggaga agtcaccgtg
gaattggtgg cagaacagaa aaatcagact cttcaagaag gagagaaaat gcagttgcct gctggagagt accataaagt
ctatactgta tcatctagtc cttcctgcta catgtacgtc tatgtcaaca ctacagaggt cgcactggag caagacctgg
catatctgca agaattaaag gagaaggtgg agaacggaag tgaaacaggg cccctgcctc cagaacttca gcctcttttg
gaaggggaag taaaaggggg ccctgagcca acacctctgg tccaaacttt tctcagacga cagaggaagc tccaagaaat
tgaacgcagg cgaaatagcc ctttccatga gcgatttctc cgcttcgtgc tgcgaaagct ctacgtcttt cgacgcagct
tcctgatgac tcgaatttca ctccgaaacc tgctattagg ccgcccttcc ctagagcaac tagcccaaga ggtgacatat
gcaaacttgc gaccatttga accagttgat gagtcaagtg cttcaaacac agattcttca aatcacccgt cagagccaga
ttctgagcat gttcactctg agttctgagg gatgtacaga tgctctgtgc agatgtgggg gcagcctgtt ataggcttat
tgtctacgca aagaacatat ttttggagaa aaatgatatg ggacaggctt tcacagtaca gcccaggctg gcctcaaact
catggttggt ccctctgctt cagcctgttt tgtaattaca tagtatcacc aaacctagtt gcttttccct ttacattttt tccccttata
agttctttaa aattatagct tacatttttt cttttttctt tttttttttt ttgtattttt tctttgtcaa gacaggtctc tctctgtgta
gcactggctg tcctggaact cactctgtag tccaggctgg cctccaactc agaaattctc ctgcctctgc ctcccaagtg
ctgggattaa aggtgtgtgc caccacgccc cactgggctt ttagttttta tagacaagat ttctccatgt agaccagacc
agctctcctg agtgctgaaa ttaaaggcac gggacatcac tacctggctt tcttattaaa cttgttttag tggtctcaac aaaaa
SEQ ID NO.13
小鼠γ-谷氨酰羧化酶蛋白質氨基酸序列
MAVHRGSALV APASDKVQKN KSAQTSGLKQ GSRMEKILGF EWTDLSSWQS
VVTLLNKPTD PANLAVFRFL FAFLMLLDIP QERGLSSLDR KYLDGLDVCR
FPLLDALRPL PLDWMYLVYT IMFLGALGMM LGLCYRLSCV LFLLPYWYVF
LLDKTSWNNH SYLYGLLAFQ LTFMDANHYW SVDGLLNARK KNAHVPLWNY
TVLRGQIFIV YFIAGVKKLD ADWVGGYSME HLSRHWLFSP FKLVLSEELT
SLLVVHWCGL LLDLSAGFLL FFDASRPVGL FFVSYFHCMN SQLFSIGMFP
YVMLASSPLF CSAEWPRKLV ARCPKRLQEL LPTKAAPRPS ASCVYKRSRG
KAGPKPGLRH QLGAIFTLLY LLEQLFLPYS HFLTQGYNNW TNGLYGYSWD
MMVHSRSHQH VKITYRDGLT GELGYLNPGV FTQSRRWKDH ADMLKQYATC
LSLLLPKYNV TEPQIYFDIW VSINDRFQQR LFDPRVDIVQ AVWSPFQRTP
WVQPLLMDLS PWRTKLQDIK SSLDNHTEVV FIADFPGLHL ENFVSEDLGN
TSIQLLQGEV TVELVAEQKN QTLQEGEKMQ LPAGEYHKVY TVSSSPSCYM
YVYVNTTEVA LEQDLAYLQE LKEKVENGSE TGPLPPELQP LLEGEVKGGP
EPTPLVQTFL RRQRKLQEIE RRRNSPFHER FLRFVLRKLY VFRRSFLMTR
ISLRNLLLGR PSLEQLAQEV TYANLRPFEP VDESSASNTD SSNHPSEPDS EHVHSEF
SEQ ID NO.14
人ApoE cDNA
gggatccttg agtcctactc agccccagcg gaggtgaagg acgtccttcc ccaggagccg actggccaat cacaggcagg
aagatgaagg ttctgtgggc tgcgttgctg gtcacattcc tggcaggatg ccaggccaag gtggagcaag cggtggagac
agagccggag cccgagctgc gccagcagac cgagtggcag agcggccagc gctgggaact ggcactgggt cgcttttggg
attacctgcg ctgggtgcag acactgtctg agcaggtgca ggaggagctg ctcagctccc aggtcaccca ggaactgagg
gcgctgatgg acgagaccat gaaggagttg aaggcctaca aatcggaact ggaggaacaa ctgaccccgg tggcggagga
gacgcgggca cggctgtcca aggagctgca ggcggcgcag gcccggctgg gcgcggacat ggaggacgtg
tgcggccgcc tggtgcagta ccgcggcgag gtgcaggcca tgctcggcca gagcaccgag gagctgcggg tgcgcctcgc
ctcccacctg cgcaagctgc gtaagcggct cctccgcgat gccgatgacc tgcagaagcg cctggcagtg taccaggccg
gggcccgcga gggcgccgag cgcggcctca gcgccatccg cgagcgcctg gggcccctgg tggaacaggg
ccgcgtgcgg gccgccactg tgggctccct ggccggccag ccgctacagg agcgggccca ggcctggggc
gagcggctgc gcgcgcggat ggaggagatg ggcagccgga cccgcgaccg cctggacgag gtgaaggagc
aggtggcgga ggtgcgcgcc aagctggagg agcaggccca gcagatacgc ctgcaggccg aggccttcca
ggcccgcctc aagagctggt tcgagcccct ggtggaagac atgcagcgcc agtgggccgg gctggtggag aaggtgcagg
ctgccgtggg caccagcgcc gcccctgtgc ccagcgacaa tcactgaacg ccgaagcctg cagccatgcg accccacgcc
accccgtgcc tcctgcctcc gcgcagcctg cagcgggaga ccctgtcccc gccccagccg tcctcctggg gtggacccta
gtttaataaa gattcaccaa gtttcacgca aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaa
SEQ ID NO.15
人ApoE蛋白質氨基酸序列
MKVLWAALLV TFLAGCQAKV EQAVETEPEP ELRQQTEWQS GQRWELALGR
FWDYLRWVQT LSEQVQEELL SSQVTQELRA LMDETMKELK AYKSELEEQL
TPVAEETRAR LSKELQAAQA RLGADMEDVC GRLVQYRGEV QAMLGQSTEE
LRVRLASHLR KLRKRLLRDA DDLQKRLAVY QAGAREGAER GLSAIRERLG
PLVEQGRVRA ATVGSLAGQP LQERAQAWGE RLRARMEEMG SRTRDRLDEV
KEQVAEVRAK LEEQAQQIRL QAEAFQARLK SWFEPLVEDM QRQWAGLVEK
VQAAVGTSAA PVPSDNH
SEQ ID NO.16
小鼠ApoE cDNA
ggacttgttt cggaaggagc tgactggcca atcacaattg cgaagatgaa ggctctgtgg gccgtgctgt tggtcacatt
gctgacagga tgcctagccg agggagagcc ggaggtgaca gatcagctcg agtggcaaag caaccaaccc tgggagcagg
ccctgaaccg cttctgggat tacctgcgct gggtgcagac gctgtctgac caggtccagg aagagctgca gagctcccaa
gtcacacaag aactgacggc actgatggag gacactatga cggaagtaaa ggcttacaaa aaggagctgg aggaacagct
gggtccagtg gcggaggaga cacgggccag gctgggcaaa gaggtgcagg cggcacaggc ccgactcgga
gccgacatgg aggatctacg caaccgactc gggcagtacc gcaacgaggt gcacaccatg ctgggccaga gcacagagga
gatacgggcg cggctctcca cacacctgcg caagatgcgc aagcgcttga tgcgggatgc cgatgatctg cagaagcgcc
tagctgtgta caaggcaggg gcacgcgagg gcgccgagcg cggtgtgagt gccatccgtg agcgcctggg gcctctggtg
gagcaaggtc gccagcgcac tgccaaccta ggcgctgggg ccgcccagcc tctgcgcgat cgcgcccagg cttttggtga
ccgcatccga aggaagtggg caaccaggcc cgtgaccgcc tagaggaggt gcgtgagcac atggaggagg tgcgctccaa
gatggaggaa cagacccagc aaatacgcct gcaggcggag atcttccagg cccgcctcaa gggctggttc gagccaatag
tggaagacat gcatcgccag tgggcaaacc tgatggagaa gatacaggcc tctgtggcta ccaaccccat catcacccca
gtggcccagg agaatcaatg agtatccttc tcctgtcctg caacaacatc catatccagc caggtggccc tgtctcaagc
acctctctgg ccctctggtg gcccttgctt aataaagatt ctccgagcaa aaaaaaaaaa aaaa
SEQ ID NO.17
小鼠ApoE蛋白質氨基酸序列
MKALWAVLLV TLLTGCLAEG EPEVTDQLEW QSNQPWEQAL NRFWDYLRWV
QTLSDQVQEE LQSSQVTQEL TALMEDTMTE VKAYKKELEE QLGPVAEETR
ARLGKEVQAA QARLGADMED LRNRLGQYRN EVHTMLGQST EEIRARLSTH
LRKMRKRLMR DADDLQKRLA VYKAGAREGA ERGVSAIRER LGPLVEQGRQ
RTANLGAGAA QPLRDRAQAF GDRIRGRLEE VGNQARDRLE EVREHMEEVR
SKMEEQTQQI RLQAEIFQAR LKGWFEPIVE DMHRQWANLM EKIQASVATN
PIITPVAQEN Q
SEQ ID NO.18
小鼠Esp(OST-PTP，Ptprv)cDNA
ggctgtggga gagcagaaga ggagctggaa gagcagccta caacagctgt cgggagggac cagggctagt tcacacttgg
aagctgggat gccaggaccg gccctcctgc ctctctcggt ctccatcggc ctcctggtca gctcactcca cactgagacg
attctgaagt aagatgctcc tggctcctca cagactctgc tacaagagac agagtgaagt gtccccaggg ctcagagcct
ttgactctgc tccttccctt cccacggctg agttggcaca ggagcacctg ggtgagctgc accagactta agaagatgag
gcccctgatt ctgttagctg ccctcctctg gctccaggac tctttggccc aggaagatgt atgctcatcc ttggatggga
gcccagacag gcagggtgga ggtccacctc tgagtgtgaa cgtcagcagc cgcggaaagc ctaccagcct gtttctgagc
tgggtagctg cagagccagg tggatttgac tatgccctct gcctcagggc tatgaacttg tcgggttttc cagaagggca
acagctccaa gctcatacca acgagtccag ctttgagttc catggcctgg tgccagggag tcgctaccag ctggaactga
ctgtcctaag accctgttgg cagaatgtca caattaccct cactgctcga actgccccta cagtggtccg tggactgcaa
ctgcatagca ctgggagccc agccagcctg gaagcctcat ggagcgatgc ctctggggat caagacagct atcaacttct
cctctaccac ccggaatccc acactctggc atgtaatgtc tctgtgtccc ctgacaccct gtcttacaat tttggtgacc
tcttgccagg tagtcagtat gtcttggagg ttatcacctg ggctggcagt ctccatgcga agactagcat cctccaatgg
acagagcctg tccctcctga tcacctaaca ctgcgtgcct tgggtaccag tagcctgcaa gccttctgga acagctctga
aggggccacc tggtttcacc tgatacttac agacctccta gagggtacca acctgaccaa agtggtcaga caaggcatct
caacccacac cttccttcgc ctgtctccgg gtacacctta ccagctgaag atctgtgctg ctgctgggcc ccaccagatt
tggggaccca atgccactga gtggacctat ccctcttacc catctgacct ggtgctgacc cccttatgga atgagctctg
ggcaagctgg aaggcagggc agggagcccg ggatggctat gtactgaagt taagtgggcc agtggagaat acaactactc
tgggtcctga ggagtgcaac gctgtcttcc cagggcccct gcctccagga cactacactt tggggctgag ggttctagct
ggaccttatg atgcctgggt agagggcagt atctggctgg ctgaatctgc tgctcgtccc atggaggtcc ctggtgccag
actgtggcta gaaggactgg aagctactaa gcaacctggg agacgggcgc tgctctattc tgttgatgcc ccaggcctcc
tagggaacat ctctgtgtct tctggtgcca ctcatgtcac cttctgtggc ttggtacccg gagcgcacta cagggtggac
attgcctcat ccatgggaga catcactcag agcctcacag gctacacaag tcccctgcca ccacagtctc tggagatcat
cagccggaac agcccatctg acctgactat cggttgggct ccagcaccag ggcagatgga aggttataag gtcacctggc
atcaggatgg cagccagagg tcacctggcg accttgttga cttgggccct gacatttcga gcctgactct gaaatctctg
gtacctggtt cctgctacac cgtgtcagca tgggcctggt ctgggaacct cagctctgac tctcagaaga ttcacagttg
cacccgtccc gctcctccca ccaacctgag cctgggcttt gcccaccagc ctgcaacact gagggcttcc tggtgtcacc
caccgggtgg cagggatgcc tttcagttac ggctttacag gctgaggccc ctgacactgg aaagtgagaa gatcctatcc
caggaggccc agaacttctc ctgggcccag ctgcctgcag gctatgaatt ccaggtacag ctgtctacct tgtgggggtc
ggaggagagc ggcagtgcca acaccacagg ctggacaccc ccctcagctc ctacattggt aaatgtgacc agtgaagccc
ccacccagct ccacgtatcc tgggtccacg ctgctgggga ccggagcagc taccaagtga ccctatacca ggagagcact
cggacagcca ccagcattgt ggggcccaag gcagacagca caagcttttg gggtttgact cctggcacta agtacaaggt
ggaagccatc tcctgggctg ggccccttta cactgcagca gccaacgttt ctgcttggac ctacccactc acacccaatg
agctgctcgc ctctatgcag gcaggcagtg ctgtggttaa cctggcctgg cccagtggtc ccttggggca agggacatgc
catgcccaac tctcagatgc tggacacctt tcatgggagc aaccgctgtc gctaggccaa gacctcctca tgctaaggaa
tcttatacca ggacatacgg tttcattgtc tgtgaagtgt cgggcaggac cactccaggc ctccactcac cccctggtgc
tgtctgtaga gcctggccct gtggaagatg tgttctgtca acctgaggcc acctacctgt ccctgaactg gacgatgcct
actggagatg tggctgtctg tctggtggag gtagagcagc tggtgccagg agggagcgct cattttgtct tccaggtcaa
cacctcggag gatgcacttc tgctgcccaa cttgacgccc accacttctt accgccttag cctcactgtg ctgggtggga
atcgccagtg gagccgggcg gttaccctgg tgtgcactac ttctgctgag gtttggcacc ccccagagct agctgaggcc
ccccaggtgg agctggggac agggatgggt gtgacagtca cacgtggcat gtttggtaaa gatgacgggc agatccagtg
gtatggcata attgccacca tcaacatgac actggcccag ccttcccagg aagccatcaa ccacacatgg tatgaccact
actatagagg acatgactcc tacctggctc tcctgttccc aaaccccttc tacccagagc cttgggctgt gccaagatcc
tggacagtac ctgtgggtac agaggactgt gacaacaccc aggagatatg caatgggcat ctcaagccag gcttccagta
taggttcagc attgcagcct ttagtaggct cagctctcca gagaccatcc tggccttctc cgccttctca gagcctcagg
ctagcatctc tctggtggcc atgcccctga cagttatgat ggggactgtg gtgggctgca tcatcattgt gtgtgcagtg
ctatgcttgt tgtgccggcg gcgcctgaag ggaccaaggt cagagaagaa tggcttttcc caggagttga tgccttacaa
cctgtggcgg acccatcggc ccatccccag ccatagcttc cggcagagct atgaggccaa gagtgcacgt gcacaccagg
ccttcttcca ggaatttgag gagctgaagg aggtgggcaa ggaccagccc agactagagg ctgagcatcc tgccaacatc
accaagaacc ggtacccaca cgtgctacct tatgaccact ccagggtcag gctgacccag ctatcaggag agcctcattc
tgactacatc aatgccaact tcatcccagg ctatagccac ccacaggaga tcattgccac ccaggggcct ctcaaaaaga
cggtcgagga cttctggcgg ttggtgtggg agcagcaagt ccacgtgatc atcatgctaa ctgtgggcat ggagaatggg
cgggtactgt gtgagcacta ctggccagtc aactccacgc ctgtcaccca cggtcacatc accacccacc tcctggcaga
ggaatctgag gacgagtgga ccaggaggga attccagctg cagcacggtg cagagcaaaa acagaggcgc gtgaagcagc
tgcagttcac gacctggcca gaccacagtg tccccgaggc tcccagctct ctgctcgctt ttgtggaact ggtgcaggag
gaggtgaagg caactcaggg caaggggccc atcctggtgc attgcagtgc gggtgtgggc aggacaggca cctttgtggc
tctcttaccg gctgttcgac aactagagga agaacaggtg gtcgatgtgt tcaacactgt gtacatactc cggctgcacc
ggcccctcat gatccagacc ttgagtcaat acatcttcct gcacagctgc ctgctgaaca agattctgga agggccctct
gacgcctcag actccggccc catccctgtg atgaattttg cacaagcttg tgccaagagg gcagccaatg ccaatgccgg
tttcttgaag gagtacaggc tcctgaagca ggccatcaag gatgagactg gctctctgct gccctctcct gactataatc
agaacagcat cgcctcctgt catcattctc aggagcagtt ggccctggtg gaggagagcc ctgctgataa catgctggca
gcctcgctct tccctggtgg gccgtctggt cgcgaccatg tggtgctgac tggctcggcc ggaccaaagg aactctggga
aatggtgtgg gaacatggcg cctatgtgct tgtctccctg ggtctgcctg ataccaagga gaagccacaa gacatctggc
caatggagat gcagcctatt gtcacagaca tggtgacagt gcacagagtg gctgagagca acacagctgg ctggcccagt
accctcatca gagttataca tggggacagt gggacggaaa ggcaggttca atgcctgcag tttccacact gcgagactgg
gagtgagctc ccagctaaca ccctactgac cttccttgat gctgtgggcc agtgctgctc ccggggcaat agcaagaagc
cagggaccct gctcagtcac tccagcaagg tcacaaacca gctgagcacc ttcttggcta tggaacagct gctacagcaa
gcagggaccg agcgcacagt ggatgtcttc agtgtggccc tgaagcagac acaggcctgt ggccttaaga ccccaacgct
ggagcagtat atctacctct acaactgtct gaacagcgca ttgaggaaca ggctgccccg agctaggaag tgaccttgcc
ctgctaggca tcacgttcca gcaatccacc caggcctggc ttccccagga gaacagatct attcggcctc acgctgtcaa
agggcagagt ctgggaataa agggtaaatc tcgag
SEQ ID NO.19
小鼠Esp(OST-PTP，Ptprv)蛋白質氨基酸序列
MRPLILLAAL LWLQDSLAQE DVCSSLDGSP DROGGGPPLS VNVSSRGKPT
SLFLSWVAAE PGGFDYALCL RAMNLSGFPE GOOLOAHTNE SSFEFHGLVP
GSRYOLELTV LRPCWQNVTI TLTARTAPTV VRGLOLHSTG SPASLEASWS
DASGDQDSYQ LLLYHPESHT LACNVSVSPD TLSYNFGDLL PGSOYVLEVI
TWAGSLHAKT SILOWTEPVP PDHLTLRALG TSSLOAFWNS SEGATWFHLI
LTDLLEGTNL TKVVRQGIST HTFLRLSPGT PYOLKICAAA GPHQIWGPNA
TEWTYPSYPS DLVLTPLWNE LWASWKAGOG ARDGYVLKLS GPVENTTTLG
PEECNAVFPG PLPPGHYTLG LRVLAGPYDA WVEGSIWLAE SAARPMEVPG
ARLWLEGLEA TKOPGRRALL YSVDAPGLLG NISVSSGATH VTFCGLVPGA
HYRVDIASSM GDITQSLTGY TSPLPPOSLE IISRNSPSDL TIGWAPAPGO
MEGYKVTWHQ DGSQRSPGDL VDLGPDISSL TLKSLVPGSC YTVSAWAWSG
NLSSDSOKIH SCTRPAPPTN LSLGFAHOPA TLRASWCHPP GGRDAFOLRL
YRLRPLTLES EKILSOEAQN FSWAOLPAGY EFOVOLSTLW GSEESGSANT
TGWTPPSAPT LVNVTSEAPT QLHVSWVHAA GDRSSYOVTL YOESTRTATS
IVGPKADSTS FWGLTPGTKY KVEAISWAGP LYTAAANVSA WTYPLTPNEL
LASMOAGSAV VNLAWPSGPL GOGTCHAQLS DAGHLSWEOP LSLGODLLML
RNLIPGHTVS LSVKCRAGPL QASTHPLVLS VEPGPVEDVF COPEATYLSL
NWTMPTGDVA VCLVEVEQLV PGGSAHFVFO VNTSEDALLL PNLTPTTSYR
LSLTVLGGNR QWSRAVTLVC TTSAEVWHPP ELAEAPOVEL GTGMGVTVTR
GMFGKDDGQI QWYGIIATIN MTLAOPSQEA INHTWYDHYY RGHDSYLALL
FPNPFYPEPW AVPRSWTVPV GTEDCDNTOE ICNGHLKPGF OYRFSIAAFS
RLSSPETILA FSAFSEPOAS ISLVAMPLTV MMGTVVGCII IVCAVLCLLC
RRRLKGPRSE KNGFSOELMP YNLWRTHRPI PSHSFROSYE AKSARAHOAF
FQEFEELKEV GKDOPRLEAE HPANITKNRY PHVLPYDHSR VRLTOLSGEP
HSDYINANFI PGYSHPOEII ATQGPLKKTV EDFWRLVWEQ QVHVIIMLTV
GMENGRVLCE HYWPVNSTPV THGHITTHLL AEESEDEWTR REFOLOHGAE
QKQRRVKQLQ FTTWPDHSVP EAPSSLLAFV ELVOEEVKAT OGKGPILVHC
SAGVGRTGTF VALLPAVRQL EEEOVVDVFN TVYILRLHRP LMIQTLSOYI
FLHSCLLNKI LEGPSDASDS GPIPVMNFAO ACAKRAANAN AGFLKEYRLL
KQAIKDETGS LLPSPDYNQN SIASCHHSOE QLALVEESPA DNMLAASLFP
GGPSGRDHVV LTGSAGPKEL WEMVWEHGAY VLVSLGLPDT KEKPODIWPM
EMQPIVTDMV TVHRVAESNT AGWPSTLIRV IHGDSGTERO VOCLOFPHCE
TGSELPANTL LTFLDAVGQC CSRGNSKKPG TLLSHSSKVT NOLSTFLAME
QLLQOAGTER TVDVFSVALK OTQACGLKTP TLEOYIYLYN CLNSALRNRL PRARK
SEQ ID NO.20
大腸桿菌β-半乳糖苷酶cDNA
accatgatta cggattcact ggccgtcgtt ttacaacgtc gtgactggga aaaccctggc gttacccaac ttaatcgcct
tgcagcacat ccccctttcg ccagctggcg taatagcgaa gaggcccgca ccgatcgccc ttcccaacag ttgcgcagcc
tgaatggcga atggcgcttt gcctggtttc cggcaccaga agcggtgccg gaaagctggc tggagtgcga tcttcctgag
gccgatactg tcgtcgtccc ctcaaactgg cagatgcacg gttacgatgc gcccatctac accaacgtaa cctatcccat
tacggtcaat ccgccgtttg ttcccacgga gaatccgacg ggttgttact cgctcacatt taatgttgat gaaagctggc
tacaggaagg ccagacgcga attatttttg atggcgttaa ctcggcgttt catctgtggt gcaacgggcg ctgggtcggt
tacggccagg acagtcgttt gccgtctgaa tttgacctga gcgcattttt acgcgccgga gaaaaccgcc tcgcggtgat
ggtgctgcgt tggagtgacg gcagttatct ggaagatcag gatatgtggc ggatgagcgg cattttccgt gacgtctcgt
tgctgcataa accgactaca caaatcagcg atttccatgt tgccactcgc tttaatgatg atttcagccg cgctgtactg
gaggctgaag ttcagatgtg cggcgagttg cgtgactacc tacgggtaac agtttcttta tggcagggtg aaacgcaggt
cgccagcggc accgcgcctt tcggcggtga aattatcgat gagcgtggtg gttatgccga tcgcgtcaca ctacgtctga
acgtcgaaaa cccgaaactg tggagcgccg aaatcccgaa tctctatcgt gcggtggttg aactgcacac cgccgacggc
acgctgattg aagcagaagc ctgcgatgtc ggtttccgcg aggtgcggat tgaaaatggt ctgctgctgc tgaacggcaa
gccgttgctg attcgaggcg ttaaccgtca cgagcatcat cctctgcatg gtcaggtcat ggatgagcag acgatggtgc
aggatatcct gctgatgaag cagaacaact ttaacgccgt gcgctgttcg cattatccga accatccgct gtggtacacg
ctgtgcgacc gctacggcct gtatgtggtg gatgaagcca atattgaaac ccacggcatg gtgccaatga atcgtctgac
cgatgatccg cgctggctac cggcgatgag cgaacgcgta acgcgaatgg tgcagcgcga tcgtaatcac ccgagtgtga
tcatctggtc gctggggaat gaatcaggcc acggcgctaa tcacgacgcg ctgtatcgct ggatcaaatc tgtcgatcct
tcccgcccgg tgcagtatga aggcggcgga gccgacacca cggccaccga tattatttgc ccgatgtacg cgcgcgtgga
tgaagaccag cccttcccgg ctgtgccgaa atggtccatc aaaaaatggc tttcgctacc tggagagacg cgcccgctga
tcctttgcga atacgcccac gcgatgggta acagtcttgg cggtttcgct aaatactggc aggcgtttcg tcagtatccc
cgtttacagg gcggcttcgt ctgggactgg gtggatcagt cgctgattaa atatgatgaa aacggcaacc cgtggtcggc
ttacggcggt gattttggcg atacgccgaa cgatcgccag ttctgtatga acggtctggt ctttgccgac cgcacgccgc
atccagcgct gacggaagca aaacaccagc agcagttttt ccagttccgt ttatccgggc aaaccatcga agtgaccagc
gaatacctgt tccgtcatag cgataacgag ctcctgcact ggatggtggc gctggatggt aagccgctgg caagcggtga
agtgcctctg gatgtcgctc cacaaggtaa acagttgatt gaactgcctg aactaccgca gccggagagc gccgggcaac
tctggctcac agtacgcgta gtgcaaccga acgcgaccgc atggtcagaa gccgggcaca tcagcgcctg gcagcagtgg
cgtctggcgg aaaacctcag tgtgacgctc cccgccgcgt cccacgccat cccgcatctg accaccagcg aaatggattt
ttgcatcgag ctgggtaata agcgttggca atttaaccgc cagtcaggct ttctttcaca gatgtggatt ggcgataaaa
aacaactgct gacgccgctg cgcgatcagt tcacccgtgc accgctggat aacgacattg gcgtaagtga agcgacccgc
attgacccta acgcctgggt cgaacgctgg aaggcggcgg gccattacca ggccgaagca gcgttgttgc agtgcacggc
agatacactt gctgatgcgg tgctgattac gaccgctcac gcgtggcagc atcaggggaa aaccttattt atcagccgga
aaacctaccg gattgatggt agtggtcaaa tggcgattac cgttgatgtt gaagtggcga gcgatacacc gcatccggcg
cggattggcc tgaactgcca gctggcgcag gtagcagagc gggtaaactg gctcggatta gggccgcaag aaaactatcc
cgaccgcctt actgccgcct gttttgaccg ctgggatctg ccattgtcag acatgtatac cccgtacgtc ttcccgagcg
aaaacggtct gcgctgcggg acgcgcgaat tgaattatgg cccacaccag tggcgcggcg acttccagtt caacatcagc
cgctacagtc aacagcaact gatggaaacc agccatcgcc atctgctgca cgcggaagaa ggcacatggc tgaatatcga
cggtttccat atggggattg gtggcgacga ctcctggagc ccgtcagtat cggcggaatt ccagctgagc gccggtcgct
accattacca gttggtctgg tgtcaaaaat aataataa
SEQ ID NO.21
大腸桿菌β-半乳糖苷酶蛋白質氨基酸序列
TMITDSLAVV LQRRDWENPG VTQLNRLAAH PPFASWRNSE EARTDRPSQQ
LRSLNGEWRF AWFPAPEAVP ESWLECDLPE ADTVVVPSNW QMHGYDAPIY
TNVTYPITVN PPFVPTENPT GCYSLTFNVD ESWLQEGQTR IIFDGVNSAF
HLWCNGRWVG YGQDSRLPSE FDLSAFLRAG ENRLAVMVLR WSDGSYLEDQ
DMWRMSGIFR DVSLLHKPTT QISDFHVATR FNDDFSRAVL EAEVQMCGEL
RDYLRVTVSL WQGETQVASG TAPFGGEIID ERGGYADRVT LRLNVENPKL
WSAEIPNLYR AVVELHTADG TLIEAEACDV GFREVRIENG LLLLNGKPLL
IRGVNRHEHH PLHGQVMDEQ TMVQDILLMK QNNFNAVRCS HYPNHPLWYT
LCDRYGLYVV DEANIETHGM VPMNRLTDDP RWLPAMSERV TRMVQRDRNH
PSVIIWSLGN ESGHGANHDA LYRWIKSVDP SRPVQYEGGG ADTTATDIIC
PMYARVDEDQ PFPAVPKWSI KKWLSLPGET RPLILCEYAH AMGNSLGGFA
KYWQAFRQYP RLQGGFVWDW VDQSLIKYDE NGNPWSAYGG DFGDTPNDRQ
FCMNGLVFAD RTPHPALTEA KHQQQFFQFR LSGQTIEVTS EYLFRHSDNE
LLHWMVALDG KPLASGEVPL DVAPQGKQLI ELPELPQPES AGQLWLTVRV
VQPNATAWSE AGHISAWQQW RLAENLSVTL PAASHAIPHL TTSEMDFCIE
LGNKRWQFNR QSGFLSQMWI GDKKQLLTPL RDQFTRAPLD NDIGVSEATR
IDPNAWVERW KAAGHYQAEA ALLQCTADTL ADAVLITTAH AWQHQGKTLF
ISRKTYRIDG SGQMAITVDV EVASDTPHPA RIGLNCQLAQ VAERVNWLGL
GPQENYPDRL TAACFDRWDL PLSDMYTPYV FPSENGLRCG TRELNYGPHQ
WRGDFQFNIS RYSQQQLMET SHRHLLHAEE GTWLNIDGFH MGIGGDDSWS
PSVSAEFQLS AGRYHYQLVW CQK
SEQ ID NO.22
成熟人骨鈣蛋白氨基酸序列
YLYQWLGAPV PYPDPLEPRR EVCELNPDCD ELADHIGFQE AYRRFYGPV
SEQ ID NO.23
人骨鈣蛋白變體氨基酸序列
YLYQWLGAPV PYPDPLX1PRR X2VCX3LNPDCD ELADHIGFQE AYRRFYGPV
序列表
<110>The Trustees of Columbia University In The City of New York
Karsenty，Gerard
Ducy，Patricia
<120>羧化不足的骨鈣蛋白提高β-細胞增殖、胰島素分泌、胰島素敏感性、葡萄糖耐量并減少脂肪量
<130>13533/50576-1
<140>未轉讓
<141>2007-09-13
<150>60/844,203
<151>2006-09-13
<150>60/870,604
<151>2006-12-18
<150>60/909,712
<151>2007-04-02
<150>60/945,081
<151>2007-06-19
<160>25
<170>PatentIn version 3.3
<210>1
<211>498
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(19)..(318)
<400>1
cgcagccacc gagacacc atg aga gcc ctc aca ctc ctc gcc cta ttg gcc51
Met Arg Ala Leu Thr Leu Leu Ala Leu Leu Ala
1 5 10
ctg gcc gca ctt tgc atc gct ggc cag gca ggt gcg aag ccc agc ggt99
Leu Ala Ala Leu Cys Ile Ala Gly Gln Ala Gly Ala Lys Pro Ser Gly
15 20 25
gca gag tcc agc aaa ggt gca gcc ttt gtg tcc aag cag gag ggc agc147
Ala Glu Ser Ser Lys Gly Ala Ala Phe Val Ser Lys Gln Glu Gly Ser
30 35 40
gag gta gtg aag aga ccc agg cgc tac ctg tat caa tgg ctg gga gcc195
Glu Val Val Lys Arg Pro Arg Arg Tyr Leu Tyr Gln Trp Leu Gly Ala
45 50 55
cca gtc ccc tac ccg gat ccc ctg gag ccc agg agg gag gtg tgt gag243
Pro Val Pro Tyr Pro Asp Pro Leu Glu Pro Arg Arg Glu Val Cys Glu
60 65 70 75
ctc aat ccg gac tgt gac gag ttg gct gac cac atc ggc ttt cag gag291
Leu Asn Pro Asp Cys Asp Glu Leu Ala Asp His Ile Gly Phe Gln Glu
80 85 90
gcc tat cgg cgc ttc tac ggc ccg gtc tagggtgtcg ctctgctggc 338
Ala Tyr Arg Arg Phe Tyr Gly Pro Val
95 100
ctggccggca accccagttc tgctcctctc caggcaccct tctttcctct tccccttgcc 398
cttgccctga cctcccagcc ctatggatgt ggggtcccca tcatcccagc tgctcccaaa 458
taaactccag aagaggaatc tgaaaaaaaa aaaaaaaaaa498
<210>2
<211>100
<212>PRT
<213>人
<400>2
Met Arg Ala Leu Thr Leu Leu Ala Leu Leu Ala Leu Ala Ala Leu Cys
1 5 10 15
Ile Ala Gly Gln Ala Gly Ala Lys Pro Ser Gly Ala Glu Ser Ser Lys
20 25 30
Gly Ala Ala Phe Val Ser Lys Gln Glu Gly Ser Glu Val Val Lys Arg
35 40 45
Pro Arg Arg Tyr Leu Tyr Gln Trp Leu Gly Ala Pro Val Pro Tyr Pro
50 55 60
Asp Pro Leu Glu Pro Arg Arg Glu Val Cys Glu Leu Asn Pro Asp Cys
65 70 75 80
Asp Glu Leu Ala Asp His Ile Gly Phe Gln Glu Ala Tyr Arg Arg Phe
85 90 95
Tyr Gly Pro Val
100
<210>3
<211>494
<212>DNA
<213>小鼠
<400>3
agaacagaca agtcccacac agcagcttgg cccagaccta gcagacacca tgaggaccat60
ctttctgctc actctgctga ccctggctgc gctctgtctc tctgacctca cagatgccaa120
gcccagcggc cctgagtctg acaaagcctt catgtccaag caggagggca ataaggtagt180
gaacagactc cggcgctacc ttggagcctc agtccccagc ccagatcccc tggagcccac240
ccgggagcag tgtgagctta accctgcttg tgacgagcta tcagaccagt atggcttgaa300
gaccgcctac aaacgcatct atggtatcac tatttaggac ctgtgctgcc ctaaagccaa360
actctggcag ctcggctttg gctgctctcc gggacttgat cctccctgtc ctctctctct420
gccctgcaag tatggatgtc acagcagctc caaaataaag ttcagatgag gaagtgcaaa480
aaaaaaaaaa aaaa 494
<210>4
<211>470
<212>DNA
<213>小鼠
<220>
<221>CDS
<222>(49)..(333)
<400>4
gaacagacaa gtcccacaca gcagcttggt gcacacctag cagacacc atg agg acc57
Met Arg Thr
1
ctc tct ctg ctc act ctg ctg gcc ctg gct gcg ctc tgt ctc tct gac105
Leu Ser Leu Leu Thr Leu Leu Ala Leu Ala Ala Leu Cys Leu Ser Asp
5 10 15
ctc aca gat ccc aag ccc agc ggc cct gag tct gac aaa gcc ttc atg153
Leu Thr Asp Pro Lys Pro Ser Gly Pro Glu Ser Asp Lys Ala Phe Met
20 25 30 35
tcc aag cag gag ggc aat aag gta gtg aac aga ctc cgg cgc tac ctt201
Ser Lys Gln Glu Gly Asn Lys Val Val Asn Arg Leu Arg Arg Tyr Leu
40 45 50
gga gcc tca gtc ccc agc cca gat ccc ctg gag ccc acc cgg gag cag249
Gly Ala Ser Val Pro Ser Pro Asp Pro Leu Glu Pro Thr Arg Glu Gln
55 60 65
tgt gag ctt aac cct gct tgt gac gag cta tca gac cag tat ggc ttg297
Cys Glu Leu Asn Pro Ala Cys Asp Glu Leu Ser Asp Gln Tyr Gly Leu
70 75 80
aag acc gcc tac aaa cgc atc tac ggt atc act atttaggacctgt 343
Lys Thr Ala Tyr Lys Arg Ile Tyr Gly Ile Thr Ile
85 90 95
gctgccctaa agccaaactctggcagctcg gctttggctg ctctccggga cttgatcctc 403
cctgtcctctctctctgccc tgcaagtatg gatgtcacag cagctccaaa ataaagttca 463
gatgagg470
<210>5
<211>95
<212>PRT
<213>小鼠
<400>5
Met Arg Thr Leu Ser Leu Leu Thr Leu Leu Ala Leu Ala Ala Leu Cys
1 5 10 15
Leu Ser Asp Leu Thr Asp Pro Lys Pro Ser Gly Pro Glu Ser Asp Lys
20 25 30
Ala Phe Met Ser Lys Gln Glu Gly Asn Lys Val Val Asn Arg Leu Arg
35 40 45
Arg Tyr Leu Gly Ala Ser Val Pro Ser Pro Asp Pro Leu Glu Pro Thr
50 55 60
Arg Glu Gln Cys Glu Leu Asn Pro Ala Cys Asp Glu Leu Ser Asp Gln
65 70 75 80
Tyr Gly Leu Lys Thr Ala Tyr Lys Arg Ile Tyr Gly Ile Thr Ile
85 90 95
<210>6
<211>4592
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(85)..(816)
<400>6
aggctgttga ggctgggcca tctcctcctc acttccattc tgactgcagt ctgtggttct60
gattccatac cagaggggct cagg atg ctg ttg ctg gga gct gtt cta ctg 111
Met Leu Leu Leu Gly Ala Val Leu Leu
1 5
cta tta gct ctg ccc ggt cat gac cag gaa acc acg act caa ggg ccc 159
Leu Leu Ala Leu Pro Gly His Asp Gln Glu Thr Thr Thr Gln Gly Pro
10 15 20 25
gga gtc ctg ctt ccc ctg ccc aag ggg gcc tgc aca ggt tgg atg gcg 207
Gly Val Leu Leu Pro Leu Pro Lys Gly Ala Cys Thr Gly Trp Met Ala
30 35 40
ggc atc cca ggg cat ccg ggc cat aat ggg gcc cca ggc cgt gat ggc 255
Gly Ile Pro Gly His Pro Gly His Asn Gly Ala Pro Gly Arg Asp Gly
45 50 55
aga gat ggc acc cct ggt gag aag ggt gag aaa gga gat cca ggt ctt 303
Arg Asp Gly Thr Pro Gly Glu Lys Gly Glu Lys Gly Asp Pro Gly Leu
60 65 70
att ggt cct aag gga gac atc ggt gaa acc gga gta ccc ggg gct gaa351
Ile Gly Pro Lys Gly Asp Ile Gly Glu Thr Gly Val Pro Gly Ala Glu
75 80 85
ggt ccc cga ggc ttt ccg gga atc caa ggc agg aaa gga gaa cct gga399
Gly Pro Arg Gly Phe Pro Gly Ile Gln Gly Arg Lys Gly Glu Pro Gly
90 95 100 105
gaa ggt gcc tat gta tac cgc tca gca ttc agt gtg gga ttg gag act447
Glu Gly Ala Tyr Val Tyr Arg Ser Ala Phe Ser Val Gly Leu Glu Thr
110 115 120
tac gtt act atc ccc aac atg ccc att cgc ttt acc aag atc ttc tac495
Tyr Val Thr Ile Pro Asn Met Pro Ile Arg Phe Thr Lys Ile Phe Tyr
125 130 135
aat cag caa aac cac tat gat ggc tcc act ggt aaa ttc cac tgc aac543
Asn Gln Gln Asn His Tyr Asp Gly Ser Thr Gly Lys Phe His Cys Asn
140 145 150
att cct ggg ctg tac tac ttt gcc tac cac atc aca gtc tat atg aag591
Ile Pro Gly Leu Tyr Tyr Phe Ala Tyr His Ile Thr Val Tyr Met Lys
155 160 165
gat gtg aag gtc agc ctc ttc aag aag gac aag gct atg ctc ttc acc639
Asp Val Lys Val Ser Leu Phe Lys Lys Asp Lys Ala Met Leu Phe Thr
170 175 180 185
tat gat cag tac cag gaa aat aat gtg gac cag gcc tcc ggc tct gtg687
Tyr Asp Gln Tyr Gln Glu Asn Asn Val Asp Gln Ala Ser Gly Ser Val
190 195 200
ctc ctg cat ctg gag gtg ggc gac caa gtc tgg ctc cag gtg tat ggg735
Leu Leu His Leu Glu Val Gly Asp Gln Val Trp Leu Gln Val Tyr Gly
205 210 215
gaa gga gag cgt aat gga ctc tat gct gat aat gac aat gac tcc acc783
Glu Gly Glu Arg Asn Gly Leu Tyr Ala Asp Asn Asp Asn Asp Ser Thr
220 225 230
ttc aca ggc ttt ctt ctc tac cat gac acc aac tgatcaccac taactcagag 836
Phe Thr Gly Phe Leu Leu Tyr His Asp Thr Asn
235 240
cctcctccag gccaaacagc cccaaagtca attaaaggct ttcagtacgg ttaggaagtt896
gattattatt tagttggagg cctttagata ttattcattc atttactcat tcatttattc956
attcattcat caagtaactt taaaaaaatc atatgctatg ttcccagtcc tggggagctt1016
cacaaacatg accagataac tgactagaaa gaagtagttg acagtgctat tttgtgccca1076
ctgtctctcc tgatgctcat atcaatccta taaggcacag ggaacaagca ttctcctgtt1136
tttacagatt gtatcctgag gctgagagag ttaagtgaat gtctaaggtc acacagtatt1196
aagtgacagt gctagaaatc aaacccagag ctgtggactt tgttcactag actgtgccct1256
tttatagaggtacatgttct ctttggagtg ttggtaggtg tctgtttccc acctcacctg1316
agagccattg aatttgcctt cctcatgaat taaaacctcc cccaagcaga gcttcctcag1376
agaaagtggt tctatgatga agtcctgtct tggaaggact actactcaat ggcccctgca1436
ctactctact tcctcttacc tatgtccctt ctcatgcctt tccctccaac ggggaaagcc1496
aactccatct ctaagtgctg aactcatccc tgttcctcaa ggccacctgg ccaggagctt1556
ctctgatgtg atatccactt tttttttttt tgagatggag tctcactctg tcacccaggc1616
tggagtacag tgacacgacc tcggctcact gcagcctcct tctcctgggt ccaagcaatt1676
attgtgcctc agcctcccga gtagctgaga cttcaggtgc attccaccac acatggctaa1736
tttttgtatt tttagtagaa atggggtttc gtcatgttgg ccaggctggt ctcgaactcc1796
tggcctaggt gatccacccg cctcgacctc ccaaagtgct gggattacag gcatgagcca1856
ccatgcccag tcgatatctc actttttatt ttgccatgga tgagagtcct gggtgtgagg1916
aacacctccc accaggctag aggcaactgc ccaggaagga ctgtgcttcc gtcacctcta1976
aatcccttgc agatccttga taaatgcctc atgaagacca atctcttgaa tcccatatct2036
acccagaatt aactccattc cagtctctgc atgtaatcag ttttatccac agaaacattt2096
tcattttagg aaatccctgg ttttaagtat caatccttgt tcagctggac aatatgaatc2156
ttttccactg aagttaggga tgactgtgat tttcagaaca cgtccagaat ttttcatcaa2216
gaaggtagct tgagcctgaa atgcaaaacc catggaggaa ttctgaagcc attgtctcct2276
tgagtaccaa cagggtcagg gaagactggg cctcctgaat ttattattgt tctttaagaa2336
ttacaggttg aggtagttga tggtggtaaa cattctctca ggagacaata actccagtga2396
tgttcttcaa agattttagc aaaaacagag taaatagcat tctctatcaa tatataaatt2456
taaaaaacta tctttttgct tacagtttta aattctgaac aattctctct tatatgtgta2516
ttgctaatca ttaaggtatt attttttcca catataaagc tttgtctttt tgttgttgtt2576
gttgttttta agatggagtt tccctctgtt gccaggctag agtgcagtgg catgatctcg2636
gcttactgca acctttgcct cccaggttca agcgattctt ctgcctcagc ctcccgagta2696
gctgggacca caggtgccta ccaccatgcc aggctaattt ttgtattttt agtaaagaca2756
gggtttcacc atattggcca ggctggtctc gaactcctga ccttgtgatc tgcccgcctc2816
catttttgtt gttatttttt gagaaagata gatatgaggt ttagagaggg atgaagaggt2876
gagagtaagc cttgtgttag tcagaactct gtgttgtgaa tgtcattcac aacagaaaac2936
ccaaaatatt atgcaaacta ctgtaagcaa gaaaaataaa ggaaaaatgg aaacatttat2996
tcctttgcat aatagaaatt accagagttg ttctgtcttt agataaggtt tgaaccaaag3056
ctcaaaacaa tcaagaccct tttctgtatg tccttctgtt ctgccttccg cagtgtaggc3116
tttaccctca ggtgctacac agtatagttc tagggtttcc ctcccgatat caaaaagact3176
gtggcctgcc cagctctcgt atccccaagc cacaccatct ggctaaatgg acatcatgtt3236
ttctggtgat gcccaaagag gagagaggaa gctctctttc ccagatgccc cagcaagtgt3296
aaccttgcat ctcattgctc tggctgagtt gtgtgcctgt ttctgaccaa tcactgagtc3356
aggaggatga aatattcata ttgacttaat tgcagcttaa gttaggggta tgtagaggta3416
ttttccctaa agcaaaattg ggacactgtt atcagaaata ggagagtgga tgatagatgc3476
aaaataatac ctgtccacaa caaactctta atgctgtgtt tgagctttca tgagtttccc3536
agagagacat agctggaaaa ttcctattga ttttctctaa aatttcaaca agtagctaaa3596
gtctggctat gctcacagtc tcacatctgg ttggggtggg ctccttacag aacacgcttt3656
cacagttacc ctaaactctc tggggcaggg ttattccttt gtggaaccag aggcacagag3716
agagtcaact gaggccaaaa gaggcctgag agaaactgag gtcaagattt caggattaat3776
ggtcctgtga tgctttgaag tacaattgtg gatttgtcca attctcttta gttctgtcag3836
cttttgcttc atatatttta gcgctctatt attagatata tacatgttta gtattatgtc3896
ttattggtgc atttactctc ttatcattat gtaatgtcct tctttatctg tgataatttt3956
ctgtgttctg aagtctactt tgtctaaaaa taacatacgc actcaacttc cttttctttc4016
ttccttcctt tctttcttcc ttcctttctt tctctctctc tctctttcct tccttccttc4076
ctccttttct ttctctctct ctctctctct ctttttttga cagactctcg ttctgtggcc4136
ctggctggag ttcagtggtg tgatcttggc tcactgctac ctctaccatg agcaattctc4196
ctgcctcagc ctcccaagta gctggaacta caggctcatg ccactgcgcc cagctaattt4256
ttgtattttt cgtagagacg gggtttcacc acattcgtca ggttggtttc aaactcctga4316
ctttgtgatc cacccgcctc ggcctcccaa agtgctggga ttacaggcat gagccatcac4376
acctggtcaa ctttcttttg attagtgttt ttgtggtata tctttttcca tcatgttact4436
ttaaatatat ctatattatt gtatttaaaa tgtgtttctt acagactgca tgtagttggg4496
tataattttt atccagtcta aaaatatctg tcttttaatt ggtgtttaga caatttatat4556
ttaataaaat tgttgaattt aaaaaaaaaa aaaaaa 4592
<210>7
<211>244
<212>PRT
<213>人
<400>7
MetLeu Leu Leu Gly Ala Val Leu Leu Leu Leu Ala Leu Pro Gly His
1 5 10 15
Asp Gln Glu Thr Thr Thr Gln Gly Pro Gly Val Leu Leu Pro Leu Pro
20 25 30
Lys Gly Ala Cys Thr Gly Trp Met Ala GlyIle Pro Gly His Pro Gly
35 40 45
His Asn Gly Ala Pro Gly Arg Asp Gly Arg Asp Gly Thr Pro Gly Glu
50 55 60
Lys Gly Glu Lys Gly Asp Pro Gly Leu Ile Gly Pro Lys Gly Asp Ile
65 70 75 80
Gly Glu Thr Gly Val Pro Gly Ala Glu Gly Pro Arg Gly Phe Pro Gly
85 90 95
Ile Gln Gly Arg Lys Gly Glu Pro Gly Glu Gly Ala Tyr Val Tyr Arg
100 105 110
Ser Ala Phe Ser Val Gly Leu Glu Thr Tyr Val Thr Ile Pro Asn Met
115 120 125
Pro Ile Arg Phe Thr Lys Ile Phe Tyr Asn Gln Gln Asn His Tyr Asp
130 135 140
Gly Ser Thr Gly Lys Phe His Cys Asn Ile Pro Gly Leu Tyr Tyr Phe
145 150 155 160
Ala Tyr His Ile Thr Val Tyr Met Lys Asp Val Lys Val Ser Leu Phe
165 170 175
Lys Lys Asp Lys Ala Met Leu Phe Thr Tyr Asp Gln Tyr Gln Glu Asn
180 185 190
Asn Val Asp Gln Ala Ser Gly Ser Val Leu Leu His Leu Glu Val Gly
195 200 205
Asp Gln Val Trp Leu Gln Val Tyr Gly Glu Gly Glu Arg Asn Gly Leu
210 215 220
Tyr Ala Asp Asn Asp Asn Asp Ser Thr Phe Thr Gly Phe Leu Leu Tyr
225 230 235 240
His Asp Thr Asn
<210>8
<211>1233
<212>DNA
<213>小鼠
<220>
<221>CDS
<222>(115)..(855)
<400>8
taagctgggg tctgcctgtc cccatgagta ccagactaat gagacctggc cactttctcc 60
tcatttctgt ctgtacgatt gtcagtggat ctgacgacac caaaagggct cagg atg117
Met
1
cta ctg ttg caa gct ctc ctg ttc ctc tta atc ctg ccc agt cat gcc165
Leu Leu Leu Gln Ala Leu Leu Phe Leu Leu Ile Leu Pro Ser His Ala
5 10 15
gaa gat gac gtt act aca act gaa gag cta gct cct gct ttg gtc cct213
Glu Asp Asp Val Thr Thr Thr Glu Glu Leu Ala Pro Ala Leu Val Pro
20 25 30
cca ccc aag gga act tgt gca ggt tgg atg gca ggc atc cca gga cat261
Pro Pro Lys Gly Thr Cys Ala Gly Trp Met Ala Gly Ile Pro Gly His
35 40 45
cct ggc cac aat ggc aca cca ggc cgt gat ggc aga gat ggc act cct309
Pro Gly His Asn Gly Thr Pro Gly Arg Asp Gly Arg Asp Gly Thr Pro
50 55 60 65
gga gag aag gga gag aaa gga gat gca ggt ctt ctt ggt cct aag ggt357
Gly Glu Lys Gly Glu Lys Gly Asp Ala Gly Leu Leu Gly Pro Lys Gly
70 75 80
gag aca gga gat gtt gga atg aca gga gct gaa ggg cca cgg ggc ttc405
Glu Thr Gly Asp Val Gly Met Thr Gly Ala Glu Gly Pro Arg Gly Phe
85 90 95
ccc gga acc cct ggc agg aaa gga gag cct gga gaa gcc gct tat gtg453
Pro Gly Thr Pro Gly Arg Lys Gly Glu Pro Gly Glu Ala Ala Tyr Val
100 105 110
tat cgc tca gcg ttc agt gtg ggg ctg gag acc cgc gtc act gtt ccc501
Tyr Arg Ser Ala Phe Ser Val Gly Leu Glu Thr Arg Val Thr Val Pro
115 120 125
aat gta ccc att cgc ttt act aag atc ttc tac aac caa cag aat cat549
Asn Val Pro Ile Arg Phe Thr Lys Ile Phe Tyr Asn Gln Gln Asn His
130 135 140 145
tat gac ggc agc act ggc aag ttc tac tgc aac att ccg gga ctc tac597
Tyr Asp Gly Ser Thr Gly Lys Phe Tyr Cys Asn Ile Pro Gly Leu Tyr
150 155 160
tac ttc tct tac cac atc acg gtg tac atg aaa gat gtg aag gtg agc645
Tyr Phe Ser Tyr His Ile Thr Val Tyr Met Lys Asp Val Lys Val Ser
165 170 175
ctc ttc aag aag gac aag gcc gtt ctc ttc acc tac gac cag tat cag693
Leu Phe Lys Lys Asp Lys Ala Val Leu Phe Thr Tyr Asp Gln Tyr Gln
180 185 190
gaa aag aat gtg gac cag gcc tct ggc tct gtg ctc ctc cat ctg gag741
Glu Lys Asn Val Asp Gln Ala Ser Gly Ser Val Leu Leu His Leu Glu
195 200 205
gtg gga gac caa gtc tgg ctc cag gtg tat ggg gat ggg gac cac aat789
Val Gly Asp Gln Val Trp Leu Gln Val Tyr Gly Asp Gly Asp His Asn
210 215 220 225
gga ctc tat gca gat aac gtc aac gac tct aca ttt act ggc ttt ctt837
Gly Leu Tyr Ala Asp Asn Val Asn Asp Ser Thr Phe Thr Gly Phe Leu
230 235 240
ctc tac cat gat acc aac tgactgcaac tacccatagc ccatacacca 885
Leu Tyr His Asp Thr Asn
245
ggagaatcat ggaacagtcg acacactttc agcttagttt gagagattga ttttattgct 945
tagtttgaga gtcctgagta ttatccacac gtgtactcac ttgttcatta aacgacttta 1005
taaaaaataa tttgtgttcc tagtccagaa aaaaaggcac tccctggtct ccacgactct 1065
tacatggtag caataacaga atgaaaatca catttggtat gggggcttca caatattcgc 1125
atgactgtct ggaagtagac catgctattt ttctgctcac tgtacacaaa tattgttcac 1185
ataaacccta taatgtaaat atgaaataca gtgattactc ttctcact 1233
<210>9
<211>247
<212>PRT
<213>小鼠
<400>9
Met Leu Leu Leu Gln Ala Leu Leu Phe Leu Leu Ile Leu Pro Ser His
1 5 10 15
Ala Glu Asp Asp Val Thr Thr Thr Glu Glu Leu Ala Pro Ala Leu Val
20 25 30
Pro Pro Pro Lys Gly Thr Cys Ala Gly Trp Met Ala Gly Ile Pro Gly
35 40 45
His Pro Gly His Asn Gly Thr Pro Gly Arg Asp Gly Arg Asp Gly Thr
50 55 60
Pro Gly Glu Lys Gly Glu Lys Gly Asp Ala Gly Leu Leu Gly Pro Lys
65 70 75 80
Gly Glu Thr Gly Asp Val Gly Met Thr Gly Ala Glu Gly Pro Arg Gly
85 90 95
Phe Pro Gly Thr Pro Gly Arg Lys Gly Glu Pro Gly Glu Ala Ala Tyr
100 105 110
Val Tyr Arg Ser Ala Phe Ser Val Gly Leu Glu Thr Arg Val Thr Val
115 120 125
Pro Asn Val Pro Ile Arg Phe Thr Lys Ile Phe Tyr Asn Gln Gln Asn
130 135 140
His Tyr Asp Gly Ser Thr Gly Lys Phe Tyr Cys Asn Ile Pro Gly Leu
145 150 155 160
Tyr Tyr Phe Ser Tyr His Ile Thr Val Tyr Met Lys Asp Val Lys Val
165 170 175
Ser Leu Phe Lys Lys Asp Lys Ala Val Leu Phe Thr Tyr Asp Gln Tyr
180 185 190
Gln Glu Lys Asn Val Asp Gln Ala Ser Gly Ser Val Leu Leu His Leu
195 200 205
Glu Val Gly Asp Gln Val Trp Leu Gln Val Tyr Gly Asp Gly Asp His
210 215 220
Asn Gly Leu Tyr Ala Asp Asn Val Asn Asp Ser Thr Phe Thr Gly Phe
225 230 235 240
Leu Leu Tyr His Asp Thr Asn
245
<210>10
<211>3236
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(29)..(2302)
<400>10
gtgacccacc tgcctcctcc gcagagca atg gcg gtg tct gcc ggg tcc gcg52
Met Ala Val Ser Ala Gly Ser Ala
1 5
cgg acc tcg ccc agc tca gat aaa gta cag aaa gac aag gct gaa ctg 100
Arg Thr Ser Pro Ser Ser Asp Lys Val Gln Lys Asp Lys Ala Glu Leu
10 15 20
atc tca ggg ccc agg cag gac agc cga ata ggg aaa ctc ttg ggt ttt148
Ile Ser Gly Pro Arg Gln Asp Ser Arg Ile Gly Lys Leu Leu Gly Phe
25 30 35 40
gag tgg aca gat ttg tcc agt tgg cgg agg ctg gtg acc ctg ctg aat196
Glu Trp Thr Asp Leu Ser Ser Trp Arg Arg Leu Val Thr Leu Leu Asn
45 50 55
cga cca acg gac cct gca agc tta gct gtc ttt cgt ttt ctt ttt ggg244
Arg Pro Thr Asp Pro Ala Ser Leu Ala Val Phe Arg Phe Leu Phe Gly
60 65 70
ttc ttg atg gtg cta gac att ccc cag gag cgg ggg ctc agc tct ctg292
Phe Leu Met Val Leu Asp Ile Pro Gln Glu Arg Gly Leu Ser Ser Leu
75 80 85
gac cgg aaa tac ctt gat ggg ctg gat gtg tgc cgc ttc ccc ttg ctg340
Asp Arg Lys Tyr Leu Asp Gly Leu Asp Val Cys Arg Phe Pro Leu Leu
90 95 100
gat gcc cta cgc cca ctg cca ctt gac tgg atg tat ctt gtc tac acc388
Asp Ala Leu Arg Pro Leu Pro Leu Asp Trp Met Tyr Leu Val Tyr Thr
105 110 115 120
atc atg ttt ctg ggg gca ctg ggc atg atg ctg ggc ctg tgc tac cgg436
Ile Met Phe Leu Gly Ala Leu Gly Met Met Leu Gly Leu Cys Tyr Arg
125 130 135
ata agc tgt gtg tta ttc ctg ctg cca tac tgg tat gtg ttt ctc ctg484
Ile Ser Cys Val Leu Phe Leu Leu Pro Tyr Trp Tyr Val Phe Leu Leu
140 145 150
gac aag aca tca tgg aac aac cac tcc tat ctg tat ggg ttg ttg gcc532
Asp Lys Thr Ser Trp Asn Asn His Ser Tyr Leu Tyr Gly Leu Leu Ala
155 160 165
ttt cag cta aca ttc atg gat gca aac cac tac tgg tct gtg gac ggt580
Phe Gln Leu Thr Phe Met Asp Ala Asn His Tyr Trp Ser Val Asp Gly
170 175 180
ctg ctg aat gcc cat agg agg aat gcc cac gtg ccc ctt tgg aac tat628
Leu Leu Asn Ala His Arg Arg Asn Ala His Val Pro Leu Trp Asn Tyr
185 190 195 200
gca gtg ctc cgt ggc cag atc ttc att gtg tac ttc att gcg ggt gtg676
Ala Val Leu Arg Gly Gln Ile Phe Ile Val Tyr Phe Ile Ala Gly Val
205 210 215
aaa aag ctg gat gca gac tgg gtt gaa ggc tat tcc atg gaa tat ttg724
Lys Lys Leu Asp Ala Asp Trp Val Glu Gly Tyr Ser Met Glu Tyr Leu
220 225 230
tcc cgg cac tgg ctc ttc agt ccc ttc aaa ctg ctg ttg tct gag gag772
Ser Arg His Trp Leu Phe Ser Pro Phe Lys Leu Leu Leu Ser Glu Glu
235 240 245
ctg act agc ctg ctg gtc gtg cac tgg ggt ggg ctg ctg ctt gac ctc820
Leu Thr Ser Leu Leu Val Val His Trp Gly Gly Leu Leu Leu Asp Leu
250 255 260
tca gct ggt ttc ctg ctc ttt ttt gat gtc tca aga tcc att ggc ctg868
Ser Ala Gly Phe Leu Leu Phe Phe Asp Val Ser Arg Ser Ile Gly Leu
265 270 275 280
ttc ttt gtg tcc tac ttc cac tgc atg aat tcc cag ctt ttc agc att916
Phe Phe Val Ser Tyr Phe His Cys Met Asn Ser Gln Leu Phe Ser Ile
285 290 295
ggt atg ttc tcc tac gtc atg ctg gcc agc agc cct ctc ttc tgc tcc964
Gly Met Phe Ser Tyr Val Met Leu Ala Ser Ser Pro Leu Phe Cys Ser
300 305 310
cct gag tgg cct cgg aag ctg gtg tcc tac tgc ccc cga agg ttg caa1012
Pro Glu Trp Pro Arg Lys Leu Val Ser Tyr Cys Pro Arg Arg Leu Gln
315 320 325
caa ctg ttg ccc ctc aag gca gcc cct cag ccc agt gtt tcc tgt gtg1060
Gln Leu Leu Pro Leu Lys Ala Ala Pro Gln Pro Ser Val Ser Cys Val
330 335 340
tat aag agg agc cgg ggc aaa agt ggc cag aag cca ggg ctg cgc cat1108
Tyr Lys Arg Ser Arg Gly Lys Ser Gly Gln Lys Pro Gly Leu Arg His
345 350 355 360
cag ctg gga gct gcc ttc acc ctg ctc tac ctc ctg gag cag cta ttc1156
Gln Leu Gly Ala Ala Phe Thr Leu Leu Tyr Leu Leu Glu Gln Leu Phe
365 370 375
ctg ccc tat tct cat ttt ctc acc cag ggc tat aac aac tgg aca aat1204
Leu Pro Tyr Ser His Phe Leu Thr Gln Gly Tyr Asn Asn Trp Thr Asn
380 385 390
ggg ctg tat ggc tat tcc tgg gac atg atg gtg cac tcc cgc tcc cac1252
Gly Leu Tyr Gly Tyr Ser Trp Asp Met Met Val His Ser Arg Ser His
395 400 405
cag cac gtg aag atc acc tac cgt gat ggc cgc act ggc gaa ctg ggc1300
Gln His Val Lys Ile Thr Tyr Arg Asp Gly Arg Thr Gly Glu Leu Gly
410 415 420
tac ctt aac cct ggg gta ttt aca cag agt cgg cga tgg aag gat cat1348
Tyr Leu Asn Pro Gly Val Phe Thr Gln Ser Arg Arg Trp Lys Asp His
425 430 435 440
gca gac atg ctg aag caa tat gcc act tgc ctg agc cgc ctg ctt ccc1396
Ala Asp Met Leu Lys Gln Tyr Ala Thr Cys Leu Ser Arg Leu Leu Pro
445 450 455
aag tat aat gtc act gag ccc cag atc tac ttt gat att tgg gtc tcc1444
Lys Tyr Asn Val Thr Glu Pro Gln Ile Tyr Phe Asp Ile Trp Val Ser
460 465 470
atc aat gac cgc ttc cag cag agg att ttt gac cct cgt gtg gac atc1492
Ile Asn Asp Arg Phe Gln Gln Arg Ile Phe Asp Pro Arg Val Asp Ile
475 480 485
gtg cag gcc gct tgg tca ccc ttt cag cgc aca tcc tgg gtg caa cca1540
Val Gln Ala Ala Trp Ser Pro Phe Gln Arg Thr Ser Trp Val Gln Pro
490 495 500
ctc ttg atg gac ctg tct ccc tgg agg gcc aag tta cag gaa atc aag1588
Leu Leu Met Asp Leu Ser Pro Trp Arg Ala Lys Leu Gln Glu Ile Lys
505 510 515 520
agc agc cta gac aac cac act gag gtg gtc ttc att gca gat ttc cct1636
Ser Ser Leu Asp Asn His Thr Glu Val Val Phe Ile Ala Asp Phe Pro
525 530 535
gga ctg cac ttg gag aat ttt gtg agt gaa gac ctg ggc aac act agc1684
Gly Leu His Leu Glu Asn Phe Val Ser Glu Asp Leu Gly Asn Thr Ser
540 545 550
atc cag ctg ctg cag ggg gaa gtg act gtg gag ctt gtg gca gaa cag1732
Ile Gln Leu Leu Gln Gly Glu Val Thr Val Glu Leu Val Ala Glu Gln
555 560 565
aag aac cag act ctt cga gag gga gaa aaa atg cag ttg cct gct ggt1780
Lys Asn Gln Thr Leu Arg Glu Gly Glu Lys Met Gln Leu Pro Ala Gly
570 575 580
gag tac cat aag gtg tat acg aca tca cct agc cct tct tgc tac atg1828
Glu Tyr His Lys Val Tyr Thr Thr Ser Pro Ser Pro Ser Cys Tyr Met
585 590 595 600
tac gtc tat gtc aac act aca gag ctt gca ctg gag caa gac ctg gca1876
Tyr Val Tyr Val Asn Thr Thr Glu Leu Ala Leu Glu Gln Asp Leu Ala
605 610 615
tat ctg caa gaa tta aag gaa aag gtg gag aat gga agt gaa aca ggg1924
Tyr Leu Gln Glu Leu Lys Glu Lys Val Glu Asn Gly Ser Glu Thr Gly
620 625 630
cct cta ccc cca gag ctg cag cct ctg ttg gaa ggg gaa gta aaa ggg1972
Pro Leu Pro Pro Glu Leu Gln Pro Leu Leu Glu Gly Glu Val Lys Gly
635 640 645
ggc cct gag cca aca cct ctg gtt cag acc ttt ctt aga cgc caa caa2020
Gly Pro Glu Pro Thr Pro Leu Val Gln Thr Phe Leu Arg Arg Gln Gln
650 655 660
agg ctc cag gag att gaa cgc cgg cga aat act cct ttc cat gag cga2068
Arg Leu Gln Glu Ile Glu Arg Arg Arg Asn Thr Pro Phe His Glu Arg
665 670 675 680
ttc ttc cgc ttc ttg ttg cga aag ctc tat gtc ttt cgc cgc agc ttc2116
Phe Phe Arg Phe Leu Leu Arg Lys Leu Tyr Val Phe Arg Arg Ser Phe
685 690 695
ctg atg act tgt atc tca ctt cga aat ctg ata tta ggc cgt cct tcc2164
Leu Met Thr Cys Ile Ser Leu Arg Asn Leu Ile Leu Gly Arg Pro Ser
700 705 710
ctg gag cag ctg gcc cag gag gtg act tat gca aac ttg aga ccc ttt2212
Leu Glu Gln Leu Ala Gln Glu Val Thr Tyr Ala Asn Leu Arg Pro Phe
715 720 725
gag gca gtt gga gaa ctg aat ccc tca aac acg gat tct tca cat tct2260
Glu Ala Val Gly Glu Leu Asn Pro Ser Asn Thr Asp Ser Ser His Ser
730 735 740
aat cct cct gag tca aat cct gat cct gtc cac tca gag ttc2302
Asn Pro Pro Glu Ser Asn Pro Asp Pro Val His Ser Glu Phe
745 750 755
tgaagggggc cagatgttgg gtgcagatgt agaagcagcc agtcacagac ccattctatg2362
caatggacat ttatttgaaa aaaattctca aaagtttttt tttttttttt gggggggcgg2422
ggttctaaag ctgtttttaa ctccgagatt acaacttaga ggaaccaagg aaataaagca2482
aataagattt aacaacccaa gattaagagg ccaggaagag gttagacgca atgtgaaact2542
gtcctcctag gataaggttt aaagtggctt tttgggggct gggtgccgtg gctcacgcct2602
gtaatcccag cattttggga ggctgaggtg ggcagatcac ttgaggccag gagttcgaga2662
ccagcctggc caacatggca aaaccccttc tctactaaaa atacaaaaat tagccagacg2722
tggtggtggg tgcctgtaat ccaactaccc aggaggctga ggcatgagaa tcgcttgggc2782
ccaggaggtg gaggttgcag tgagccgaga tcgagccact gcactcctgg gcaacagagc2842
aagacttcgt ctcaaaataa ataaataaag tggctcttgg ggaaaagcaa tttaatgtac2902
cacgatgaat agctaactgt tcccaagtgt ttgctatgtg caacacaccg cgtgagcagt2962
gttacctgca ttattacatt aggctgagag gtaaaataat ttgcccgaag acatacagct3022
agtgacgaat ggactgatgg tttgaactta acgtctattt gacttaaggt cctgcaccct3082
gccacttgta attttcagaa tcactgataa tctgaaataa tgcagcttaa aacatgtttt3142
cttaattaaa agtataaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa3202
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaa3236
<210>11
<211>758
<212>PRT
<213>人
<400>11
Met Ala Val Ser Ala Gly Ser Ala Arg Thr Ser Pro Ser Ser Asp Lys
1 5 10 15
Val Gln Lys Asp Lys Ala Glu Leu Ile Ser Gly Pro Arg Gln Asp Ser
20 25 30
Arg Ile Gly Lys Leu Leu Gly Phe Glu Trp Thr Asp Leu Ser Ser Trp
35 40 45
Arg Arg Leu Val Thr Leu Leu Asn Arg Pro Thr Asp Pro Ala Ser Leu
50 55 60
Ala Val Phe Arg Phe Leu Phe Gly Phe Leu Met Val Leu Asp Ile Pro
65 70 75 80
Gln Glu Arg Gly Leu Ser Ser Leu Asp Arg Lys Tyr Leu Asp Gly Leu
85 90 95
Asp Val Cys Arg Phe Pro Leu Leu Asp Ala Leu Arg Pro Leu Pro Leu
100 105 110
Asp Trp Met Tyr Leu Val Tyr Thr Ile Met Phe Leu Gly Ala Leu Gly
115 120 125
Met Met Leu Gly Leu Cys Tyr Arg Ile Ser Cys Val Leu Phe Leu Leu
130 135 140
Pro Tyr Trp Tyr Val Phe Leu Leu Asp Lys Thr Ser Trp Asn Asn His
145 150 155 160
Ser Tyr Leu Tyr Gly Leu Leu Ala Phe Gln Leu Thr Phe Met Asp Ala
165 170 175
Asn His Tyr Trp Ser Val Asp Gly Leu Leu Asn Ala His Arg Arg Asn
180 185 190
Ala His Val Pro Leu Trp Asn Tyr Ala Val Leu Arg Gly Gln Ile Phe
195 200 205
Ile Val Tyr Phe Ile Ala Gly Val Lys Lys Leu Asp Ala Asp Trp Val
210 215 220
Glu Gly Tyr Ser Met Glu Tyr Leu Ser Arg His Trp Leu Phe Ser Pro
225 230 235 240
Phe Lys Leu Leu Leu Ser Glu Glu Leu Thr Ser Leu Leu Val Val His
245 250 255
Trp Gly Gly Leu Leu Leu Asp Leu Ser Ala Gly Phe Leu Leu Phe Phe
260 265 270
Asp Val Ser Arg Ser Ile Gly Leu Phe Phe Val Ser Tyr Phe His Cys
275 280 285
Met Asn Ser Gln Leu Phe Ser Ile Gly Met Phe Ser Tyr Val Met Leu
290 295 300
Ala Ser Ser Pro Leu Phe Cys Ser Pro Glu Trp Pro Arg Lys Leu Val
305 310 315 320
Ser Tyr Cys Pro Arg Arg Leu Gln Gln Leu Leu Pro Leu Lys Ala Ala
325 330 335
Pro Gln Pro Ser Val Ser Cys Val Tyr Lys Arg Ser Arg Gly Lys Ser
340 345 350
Gly Gln Lys Pro Gly Leu Arg His Gln Leu Gly Ala Ala Phe Thr Leu
355 360 365
Leu Tyr Leu Leu Glu Gln Leu Phe Leu Pro Tyr Ser His Phe Leu Thr
370 375 380
Gln Gly Tyr Asn Asn Trp Thr Asn Gly Leu Tyr Gly Tyr Ser Trp Asp
385 390 395 400
Met Met Val His Ser Arg Ser His Gln His Val Lys Ile Thr Tyr Arg
405 410 415
Asp Gly Arg Thr Gly Glu Leu Gly Tyr Leu Asn Pro Gly Val Phe Thr
420 425 430
Gln Ser Arg Arg Trp Lys Asp His Ala Asp Met Leu Lys Gln Tyr Ala
435 440 445
Thr Cys Leu Ser Arg Leu Leu Pro Lys Tyr Asn Val Thr Glu Pro Gln
450 455 460
Ile Tyr Phe Asp Ile Trp Val Ser Ile Asn Asp Arg Phe Gln Gln Arg
465 470 475 480
Ile Phe Asp Pro Arg Val Asp Ile Val Gln Ala Ala Trp Ser Pro Phe
485 490 495
Gln Arg Thr Ser Trp Val Gln Pro Leu Leu Met Asp Leu Ser Pro Trp
500 505 510
Arg Ala Lys Leu Gln Glu Ile Lys Ser Ser Leu Asp Asn His Thr Glu
515 520 525
Val Val Phe Ile Ala Asp Phe Pro Gly Leu His Leu Glu Asn Phe Val
530 535 540
Ser Glu Asp Leu Gly Asn Thr Ser Ile Gln Leu Leu Gln Gly Glu Val
545 550 555 560
Thr Val Glu Leu Val Ala Glu Gln Lys Asn Gln Thr Leu Arg Glu Gly
565 570 575
Glu Lys Met Gln Leu Pro Ala Gly Glu Tyr His Lys Val Tyr Thr Thr
580 585 590
Ser Pro Ser Pro Ser Cys Tyr Met Tyr Val Tyr Val Asn Thr Thr Glu
595 600 605
Leu Ala Leu Glu Gln Asp Leu Ala Tyr Leu Gln Glu Leu Lys Glu Lys
610 615 620
Val Glu Asn Gly Ser Glu Thr Gly Pro Leu Pro Pro Glu Leu Gln Pro
625 630 635 640
Leu Leu Glu Gly Glu Val Lys Gly Gly Pro Glu Pro Thr Pro Leu Val
645 650 655
Gln Thr Phe Leu Arg Arg Gln Gln Arg Leu Gln Glu Ile Glu Arg Arg
660 665 670
Arg Asn Thr Pro Phe His Glu Arg Phe Phe Arg Phe Leu Leu Arg Lys
675 680 685
Leu Tyr Val Phe Arg Arg Ser Phe Leu Met Thr Cys Ile Ser Leu Arg
690 695 700
Asn Leu Ile Leu Gly Arg Pro Ser Leu Glu Gln Leu Ala Gln Glu Val
705 710 715 720
Thr Tyr Ala Asn Leu Arg Pro Phe Glu Ala Val Gly Glu Leu Asn Pro
725 730 735
Ser Asn Thr Asp Ser Ser His Ser Asn Pro Pro Glu Ser Asn Pro Asp
740 745 750
Pro Val His Ser Glu Phe
755
<210>12
<211>2905
<212>DNA
<213>小鼠
<220>
<221>CDS
<222>(75)..(2345)
<400>12
agacagcaag tctaagtctg gaggttccac tgggtccgac ctggctgcag agaggctcac 60
ctgtccctgc agtc atg gct gtg cac cgc ggc tcc gca ctg gtt gct ccc110
Met Ala Val His Arg Gly Ser Ala Leu Val Ala Pro
1 5 10
gcc tca gat aaa gta cag aaa aac aag tct gca cag aca tca gga ctg158
Ala Ser Asp Lys Val Gln Lys Asn Lys Ser Ala Gln Thr Ser Gly Leu
15 20 25
aaa cag ggc agc cga atg gag aaa att tta ggg ttt gaa tgg aca gat206
Lys Gln Gly Ser Arg Met Glu Lys Ile Leu Gly Phe Glu Trp Thr Asp
30 35 40
tta tct agc tgg cag agt gtc gtg acc ctg ctt aac aaa cca acg gac254
Leu Ser Ser Trp Gln Ser Val Val Thr Leu Leu Asn Lys Pro Thr Asp
45 50 55 60
cct gca aac ctg gct gtc ttt cgt ttt ctc ttt gct ttc ttg atg ctg302
Pro Ala Asn Leu Ala Val Phe Arg Phe Leu Phe Ala Phe Leu Met Leu
65 70 75
ctg gac att ccc cag gaa cgc ggc ctt agc tcc ctg gac cga aaa tac350
Leu Asp Ile Pro Gln Glu Arg Gly Leu Ser Ser Leu Asp Arg Lys Tyr
80 85 90
ttg gat ggg ctg gat gtg tgc cgt ttc ccc ttg ctg gat gcc ttg cgc398
Leu Asp Gly Leu Asp Val Cys Arg Phe Pro Leu Leu Asp Ala Leu Arg
95 100 105
cca ctg cca ctg gac tgg atg tat ctt gtc tac acc atc atg ttt ctg446
Pro Leu Pro Leu Asp Trp Met Tyr Leu Val Tyr Thr Ile Met Phe Leu
110 115 120
ggg gca ctg ggc atg atg ctg ggg cta tgc tac cgg cta agc tgt gtg494
Gly Ala Leu Gly Met Met Leu Gly Leu Cys Tyr Arg Leu Ser Cys Val
125 130 135 140
tta ttc ctg cta ccg tac tgg tac gtg ttt ctc ctg gac aag act tcg542
Leu Phe Leu Leu Pro Tyr Trp Tyr Val Phe Leu Leu Asp Lys Thr Ser
145 150 155
tgg aac aat cac tcc tat ctg tat ggt ttg ttg gcc ttt cag ttg aca590
Trp Asn Asn His Ser Tyr Leu Tyr Gly Leu Leu Ala Phe Gln Leu Thr
160 165 170
ttc atg gat gca aac cac tac tgg tct gtg gat ggc ttg ctg aat gcc638
Phe Met Asp Ala Asn His Tyr Trp Ser Val Asp Gly Leu Leu Asn Ala
175 180 185
cga aag aag aat gct cac gtg ccc ctt tgg aac tac aca gtt ctg cgt686
Arg Lys Lys Asn Ala His Val Pro Leu Trp Asn Tyr Thr Val Leu Arg
190 195 200
ggc cag atc ttc atc gtg tac ttc atc gcg ggt gtg aag aag ctc gat734
Gly Gln Ile Phe Ile Val Tyr Phe Ile Ala Gly Val Lys Lys Leu Asp
205 210 215 220
gct gac tgg gtt ggg ggc tac tcc atg gag cac ctg tcc cgg cac tgg782
Ala Asp Trp Val Gly Gly Tyr Ser Met Glu His Leu Ser Arg His Trp
225 230 235
ctc ttc agt ccc ttc aag ctg gtg ttg tcg gag gag ctg aca agc ctg830
Leu Phe Ser Pro Phe Lys Leu Val Leu Ser Glu Glu Leu Thr Ser Leu
240 245 250
ctg gta gta cac tgg tgt ggg ctt ctc ctt gac ctc tcg gct ggc ttc878
Leu Val Val His Trp Cys Gly Leu Leu Leu Asp Leu Ser Ala Gly Phe
255 260 265
ctg ctc ttc ttt gat gcc tcc aga ccc gtc ggc ctg ttc ttc gtg tcc926
Leu Leu Phe Phe Asp Ala Ser Arg Pro Val Gly Leu Phe Phe Val Ser
270 275 280
tac ttt cac tgc atg aac tcg cag ctc ttc agc atc ggg atg ttt ccc974
Tyr Phe His Cys Met Asn Ser Gln Leu Phe Ser Ile Gly Met Phe Pro
285 290 295 300
tat gtc atg ctg gcc agc agc cct ctc ttc tgc tca gct gaa tgg cct1022
Tyr Val Met Leu Ala Ser Ser Pro Leu Phe Cys Ser Ala Glu Trp Pro
305 310 315
cgg aag ttg gta gcc cga tgc ccg aaa agg ctg caa gag ctg ctg ccc1070
Arg Lys Leu Val Ala Arg Cys Pro Lys Arg Leu Gln Glu Leu Leu Pro
320 325 330
acc aaa gcc gct cct cgg cct agt gct tcc tgt gtg tat aag agg tcc1118
Thr Lys Ala Ala Pro Arg Pro Ser Ala Ser Cys Val Tyr Lys Arg Ser
335 340 345
cgg ggc aaa gct ggc ccg aag ccc ggg ctg cgc cac cag ctg gga gcc1166
Arg Gly Lys Ala Gly Pro Lys Pro Gly Leu Arg His Gln Leu Gly Ala
350 355 360
atc ttc acc ctg ctc tac ctc cta gag cag ctc ttc ctg ccc tat tcc1214
Ile Phe Thr Leu Leu Tyr Leu Leu Glu Gln Leu Phe Leu Pro Tyr Ser
365 370 375 380
cac ttc ctg acc cag ggt tac aat aac tgg aca aat ggg ctg tat ggc1262
His Phe Leu Thr Gln Gly Tyr Asn Asn Trp Thr Asn Gly Leu Tyr Gly
385 390 395
tat tcc tgg gac atg atg gtg cac tcc cgc tcc cac cag cac gta aag1310
Tyr Ser Trp Asp Met Met Val His Ser Arg Ser His Gln His Val Lys
400 405 410
atc acc tac cgc gac ggc ctc acg ggc gag cta ggc tac ctt aac cct1358
Ile Thr Tyr Arg Asp Gly Leu Thr Gly Glu Leu Gly Tyr Leu Asn Pro
415 420 425
ggg gta ttc aca cag agc cgg cga tgg aag gat cat gca gac atg ctg1406
Gly Val Phe Thr Gln Ser Arg Arg Trp Lys Asp His Ala Asp Met Leu
430 435 440
aag caa tat gcc act tgc ctg agc ctc ctg ctt ccc aag tac aat gtc1454
Lys Gln Tyr Ala Thr Cys Leu Ser Leu Leu Leu Pro Lys Tyr Asn Val
445 450 455 460
act gag ccc cag atc tac ttt gat att tgg gtc tcc atc aat gac cgc1502
Thr Glu Pro Gln Ile Tyr Phe Asp Ile Trp Val Ser Ile Asn Asp Arg
465 470 475
ttc cag cag agg ctt ttt gac cct cgt gtg gac atc gtg cag gct gtc1550
Phe Gln Gln Arg Leu Phe Asp Pro Arg Val Asp Ile Val Gln Ala Val
480 485 490
tgg tcc ccc ttc cag cgc aca cct tgg gtg cag cca ctc ttg atg gat1598
Trp Ser Pro Phe Gln Arg Thr Pro Trp Val Gln Pro Leu Leu Met Asp
495 500 505
tta tct ccc tgg agg acc aag tta cag gat att aag agc agt ctg gac1646
Leu Ser Pro Trp Arg Thr Lys Leu Gln Asp Ile Lys Ser Ser Leu Asp
510 515 520
aac cac acc gag gtg gtc ttc att gca gat ttc cct ggg ctt cac ttg1694
Asn His Thr Glu Val Val Phe Ile Ala Asp Phe Pro Gly Leu His Leu
525 530 535 540
gag aat ttt gtg agt gaa gac ctg ggc aac act agc atc cag ctg ctg1742
Glu Asn Phe Val Ser Glu Asp Leu Gly Asn Thr Ser Ile Gln Leu Leu
545 550 555
cag gga gaa gtc acc gtg gaa ttg gtg gca gaa cag aaa aat cag act1790
Gln Gly Glu Val Thr Val Glu Leu Val Ala Glu Gln Lys Asn Gln Thr
560 565 570
ctt caa gaa gga gag aaa atg cag ttg cct gct gga gag tac cat aaa1838
Leu Gln Glu Gly Glu Lys Met Gln Leu Pro Ala Gly Glu Tyr His Lys
575 580 585
gtc tat act gta tca tct agt cct tcc tgc tac atg tac gtc tat gtc1886
Val Tyr Thr Val Ser Ser Ser Pro Ser Cys Tyr Met Tyr Val Tyr Val
590 595 600
aac act aca gag gtc gca ctg gag caa gac ctg gca tat ctg caa gaa1934
Asn Thr Thr Glu Val Ala Leu Glu Gln Asp Leu Ala Tyr Leu Gln Glu
605 610 615 620
tta aag gag aag gtg gag aac gga agt gaa aca ggg ccc ctg cct cca1982
Leu Lys Glu Lys Val Glu Asn Gly Ser Glu Thr Gly Pro Leu Pro Pro
625 630 635
gaa ctt cag cct ctt ttg gaa ggg gaa gta aaa ggg ggc cct gag cca2030
Glu Leu Gln Pro Leu Leu Glu Gly Glu Val Lys Gly Gly Pro Glu Pro
640 645 650
aca cct ctg gtc caa act ttt ctc aga cga cag agg aag ctc caa gaa2078
Thr Pro Leu Val Gln Thr Phe Leu Arg Arg Gln Arg Lys Leu Gln Glu
655 660 665
att gaa cgc agg cga aat agc cct ttc cat gag cga ttt ctc cgc ttc2126
Ile Glu Arg Arg Arg Asn Ser Pro Phe His Glu Arg Phe Leu Arg Phe
670 675 680
gtg ctg cga aag ctc tac gtc ttt cga cgc agc ttc ctg atg act cga2174
Val Leu Arg Lys Leu Tyr Val Phe Arg Arg Ser Phe Leu Met Thr Arg
685 690 695 700
att tca ctc cga aac ctg cta tta ggc cgc cct tcc cta gag caa cta2222
Ile Ser Leu Arg Asn Leu Leu Leu Gly Arg Pro Ser Leu Glu Gln Leu
705 710 715
gcc caa gag gtg aca tat gca aac ttg cga cca ttt gaa cca gtt gat2270
Ala Gln Glu Val Thr Tyr Ala Asn Leu Arg Pro Phe Glu Pro Val Asp
720 725 730
gag tca agt gct tca aac aca gat tct tca aat cac ccg tca gag cca2318
Glu Ser Ser Ala Ser Asn Thr Asp Ser Ser Asn His Pro Ser Glu Pro
735 740 745
gat tct gag cat gtt cac tct gag ttc tgagggatgt acagatgctc 2365
Asp Ser Glu His Val His Ser Glu Phe
750 755
tgtgcagatg tgggggcagc ctgttatagg cttattgtct acgcaaagaa catatttttg 2425
gagaaaaatg atatgggaca ggctttcaca gtacagccca ggctggcctc aaactcatgg 2485
ttggtccctc tgcttcagcc tgttttgtaa ttacatagta tcaccaaacc tagttgcttt 2545
tccctttaca ttttttcccc ttataagttc tttaaaatta tagcttacat tttttctttt 2605
ttcttttttt tttttttgta ttttttcttt gtcaagacag gtctctctct gtgtagcact 2665
ggctgtcctg gaactcactc tgtagtccag gctggcctcc aactcagaaa ttctcctgcc 2725
tctgcctccc aagtgctggg attaaaggtg tgtgccacca cgccccactg ggcttttagt 2785
ttttatagac aagatttctc catgtagacc agaccagctc tcctgagtgc tgaaattaaa 2845
ggcacgggac atcactacct ggctttctta ttaaacttgt tttagtggtc tcaacaaaaa 2905
<210>13
<211>757
<212>PRT
<213>小鼠
<400>13
Met Ala Val His Arg Gly Ser Ala Leu Val Ala Pro Ala Ser Asp Lys
1 5 10 15
Val Gln Lys Asn Lys Ser Ala Gln Thr Ser Gly Leu Lys Gln Gly Ser
20 25 30
Arg Met Glu Lys Ile Leu Gly Phe Glu Trp Thr Asp Leu Ser Ser Trp
35 40 45
Gln Ser Val Val Thr Leu Leu Asn Lys Pro Thr Asp Pro Ala Asn Leu
50 55 60
Ala Val Phe Arg Phe Leu Phe Ala Phe Leu Met Leu Leu Asp Ile Pro
65 70 75 80
Gln Glu Arg Gly Leu Ser Ser Leu Asp Arg Lys Tyr Leu Asp Gly Leu
85 90 95
Asp Val Cys Arg Phe Pro Leu Leu Asp Ala Leu Arg Pro Leu Pro Leu
100 105 110
Asp Trp Met Tyr Leu Val Tyr Thr Ile Met Phe Leu Gly Ala Leu Gly
115 120 125
Met Met Leu Gly Leu Cys Tyr Arg Leu Ser Cys Val Leu Phe Leu Leu
130 135 140
Pro Tyr Trp Tyr Val Phe Leu Leu Asp Lys Thr Ser Trp Asn Asn His
145 150 155 160
Ser Tyr Leu Tyr Gly Leu Leu Ala Phe Gln Leu Thr Phe Met Asp Ala
165 170 175
Asn His Tyr Trp Ser Val Asp Gly Leu Leu Asn Ala Arg Lys Lys Asn
180 185 190
Ala His Val Pro Leu Trp Asn Tyr Thr Val Leu Arg Gly Gln Ile Phe
195 200 205
Ile Val Tyr Phe Ile Ala Gly Val Lys Lys Leu Asp Ala Asp Trp Val
210 215 220
Gly Gly Tyr Ser Met Glu His Leu Ser Arg His Trp Leu Phe Ser Pro
225 230 235 240
Phe Lys Leu Val Leu Ser Glu Glu Leu Thr Ser Leu Leu Val Val His
245 250 255
Trp Cys Gly Leu Leu Leu Asp Leu Ser Ala Gly Phe Leu Leu Phe Phe
260 265 270
Asp Ala Ser Arg Pro Val Gly Leu Phe Phe Val Ser Tyr Phe His Cys
275 280 285
Met Asn Ser Gln Leu Phe Ser Ile Gly Met Phe Pro Tyr Val Met Leu
290 295 300
Ala Ser Ser Pro Leu Phe Cys Ser Ala Glu Trp Pro Arg Lys Leu Val
305 310 315 320
Ala Arg Cys Pro Lys Arg Leu Gln Glu Leu Leu Pro Thr Lys Ala Ala
325 330 335
Pro Arg Pro Ser Ala Ser Cys Val Tyr Lys Arg Ser Arg Gly Lys Ala
340 345 350
Gly Pro Lys Pro Gly Leu Arg His Gln Leu Gly Ala Ile Phe Thr Leu
355 360 365
Leu Tyr Leu Leu Glu Gln Leu Phe Leu Pro Tyr Ser His Phe Leu Thr
370 375 380
Gln Gly Tyr Asn Asn Trp Thr Asn Gly Leu Tyr Gly Tyr Ser Trp Asp
385 390 395 400
Met Met Val His Ser Arg Ser His Gln His Val Lys Ile Thr Tyr Arg
405 410 415
Asp Gly Leu Thr Gly Glu Leu Gly Tyr Leu Asn Pro Gly Val Phe Thr
420 425 430
Gln Ser Arg Arg Trp Lys Asp His Ala Asp Met Leu Lys Gln Tyr Ala
435 440 445
Thr Cys Leu Ser Leu Leu Leu Pro Lys Tyr Asn Val Thr Glu Pro Gln
450 455 460
Ile Tyr Phe Asp Ile Trp Val Ser Ile Asn Asp Arg Phe Gln Gln Arg
465 470 475 480
Leu Phe Asp Pro Arg Val Asp Ile Val Gln Ala Val Trp Ser Pro Phe
485 490 495
Gln Arg Thr Pro Trp Val Gln Pro Leu Leu Met Asp Leu Ser Pro Trp
500 505 510
Arg Thr Lys Leu Gln Asp Ile Lys Ser Ser Leu Asp Asn His Thr Glu
515 520 525
Val Val Phe Ile Ala Asp Phe Pro Gly Leu His Leu Glu Asn Phe Val
530 535 540
Ser Glu Asp Leu Gly Asn Thr Ser Ile Gln Leu Leu Gln Gly Glu Val
545 550 555 560
Thr Val Glu Leu Val Ala Glu Gln Lys Asn Gln Thr Leu Gln Glu Gly
565 570 575
Glu Lys Met Gln Leu Pro Ala Gly Glu Tyr His Lys Val Tyr Thr Val
580 585 590
Ser Ser Ser Pro Ser Cys Tyr Met Tyr Val Tyr Val Asn Thr Thr Glu
595 600 605
Val Ala Leu Glu Gln Asp Leu Ala Tyr Leu Gln Glu Leu Lys Glu Lys
610 615 620
Val Glu Asn Gly Ser Glu Thr Gly Pro Leu Pro Pro Glu Leu Gln Pro
625 630 635 640
Leu Leu Glu Gly Glu Val Lys Gly Gly Pro Glu Pro Thr Pro Leu Val
645 650 655
Gln Thr Phe Leu Arg Arg Gln Arg Lys Leu Gln Glu Ile Glu Arg Arg
660 665 670
Arg Asn Ser Pro Phe His Glu Arg Phe Leu Arg Phe Val Leu Arg Lys
675 680 685
Leu Tyr Val Phe Arg Arg Ser Phe Leu Met Thr Arg Ile Ser Leu Arg
690 695 700
Asn Leu Leu Leu Gly Arg Pro Ser Leu Glu Gln Leu Ala Gln Glu Val
705 710 715 720
Thr Tyr Ala Asn Leu Arg Pro Phe Glu Pro Val Asp Glu Ser Ser Ala
725 730 735
Ser Asn Thr Asp Ser Ser Asn His Pro Ser Glu Pro Asp Ser Glu His
740 745 750
Val His Ser Glu Phe
755
<210>14
<211>1223
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(84)..(1034)
<400>14
gggatccttg agtcctactc agccccagcg gaggtgaagg acgtccttcc ccaggagccg60
actggccaat cacaggcagg aag atg aag gtt ctg tgg gct gcg ttg ctg gtc 113
Met Lys Val Leu Trp Ala Ala Leu Leu Val
1 5 10
aca ttc ctg gca gga tgc cag gcc aag gtg gag caa gcg gtg gag aca161
Thr Phe Leu Ala Gly Cys Gln Ala Lys Val Glu Gln Ala Val Glu Thr
15 20 25
gag ccg gag ccc gag ctg cgc cag cag acc gag tgg cag agc ggc cag209
Glu Pro Glu Pro Glu Leu Arg Gln Gln Thr Glu Trp Gln Ser Gly Gln
30 35 40
cgc tgg gaa ctg gca ctg ggt cgc ttt tgg gat tac ctg cgc tgg gtg257
Arg Trp Glu Leu Ala Leu Gly Arg Phe Trp Asp Tyr Leu Arg Trp Val
45 50 55
cag aca ctg tct gag cag gtg cag gag gag ctg ctc agc tcc cag gtc305
Gln Thr Leu Ser Glu Gln Val Gln Glu Glu Leu Leu Ser Ser Gln Val
60 65 70
acc cag gaa ctg agg gcg ctg atg gac gag acc atg aag gag ttg aag353
Thr Gln Glu Leu Arg Ala Leu Met Asp Glu Thr Met Lys Glu Leu Lys
75 80 85 90
gcc tac aaa tcg gaa ctg gag gaa caa ctg acc ccg gtg gcg gag gag401
Ala Tyr Lys Ser Glu Leu Glu Glu Gln Leu Thr Pro Val Ala Glu Glu
95 100 105
acg cgg gca cgg ctg tcc aag gag ctg cag gcg gcg cag gcc cgg ctg449
Thr Arg Ala Arg Leu Ser Lys Glu Leu Gln Ala Ala Gln Ala Arg Leu
110 115 120
ggc gcg gac atg gag gac gtg tgc ggc cgc ctg gtg cag tac cgc ggc497
Gly Ala Asp Met Glu Asp Val Cys Gly Arg Leu Val Gln Tyr Arg Gly
125 130 135
gag gtg cag gcc atg ctc ggc cag agc acc gag gag ctg cgg gtg cgc545
Glu Val Gln Ala Met Leu Gly Gln Ser Thr Glu Glu Leu Arg Val Arg
140 145 150
ctc gcc tcc cac ctg cgc aag ctg cgt aag cgg ctc ctc cgc gat gcc593
Leu Ala Ser His Leu Arg Lys Leu Arg Lys Arg Leu Leu Arg Asp Ala
155 160 165 170
gat gac ctg cag aag cgc ctg gca gtg tac cag gcc ggg gcc cgc gag641
Asp Asp Leu Gln Lys Arg Leu Ala Val Tyr Gln Ala Gly Ala Arg Glu
175 180 185
ggc gcc gag cgc ggc ctc agc gcc atc cgc gag cgc ctg ggg ccc ctg689
Gly Ala Glu Arg Gly Leu Ser Ala Ile Arg Glu Arg Leu Gly Pro Leu
190 195 200
gtg gaa cag ggc cgc gtg cgg gcc gcc act gtg ggc tcc ctg gcc ggc737
Val Glu Gln Gly Arg Val Arg Ala Ala Thr Val Gly Ser Leu Ala Gly
205 210 215
cag ccg cta cag gag cgg gcc cag gcc tgg ggc gag cgg ctg cgc gcg785
Gln Pro Leu Gln Glu Arg Ala Gln Ala Trp Gly Glu Arg Leu Arg Ala
220 225 230
cgg atg gag gag atg ggc agc cgg acc cgc gac cgc ctg gac gag gtg833
Arg Met Glu Glu Met Gly Ser Arg Thr Arg Asp Arg Leu Asp Glu Val
235 240 245 250
aag gag cag gtg gcg gag gtg cgc gcc aag ctg gag gag cag gcc cag881
Lys Glu Gln Val Ala Glu Val Arg Ala Lys Leu Glu Glu Gln Ala Gln
255 260 265
cag ata cgc ctg cag gcc gag gcc ttc cag gcc cgc ctc aag agc tgg929
Gln Ile Arg Leu Gln Ala Glu Ala Phe Gln Ala Arg Leu Lys Ser Trp
270 275 280
ttc gag ccc ctg gtg gaa gac atg cag cgc cag tgg gcc ggg ctg gtg977
Phe Glu Pro Leu Val Glu Asp Met Gln Arg Gln Trp Ala Gly Leu Val
285 290 295
gag aag gtg cag gct gcc gtg ggc acc agc gcc gcc cct gtg ccc agc1025
Glu Lys Val Gln Ala Ala Val Gly Thr Ser Ala Ala Pro Val Pro Ser
300 305 310
gac aat cac tgaacgccga agcctgcagc catgcgaccc cacgccaccc1074
Asp Asn His
315
cgtgcctcct gcctccgcgc agcctgcagc gggagaccct gtccccgccc cagccgtcct 1134
cctggggtgg accctagttt aataaagatt caccaagttt cacgcaaaaa aaaaaaaaaa 1194
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaa1223
<210>15
<211>317
<212>PRT
<213>人
<400>15
Met Lys Val Leu Trp Ala Ala Leu Leu Val Thr Phe Leu Ala Gly Cys
1 5 10 15
Gln Ala Lys Val Glu Gln Ala Val Glu Thr Glu Pro Glu Pro Glu Leu
20 25 30
Arg Gln Gln Thr Glu Trp Gln Ser Gly Gln Arg Trp Glu Leu Ala Leu
35 40 45
Gly Arg Phe Trp Asp Tyr Leu Arg Trp Val Gln Thr Leu Ser Glu Gln
50 55 60
Val Gln Glu Glu Leu Leu Ser Ser Gln Val Thr Gln Glu Leu Arg Ala
65 70 75 80
Leu Met Asp Glu Thr Met Lys Glu Leu Lys Ala Tyr Lys Ser Glu Leu
85 90 95
Glu Glu Gln Leu Thr Pro Val Ala Glu Glu Thr Arg Ala Arg Leu Ser
100 105 110
Lys Glu Leu Gln Ala Ala Gln Ala Arg Leu Gly Ala Asp Met Glu Asp
115 120 125
Val Cys Gly Arg Leu Val Gln Tyr Arg Gly Glu Val Gln Ala Met Leu
130 135 140
Gly Gln Ser Thr Glu Glu Leu Arg Val Arg Leu Ala Ser His Leu Arg
145 150 155 160
Lys Leu Arg Lys Arg Leu Leu Arg Asp Ala Asp Asp Leu Gln Lys Arg
165 170 175
Leu Ala Val Tyr Gln Ala Gly Ala Arg Glu Gly Ala Glu Arg Gly Leu
180 185 190
Ser Ala Ile Arg Glu Arg Leu Gly Pro Leu Val Glu Gln Gly Arg Val
195 200 205
Arg Ala Ala Thr Val Gly Ser Leu Ala Gly Gln Pro Leu Gln Glu Arg
210 215 220
Ala Gln Ala Trp Gly Glu Arg Leu Arg Ala Arg Met Glu Glu Met Gly
225 230 235 240
Ser Arg Thr Arg Asp Arg Leu Asp Glu Val Lys Glu Gln Val Ala Glu
245 250 255
Val Arg Ala Lys Leu Glu Glu Gln Ala Gln Gln Ile Arg Leu Gln Ala
260 265 270
Glu Ala Phe Gln Ala Arg Leu Lys Ser Trp Phe Glu Pro Leu Val Glu
275 280 285
Asp Met Gln Arg Gln Trp Ala Gly Leu Val Glu Lys Val Gln Ala Ala
290 295 300
Val Gly Thr Ser Ala Ala Pro Val Pro Ser Asp Asn His
305 310 315
<210>16
<211>1104
<212>DNA
<213>小鼠
<220>
<221>CDS
<222>(46)..(978)
<400>16
ggacttgttt cggaaggagc tgactggcca atcacaattg cgaag atg aag gct ctg 57
Met Lys Ala Leu
1
tgg gcc gtg ctg ttg gtc aca ttg ctg aca gga tgc cta gcc gag gga105
Trp Ala Val Leu Leu Val Thr Leu Leu Thr Gly Cys Leu Ala Glu Gly
5 10 15 20
gag ccg gag gtg aca gat cag ctc gag tgg caa agc aac caa ccc tgg153
Glu Pro Glu Val Thr Asp Gln Leu Glu Trp Gln Ser Asn Gln Pro Trp
25 30 35
gag cag gcc ctg aac cgc ttc tgg gat tac ctg cgc tgg gtg cag acg201
Glu Gln Ala Leu Asn Arg Phe Trp Asp Tyr Leu Arg Trp Val Gln Thr
40 45 50
ctg tct gac cag gtc cag gaa gag ctg cag agc tcc caa gtc aca caa249
Leu Ser Asp Gln Val Gln Glu Glu Leu Gln Ser Ser Gln Val Thr Gln
55 60 65
gaa ctg acg gca ctg atg gag gac act atg acg gaa gta aag gct tac297
Glu Leu Thr Ala Leu Met Glu Asp Thr Met Thr Glu Val Lys Ala Tyr
70 75 80
aaa aag gag ctg gag gaa cag ctg ggt cca gtg gcg gag gag aca cgg345
Lys Lys Glu Leu Glu Glu Gln Leu Gly Pro Val Ala Glu Glu Thr Arg
85 90 95 100
gcc agg ctg ggc aaa gag gtg cag gcg gca cag gcc cga ctc gga gcc393
Ala Arg Leu Gly Lys Glu Val Gln Ala Ala Gln Ala Arg Leu Gly Ala
105 110 115
gac atg gag gat cta cgc aac cga ctc ggg cag tac cgc aac gag gtg441
Asp Met Glu Asp Leu Arg Asn Arg Leu Gly Gln Tyr Arg Asn Glu Val
120 125 130
cac acc atg ctg ggc cag agc aca gag gag ata cgg gcg cgg ctc tcc489
His Thr Met Leu Gly Gln Ser Thr Glu Glu Ile Arg Ala Arg Leu Ser
135 140 145
aca cac ctg cgc aag atg cgc aag cgc ttg atg cgg gat gcc gat gat537
Thr His Leu Arg Lys Met Arg Lys Arg Leu Met Arg Asp Ala Asp Asp
150 155 160
ctg cag aag cgc cta gct gtg tac aag gca ggg gca cgc gag ggc gcc585
Leu Gln Lys Arg Leu Ala Val Tyr Lys Ala Gly Ala Arg Glu Gly Ala
165 170 175 180
gag cgc ggt gtg agt gcc atc cgt gag cgc ctg ggg cct ctg gtg gag633
Glu Arg Gly Val Ser Ala Ile Arg Glu Arg Leu Gly Pro Leu Val Glu
185 190 195
caa ggt cgc cag cgc act gcc aac cta ggc gct ggg gcc gcc cag cct681
Gln Gly Arg Gln Arg Thr Ala Asn Leu Gly Ala Gly Ala Ala Gln Pro
200 205 210
ctg cgc gat cgc gcc cag gct ttt ggt gac cgc atc cga ggg cgg ctg729
Leu Arg Asp Arg Ala Gln Ala Phe Gly Asp Arg Ile Arg Gly Arg Leu
215 220 225
gag gaa gtg ggc aac cag gcc cgt gac cgc cta gag gag gtg cgt gag777
Glu Glu Val Gly Asn Gln Ala Arg Asp Arg Leu Glu Glu Val Arg Glu
230 235 240
cac atg gag gag gtg cgc tcc aag atg gag gaa cag acc cag caa ata825
His Met Glu Glu Val Arg Ser Lys Met Glu Glu Gln Thr Gln Gln Ile
245 250 255 260
cgc ctg cag gcg gag atc ttc cag gcc cgc ctc aag ggc tgg ttc gag873
Arg Leu Gln Ala Glu Ile Phe Gln Ala Arg Leu Lys Gly Trp Phe Glu
265 270 275
cca ata gtg gaa gac atg cat cgc cag tgg gca aac ctg atg gag aag921
Pro Ile Val Glu Asp Met His Arg Gln Trp Ala Asn Leu Met Glu Lys
280 285 290
ata cag gcc tct gtg gct acc aac ccc atc atc acc cca gtg gcc cag969
Ile Gln Ala Ser Val Ala Thr Asn Pro Ile Ile Thr Pro Val Ala Gln
295 300 305
gag aatcaa tgagtatcct tctcctgtcc tgcaacaaca tccatatcca 1018
Glu Asn Gln
310
gccaggtggc cctgtctcaa gcacctctct ggccctctgg tggcccttgc ttaataaaga 1078
ttctccgagc aaaaaaaaaa aaaaaa 1104
<210>17
<211>311
<212>PRT
<213>小鼠
<400>17
Met Lys Ala Leu Trp Ala Val Leu Leu Val Thr Leu Leu Thr Gly Cys
1 5 10 15
Leu Ala Glu Gly Glu Pro Glu Val Thr Asp Gln Leu Glu Trp Gln Ser
20 25 30
Asn Gln Pro Trp Glu Gln Ala Leu Asn Arg Phe Trp Asp Tyr Leu Arg
35 40 45
Trp Val Gln Thr Leu Ser Asp Gln Val Gln Glu Glu Leu Gln Ser Ser
50 55 60
Gln Val Thr Gln Glu Leu Thr Ala Leu Met Glu Asp Thr Met Thr Glu
65 70 75 80
Val Lys Ala Tyr Lys Lys Glu Leu Glu Glu Gln Leu Gly Pro Val Ala
85 90 95
Glu Glu Thr Arg Ala Arg Leu Gly Lys Glu Val Gln Ala Ala Gln Ala
100 105 110
Arg Leu Gly Ala Asp Met Glu Asp Leu Arg Asn Arg Leu Gly Gln Tyr
115 120 125
Arg Asn Glu Val His Thr Met Leu Gly Gln Ser Thr Glu Glu Ile Arg
130 135 140
Ala Arg Leu Ser Thr His Leu Arg Lys Met Arg Lys Arg Leu Met Arg
145 150 155 160
Asp Ala Asp Asp Leu Gln Lys Arg Leu Ala Val Tyr Lys Ala Gly Ala
165 170 175
Arg Glu Gly Ala Glu Arg Gly Val Ser Ala Ile Arg Glu Arg Leu Gly
180 185 190
Pro Leu Val Glu Gln Gly Arg Gln Arg Thr Ala Asn Leu Gly Ala Gly
195 200 205
Ala Ala Gln Pro Leu Arg Asp Arg Ala Gln Ala Phe Gly Asp Arg Ile
210 215 220
Arg Gly Arg Leu Glu Glu Val Gly Asn Gln Ala Arg Asp Arg Leu Glu
225 230 235 240
Glu Val Arg Glu His Met Glu Glu Val Arg Ser Lys Met Glu Glu Gln
245 250 255
Thr Gln Gln Ile Arg Leu Gln Ala Glu Ile Phe Gln Ala Arg Leu Lys
260 265 270
Gly Trp Phe Glu Pro Ile Val Glu Asp Met His Arg Gln Trp Ala Asn
275 280 285
Leu Met Glu Lys Ile Gln Ala Ser Val Ala Thr Asn Pro Ile Ile Thr
290 295 300
Pro Val Ala Gln Glu Asn Gln
305 310
<210>18
<2ll>5555
<212>DNA
<213>小鼠
<220>
<221>CDS
<222>(316)..(5430)
<400>18
ggctgtggga gagcagaaga ggagctggaa gagcagccta caacagctgt cgggagggac60
cagggctagt tcacacttgg aagctgggat gccaggaccg gccctcctgc ctctctcggt120
ctccatcggc ctcctggtca gctcactcca cactgagacg attctgaagt aagatgctcc180
tggctcctca cagactctgc tacaagagac agagtgaagt gtccccaggg ctcagagcct240
ttgactctgc tccttccctt cccacggctg agttggcaca ggagcacctg ggtgagctgc300
accagactta agaag atg agg ccc ctg att ctg tta gct gcc ctc ctc tgg 351
Met Arg Pro Leu Ile Leu Leu Ala Ala Leu Leu Trp
1 5 10
ctc cag gac tct ttg gcc cag gaa gat gta tgc tca tcc ttg gat ggg 399
Leu Gln Asp Ser Leu Ala Gln Glu Asp Val Cys Ser Ser Leu Asp Gly
15 20 25
agc cca gac agg cag ggt gga ggt cca cct ctg agt gtg aac gtc agc 447
Ser Pro Asp Arg Gln Gly Gly Gly Pro Pro Leu Ser Val Asn Val Ser
30 35 40
agc cgc gga aag cct acc agc ctg ttt ctg agc tgg gta gct gca gag 495
Ser Arg Gly Lys Pro Thr Ser Leu Phe Leu Ser Trp Val Ala Ala Glu
45 50 55 60
cca ggt gga ttt gac tat gcc ctc tgc ctc agg gct atg aac ttg tcg 543
Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Ala Leu Cys Leu Arg Ala Met Asn Leu Ser
65 70 75
ggt ttt cca gaa ggg caa cag ctc caa gct cat acc aac gag tcc agc 591
Gly Phe Pro Glu Gly Gln Gln Leu Gln Ala His Thr Asn Glu Ser Ser
80 85 90
ttt gag ttc cat ggc ctg gtg cca ggg agt cgc tac cag ctg gaa ctg 639
Phe Glu Phe His Gly Leu Val Pro Gly Ser Arg Tyr Gln Leu Glu Leu
95 100 105
act gtc cta aga ccc tgt tgg cag aat gtc aca att acc ctc act gct 687
Thr Val Leu Arg Pro Cys Trp Gln Asn Val Thr Ile Thr Leu Thr Ala
110 115 120
cga act gcc cct aca gtg gtc cgt gga ctg caa ctg cat agc act ggg 735
Arg Thr Ala Pro Thr Val Val Arg Gly Leu Gln Leu His Ser Thr Gly
125 130 135 140
agc cca gcc agc ctg gaa gcc tca tgg agc gat gcc tct ggg gat caa 783
Ser Pro Ala Ser Leu Glu Ala Ser Trp Ser Asp Ala Ser Gly Asp Gln
145 150 155
gac agc tat caa ctt ctc ctc tac cac ccg gaa tcc cac act ctg gca 831
Asp Ser Tyr Gln Leu Leu Leu Tyr His Pro Glu Ser His Thr Leu Ala
160 165 170
tgt aat gtc tct gtg tcc cct gac acc ctg tct tac aat ttt ggt gac879
Cys Asn Val Ser Val Ser Pro Asp Thr Leu Ser Tyr Asn Phe Gly Asp
175 180 185
ctc ttg cca ggt agt cag tat gtc ttg gag gtt atc acc tgg gct ggc927
Leu Leu Pro Gly Ser Gln Tyr Val Leu Glu Val Ile Thr Trp Ala Gly
190 195 200
agt ctc cat gcg aag act agc atc ctc caa tgg aca gag cct gtc cct975
Ser Leu His Ala Lys Thr Ser Ile Leu Gln Trp Thr Glu Pro Val Pro
205 210 215 220
cct gat cac cta aca ctg cgt gcc ttg ggt acc agt agc ctg caa gcc1023
Pro Asp His Leu Thr Leu Arg Ala Leu Gly Thr Ser Ser Leu Gln Ala
225 230 235
ttc tgg aac agc tct gaa ggg gcc acc tgg ttt cac ctg ata ctt aca1071
Phe Trp Asn Ser Ser Glu Gly Ala Thr Trp Phe His Leu Ile Leu Thr
240 245 250
gac ctc cta gag ggt acc aac ctg acc aaa gtg gtc aga caa ggc atc1119
Asp Leu Leu Glu Gly Thr Asn Leu Thr Lys Val Val Arg Gln Gly Ile
255 260 265
tca acc cac acc ttc ctt cgc ctg tct ccg ggt aca cct tac cag ctg1167
Ser Thr His Thr Phe Leu Arg Leu Ser Pro Gly Thr Pro Tyr Gln Leu
270 275 280
aag atc tgt gct gct gct ggg ccc cac cag att tgg gga ccc aat gcc1215
Lys Ile Cys Ala Ala Ala Gly Pro His Gln Ile Trp Gly Pro Asn Ala
285 290 295 300
act gag tgg acc tat ccc tct tac cca tct gac ctg gtg ctg acc ccc1263
Thr Glu Trp Thr Tyr Pro Ser Tyr Pro Ser Asp Leu Val Leu Thr Pro
305 310 315
tta tgg aat gag ctc tgg gca agc tgg aag gca ggg cag gga gcc cgg1311
Leu Trp Asn Glu Leu Trp Ala Ser Trp Lys Ala Gly Gln Gly Ala Arg
320 325 330
gat ggc tat gta ctg aag tta agt ggg cca gtg gag aat aca act act1359
Asp Gly Tyr Val Leu Lys Leu Ser Gly Pro Val Glu Asn Thr Thr Thr
335 340 345
ctg ggt cct gag gag tgc aac gct gtc ttc cca ggg ccc ctg cct cca1407
Leu Gly Pro Glu Glu Cys Asn Ala Val Phe Pro Gly Pro Leu Pro Pro
350 355 360
gga cac tac act ttg ggg ctg agg gtt cta gct gga cct tat gat gcc1455
Gly His Tyr Thr Leu Gly Leu Arg Val Leu Ala Gly Pro Tyr Asp Ala
365 370 375 380
tgg gta gag ggc agt atc tgg ctg gct gaa tct gct gct cgt ccc atg1503
Trp Val Glu Gly Ser Ile Trp Leu Ala Glu Ser Ala Ala Arg Pro Met
385 390 395
gag gtc cct ggt gcc aga ctg tgg cta gaa gga ctg gaa gct act aag1551
Glu Val Pro Gly Ala Arg Leu Trp Leu Glu Gly Leu Glu Ala Thr Lys
400 405 410
caa cct ggg aga cgg gcg ctg ctc tat tct gtt gat gcc cca ggc ctc1599
Gln Pro Gly Arg Arg Ala Leu Leu Tyr Ser Val Asp Ala Pro Gly Leu
415 420 425
cta ggg aac atc tct gtg tct tct ggt gcc act cat gtc acc ttc tgt1647
Leu Gly Asn Ile Ser Val Ser Ser Gly Ala Thr His Val Thr Phe Cys
430 435 440
ggc ttg gta ccc gga gcg cac tac agg gtg gac att gcc tca tcc atg1695
Gly Leu Val Pro Gly Ala His Tyr Arg Val Asp Ile Ala Ser Ser Met
445 450 455 460
gga gac atc act cag agc ctc aca ggc tac aca agt ccc ctg cca cca1743
Gly Asp Ile Thr Gln Ser Leu Thr Gly Tyr Thr Ser Pro Leu Pro Pro
465 470 475
cag tct ctg gag atc atc agc cgg aac agc cca tct gac ctg act atc1791
Gln Ser Leu Glu Ile Ile Ser Arg Asn Ser Pro Ser Asp Leu Thr Ile
480 485 490
ggt tgg gct cca gca cca ggg cag atg gaa ggt tat aag gtc acc tgg1839
Gly Trp Ala Pro Ala Pro Gly Gln Met Glu Gly Tyr Lys Val Thr Trp
495 500 505
cat cag gat ggc agc cag agg tca cct ggc gac ctt gtt gac ttg ggc1887
His Gln Asp Gly Ser Gln Arg Ser Pro Gly Asp Leu Val Asp Leu Gly
510 515 520
cct gac att tcg agc ctg act ctg aaa tct ctg gta cct ggt tcc tgc1935
Pro Asp Ile Ser Ser Leu Thr Leu Lys Ser Leu Val Pro Gly Ser Cys
525 530 535 540
tac acc gtg tca gca tgg gcc tgg tct ggg aac ctc agc tct gac tct1983
Tyr Thr Val Ser Ala Trp Ala Trp Ser Gly Asn Leu Ser Ser Asp Ser
545 550 555
cag aag att cac agt tgc acc cgt ccc gct cct ccc acc aac ctg agc2031
Gln Lys Ile His Ser Cys Thr Arg Pro Ala Pro Pro Thr Asn Leu Ser
560 565 570
ctg ggc ttt gcc cac cag cct gca aca ctg agg gct tcc tgg tgt cac2079
Leu Gly Phe Ala His Gln Pro Ala Thr Leu Arg Ala Ser Trp Cys His
575 580 585
cca ccg ggt ggc agg gat gcc ttt cag tta cgg ctt tac agg ctg agg2127
Pro Pro Gly Gly Arg Asp Ala Phe Gln Leu Arg Leu Tyr Arg Leu Arg
590 595 600
ccc ctg aca ctg gaa agt gag aag atc cta tcc cag gag gcc cag aac2175
Pro Leu Thr Leu Glu Ser Glu Lys Ile Leu Ser Gln Glu Ala Gln Asn
605 610 615 620
ttc tcc tgg gcc cag ctg cct gca ggc tat gaa ttc cag gta cag ctg2223
Phe Ser Trp Ala Gln Leu Pro Ala Gly Tyr Glu Phe Gln Val Gln Leu
625 630 635
tct acc ttg tgg ggg tcg gag gag agc ggc agt gcc aac acc aca ggc2271
Ser Thr Leu Trp Gly Ser Glu Glu Ser Gly Ser Ala Asn Thr Thr Gly
640 645 650
tgg aca ccc ccc tca gct cct aca ttg gta aat gtg acc agt gaa gcc2319
Trp Thr Pro Pro Ser Ala Pro Thr Leu Val Asn Val Thr Ser Glu Ala
655 660 665
ccc acc cag ctc cac gta tcc tgg gtc cac gct gct ggg gac cgg agc2367
Pro Thr Gln Leu His Val Ser Trp Val His Ala Ala Gly Asp Arg Ser
670 675 680
agc tac caa gtg acc cta tac cag gag agc act cgg aca gcc acc agc2415
Ser Tyr Gln Val Thr Leu Tyr Gln Glu Ser Thr Arg Thr Ala Thr Ser
685 690 695 700
att gtg ggg ccc aag gca gac agc aca agc ttt tgg ggt ttg act cct2463
Ile Val Gly Pro Lys Ala Asp Ser Thr Ser Phe Trp Gly Leu Thr Pro
705 710 715
ggc act aag tac aag gtg gaa gcc atc tcc tgg gct ggg ccc ctt tac2511
Gly Thr Lys Tyr Lys Val Glu Ala Ile Ser Trp Ala Gly Pro Leu Tyr
720 725 730
act gca gca gcc aac gtt tct gct tgg acc tac cca ctc aca ccc aat2559
Thr Ala Ala Ala Asn Val Ser Ala Trp Thr Tyr Pro Leu Thr Pro Asn
735 740 745
gag ctg ctc gcc tct atg cag gca ggc agt gct gtg gtt aac ctg gcc2607
Glu Leu Leu Ala Ser Met Gln Ala Gly Ser Ala Val Val Asn Leu Ala
750 755 760
tgg ccc agt ggt ccc ttg ggg caa ggg aca tgc cat gcc caa ctc tca2655
Trp Pro Ser Gly Pro Leu Gly Gln Gly Thr Cys His Ala Gln Leu Ser
765 770 775 780
gat gct gga cac ctt tca tgg gag caa ccg ctg tcg cta ggc caa gac2703
Asp Ala Gly His Leu Ser Trp Glu Gln Pro Leu Ser Leu Gly Gln Asp
785 790 795
ctc ctc atg cta agg aat ctt ata cca gga cat acg gtt tca ttg tct2751
Leu Leu Met Leu Arg Asn Leu Ile Pro Gly His Thr Val Ser Leu Ser
800 805 810
gtg aag tgt cgg gca gga cca ctc cag gcc tcc act cac ccc ctg gtg2799
Val Lys Cys Arg Ala Gly Pro Leu Gln Ala Ser Thr His Pro Leu Val
815 820 825
ctg tct gta gag cct ggc cct gtg gaa gat gtg ttc tgt caa cct gag2847
Leu Ser Val Glu Pro Gly Pro Val Glu Asp Val Phe Cys Gln Pro Glu
830 835 840
gcc acc tac ctg tcc ctg aac tgg acg atg cct act gga gat gtg gct2895
Ala Thr Tyr Leu Ser Leu Asn Trp Thr Met Pro Thr Gly Asp Val Ala
845 850 855 860
gtc tgt ctg gtg gag gta gag cag ctg gtg cca gga ggg agc gct cat2943
Val Cys Leu Val Glu Val Glu Gln Leu Val Pro Gly Gly Ser Ala His
865 870 875
ttt gtc ttc cag gtc aac acc tcg gag gat gca ctt ctg ctg ccc aac2991
Phe Val Phe Gln Val Asn Thr Ser Glu Asp Ala Leu Leu Leu Pro Asn
880 885 890
ttg acg ccc acc act tct tac cgc ctt agc ctc act gtg ctg ggt ggg3039
Leu Thr Pro Thr Thr Ser Tyr Arg Leu Ser Leu Thr Val Leu Gly Gly
895 900 905
aat cgc cag tgg agc cgg gcg gtt acc ctg gtg tgc act act tct gct3087
Asn Arg Gln Trp Ser Arg Ala Val Thr Leu Val Cys Thr Thr Ser Ala
910 915 920
gag gtt tgg cac ccc cca gag cta gct gag gcc ccc cag gtg gag ctg3135
Glu Val Trp His Pro Pro Glu Leu Ala Glu Ala Pro Gln Val Glu Leu
925 930 935 940
ggg aca ggg atg ggt gtg aca gtc aca cgt ggc atg ttt ggt aaa gat3183
Gly Thr Gly Met Gly Val Thr Val Thr Arg Gly Met Phe Gly Lys Asp
945 950 955
gac ggg cag atc cag tgg tat ggc ata att gcc acc atc aac atg aca3231
Asp Gly Gln Ile Gln Trp Tyr Gly Ile Ile Ala Thr Ile Asn Met Thr
960 965 970
ctg gcc cag cct tcc cag gaa gcc atc aac cac aca tgg tat gac cac3279
Leu Ala Gln Pro Ser Gln Glu Ala Ile Asn His Thr Trp Tyr Asp His
975 980 985
tac tat aga gga cat gac tcc tac ctg gct ctc ctg ttc cca aac ccc3327
Tyr Tyr Arg Gly His Asp Ser Tyr Leu Ala Leu Leu Phe Pro Asn Pro
990 995 1000
ttc tac cca gag cct tgg gct gtg cca aga tcc tgg aca gta cct3372
Phe Tyr Pro Glu Pro Trp Ala Val Pro Arg Ser Trp Thr Val Pro
100510101015
gtg ggt aca gag gac tgt gac aac acc cag gag ata tgc aat ggg3417
Val Gly Thr Glu Asp Cys Asp Asn Thr Gln Glu Ile Cys Asn Gly
102010251030
cat ctc aag cca ggc ttc cag tat agg ttc agc att gca gcc ttt3462
His Leu Lys Pro Gly Phe Gln Tyr Arg Phe Ser Ile Ala Ala Phe
103510401045
agt agg ctc agc tct cca gag acc atc ctg gcc ttc tcc gcc ttc3507
Ser Arg Leu Ser Ser Pro Glu Thr Ile Leu Ala Phe Ser Ala Phe
105010551060
tca gag cct cag gct agc atc tct ctg gtg gcc atg ccc ctg aca3552
Ser Glu Pro Gln Ala Ser Ile Ser Leu Val Ala Met Pro Leu Thr
106510701075
gtt atg atg ggg act gtg gtg ggc tgc atc atc att gtg tgt gca3597
Val Met Met Gly Thr Val Val Gly Cys Ile Ile Ile Val Cys Ala
108010851090
gtg cta tgc ttg ttg tgc cgg cgg cgc ctg aag gga cca aggtca3642
Val Leu Cys Leu Leu Cys Arg Arg Arg Leu Lys Gly Pro Arg Ser
10951100 1105
gag aag aat ggc ttt tcc cag gag ttg atg cct tac aac ctg tgg3687
Glu Lys Asn Gly Phe Ser Gln Glu Leu Met Pro Tyr Asn Leu Trp
111011151120
cgg acc cat cgg ccc atc ccc agc cat agc ttc cgg cag agc tat3732
Arg Thr His Arg Pro Ile Pro Ser His Ser Phe Arg Gln Ser Tyr
112511301135
gag gcc aag agt gca cgt gca cac cag gcc ttc ttc cag gaa ttt3777
Glu Ala Lys Ser Ala Arg Ala His Gln Ala Phe Phe Gln Glu Phe
114011451150
gag gag ctg aag gag gtg ggc aag gac cag ccc aga cta gag gct3822
Glu Glu Leu Lys Glu Val Gly Lys Asp Gln Pro Arg Leu Glu Ala
115511601165
gag cat cct gcc aac atc acc aag aac cgg tac cca cac gtg cta3867
Glu His Pro Ala Asn Ile Thr Lys Asn Arg Tyr Pro His Val Leu
117011751180
cct tat gac cac tcc agg gtc agg ctg acc cag cta tca gga gag3912
Pro Tyr Asp His Ser Arg Val Arg Leu Thr Gln Leu Ser Gly Glu
118511901195
cct cat tct gac tac atc aat gcc aac ttc atc cca ggc tat agc3957
Pro His Ser Asp Tyr Ile Asn Ala Asn Phe Ile Pro Gly Tyr Ser
120012051210
cac cca cag gag atc att gcc acc cag ggg cct ctc aaa aag acg4002
His Pro Gln Glu Ile Ile Ala Thr Gln Gly Pro Leu Lys Lys Thr
121512201225
gtc gag gac ttc tgg cgg ttg gtg tgg gag cag caa gtc cac gtg4047
Val Glu Asp Phe Trp Arg Leu Val Trp Glu Gln Gln Val His Val
123012351240
atc atc atg cta act gtg ggc atg gag aat ggg cgg gta ctg tgt4092
Ile Ile Met Leu Thr Val Gly Met Glu Asn Gly Arg Val Leu Cys
124512501255
gag cac tac tgg cca gtc aac tcc acg cct gtc acc cac ggt cac4137
Glu His Tyr Trp Pro Val Asn Ser Thr Pro Val Thr His Gly His
126012651270
atc acc acc cac ctc ctg gca gag gaa tct gag gac gag tgg acc4182
Ile Thr Thr His Leu Leu Ala Glu Glu Ser Glu Asp Glu Trp Thr
127512801285
agg agg gaa ttc cag ctg cag cac ggt gca gag caa aaa cag agg4227
Arg Arg Glu Phe Gln Leu Gln His Gly Ala Glu Gln Lys Gln Arg
129012951300
cgc gtg aag cag ctg cag ttc acg acc tgg cca gac cac agt gtc4272
Arg Val Lys Gln Leu Gln Phe Thr Thr Trp Pro Asp His Ser Val
130513101315
ccc gag gct ccc agc tct ctg ctc gct ttt gtg gaa ctg gtg cag4317
Pro Glu Ala Pro Ser Ser Leu Leu Ala Phe Val Glu Leu Val Gln
132013251330
gag gag gtg aag gca act cag ggc aag ggg ccc atc ctg gtg cat4362
Glu Glu Val Lys Ala Thr Gln Gly Lys Gly Pro Ile Leu Val His
133513401345
tgc agt gcg ggt gtg ggc agg aca ggc acc ttt gtg gct ctc tta4407
Cys Ser Ala Gly Val Gly Arg Thr Gly Thr Phe Val Ala Leu Leu
135013551360
ccg gct gtt cga caa cta gag gaa gaa cag gtg gtc gat gtg ttc4452
Pro Ala Val Arg Gln Leu Glu Glu Glu Gln Val Val Asp Val Phe
136513701375
aac act gtg tac ata ctc cgg ctg cac cgg ccc ctc atg atc cag4497
Asn Thr Val Tyr Ile Leu Arg Leu His Arg Pro Leu Met Ile Gln
138013851390
acc ttg agt caa tac atc ttc ctg cac agc tgc ctg ctg aac aag4542
Thr Leu Ser Gln Tyr Ile Phe Leu His Ser Cys Leu Leu Asn Lys
139514001405
att ctg gaa ggg ccc tct gac gcc tca gac tcc ggc ccc atc cct4587
Ile Leu Glu Gly Pro Ser Asp Ala Ser Asp Ser Gly Pro Ile Pro
141014151420
gtg atg aat ttt gca caa gct tgt gcc aag agg gca gcc aat gcc4632
Val Met Asn Phe Ala Gln Ala Cys Ala Lys Arg Ala Ala Asn Ala
142514301435
aat gcc ggt ttc ttg aag gag tac agg ctc ctg aag cag gcc atc4677
Asn Ala Gly Phe Leu Lys Glu Tyr Arg Leu Leu Lys Gln Ala Ile
144014451450
aag gat gag act ggc tct ctg ctg ccc tct cct gac tat aat cag4722
Lys Asp Glu Thr Gly Ser Leu Leu Pro Ser Pro Asp Tyr Asn Gln
145514601465
aac agc atc gcc tcc tgt cat cat tct cag gag cag ttg gcc ctg4767
Asn Ser Ile Ala Ser Cys His His Ser Gln Glu Gln Leu Ala Leu
147014751480
gtg gag gag agc cct gct gat aac atg ctg gca gcc tcg ctc ttc4812
Val Glu Glu Ser Pro Ala Asp Asn Met Leu Ala Ala Ser Leu Phe
148514901495
cct ggt ggg ccg tct ggt cgc gac cat gtg gtg ctg act ggc tcg4857
Pro Gly Gly Pro Ser Gly Arg Asp His Val Val Leu Thr Gly Ser
150015051510
gcc gga cca aag gaa ctc tgg gaa atg gtg tgg gaa cat ggc gcc4902
Ala Gly Pro Lys Glu Leu Trp Glu Met Val Trp Glu His Gly Ala
151515201525
tat gtg ctt gtc tcc ctg ggt ctg cct gat acc aag gag aag cca4947
Tyr Val Leu Val Ser Leu Gly Leu Pro Asp Thr Lys Glu Lys Pro
153015351540
caa gac atc tgg cca atg gag atg cag cct att gtc aca gac atg4992
Gln Asp Ile Trp Pro Met Glu Met Gln Pro Ile Val Thr Asp Met
154515501555
gtg aca gtg cac aga gtg gct gag agc aac aca gct ggc tgg ccc5037
Val Thr Val His Arg Val Ala Glu Ser Asn Thr Ala Gly Trp Pro
156015651570
agt acc ctc atc aga gtt ata cat ggg gac agt ggg acg gaa agg5082
Ser Thr Leu Ile Arg Val Ile His Gly Asp Ser Gly Thr Glu Arg
157515801585
cag gtt caa tgc ctg cag ttt cca cac tgc gag act ggg agt gag 5127
Gln Val Gln Cys Leu Gln Phe Pro His Cys Glu Thr Gly Ser Glu
159015951600
ctc cca gct aac acc cta ctg acc ttc ctt gat gct gtg ggc cag 5172
Leu Pro Ala Asn Thr Leu Leu Thr Phe Leu Asp Ala Val Gly Gln
160516101615
tgc tgc tcc cgg ggc aat agc aag aag cca ggg acc ctg ctc agt 5217
Cys Cys Ser Arg Gly Asn Ser Lys Lys Pro Gly Thr Leu Leu Ser
162016251630
cac tcc agc aag gtc aca aac cag ctg agc acc ttc ttg gct atg 5262
His Ser Ser Lys Val Thr Asn Gln Leu Ser Thr Phe Leu Ala Met
163516401645
gaa cag ctg cta cag caa gca ggg acc gag cgc aca gtg gat gtc 5307
Glu Gln Leu Leu Gln Gln Ala Gly Thr Glu Arg Thr Val Asp Val
165016551660
ttc agt gtg gcc ctg aag cag aca cag gcc tgt ggc ctt aag acc 5352
Phe Ser Val Ala Leu Lys Gln Thr Gln Ala Cys Gly Leu Lys Thr
166516701675
cca acg ctg gag cag tat atc tac ctc tac aac tgt ctg aac agc 5397
Pro Thr Leu Glu Gln Tyr Ile Tyr Leu Tyr Asn Cys Leu Asn Ser
168016851690
gca ttg agg aac agg ctg ccc cga gct agg aag tgaccttgcc 5440
Ala Leu Arg Asn Arg Leu Pro Arg Ala Arg Lys
169517001705
ctgctaggca tcacgttcca gcaatccacc caggcctggc ttccccagga gaacagatct5500
attcggcctc acgctgtcaa agggcagagt ctgggaataa agggtaaatc tcgag 5555
<210>19
<211>1705
<212>PRT
<213>小鼠
<400>19
Met Arg Pro Leu Ile Leu Leu Ala Ala Leu Leu Trp Leu Gln Asp Ser
1 5 10 15
Leu Ala Gln Glu Asp Val Cys Ser Ser Leu Asp Gly Ser Pro Asp Arg
20 25 30
Gln Gly Gly Gly Pro Pro Leu Ser Val Asn Val Ser Ser Arg Gly Lys
35 40 45
Pro Thr Ser Leu Phe Leu Ser Trp Val Ala Ala Glu Pro Gly Gly Phe
50 55 60
Asp Tyr Ala Leu Cys Leu Arg Ala Met Asn Leu Ser Gly Phe Pro Glu
65 70 75 80
Gly Gln Gln Leu Gln Ala His Thr Asn Glu Ser Ser Phe Glu Phe His
85 90 95
Gly Leu Val Pro Gly Ser Arg Tyr Gln Leu Glu Leu Thr Val Leu Arg
100 105 110
Pro Cys Trp Gln Asn Val Thr Ile Thr Leu Thr Ala Arg Thr Ala Pro
115 120 125
Thr Val Val Arg Gly Leu Gln Leu His Ser Thr Gly Ser Pro Ala Ser
130 135 140
Leu Glu Ala Ser Trp Ser Asp Ala Ser Gly Asp Gln Asp Ser Tyr Gln
145 150 155 160
Leu Leu Leu Tyr His Pro Glu Ser His Thr Leu Ala Cys Asn Val Ser
165 170 175
Val Ser Pro Asp Thr Leu Ser Tyr Asn Phe Gly Asp Leu Leu Pro Gly
180 185 190
Ser Gln Tyr Val Leu Glu Val Ile Thr Trp Ala Gly Ser Leu His Ala
195 200 205
Lys Thr Ser Ile Leu Gln Trp Thr Glu Pro Val Pro Pro Asp His Leu
210 215 220
Thr Leu Arg Ala Leu Gly Thr Ser Ser Leu Gln Ala Phe Trp Asn Ser
225 230 235 240
Ser Glu Gly Ala Thr Trp Phe His Leu Ile Leu Thr Asp Leu Leu Glu
245 250 255
Gly Thr Asn Leu Thr Lys Val Val Arg Gln Gly Ile Ser Thr His Thr
260 265 270
Phe Leu Arg Leu Ser Pro Gly Thr Pro Tyr Gln Leu Lys Ile Cys Ala
275 280 285
Ala Ala Gly Pro His Gln Ile Trp Gly Pro Asn Ala Thr Glu Trp Thr
290 295 300
Tyr Pro Ser Tyr pro Ser Asp Leu Val Leu Thr Pro Leu Trp Asn Glu
305 310 315 320
Leu Trp Ala Ser Trp Lys Ala Gly Gln Gly Ala Arg Asp Gly Tyr Val
325 330 335
Leu Lys Leu Ser Gly Pro Val Glu Asn Thr Thr Thr Leu Gly Pro Glu
340 345 350
Glu Cys Asn Ala Val Phe Pro Gly Pro Leu Pro Pro Gly His Tyr Thr
355 360 365
Leu Gly Leu Arg Val Leu Ala Gly Pro Tyr Asp Ala Trp Val Glu Gly
370 375 380
Ser Ile Trp Leu Ala Glu Ser Ala Ala Arg Pro Met Glu Val Pro Gly
385 390 395 400
Ala Arg Leu Trp Leu Glu Gly Leu Glu Ala Thr Lys Gln Pro Gly Arg
405 410 415
Arg Ala Leu Leu Tyr Ser Val Asp Ala Pro Gly Leu Leu Gly Asn Ile
420 425 430
Ser Val Ser Ser Gly Ala Thr His Val Thr Phe Cys Gly Leu Val Pro
435 440 445
Gly Ala His Tyr Arg Val Asp Ile Ala Ser Ser Met Gly Asp Ile Thr
450 455 460
Gln Ser Leu Thr Gly Tyr Thr Ser Pro Leu Pro Pro Gln Ser Leu Glu
465 470 475 480
Ile Ile Ser Arg Asn Ser Pro Ser Asp Leu Thr Ile Gly Trp Ala Pro
485 490 495
Ala Pro Gly Gln Met Glu Gly Tyr Lys Val Thr Trp His Gln Asp Gly
500 505 510
Ser Gln Arg Ser Pro Gly Asp Leu Val Asp Leu Gly Pro Asp Ile Ser
515 520 525
Ser Leu Thr Leu Lys Ser Leu Val Pro Gly Ser Cys Tyr Thr Val Ser
530 535 540
Ala Trp Ala Trp Ser Gly Asn Leu Ser Ser Asp Ser Gln Lys Ile His
545 550 555 560
Ser Cys Thr Arg Pro Ala Pro Pro Thr Asn Leu Ser Leu Gly Phe Ala
565 570 575
His Gln Pro Ala Thr Leu Arg Ala Ser Trp Cys His Pro Pro Gly Gly
580 585 590
Arg Asp Ala Phe Gln Leu Arg Leu Tyr Arg Leu Arg Pro Leu Thr Leu
595 600 605
Glu Ser Glu Lys Ile Leu Ser Gln Glu Ala Gln Asn Phe Ser Trp Ala
610 615 620
Gln Leu Pro Ala Gly Tyr Glu Phe Gln Val Gln Leu Ser Thr Leu Trp
625 630 635 640
Gly Ser Glu Glu Ser Gly Ser Ala Asn Thr Thr Gly Trp Thr Pro Pro
645 650 655
Ser Ala Pro Thr Leu Val Asn Val Thr Ser Glu Ala Pro Thr Gln Leu
660 665 670
His Val Ser Trp Val His Ala Ala Gly Asp Arg Ser Ser Tyr Gln Val
675 680 685
Thr Leu Tyr Gln Glu Ser Thr Arg Thr Ala Thr Ser Ile Val Gly Pro
690 695 700
Lys Ala Asp Ser Thr Ser Phe Trp Gly Leu Thr Pro Gly Thr Lys Tyr
705 710 715 720
Lys Val Glu Ala Ile Ser Trp Ala Gly Pro Leu Tyr Thr Ala Ala Ala
725 730 735
Asn Val Ser Ala Trp Thr Tyr Pro Leu Thr Pro Asn Glu Leu Leu Ala
740 745 750
Ser Met Gln Ala Gly Ser Ala Val Val Asn Leu Ala Trp Pro Ser Gly
755 760 765
Pro Leu Gly Gln Gly Thr Cys His Ala Gln Leu Ser Asp Ala Gly His
770 775 780
Leu Ser Trp Glu Gln Pro Leu Ser Leu Gly Gln Asp Leu Leu Met Leu
785 790 795 800
Arg Asn Leu Ile Pro Gly His Thr Val Ser Leu Ser Val Lys Cys Arg
805 810 815
Ala Gly Pro Leu Gln Ala Ser Thr His Pro Leu Val Leu Ser Val Glu
820 825 830
Pro Gly Pro Val Glu Asp Val Phe Cys Gln Pro Glu Ala Thr Tyr Leu
835 840 845
Ser Leu Asn Trp Thr Met Pro Thr Gly Asp Val Ala Val Cys Leu Val
850 855 860
Glu Val Glu Gln Leu Val Pro Gly Gly Ser Ala His Phe Val Phe Gln
865 870 875 880
Val Asn Thr Ser Glu Asp Ala Leu Leu Leu Pro Asn Leu Thr Pro Thr
885 890 895
Thr Ser Tyr Arg Leu Ser Leu Thr Val Leu Gly Gly Asn Arg Gln Trp
900 905 910
Ser Arg Ala Val Thr Leu Val Cys Thr Thr Ser Ala Glu Val Trp His
915 920 925
Pro Pro Glu Leu Ala Glu Ala Pro Gln Val Glu Leu Gly Thr Gly Met
930 935 940
Gly Val Thr Val Thr Arg Gly Met Phe Gly Lys Asp Asp Gly Gln Ile
945 950 955 960
Gln Trp Tyr Gly Ile Ile Ala Thr Ile Asn Met Thr Leu Ala Gln Pro
965 970 975
Ser Gln Glu Ala Ile Asn His Thr Trp Tyr Asp His Tyr Tyr Arg Gly
980 985 990
His Asp Ser Tyr Leu Ala Leu Leu Phe Pro Asn Pro Phe Tyr Pro Glu
995 10001005
Pro Trp Ala Val Pro Arg Ser Trp Thr Val Pro Val Gly Thr Glu
101010151020
Asp Cys Asp Asn Thr Gln Glu Ile Cys Asn Gly His Leu Lys Pro
102510301035
Gly Phe Gln Tyr Arg Phe Ser Ile Ala Ala Phe Ser Arg Leu Ser
104010451050
Ser Pro Glu Thr Ile Leu Ala Phe Ser Ala Phe Ser Glu Pro Gln
105510601065
Ala Ser Ile Ser Leu Val Ala Met Pro Leu Thr Val Met Met Gly
107010751080
Thr Val Val Gly Cys Ile Ile Ile Val Cys Ala Val Leu Cys Leu
108510901095
Leu Cys Arg Arg Arg Leu Lys Gly Pro Arg Ser Glu Lys Asn Gly
110011051110
Phe Ser Gln Glu Leu Met Pro Tyr Asn Leu Trp Arg Thr His Arg
111511201125
Pro Ile Pro Ser His Ser Phe Arg Gln Ser Tyr Glu Ala Lys Ser
113011351140
Ala Arg Ala His Gln Ala Phe Phe Gln Glu Phe Glu Glu Leu Lys
114511501155
Glu Val Gly Lys Asp Gln Pro Arg Leu Glu Ala Glu His Pro Ala
116011651170
Asn Ile Thr Lys Asn Arg Tyr Pro His Val Leu Pro Tyr Asp His
117511801185
Ser Arg Val Arg Leu Thr Gln Leu Ser Gly Glu Pro His Ser Asp
119011951200
Tyr Ile Asn Ala Asn Phe Ile Pro Gly Tyr Ser His Pro Gln Glu
120512101215
Ile Ile Ala Thr Gln Gly Pro Leu Lys Lys Thr Val Glu Asp Phe
122012251230
Trp Arg Leu Val Trp Glu Gln Gln Val His Val Ile Ile Met Leu
123512401245
Thr Val Gly Met Glu Asn Gly Arg Val Leu Cys Glu His Tyr Trp
125012551260
Pro Val Asn Ser Thr Pro Val Thr His Gly His Ile Thr Thr His
126512701275
Leu Leu Ala Glu Glu Ser Glu Asp Glu Trp Thr Arg Arg Glu Phe
128012851290
Gln Leu Gln His Gly Ala Glu Gln Lys Gln Arg Arg Val Lys Gln
129513001305
Leu Gln Phe Thr Thr Trp Pro Asp His Ser Val Pro Glu Ala Pro
131013151320
Ser Ser Leu Leu Ala Phe Val Glu Leu Val Gln Glu Glu Val Lys
132513301335
Ala Thr Gln Gly Lys Gly Pro Ile Leu Val His Cys Ser Ala Gly
134013451350
Val Gly Arg Thr Gly Thr Phe Val Ala Leu Leu Pro Ala Val Arg
135513601365
Gln Leu Glu Glu Glu Gln Val Val Asp Val Phe Asn Thr Val Tyr
137013751380
Ile Leu Arg Leu His Arg Pro Leu Met Ile Gln Thr Leu Ser Gln
138513901395
Tyr Ile Phe Leu His ser Cys Leu Leu Asn Lys Ile Leu Glu Gly
140014051410
Pro Ser Asp Ala Ser Asp Ser Gly Pro Ile Pro Val Met Asn Phe
141514201425
Ala Gln Ala Cys Ala Lys Arg Ala Ala Asn Ala Asn Ala Gly Phe
143014351440
Leu Lys Glu Tyr Arg Leu Leu Lys Gln Ala Ile Lys Asp Glu Thr
144514501455
Gly Ser Leu Leu Pro Ser Pro Asp Tyr Asn Gln Asn Ser Ile Ala
146014651470
Ser Cys His His Ser Gln Glu Gln Leu Ala Leu Val Glu Glu Ser
147514801485
Pro Ala Asp Asn Met Leu Ala Ala Ser Leu Phe Pro Gly Gly Pro
149014951500
Ser Gly Arg Asp His Val Val Leu Thr Gly Ser Ala Gly Pro Lys
150515101515
Glu Leu Trp Glu Met Val Trp Glu His Gly Ala Tyr Val Leu Val
152015251530
Ser Leu Gly Leu Pro Asp Thr Lys Glu Lys Pro Gln Asp Ile Trp
153515401545
Pro Met Glu Met Gln Pro Ile Val Thr Asp Met Val Thr Val His
155015551560
Arg Val Ala Glu Ser Asn Thr Ala Gly Trp Pro Ser Thr Leu Ile
156515701575
Arg Val Ile His Gly Asp Ser Gly Thr Glu Arg Gln Val Gln Cys
158015851590
Leu Gln Phe Pro His Cys Glu Thr Gly Ser Glu Leu Pro Ala Asn
159516001605
Thr Leu Leu Thr Phe Leu Asp Ala Val Gly Gln Cys Cys Ser Arg
161016151620
Gly Asn Ser Lys Lys Pro Gly Thr Leu Leu Ser His Ser Ser Lys
162516301635
Val Thr Asn Gln Leu Ser Thr Phe Leu Ala Met Glu Gln Leu Leu
164016451650
Gln Gln Ala Gly Thr Glu Arg Thr Val Asp Val Phe Ser Val Ala
165516601665
Leu Lys Gln Thr Gln Ala Cys Gly Leu Lys Thr Pro Thr Leu Glu
167016751680
Gln Tyr Ile Tyr Leu Tyr Asn Cys Leu Asn Ser Ala Leu Arg Asn
168516901695
Arg Leu Pro Arg Ala Arg Lys
17001705
<210>20
<211>3078
<212>DNA
<213>大腸桿菌
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(3078)
<400>20
acc atg att acg gat tca ctg gcc gtc gtt tta caa cgt cgt gac tgg48
Thr Met Ile Thr Asp Ser Leu Ala Val Val Leu Gln Arg Arg Asp Trp
1 5 10 15
gaa aac cct ggc gtt acc caa ctt aat cgc ctt gca gca cat ccc cct96
Glu Asn Pro Gly Val Thr Gln Leu Asn Arg Leu Ala Ala His Pro Pro
20 25 30
ttc gcc agc tgg cgt aat agc gaa gag gcc cgc acc gat cgc cct tcc144
Phe Ala Ser Trp Arg Asn Ser Glu Glu Ala Arg Thr Asp Arg Pro Ser
35 40 45
cas cag ttg cgc agc ctg aat ggc gaa tgg cgc ttt gcc tgg ttt ccg192
Gln Gln Leu Arg Ser Leu Asn Gly Glu Trp Arg Phe Ala Trp Phe Pro
50 55 60
gca cca gaa gcg gtg ccg gaa agc tgg ctg gag tgc gat ctt cct gag240
Ala Pro Glu Ala Val Pro Glu Ser Trp Leu Glu Cys Asp Leu Pro Glu
65 70 75 80
gcc gat act gtc gtc gtc ccc tca aac tgg cag atg cac ggt tac gat288
Ala Asp Thr Val Val Val Pro Ser Asn Trp Gln Met His Gly Tyr Asp
85 90 95
gcg ccc atc tac acc aac gta acc tat ccc att acg gtc aat cog ccg336
Ala Pro Ile Tyr Thr Asn Val Thr Tyr Pro Ile Thr Val Asn Pro Pro
100 105 110
ttt gtt ccc acg gag aat ccg acg ggt tgt tac tcg ctc aca ttt aat384
Phe Val Pro Thr Glu Asn Pro Thr Gly Cys Tyr Ser Leu Thr Phe Asn
115 120 125
gtt gat gaa agc tgg cta cag gaa ggc cag acg cga att att ttt gat432
Val Asp Glu Ser Trp Leu Gln Glu Gly Gln Thr Arg Ile Ile Phe Asp
130 135 140
ggc gtt aac tcg gcg ttt cat ctg tgg tgc aac ggg cgc tgg gtc ggt480
Gly Val Asn Ser Ala Phe His Leu Trp Cys Asn Gly Arg Trp Val Gly
145 150 155 160
tac ggc cag gac agt cgt ttg ccg tct gaa ttt gac ctg agc gca ttt528
Tyr Gly Gln Asp Ser Arg Leu Pro Ser Glu Phe Asp Leu Ser Ala Phe
165 170 175
tta cgc gcc gga gaa aac cgc ctc gcg gtg atg gtg ctg cgt tgg agt576
Leu Arg Ala Gly Glu Asn Arg Leu Ala Val Met Val Leu Arg Trp Ser
180 185 190
gac ggc agt tat ctg gaa gat cag gat atg tgg cgg atg agc ggc att624
Asp Gly Ser Tyr Leu Glu Asp Gln Asp Met Trp Arg Met Ser Gly Ile
195 200 205
ttc cgt gac gtc tcg ttg ctg cat aaa ccg act acs caa atc agc gat672
Phe Arg Asp Val Ser Leu Leu His Lys Pro Thr Thr Gln Ile Ser Asp
210 215 220
ttc cat gtt gcc act cgc ttt aat gat gat ttc agc cgc gct gta ctg720
Phe His Val Ala Thr Arg Phe Asn Asp Asp Phe Ser Arg Ala Val Leu
225 230 235 240
gag gct gaa gtt cag atg tgc ggc gag ttg cgt gac tac cta cgg gta768
Glu Ala Glu Val Gln Met Cys Gly Glu Leu Arg Asp Tyr Leu Arg Val
245 250 255
aca gtt tct tta tgg cag ggt gaa acg cag gtc gcc agc ggc acc gcg816
Thr Val Ser Leu Trp Gln Gly Glu Thr Gln Val Ala Ser Gly Thr Ala
260 265 270
cct ttc ggc ggt gaa att atc gat gag cgt ggt ggt tat gcc gat cgc864
Pro Phe Gly Gly Glu Ile Ile Asp Glu Arg Gly Gly Tyr Ala Asp Arg
275 280 285
gtc aca cta cgt ctg aac gtc gaa aac ccg aaa ctg tgg agc gcc gaa912
Val Thr Leu Arg Leu Asn Val Glu Asn Pro Lys Leu Trp Ser Ala Glu
290 295 300
atc ccg aat ctc tat cgt gcg gtg gtt gaa ctg cac acc gcc gac ggc960
Ile Pro Asn Leu Tyr Arg Ala Val Val Glu Leu His Thr Ala Asp Gly
305 310 315 320
acg ctg att gaa gca gaa gcc tgc gat gtc ggt ttc cgc gag gtg cgg1008
Thr Leu Ile Glu Ala Glu Ala Cys Asp Val Gly Phe Arg Glu Val Arg
325 330 335
att gaa aat ggt ctg ctg ctg ctg aac ggc aag ccg ttg ctg att cga1056
Ile Glu Asn Gly Leu Leu Leu Leu Asn Gly Lys Pro Leu Leu Ile Arg
340 345 350
ggc gtt aac cgt cac gag cat cat cct ctg cat ggt cag gtc atg gat1104
Gly Val Asn Arg His Glu His His Pro Leu His Gly Gln Val Met Asp
355 360 365
gag cag acg atg gtg cag gat atc ctg ctg atg aag cag aac aac ttt1152
Glu Gln Thr Met Val Gln Asp Ile Leu Leu Met Lys Gln Asn Asn Phe
370 375 380
aac gcc gtg cgc tgt tcg cat tat ccg aac cat ccg ctg tgg tac acg1200
Asn Ala Val Arg Cys Ser His Tyr Pro Asn His Pro Leu Trp Tyr Thr
385 390 395 400
ctg tgc gac cgc tac ggc ctg tat gtg gtg gat gaa gcc aat att gaa1248
Leu Cys Asp Arg Tyr Gly Leu Tyr Val Val Asp Glu Ala Asn Ile Glu
405 410 415
acc cac ggc atg gtg cca atg aat cgt ctg acc gat gat ccg cgc tgg1296
Thr His Gly Met Val Pro Met Asn Arg Leu Thr Asp Asp Pro Arg Trp
420 425 430
cta ccg gcg atg agc gaa cgc gta acg cga atg gtg cag cgc gat cgt1344
Leu Pro Ala Met Ser Glu Arg Val Thr Arg Met Val Gln Arg Asp Arg
435 440 445
aat cac ccg agt gtg atc atc tgg tcg ctg ggg aat gaa tca ggc cac1392
Asn His Pro Ser Val Ile Ile Trp Ser Leu Gly Asn Glu Ser Gly His
450 455 460
ggc gct aat cac gac gcg ctg tat cgc tgg atc aaa tct gtc gat cct1440
Gly Ala Asn His Asp Ala Leu Tyr Arg Trp Ile Lys Ser Val Asp Pro
465 470 475 480
tcc cgc ccg gtg cag tat gaa ggc ggc gga gcc gac acc acg gcc acc1488
Ser Arg Pro Val Gln Tyr Glu Gly Gly Gly Ala Asp Thr Thr Ala Thr
485 490 495
gat att att tgc ccg atg tac gcg cgc gtg gat gaa gac cag ccc ttc1536
Asp Ile Ile Cys Pro Met Tyr Ala Arg Val Asp Glu Asp Gln Pro Phe
500 505 510
ccg gct gtg ccg aaa tgg tcc atc aaa aaa tgg ctt tcg cta cct gga1584
Pro Ala Val Pro Lys Trp Ser Ile Lys Lys Trp Leu Ser Leu Pro Gly
515 520 525
gag acg cgc ccg ctg atc ctt tgc gaa tac gcc cac gcg atg ggt aac1632
Glu Thr Arg Pro Leu Ile Leu Cys Glu Tyr Ala His Ala Met Gly Asn
530 535 540
agt ctt ggc ggt ttc gct aaa tac tgg cag gcg ttt cgt cag tat ccc1680
Ser Leu Gly Gly Phe Ala Lys Tyr Trp Gln Ala Phe Arg Gln Tyr Pro
545 550 555 560
cgt tta cag ggc ggc ttc gtc tgg gac tgg gtg gat cag tcg ctg att1728
Arg Leu Gln Gly Gly Phe Val Trp Asp Trp Val Asp Gln Ser Leu Ile
565 570 575
aaa tat gat gaa aac ggc aac ccg tgg tcg gct tac ggc ggt gat ttt1776
Lys Tyr Asp Glu Asn Gly Asn Pro Trp Ser Ala Tyr Gly Gly Asp Phe
580 585 590
ggc gat acg ccg aac gat cgc cag ttc tgt atg aac ggt ctg gtc ttt1824
Gly Asp Thr Pro Asn Asp Arg Gln Phe Cys Met Asn Gly Leu Val Phe
595 600 605
gcc gac cgc acg ccg cat cca gcg ctg acg gaa gca aaa cac cag cag1872
Ala Asp Arg Thr Pro His Pro Ala Leu Thr Glu Ala Lys His Gln Gln
610 615 620
cag ttt ttc cag ttc cgt tta tcc ggg caa acc atc gaa gtg acc agc1920
Gln Phe Phe Gln Phe Arg Leu Ser Gly Gln Thr Ile Glu Val Thr Ser
625 630 635 640
gaa tac ctg ttc cgt cat agc gat aac gag ctc ctg cac tgg atg gtg1968
Glu Tyr Leu Phe Arg His Ser Asp Asn Glu Leu Leu His Trp Met Val
645 650 655
gcg ctg gat ggt aag ccg ctg gca agc ggt gaa gtg cct ctg gat gtc2016
Ala Leu Asp Gly Lys Pro Leu Ala Ser Gly Glu Val Pro Leu Asp Val
660 665 670
gct cca caa ggt aaa cag ttg att gaa ctg cct gaa cta ccg cag ccg2064
Ala Pro Gln Gly Lys Gln Leu Ile Glu Leu Pro Glu Leu Pro Gln Pro
675 680 685
gag agc gcc ggg caa ctc tgg ctc aca gta cgc gta gtg caa ccg aac2112
Glu Ser Ala Gly Gln Leu Trp Leu Thr Val Arg Val Val Gln Pro Asn
690 695 700
gcg acc gca tgg tca gaa gcc ggg cac atc agc gcc tgg cag cag tgg2160
Ala Thr Ala Trp Ser Glu Ala Gly His Ile Ser Ala Trp Gln Gln Trp
705 710 715 720
cgt ctg gcg gaa aac ctc agt gtg acg ctc ccc gcc gcg tcc cac gcc2208
Arg Leu Ala Glu Asn Leu Ser Val Thr Leu Pro Ala Ala Ser His Ala
725 730 735
atc ccg cat ctg acc acc agc gaa atg gat ttt tgc atc gag ctg ggt2256
Ile Pro His Leu Thr Thr Ser Glu Met Asp Phe Cys Ile Glu Leu Gly
740 745 750
aat aag cgt tgg caa ttt aac cgc cag tca ggc ttt ctt tca cag atg2304
Asn Lys Arg Trp Gln Phe Asn Arg Gln Ser Gly Phe Leu Ser Gln Met
755 760 765
tgg att ggc gat aaa aaa caa ctg ctg acg ccg ctg cgc gat cag ttc2352
Trp Ile Gly Asp Lys Lys Gln Leu Leu Thr Pro Leu Arg Asp Gln Phe
770 775 780
acc cgt gca ccg ctg gat aac gac att ggc gta agt gaa gcg acc cgc2400
Thr Arg Ala Pro Leu Asp Asn Asp Ile Gly Val Ser Glu Ala Thr Arg
785 790 795 800
att gac cct aac gcc tgg gtc gaa cgc tgg aag gcg gcg ggc cat tac2448
Ile Asp Pro Asn Ala Trp Val Glu Arg Trp Lys Ala Ala Gly His Tyr
805 810 815
cag gcc gaa gca gcg ttg ttg cag tgc acg gca gat aca ctt gct gat2496
Gln Ala Glu Ala Ala Leu Leu Gln Cys Thr Ala Asp Thr Leu Ala Asp
820 825 830
gcg gtg ctg att acg acc gct cac gcg tgg cag cat cag ggg aaa acc2544
Ala Val Leu Ile Thr Thr Ala His Ala Trp Gln His Gln Gly Lys Thr
835 840 845
tta ttt atc agc cgg aaa acc tac cgg att gat ggt agt ggt caa atg2592
Leu Phe Ile Ser Arg Lys Thr Tyr Arg Ile Asp Gly Ser Gly Gln Met
850 855 860
gcg att acc gtt gat gtt gaa gtg gcg agc gat aca ccg cat ccg gcg2640
Ala Ile Thr Val Asp Val Glu Val Ala Ser Asp Thr Pro His Pro Ala
865 870 875 880
cgg att ggc ctg aac tgc cag ctg gcg cag gta gca gag cgg gta aac2688
Arg Ile Gly Leu Asn Cys Gln Leu Ala Gln Val Ala Glu Arg Val Asn
885 890 895
tgg ctc gga tta ggg ccg caa gaa aac tat ccc gac cgc ctt act gcc2736
Trp Leu Gly Leu Gly Pro Gln Glu Asn Tyr Pro Asp Arg Leu Thr Ala
900 905 910
gcc tgt ttt gac cgc tgg gat ctg cca ttg tca gac atg tat acc ccg2784
Ala Cys Phe Asp Arg Trp Asp Leu Pro Leu Ser Asp Met Tyr Thr Pro
915 920 925
tac gtc ttc ccg agc gaa aac ggt ctg cgc tgc ggg acg cgc gaa ttg2832
Tyr Val Phe Pro Ser Glu Asn Gly Leu Arg Cys Gly Thr Arg Glu Leu
930 935 940
aat tat ggc cca cac cag tgg cgc ggc gac ttc cag ttc aac atc agc2880
Asn Tyr Gly Pro His Gln Trp Arg Gly Asp Phe Gln Phe Asn Ile Ser
945 950 955 960
cgc tac agt caa cag caa ctg atg gaa acc agc cat cgc cat ctg ctg2928
Arg Tyr Ser Gln Gln Gln Leu Met Glu Thr Ser His Arg His Leu Leu
965 970 975
cac gcg gaa gaa ggc aca tgg ctg aat atc gac ggt ttc cat atg ggg2976
His Ala Glu Glu Gly Thr Trp Leu Asn Ile Asp Gly Phe His Met Gly
980 985 990
att ggt ggc gac gac tcc tgg agc ccg tca gta tcg gcg gaa ttc cag3024
Ile Gly Gly Asp Asp Ser Trp Ser Pro Ser Val Ser Ala Glu Phe Gln
995 10001005
ctg agc gcc ggt cgc tac cat tac cag ttg gtc tgg tgt caa aaa3069
Leu Ser Ala Gly Arg Tyr His Tyr Gln Leu Val Trp Cys Gln Lys
101010151020
taataataa 3078
<210>21
<211>1023
<212>PRT
<213>大腸桿菌
<400>21
Thr Met Ile Thr Asp Ser Leu Ala Val Val Leu Gln Arg Arg Asp Trp
1 5 10 15
Glu Asn Pro Gly Val Thr Gln Leu Asn Arg Leu Ala Ala His Pro Pro
20 25 30
Phe Ala Ser Trp Arg Asn Ser Glu Glu Ala Arg Thr Asp Arg Pro Ser
35 40 45
Gln Gln Leu Arg Ser Leu Asn Gly Glu Trp Arg Phe Ala Trp Phe Pro
50 55 60
Ala Pro Glu Ala Val Pro Glu Ser Trp Leu Glu Cys Asp Leu Pro Glu
65 70 75 80
Ala Asp Thr Val Val Val Pro Ser Asn Trp Gln Met His Gly Tyr Asp
85 90 95
Ala Pro Ile Tyr Thr Asn Val Thr Tyr Pro Ile Thr Val Asn Pro Pro
100 105 110
Phe Val Pro Thr Glu Asn Pro Thr Gly Cys Tyr Ser Leu Thr Phe Asn
115 120 125
Val Asp Glu Ser Trp Leu Gln Glu Gly Gln Thr Arg Ile Ile Phe Asp
130 135 140
Gly Val Asn Ser Ala Phe His Leu Trp Cys Asn Gly Arg Trp Val Gly
145 150 155 160
Tyr Gly Gln Asp Ser Arg Leu Pro Ser Glu Phe Asp Leu Ser Ala Phe
165 170 175
Leu Arg Ala Gly Glu Asn Arg Leu Ala Val Met Val Leu Arg Trp Ser
180 185 190
Asp Gly Ser Tyr Leu Glu Asp Gln Asp Met Trp Arg Met Ser Gly Ile
195 200 205
Phe Arg Asp Val Ser Leu Leu His Lys Pro Thr Thr Gln Ile Ser Asp
210 215 220
Phe His Val Ala Thr Arg Phe Asn Asp Asp Phe Ser Arg Ala Val Leu
225 230 235 240
Glu Ala Glu Val Gln Met Cys Gly Glu Leu Arg Asp Tyr Leu Arg Val
245 250 255
Thr Val Ser Leu Trp Gln Gly Glu Thr Gln Val Ala Ser Gly Thr Ala
260 265 270
Pro Phe Gly Gly Glu Ile Ile Asp Glu Arg Gly Gly Tyr Ala Asp Arg
275 280 285
Val Thr Leu Arg Leu Asn Val Glu Asn Pro Lys Leu Trp Ser Ala Glu
290 295 300
Ile Pro Asn Leu Tyr Arg Ala Val Val Glu Leu His Thr Ala Asp Gly
305 310 315 320
Thr Leu Ile Glu Ala Glu Ala Cys Asp Val Gly Phe Arg Glu Val Arg
325 330 335
Ile Glu Asn Gly Leu Leu Leu Leu Asn Gly Lys Pro Leu Leu Ile Arg
340 345 350
Gly Val Asn Arg His Glu His His Pro Leu His Gly Gln Val Met Asp
355 360 365
Glu Gln Thr Met Val Gln Asp Ile Leu Leu Met Lys Gln Asn Asn Phe
370 375 380
Asn Ala Val Arg Cys Ser His Tyr Pro Asn His Pro Leu Trp Tyr Thr
385 390 395 400
Leu Cys Asp Arg Tyr Gly Leu Tyr Val Val Asp Glu Ala Asn Ile Glu
405 410 415
Thr His Gly Met Val Pro Met Asn Arg Leu Thr Asp Asp Pro Arg Trp
420 425 430
Leu Pro Ala Met Ser Glu Arg Val Thr Arg Met Val Gln Arg Asp Arg
435 440 445
Asn His Pro Ser Val Ile Ile Trp Ser Leu Gly Asn Glu Ser Gly His
450 455 460
Gly Ala Asn His Asp Ala Leu Tyr Arg Trp Ile Lys Ser Val Asp Pro
465 470 475 480
Ser Arg Pro Val Gln Tyr Glu Gly Gly Gly Ala Asp Thr Thr Ala Thr
485 490 495
Asp Ile Ile Cys Pro Met Tyr Ala Arg Val Asp Glu Asp Gln Pro Phe
500 505 510
Pro Ala Val Pro Lys Trp Ser Ile Lys Lys Trp Leu Ser Leu Pro Gly
515 520 525
Glu Thr Arg Pro Leu Ile Leu Cys Glu Tyr Ala His Ala Met Gly Asn
530 535 540
Ser Leu Gly Gly Phe Ala Lys Tyr Trp Gln Ala Phe Arg Gln Tyr Pro
545 550 555 560
Arg Leu Gln Gly Gly Phe Val Trp Asp Trp Val Asp Gln Ser Leu Ile
565 570 575
Lys Tyr Asp Glu Asn Gly Asn Pro Trp Ser Ala Tyr Gly Gly Asp Phe
580 585 590
Gly Asp Thr Pro Asn Asp Arg Gln Phe Cys Met Asn Gly Leu Val Phe
595 600 605
Ala Asp Arg Thr Pro His Pro Ala Leu Thr Glu Ala Lys His Gln Gln
610 615 620
Gln Phe Phe Gln Phe Arg Leu Ser Gly Gln Thr Ile Glu Val Thr Ser
625 630 635 640
Glu Tyr Leu Phe Arg His Ser Asp Asn Glu Leu Leu His Trp Met Val
645 650 655
Ala Leu Asp Gly Lys Pro Leu Ala Ser Gly Glu Val Pro Leu Asp Val
660 665 670
Ala Pro Gln Gly Lys Gln Leu Ile Glu Leu Pro Glu Leu Pro Gln Pro
675 680 685
Glu Ser Ala Gly Gln Leu Trp Leu Thr Val Arg Val Val Gln Pro Asn
690 695 700
Ala Thr Ala Trp Ser Glu Ala Gly His Ile Ser Ala Trp Gln Gln Trp
705 710 715 720
Arg Leu Ala Glu Asn Leu Ser Val Thr Leu Pro Ala Ala Ser His Ala
725 730 735
Ile Pro His Leu Thr Thr Ser Glu Met Asp Phe Cys Ile Glu Leu Gly
740 745 750
Asn Lys Arg Trp Gln Phe Asn Arg Gln Ser Gly Phe Leu Ser Gln Met
755 760 765
Trp Ile Gly Asp Lys Lys Gln Leu Leu Thr Pro Leu Arg Asp Gln Phe
770 775 780
Thr Arg Ala Pro Leu Asp Asn Asp Ile Gly Val Ser Glu Ala Thr Arg
785 790 795 800
Ile Asp Pro Asn Ala Trp Val Glu Arg Trp Lys Ala Ala Gly His Tyr
805 810 815
Gln Ala Glu Ala Ala Leu Leu Gln Cys Thr Ala Asp Thr Leu Ala Asp
820 825 830
Ala Val Leu Ile Thr Thr Ala His Ala Trp Gln His Gln Gly Lys Thr
835 840 845
Leu Phe Ile Ser Arg Lys Thr Tyr Arg Ile Asp Gly Ser Gly Gln Met
850 855 860
Ala Ile Thr Val Asp Val Glu Val Ala Ser Asp Thr Pro His Pro Ala
865 870 875 880
Arg Ile Gly Leu Asn Cys Gln Leu Ala Gln Val Ala Glu Arg Val Asn
885 890 895
Trp Leu Gly Leu Gly Pro Gln Glu Asn Tyr Pro Asp Arg Leu Thr Ala
900 905 910
Ala Cys Phe Asp Arg Trp Asp Leu Pro Leu Ser Asp Met Tyr Thr Pro
915 920 925
Tyr Val Phe Pro Ser Glu Asn Gly Leu Arg Cys Gly Thr Arg Glu Leu
930 935 940
Asn Tyr Gly Pro His Gln Trp Arg Gly Asp Phe Gln Phe Asn Ile Ser
945 950 955 960
Arg Tyr Ser Gln Gln Gln Leu Met Glu Thr Ser His Arg His Leu Leu
965 970 975
His Ala Glu Glu Gly Thr Trp Leu Asn Ile Asp Gly Phe His Met Gly
980 985 990
Ile Gly Gly Asp Asp Ser Trp Ser Pro Ser Val Ser Ala Glu Phe Gln
995 10001005
Leu Ser Ala Gly Arg Tyr His Tyr Gln Leu Val Trp Cys Gln Lys
101010151020
<210>22
<211>49
<212>PRT
<213>人
<400>22
Tyr Leu Tyr Gln Trp Leu Gly Ala Pro Val Pro Tyr Pro Asp Pro Leu
1 5 10 15
Glu Pro Arg Arg Glu Val Cys Glu Leu Asn Pro Asp Cys Asp Glu Leu
20 25 30
Ala Asp His Ile Gly Phe Gln Glu Ala Tyr Arg Arg Phe Tyr Gly Pro
35 40 45
Val
<210>23
<211>49
<212>PRT
<213>人
<220>
<221>VARIANT
<222>(17)..(17)
<223>如果17、21和24位的Xaa均未Glu，則Glu17不羧化，或者<50％的Glu21是羧化的，和/或<50％的Glu24是羧化的，或者17、21和24位以外的1至7個位置與所指明的氨基酸不同
<220>
<221>VARIANT
<222>(21)..(21)
<223>如果17、21和24位的Xaa均未Glu，則Glu17不羧化，或者<50％的Glu21是羧化的，和/或<50％的Glu24是羧化的，或者17、21和24位以外的1至7個位置與所指明的氨基酸不同
<220>
<221>VARIANT
<222>(24)..(24)
<223>如果17、21和24位的Xaa均未Glu，則Glu17不羧化，或者<50％的Glu21是羧化的，和/或<50％的Glu24是羧化的，或者17、21和24位以外的1至7個位置與所指明的氨基酸不同
<400>23
Tyr Leu Tyr Gln Trp Leu Gly Ala Pro Val Pro Tyr Pro Asp Pro Leu
1 5 10 15
Xaa Pro Arg Arg Xaa Val Cys Xaa Leu Asn Pro Asp Cys Asp Glu Leu
20 25 30
Ala Asp His Ile Gly Phe Gln Glu Ala Tyr Arg Arg Phe Tyr Gly Pro
35 40 45
Val
<210>24
<211>5136
<212>DNA
<213>褐家鼠
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(5136)
<400>24
atg agg ccc ctg att ctg tta gct gcc ctc ctc tgg ctc cag ggc ttt48
Met Arg Pro Leu Ile Leu Leu Ala Ala Leu Leu Trp Leu Gln Gly Phe
1 5 10 15
ttg gcc gag gac gac gca tgc tca tcc ttg gaa ggg agc cca gac agg96
Leu Ala Glu Asp Asp Ala Cys Ser Ser Leu Glu Gly Ser Pro Asp Arg
20 25 30
cag ggt gga ggt cca ctt ctg agt gtg aac gtc agt agc cat gga aag144
Gln Gly Gly Gly Pro Leu Leu Ser Val Asn Val Ser Ser His Gly Lys
35 40 45
tct acc agc ctg ttt ctg agc tgg gta gct gca gag ctg ggc gga ttt192
Ser Thr Ser Leu Phe Leu Ser Trp Val Ala Ala Glu Leu Gly Gly Phe
50 55 60
gac tat gcc ctc agc ctc agg agt gtg aac tcc tca ggt tct cca gaa240
Asp Tyr Ala Leu Ser Leu Arg Ser Val Asn Ser Ser Gly Ser Pro Glu
65 70 75 80
ggg caa cag ctc cag gct cac aca aat gag tcc ggc ttt gag ttc cat288
Gly Gln Gln Leu Gln Ala His Thr Asn Glu Ser Gly Phe Glu Phe His
85 90 95
ggc ctg gtg cca ggg agt cgc tac cag cta aaa ctg act gtc cta aga336
Gly Leu Val Pro Gly Ser Arg Tyr Gln Leu Lys Leu Thr Val Leu Arg
100 105 110
ccc tgt tgg cag aat gtc aca att acc ctc act gcc cga act gcc ccg384
Pro Cys Trp Gln Asn Val Thr Ile Thr Leu Thr Ala Arg Thr Ala Pro
115 120 125
aca gtg gtc cgt gga ctg cag ctg cat agc gct ggg agc cca gcc agg432
Thr Val Val Arg Gly Leu Gln Leu His Ser Ala Gly Ser Pro Ala Arg
130 135 140
ctg gaa gcc tcg tgg agt gat gcc cct gga gat caa gac agc tac caa480
Leu Glu Ala Ser Trp ser Asp Ala Pro Gly Asp Gln Asp Ser Tyr Gln
145 150 155 160
ctt ctc ctc tac cac ctg gaa tcc caa act ctg gca tgc aat gtc tct528
Leu Leu Leu Tyr His Leu Glu Ser Gln Thr Leu Ala Cys Asn Val Ser
165 170 175
gtg tcc cct gac acc ctg tct tac agt ttt ggc gac ctt ttg cca ggt576
Val Ser Pro Asp Thr Leu Ser Tyr Ser Phe Gly Asp Leu Leu Pro Gly
180 185 190
act cag tat gtc ttg gag gtt atc acc tgg gct ggc agt ctc cat gcg624
Thr Gln Tyr Val Leu Glu Val Ile Thr Trp Ala Gly Ser Leu His Ala
195 200 205
aag act agt atc ctc cag tgg aca gag cct gtc cct cct gat cac cta672
Lys Thr Ser Ile Leu Gln Trp Thr Glu Pro Val Pro Pro Asp His Leu
210 215 220
gca cta cgt gcc ttg ggt acc agt agc ctg caa gcc ttc tgg aac agc720
Ala Leu Arg Ala Leu Gly Thr Ser Ser Leu Gln Ala Phe Trp Asn Ser
225 230 235 240
tct gaa ggg gcc acc tcg ttt cac ctg atg ctc aca gac ctc ctc ggg768
Ser Glu Gly Ala Thr Ser Phe His Leu Met Leu Thr Asp Leu Leu Gly
245 250 255
ggc acc aac acg act gcg gtg atc aga caa ggg gtc tcg acc cac acc816
Gly Thr Asn Thr Thr Ala Val Ile Arg Gln Gly Val Ser Thr His Thr
260 265 270
ttt ctt cac cta tct ccg ggt aca cct cat gag ctg aag att tgt gct864
Phe Leu His Leu Ser Pro Gly Thr Pro His Glu Leu Lys Ile Cys Ala
275 280 285
tct gct ggg ccc cac cag atc tgg gga ccc agt gcc acc gag tgg acc912
Ser Ala Gly Pro His Gln Ile Trp Gly Pro Ser Ala Thr Glu Trp Thr
290 295 300
tat ccc tct tac cca tct gac ctg gtg ctg act ccc tta cgg aat gag960
Tyr Pro Ser Tyr Pro Ser Asp Leu Val Leu Thr Pro Leu Arg Asn Glu
305 310 315 320
ctc tgg gcc agc tgg aag gca ggg ctg gga gcc cgg gac ggc tat gta1008
Leu Trp Ala Ser Trp Lys Ala Gly Leu Gly Ala Arg Asp Gly Tyr Val
325 330 335
ctg aag tta agt ggg cca atg gag agt acg tct acc ctg ggc ccg gaa1056
Leu Lys Leu Ser Gly Pro Met Glu Ser Thr Ser Thr Leu Gly Pro Glu
340 345 350
gag tgc aat gca gtc ttc cca ggg ccc ctg cct ccg gga cac tac act1104
Glu Cys Asn Ala Val Phe Pro Gly Pro Leu Pro Pro Gly His Tyr Thr
355 360 365
ttg cag ctg aag gtt cta gct gga cct tat gat gcc tgg gtg gag ggc1152
Leu Gln Leu Lys Val Leu Ala Gly Pro Tyr Asp Ala Trp Val Glu Gly
370 375 380
agt acc tgg ctg gct gaa tct gct gcc ctt ccc agg gag gtc cct ggt1200
Ser Thr Trp Leu Ala Glu Ser Ala Ala Leu Pro Arg Glu Val Pro Gly
385 390 395 400
gcc aga ctg tgg cta gat gga ctg gaa gct tcc aag cag cct ggg aga1248
Ala Arg Leu Trp Leu Asp Gly Leu Glu Ala Ser Lys Gln Pro Gly Arg
405 410 415
cgg gcg cta ctc tat tct gac gat gcc cca ggc tcc cta ggg aac atc1296
Arg Ala Leu Leu Tyr Ser Asp Asp Ala Pro Gly Ser Leu Gly Asn Ile
420 425 430
tct gtg ccc tct ggt gcc act cac gtc att ttc tgt ggc ctg gta cct1344
Ser Val Pro Ser Gly Ala Thr His Val Ile Phe Cys Gly Leu Val Pro
435 440 445
gga gcc cac tat agg gtg gac att gcc tca tcc acg ggg gac atc tct1392
Gly Ala His Tyr Arg Val Asp Ile Ala Ser Ser Thr Gly Asp Ile Ser
450 455 460
cag agc atc tca ggc tat aca agt ccc ctg cca ccg cag tca ctg gag1440
Gln Ser Ile Ser Gly Tyr Thr Ser Pro Leu Pro Pro Gln Ser Leu Glu
465 470 475 480
gtc atc agc agg agc agc cca tct gac ctg act att gct tgg ggt cca1488
Val Ile Ser Arg Ser Ser Pro Ser Asp Leu Thr Ile Ala Trp Gly Pro
485 490 495
gca cca ggg cag ctg gaa ggt tat aag gtt acc tgg cat cag gat ggc1536
Ala Pro Gly Gln Leu Glu Gly Tyr Lys Val Thr Trp His Gln Asp Gly
500 505 510
agc cag agg tct cct ggc gac ctt gtt gac ttg ggc cct gac act ttg1584
Ser Gln Arg Ser Pro Gly Asp Leu Val Asp Leu Gly Pro Asp Thr Leu
515 520 525
agc ctg act ctg aaa tct ctg gta ccc ggc tcc tgc tac acc gtg tca1632
Ser Leu Thr Leu Lys Ser Leu Val Pro Gly Ser Cys Tyr Thr Val Ser
530 535 540
gca tgg gcc tgg gcc ggg aac ctc gac tct gac tct cag aag att cac1680
Ala Trp Ala Trp Ala Gly Asn Leu Asp Ser Asp Ser Gln Lys Ile His
545 550 555 560
agc tgc acc cgc ccc gct cct ccc acc aac ctg agt ctg ggc ttt gcc1728
Ser Cys Thr Arg Pro Ala Pro Pro Thr Asn Leu Ser Leu Gly Phe Ala
565 570 575
cac cag cct gcg gca ctg aag gct tcc tgg tat cac cca ccg ggt ggc1776
His Gln Pro Ala Ala Leu Lys Ala Ser Trp Tyr His Pro Pro Gly Gly
580 585 590
agg gat gcc ttt cac tta cgg ctt tac agg ctg agg cct ctg aca ctg1824
Arg Asp Ala Phe His Leu Arg Leu Tyr Arg Leu Arg Pro Leu Thr Leu
595 600 605
gaa agt gag aag gtc cta cct cgg gag gcc cag aac ttc tcc tgg gcc1872
Glu Ser Glu Lys Val Leu Pro Arg Glu Ala Gln Asn Phe Ser Trp Ala
610 615 620
cag ctg act gca ggc tgt gag ttc cag gta cag ctg tct acc ttg tgg1920
Gln Leu Thr Ala Gly Cys Glu Phe Gln Val Gln Leu Ser Thr Leu Trp
625 630 635 640
ggg tct gag aga agc agc agt gcc aac gcc aca ggc tgg aca ccc cct1968
Gly Ser Glu Arg Ser Ser Ser Ala Asn Ala Thr Gly Trp Thr Pro Pro
645 650 655
tca gct cct aca ctg gta aac gtg acc agc gat gct cct acc cag ctc2016
Ser Ala Pro Thr Leu Val Asn Val Thr Ser Asp Ala Pro Thr Gln Leu
660 665 670
caa gta tcc tgg gcc cac gtt cct ggg ggc cgg agc cgc tac caa gtg2064
Gln Val Ser Trp Ala His Val Pro Gly Gly Arg Ser Arg Tyr Gln Val
675 680 685
acc cta tac cag gag agt acc cgg aca gcc acc agc atc atg ggg ccc2112
Thr Leu Tyr Gln Glu Ser Thr Arg Thr Ala Thr Ser Ile Met Gly Pro
690 695 700
aag gaa gat ggc acg agc ttt ttg ggt ttg act cct ggc act aag tac2160
Lys Glu Asp Gly Thr Ser Phe Leu Gly Leu Thr Pro Gly Thr Lys Tyr
705 710 715 720
aag gtg gaa gtc atc tcc tgg gct ggg ccc ctc tac act gca gca gcc2208
Lys Val Glu Val Ile Ser Trp Ala Gly Pro Leu Tyr Thr Ala Ala Ala
725 730 735
aac gtt tct gcc tgg acc tac cca ctc ata ccc aat gag ctg ctc gtg2256
Asn Val Ser Ala Trp Thr Tyr Pro Leu Ile Pro Asn Glu Leu Leu Val
740 745 750
tca atg cag gca ggc agt gct gtg gtt aac ctg gcc tgg ccc agt ggt2304
Ser Met Gln Ala Gly Ser Ala Val Val Asn Leu Ala Trp Pro Ser Gly
755 760 765
ccc ctg ggg caa ggg gca tgc cac gcc caa ctc tca gat gct gga cac2352
Pro Leu Gly Gln Gly Ala Cys His Ala Gln Leu Ser Asp Ala Gly His
770 775 780
ctc tca tgg gag caa ccc ctg aaa cta ggc caa gag ctc ttc atg cta2400
Leu Ser Trp Glu Gln Pro Leu Lys Leu Gly Gln Glu Leu Phe Met Leu
785 790 795 800
agg gat ctc aca cca gga cat acc atc tcg atg tca gtg agg tgt cgg2448
Arg Asp Leu Thr Pro Gly His Thr Ile Ser Met Ser Val Arg Cys Arg
805 810 815
gca ggg ccg ctc cag gcc tct acg cac ctt gtg gtg ctg tct gtg gag2496
Ala Gly Pro Leu Gln Ala Ser Thr His Leu Val Val Leu Ser Val Glu
820 825 830
cct ggc cct gtg gaa gat gtg ctc tgt cat cca gag gcc acc tac ctg2544
Pro Gly Pro Val Glu Asp Val Leu Cys His Pro Glu Ala Thr Tyr Leu
835 840 845
gcc ctg aac tgg acg atg cct gct gga gac gtg gat gtc tgt ctg gtg2592
Ala Leu Asn Trp Thr Met Pro Ala Gly Asp Val Asp Val Cys Leu Val
850 855 860
gtg gta gag cgg ctg gtg ccg gga ggg ggc act cat ttt gtc ttc cag2640
Val Val Glu Arg Leu Val Pro Gly Gly Gly Thr His Phe Val Phe Gln
865 870 875 880
gtc aac acc tca ggg gat gct ctt ctg ttg ccc aac ttg atg ccc acc2688
Val Asn Thr Ser Gly Asp Ala Leu Lau Leu Pro Asn Leu Met Pro Thr
885 890 895
act tct tac cgc ctt agc ctc acc gtt ctg ggc agg aat agt cgg tgg2736
Thr Ser Tyr Arg Leu Ser Leu Thr Val Leu Gly Arg Asn Ser Arg Trp
900 905 910
agc cgg gcg gtt tcc ctg gtg tgc agt act tct gct gag gct tgg cac2784
Ser Arg Ala Val Ser Leu Val Cys Ser Thr Ser Ala Glu Ala Trp His
915 920 925
ccc cca gag cta gct gag ccc ccc cag gtg gag ctg ggg aca ggg atg2832
Pro Pro Glu Leu Ala Glu Pro Pro Gln Val Glu Leu Gly Thr Gly Met
930 935 940
ggt gtg aca gtc atg cgt ggc atg ttt ggt aaa gat gac ggg cag atc2880
Gly Val Thr Val Met Arg Gly Met Phe Gly Lys Asp Asp Gly Gln Ile
945 950 955 960
cag tgg tat ggc ata att gcc acc atc aac atg acg ctg gcc cag cct2928
Gln Trp Tyr Gly Ile Ile Ala Thr Ile Asn Met Thr Leu Ala Gln Pro
965 970 975
tcc cgg gaa gcc atc aat tac aca tgg tat gac cac tac tat aga gga2976
Ser Arg Glu Ala Ile Asn Tyr Thr Trp Tyr Asp His Tyr Tyr Arg Gly
980 985 990
tgt gag tcc ttc ctg gct ctc ctg ttc cca aac ccc ttc tac cca gag3024
Cys Glu Ser Phe Leu Ala Leu Leu Phe Pro Asn Pro Phe Tyr Pro Glu
995 10001005
cct tgg gct ggg cca aga tcc tgg aca gta cct gtg ggt act gag3069
Pro Trp Ala Gly Pro Arg Ser Trp Thr Val Pro Val Gly Thr Glu
101010151020
gac tgt gac aac acc caa gag ata tgc aat ggg cgt ctc aag tca3114
Asp Cys Asp Asn Thr Gln Glu Ile Cys Asn Gly Arg Leu Lys Ser
102510301035
ggc ttc cag tat agg ttc agc gtt gtg gcc ttt agt agg ctc aac3159
Gly Phe Gln Tyr Arg Phe Ser Val Val Ala Phe Ser Arg Leu Asn
104010451050
act cca gag acc atc ctc gcc ttc tcg gcc ttc tca gag ccc cgg3204
Thr Pro Glu Thr Ile Leu Ala Phe Ser Ala Phe Ser Glu Pro Arg
105510601065
gcc agc atc tct ctg gcg atc att ccc ctg aca gtt atg ctg ggg3249
Ala Ser Ile Ser Leu Ala Ile Ile Pro Leu Thr Val Met Leu Gly
107010751080
gct gtg gtg ggc agc att gtc att gtg tgt gca gtg cta tgc ttg3294
Ala Val Val Gly Ser Ile Val Ile Val Cys Ala Val Leu Cys Leu
108510901095
ctc cgc tgg cgg tgc ctg aag gga cca aga tca gag aag gat ggc3339
Leu Arg Trp Arg Cys Leu Lys Gly Pro Arg Ser Glu Lys Asp Gly
110011051110
ttt tcc aag gag ctg atg cct tac aac ctg tgg cgg acc cat cgg3384
Phe Ser Lys Glu Leu Met Pro Tyr Asn Leu Trp Arg Thr His Arg
111511201125
cct atc ccc atc cat agc ttc cgg cag agc tat gag gcc aag agc3429
Pro Ile Pro Ile His Ser Phe Arg Gln Ser Tyr Glu Ala Lys Ser
113011351140
gca cat gca cac cag acc ttc ttc cag gaa ttt gag gag ttg aag3474
Ala His Ala His Gln Thr Phe Phe Gln Glu Phe Glu Glu Leu Lys
114511501155
gag gta ggc aag gac cag ccc cga cta gag gct gag cat ccg gac3519
Glu Val Gly Lys Asp Gln Pro Arg Leu Glu Ala Glu His Pro Asp
116011651170
aac atc atc aag aac cgg tac cca cac gtg ctg ccc tat gac cac3564
Asn Ile Ile Lys Asn Arg Tyr Pro His Val Leu Pro Tyr Asp His
117511801185
tcc agg gtc agg ctg acc cag cta cca gga gag cct cat tct gac3609
Ser Arg Val Arg Leu Thr Gln Leu Pro Gly Glu Pro His Ser Asp
119011951200
tac atc aat gcc aac ttc atc cca ggc tat agc cac aca cag gag3654
Tyr Ile Asn Ala Asn Phe Ile Pro Gly Tyr Ser His Thr Gln Glu
120512101215
atc att gcc acc cag ggg cct ctc aaa aag acg cta gag gac ttc3699
Ile Ile Ala Thr Gln Gly Pro Leu Lys Lys Thr Leu Glu Asp Phe
122012251230
tgg cgg ttg gta tgg gag cag caa gtc cac gtg atc atc atg ctg3744
Trp Arg Leu Val Trp Glu Gln Gln Val His Val Ile Ile Met Leu
123512401245
act gtg ggc atg gag aac ggg cgg gta ctg tgt gag cac tac tgg3789
Thr Val Gly Met Glu Asn Gly Arg Val Leu Cys Glu His Tyr Trp
125012551260
cca gcc aac tcc acg cct gtt act cac ggt cac atc acc atc cac3834
Pro Ala Asn Ser Thr Pro Val Thr His Gly His Ile Thr Ile His
126512701275
ctc ctg gca gag gag cct gag gat gag tgg acc agg agg gaa ttc3879
Leu Leu Ala Glu Glu Pro Glu Asp Glu Trp Thr Arg Arg Glu Phe
128012851290
cag ctg cag cac ggt acc gag caa aaa cag agg cga gtg aag cag3924
Gln Leu Gln His Gly Thr Glu Gln Lys Gln Arg Arg Val Lys Gln
129513001305
ctg cag ttc acta cc tgg cca gac cac agt gtc ccg gag gct ccc3969
Leu Gln Phe Thr Thr Trp Pro Asp His Ser Val Pro Glu Ala Pro
131013151320
agc tct ctg ctc gct ttt gta gaa ctg gta cag gag cag gtg cag4014
Ser Ser Leu Leu Ala Phe Val Glu Leu Val Gln Glu Gln Val Gln
132513301335
gcc act cag ggc aag gga ccc atc ctg gtg cat tgc agt gct ggc4059
Ala Thr Gln Gly Lys Gly Pro Ile Leu Val His Cys Ser Ala Gly
134013451350
gtg ggg agg aca ggc acc ttt gtg gct ctc ttg cgg cta ctg cga4104
Val Gly Arg Thr Gly Thr Phe Val Ala Leu Leu Arg Leu Leu Arg
135513601365
caa cta gag gaa gag aag gtg gcc gat gtg ttc aac act gtg tac4149
Gln Leu Glu Glu Glu Lys Val Ala Asp Val Phe Asn Thr Val Tyr
137013751380
ata ctc cgg ttg cac cgg ccc ctc atg atc cag acc ctg agt caa4194
Ile Leu Arg Leu His Arg Pro Leu Met Ile Gln Thr Leu Ser Gln
138513901395
tac atc ttc ctg cac agt tgc ctg ctg aac aag att ctg gaa ggg4239
Tyr Ile Phe Leu His Ser Cys Leu Leu Asn Lys Ile Leu Glu Gly
140014051410
ccc cct gac agc tcc gac tcc ggc ccc atc tct gtg atg gat ttt4284
Pro Pro Asp Ser Ser Asp Ser Gly Pro Ile Ser Val Met Asp Phe
141514201425
gca cag gct tgt gcc aag agg gca gcc aac gcc aat gct ggt ttc4329
Ala Gln Ala Cys Ala Lys Arg Ala Ala Asn Ala Asn Ala Gly Phe
143014351440
ttg aag gag tac aag ctc ctg aag cag gcc atc aag gat ggg act4374
Leu Lys Glu Tyr Lys Leu Leu Lys Gln Ala Ile Lys Asp Gly Thr
144514501455
ggc tct ctg ctg ccc cct cct gac tac aat cag aac agc att gtc4419
Gly Ser Leu Leu Pro Pro Pro Asp Tyr Asn Gln Asn Ser Ile Val
146014651470
tcc cgt cgt cat tct cag gag cag ttc gcc ctg gtg gag gag tgc4464
Ser Arg Arg His Ser Gln Glu Gln Phe Ala Leu Val Glu Glu Cys
147514801485
cct gag gat agc atg ctg gaa gcc tca ctc ttc cct ggt ggt ccg4509
Pro Glu Asp Ser Met Leu Glu Ala Ser Leu Phe Pro Gly Gly Pro
149014951500
tct ggt tgt gat cat gtg gtg ctg act ggc tca gcc gga cca aag4554
Ser Gly Cys Asp His Val Val Leu Thr Gly Ser Ala Gly Pro Lys
150515101515
gaa ctc tgg gaa atg gtg tgg gag cat gat gcc cat gtg ctc gtc4599
Glu Leu Trp Glu Met Val Trp Glu His Asp Ala His Val Leu Val
152015251530
tcc ctg ggc ctg cct gat acc aag gag aag cca cca gac atc tgg4644
Ser Leu Gly Leu Pro Asp Thr Lys Glu Lys Pro Pro Asp Ile Trp
153515401545
cca gtg gag atg cag cct att gtc aca gac atg gtg aca gtg cac4689
Pro Val Glu Met Gln Pro Ile Val Thr Asp Met Val Thr Val His
155015551560
aga gtg tct gag agc aac aca aca act ggc tgg ccc agc acc ctc4734
Arg Val Ser Glu Ser Asn Thr Thr Thr Gly Trp Pro Ser Thr Leu
156515701575
ttc aga gtc ata cac ggg gag agt gga aag gaa agg cag gtt caa4779
Phe Arg Val Ile His Gly Glu Ser Gly Lys Glu Arg Gln Val Gln
158015851590
tgc ctg caa ttt cca tgc tct gag tct ggg tgt gag ctc cca gct4824
Cys Leu Gln Phe Pro Cys Ser Glu Ser Gly Cys Glu Leu Pro Ala
159516001605
aac acc cta ctg acc ttc ctt gat gct gtg ggc cag tgc tgc ttc4869
Asn Thr Leu Leu Thr Phe Leu Asp Ala Val Gly Gln Cys Cys Phe
161016151620
cgg ggc aag agc aag aag cca ggg acc ctg ctc agc cac tcc agc4914
Arg Gly Lys Ser Lys Lys Pro Gly Thr Leu Leu Ser His Ser Ser
162516301635
aaa aac aca aac cag ctg ggc acc ttc ttg gct atg gaa cag ctg4959
Lys Asn Thr Asn Gln Leu Gly Thr Phe Leu Ala Met Glu Gln Leu
164016451650
tta cag caa gca ggg aca gag cgc aca gtg gac gtc ttc aat gtg5004
Leu Gln Gln Ala Gly Thr Glu Arg Thr Val Asp Val Phe Asn Val
165516601665
gcc ctg aag cag tca cag gcc tgc ggc ctt atg acc cca aca ctg5049
Ala Leu Lys Gln Ser Gln Ala Cys Gly Leu Met Thr Pro Thr Leu
167016751680
gag cag tat atc tac ctc tac aac tgt ctg aac agc gca ctg ctg5094
Glu Gln Tyr Ile Tyr Leu Tyr Asn Cys Leu Asn Ser Ala Leu Leu
168516901695
aac ggg ctg ccc aga gct ggg aag tgg cct gcg ccc tgc tag5136
Asn Gly Leu Pro Arg Ala Gly Lys Trp Pro Ala Pro Cys
170017051710
<210>25
<211>1711
<212>PRT
<213>褐家鼠
<400>25
Met Arg Pro Leu Ile Leu Leu Ala Ala Leu Leu Trp Leu Gln Gly Phe
1 5 10 15
Leu Ala Glu Asp Asp Ala Cys Ser Ser Leu Glu Gly Ser Pro Asp Arg
20 25 30
Gln Gly Gly Gly Pro Leu Leu Ser Val Asn Val Ser Ser His Gly Lys
35 40 45
Ser Thr Ser Leu Phe Leu Ser Trp Val Ala Ala Glu Leu Gly Gly Phe
50 55 60
Asp Tyr Ala Leu Ser Leu Arg Ser Val Asn Ser Ser Gly Ser Pro Glu
65 70 75 80
Gly Gln Gln Leu Gln Ala His Thr Asn Glu Ser Gly Phe Glu Phe His
85 90 95
Gly Leu Val Pro Gly Ser Arg Tyr Gln Leu Lys Leu Thr Val Leu Arg
100 105 110
Pro Cys Trp Gln Asn Val Thr Ile Thr Leu Thr Ala Arg Thr Ala Pro
115 120 125
Thr Val Val Arg Gly Leu Gln Leu His Ser Ala Gly Ser Pro Ala Arg
130 135 140
Leu Glu Ala Ser Trp Ser Asp Ala Pro Gly Asp Gln Asp Ser Tyr Gln
145 150 155 160
Leu Leu Leu Tyr His Leu Glu Ser Gln Thr Leu Ala Cys Asn Val Ser
165 170 175
Val Ser Pro Asp Thr Leu Ser Tyr Ser Phe Gly Asp Leu Leu Pro Gly
180 185 190
Thr Gln Tyr Val Leu Glu Val Ile Thr Trp Ala Gly Ser Leu His Ala
195 200 205
Lys Thr Ser Ile Leu Gln Trp Thr Glu Pro Val Pro Pro Asp His Leu
210 215 220
Ala Leu Arg Ala Leu Gly Thr Ser Ser Leu Gln Ala Phe Trp Asn Ser
225 230 235 240
Ser Glu Gly Ala Thr Ser Phe His Leu Met Leu Thr Asp Leu Leu Gly
245 250 255
Gly Thr Asn Thr Thr Ala Val Ile Arg Gln Gly Val Ser Thr His Thr
260 265 270
Phe Leu His L6u Ser Pro Gly Thr Pro His Glu Leu Lys Ile Cys Ala
275 280 285
Ser Ala Gly Pro His Gln Ile Trp Gly Pro Ser Ala Thr Glu Trp Thr
290 295 300
Tyr Pro Ser Tyr Pro Ser Asp Leu Val Leu Thr Pro Leu Arg Asn Glu
305 310 315 320
Leu Trp Ala Ser Trp Lys Ala Gly Leu Gly Ala Arg Asp Gly Tyr Val
325 330 335
Leu Lys Leu Ser Gly Pro Met Glu Ser Thr Ser Thr Leu Gly Pro Glu
340 345 350
Glu Cys Asn Ala Val Phe Pro Gly Pro Leu Pro Pro Gly His Tyr Thr
355 360 365
Leu Gln Leu Lys Val Leu Ala Gly Pro Tyr Asp Ala Trp Val Glu Gly
370 375 380
Ser Thr Trp Leu Ala Glu Ser Ala Ala Leu Pro Arg Glu Val Pro Gly
385 390 395 400
Ala Arg Leu Trp Leu Asp Gly Leu Glu Ala Ser Lys Gln Pro Gly Arg
405 410 415
Arg Ala Leu Leu Tyr Ser Asp Asp Ala Pro Gly Ser Leu Gly Asn Ile
420 425 430
Ser Val Pro Ser Gly Ala Thr His Val Ile Phe Cys Gly Leu Val Pro
435 440 445
Gly Ala His Tyr Arg Val Asp Ile Ala Ser Ser Thr Gly Asp Ile Ser
450 455 460
Gln Ser Ile Ser Gly Tyr Thr Ser Pro Leu Pro Pro Gln Ser Leu Glu
465 470 475 480
Val Ile Ser Arg Ser Ser Pro Ser Asp Leu Thr Ile Ala Trp Gly Pro
485 490 495
Ala Pro Gly Gln Leu Glu Gly Tyr Lys Val Thr Trp His Gln Asp Gly
500 505 510
Ser Gln Arg Ser Pro Gly Asp Leu Val Asp Leu Gly Pro Asp Thr Leu
515 520 525
Ser Leu Thr Leu Lys Ser Leu Val Pro Gly Ser Cys Tyr Thr Val Ser
530 535 540
Ala Trp Ala Trp Ala Gly Asn Leu Asp Ser Asp Ser Gln Lys Ile His
545 550 555 560
Ser Cys Thr Arg Pro Ala Pro Pro Thr Asn Leu Ser Leu Gly Phe Ala
56 5570 575
His Gln Pro Ala Ala Leu Lys Ala Ser Trp Tyr His Pro Pro Gly Gly
580 585 590
Arg Asp Ala Phe His Leu Arg Leu Tyr Arg Leu Arg Pro Leu Thr Leu
595 600 605
Glu Ser Glu Lys Val Leu Pro Arg Glu Ala Gln Asn Phe Ser Trp Ala
610 615 620
Gln Leu Thr Ala Gly Cys Glu Phe Gln Val Gln Leu Ser Thr Leu Trp
625 630 635 640
Gly Ser Glu Arg Ser Ser Ser Ala Asn Ala Thr Gly Trp Thr Pro Pro
645 650 655
Ser Ala Pro Thr Leu Val Asn Val Thr Ser Asp Ala Pro Thr Gln Leu
660 665 670
Gln Val Ser Trp Ala His Val Pro Gly Gly Arg Ser Arg Tyr Gln Val
675 680 685
Thr Leu Tyr Gln Glu Ser Thr Arg Thr Ala Thr Ser Ile Met Gly Pro
690 695 700
Lys Glu Asp Gly Thr Ser Phe Leu Gly Leu Thr Pro Gly Thr Lys Tyr
705 710 715 720
Lys Val Glu Val Ile Ser Trp Ala Gly Pro Leu Tyr Thr Ala Ala Ala
725 730 735
Asn Val Ser Ala Trp Thr Tyr Pro Leu Ile Pro Asn Glu Leu Leu Val
740 745 750
Ser Met Gln Ala Gly Ser Ala Val Val Asn Leu Ala Trp Pro Ser Gly
755 760 765
Pro Leu Gly Gln Gly Ala Cys His Ala Gln Leu Ser Asp Ala Gly His
770 775 780
Leu Ser Trp Glu Gln Pro Leu Lys Leu Gly Gln Glu Leu Phe Met Leu
785 790 795 800
Arg Asp Leu Thr Pro Gly His Thr Ile Ser Met Ser Val Arg Cys Arg
805 810 815
Ala Gly Pro Leu Gln Ala Ser Thr His Leu Val Val Leu Ser Val Glu
820 825 830
Pro Gly Pro Val Glu Asp Val Leu Cys His Pro Glu Ala Thr Tyr Leu
835 840 845
Ala Leu Asn Trp Thr Met Pro Ala Gly Asp Val Asp Val Cys Leu Val
850 855 860
Val Val Glu Arg Leu Val Pro Gly Gly Gly Thr His Phe Val Phe Gln
865 870 875 880
Val Asn Thr Ser Gly Asp Ala Leu Leu Leu Pro Asn Leu Met Pro Thr
885 890 895
Thr Ser Tyr Arg Leu Ser Leu Thr Val Leu Gly Arg Asn Ser Arg Trp
900 905 910
Ser Arg Ala Val Ser Leu Val Cys Ser Thr Ser Ala Glu Ala Trp His
915 920 925
Pro Pro Glu Leu Ala Glu Pro Pro Gln Val Glu Leu Gly Thr Gly Met
930 935 940
Gly Val Thr Val Met Arg Gly Met Phe Gly Lys Asp Asp Gly Gln Ile
945 950 955 960
Gln Trp Tyr Gly Ile Ile Ala Thr Ile Asn Met Thr Leu Ala Gln Pro
965 970 975
Ser Arg Glu Ala Ile Asn Tyr Thr Trp Tyr Asp His Tyr Tyr Arg Gly
980 985 990
Cys Glu Ser Phe Leu Ala Leu Leu Phe Pro Asn Pro Phe Tyr Pro Glu
995 10001005
Pro Trp Ala Gly Pro Arg Ser Trp Thr Val Pro Val Gly Thr Glu
101010151020
Asp Cys Asp Asn Thr Gln Glu Ile Cys Asn Gly Arg Leu Lys Ser
102510301035
Gly Phe Gln Tyr Arg Phe Ser Val Val Ala Phe Ser Arg Leu Asn
104010451050
Thr Pro Glu Thr Ile Leu Ala Phe Ser Ala Phe Ser Glu Pro Arg
105510601065
Ala Ser Ile Ser Leu Ala Ile Ile Pro Leu Thr Val Met Leu Gly
107010751080
Ala Val Val Gly Ser Ile Val Ile Val Cys Ala Val Leu Cys Leu
108510901095
Leu Arg Trp Arg Cys Leu Lys Gly Pro Arg Ser Glu Lys Asp Gly
110011051110
Phe Ser Lys Glu Leu Met Pro Tyr Asn Leu Trp Arg Thr His Arg
111511201125
Pro Ile Pro Ile His Ser Phe Arg Gln Ser Tyr Glu Ala Lys Ser
113011351140
Ala His Ala His Gln Thr Phe Phe Gln Glu Phe Glu Glu Leu Lys
114511501155
Glu Val Gly Lys Asp Gln Pro Arg Leu Glu Ala Glu His Pro Asp
116011651170
Asn Ile Ile Lys Asn Arg Tyr Pro His Val Leu Pro Tyr Asp His
117511801185
Ser Arg Val Arg Leu Thr Gln Leu Pro Gly Glu Pro His Ser Asp
119011951200
Tyr Ile Asn Ala Asn Phe Ile Pro Gly Tyr Ser His Thr Gln Glu
120512101215
Ile Ile Ala Thr Gln Gly Pro Leu Lys Lys Thr Leu Glu Asp Phe
122012251230
Trp Arg Leu Val Trp Glu Gln Gln Val His Val Ile Ile Met Leu
123512401245
Thr Val Gly Met Glu Asn Gly Arg Val Leu Cys Glu His Tyr Trp
125012551260
Pro Ala Asn Ser Thr Pro Val Thr His Gly His Ile Thr Ile His
126512701275
Leu Leu Ala Glu Glu Pro Glu Asp Glu Trp Thr Arg Arg Glu Phe
128012851290
Gln Leu Gln His Gly Thr Glu Gln Lys Gln Arg Arg Val Lys Gln
129513001305
Leu Gln Phe Thr Thr Trp Pro Asp His Ser Val Pro Glu Ala Pro
131013151320
Ser Ser Leu Leu Ala Phe Val Glu Leu Val Gln Glu Gln Val Gln
132513301335
Ala Thr Gln Gly Lys Gly Pro Ile Leu Val His Cys Ser Ala Gly
134013451350
Val Gly Arg Thr Gly Thr Phe Val Ala Leu Leu Arg Leu Leu Arg
135513601365
Gln Leu Glu Glu Glu Lys Val Ala Asp Val Phe Asn Thr Val Tyr
137013751380
Ile Leu Arg Leu His Arg Pro Leu Met Ile Gln Thr Leu Ser Gln
138513901395
Tyr Ile Phe Leu His Ser Cys Leu Leu Asn Lys Ile Leu Glu Gly
140014051410
Pro Pro Asp Ser Ser Asp Ser Gly Pro Ile Ser Val Met Asp Phe
141514201425
Ala Gln Ala Cys Ala Lys Arg Ala Ala Asn Ala Asn Ala Gly Phe
143014351440
Leu Lys Glu Tyr Lys Leu Leu Lys Gln Ala Ile Lys Asp Gly Thr
144514501455
Gly Ser Leu Leu Pro Pro Pro Asp Tyr Asn Gln Asn Ser Ile Val
146014651470
Ser Arg Arg His Ser Gln Glu Gln Phe Ala Leu Val Glu Glu Cys
147514801485
Pro Glu Asp Ser Met Leu Glu Ala Ser Leu Phe Pro Gly Gly Pro
149014951500
Ser Gly Cys Asp His Val Val Leu Thr Gly Ser Ala Gly Pro Lys
150515101515
Glu Leu Trp Glu Met Val Trp Glu His Asp Ala His Val Leu Val
152015251530
Ser Leu Gly Leu Pro Asp Thr Lys Glu Lys Pro Pro Asp Ile Trp
153515401545
Pro Val Glu Met Gln Pro Ile Val Thr Asp Met Val Thr Val His
155015551560
Arg Val Ser Glu Ser Asn Thr Thr Thr Gly Trp Pro Ser Thr Leu
156515701575
Phe Arg Val Ile His Gly Glu Ser Gly Lys Glu Arg Gln Val Gln
158015851590
Cys Leu Gln Phe Pro Cys Ser Glu Ser Gly Cys Glu Leu Pro Ala
159516001605
Asn Thr Leu Leu Thr Phe Leu Asp Ala Val Gly Gln Cys cys Phe
161016151620
Arg Gly Lys Ser Lys Lys Pro Gly Thr Leu Leu Ser His Ser Ser
162516301635
Lys Asn Thr Asn Gln Leu Gly Thr Phe Leu Ala Met Glu Gln Leu
164016451650
Leu Gln Gln Ala Gly Thr Glu Arg Thr Val Asp Val Phe Asn Val
165516601665
Ala Leu Lys Gln Ser Gln Ala Cys Gly Leu Met Thr Pro Thr Leu
167016751680
Glu Gln Tyr Ile Tyr Leu Tyr Asn Cys Leu Asn Ser Ala Leu Leu
168516901695
Asn Gly Leu Pro Arg Ala Gly Lys Trp Pro Ala Pro Cys
170017051710
權利要求
1.用于在哺乳動物中治療或預防糖尿病的方法，包括施用有效量的未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白。
2.權利要求1的方法，其中所述糖尿病為1型糖尿病。
3.權利要求1的方法，其中所述糖尿病為2型糖尿病。
4.權利要求1到3羧化不足的方法，其中所述未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白以有效產生下述效果的量施用，所述效果選自葡萄糖耐量提高、胰島素產生提高、胰島素敏感性提高、胰腺β-細胞增殖提高以及脂連蛋白血清水平提高。
5.用于在哺乳動物中治療或預防血管病癥的方法，包括施用有效量的未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白。
6.權利要求5的方法，其中所述血管病癥是動脈粥樣硬化。
7.權利要求5或6的方法，其中所述未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白以有效產生下述效果的量施用，所述效果選自氧化磷脂減少、動脈粥樣硬化斑塊消退、炎性蛋白的生物合成減少、血漿膽固醇減少、血管平滑肌細胞(VSMC)的增殖和數量減少，以及動脈斑塊的厚度減小。
8.用于治療或預防肥胖癥的方法，包括施用有效量的未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白。
9.權利要求8的方法，其中所述未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白以有效產生下述效果的量施用，所述效果選自葡萄糖耐量提高、胰島素產生提高、胰島素敏感性提高、胰腺β-細胞增殖提高，以及脂連蛋白血清水平提高。
10.用于治療或預防葡萄糖不耐受的方法，包括施用有效量的未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白。
11.用于治療或預防代謝綜合征的方法，包括施用有效量的未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白。
12.權利要求10或11的方法，其中所述未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白以有效產生下述效果的量施用，所述效果選自葡萄糖耐量提高、胰島素產生提高、胰島素敏感性提高、胰腺β-細胞增殖提高，以及脂連蛋白血清水平提高。
13.權利要求1到12中任一項的方法，其中所述哺乳動物是人。
14.權利要求1到12中任一項的方法，其中所述未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白與用于預防骨丟失的藥劑組合施用。
15.權利要求1到12中任一項的方法，其中所述羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白中對應于成熟人骨鈣蛋白17、21和24位的位置上的至少一個谷氨酸未被羧化。
16.權利要求1到12中任一項的方法，其中所述羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白中對應于成熟人骨鈣蛋白17、21和24位的位置上的所有三個谷氨酸均未被羧化。
17.權利要求1到12中任一項的方法，其中所述羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白是羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白的制備物，其中該制備物中對應于成熟人骨鈣蛋白17、21和24位的位置上的全部Glu殘基中多于約20％未被羧化。
18.權利要求1到12中任一項的方法，其中將所述羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白與成熟人骨鈣蛋白以最高序列同源性進行比對時，該羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白與成熟人骨鈣蛋白共有至少80％的氨基酸序列同一性。
19.權利要求1到12中任一項的方法，其中將所述羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白與成熟人骨鈣蛋白以最高序列同源性進行比對時，該羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白與成熟人骨鈣蛋白共有至少85％的氨基酸序列同一性。
20.權利要求1到12中任一項的方法，其中將所述羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白與成熟人骨鈣蛋白以最高序列同源性進行比對時，羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白與成熟人骨鈣蛋白共有至少90％的氨基酸序列同一性。
21.權利要求1到12中任一項的方法，其中所述羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白是選自以下的多肽
(a)包含缺失C端最后10個氨基酸的成熟人骨鈣蛋白的片段；
(b)包含缺失N端前10個氨基酸的成熟人骨鈣蛋白的片段；
(c)包含SEQ ID NO2中62-90位氨基酸的片段；
(d)包含成熟人骨鈣蛋白中1-36位氨基酸的片段；和
(e)上述的變體。
22.羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白在制備用于治療性或預防性治療選自以下的病癥的藥物中的用途糖尿病、血管病癥和肥胖癥、葡萄糖不耐受和代謝綜合征。
23.根據權利要求22的羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白的用途，其中所述糖尿病是1型糖尿病。
24.根據權利要求22的羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白的用途，其中所述糖尿病是2型糖尿病。
25.根據權利要求22的羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白的用途，其中所述病癥是肥胖癥。
26.根據權利要求22的羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白的用途，其中所述病癥是糖尿病，且所述羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白產生選自以下的效果葡萄糖耐量提高、胰島素產生提高、胰島素敏感性提高、胰腺β-細胞增殖提高，以及脂連蛋白血清水平提高。
27.根據權利要求22的羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白的用途，其中所述病癥是血管病癥。
28.根據權利要求27的羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白的用途，其中所述血管病癥是動脈粥樣硬化。
29.根據權利要求27的羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白的用途，其中所述羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白產生選自以下的效果氧化磷脂減少、動脈粥樣硬化斑塊消退、炎性蛋白的生物合成減少、血漿膽固醇減少、血管平滑肌細胞(VSMC)的增殖和數量減少，以及動脈斑塊的厚度減小。
30.根據權利要求22的羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白的用途，其中所述糖尿病是葡萄糖不耐受。
31.根據權利要求22的羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白的用途，其中所述糖尿病是代謝綜合征。
32.根據權利要求30或31的羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白的用途，其中所述羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白產生選自以下的效果葡萄糖耐量提高、胰島素產生提高、胰島素敏感性提高、胰腺β-細胞增殖提高，以及脂連蛋白血清水平提高。
33.根據權利要求22到32中任一項的羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白的用途，其與用于預防骨丟失的藥劑相組合。
34.根據權利要求22到32中任一項的羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白的用途，其中所述羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白中對應于成熟人骨鈣蛋白17、21和24位的位置上的至少一個谷氨酸未被羧化。
35.根據權利要求22到32中任一項的羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白的用途，其中所述羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白中對應于成熟人骨鈣蛋白17、21和24位的位置上的所有三個谷氨酸均未被羧化。
36.根據權利要求22到32中任一項的羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白的用途，其中羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白是羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白的制備物，其中該制備物中對應于成熟人骨鈣蛋白17、21和24位位置上的全部Glu殘基中多于約20％未被羧化。
37.根據權利要求22到32中任一項的羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白的用途，其中將所述羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白與成熟人骨鈣蛋白以最高序列同源性進行比對時，該羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白與成熟人骨鈣蛋白共有至少80％的氨基酸序列同一性。
38.根據權利要求22到32中任一項的羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白的用途，其中將所述羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白與成熟人骨鈣蛋白以最高序列同源性進行比對時，該羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白與成熟人骨鈣蛋白共有至少85％的氨基酸序列同一性。
39.根據權利要求22到32中任一項的羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白的用途，其中將所述羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白與成熟人骨鈣蛋白以最高序列同源性進行比對時，該羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白與成熟人骨鈣蛋白共有至少90％的氨基酸序列同一性。
40.根據權利要求22到32中任一項的羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白的用途，其中與羧化的骨鈣蛋白相比，所述羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白與羥基磷灰石的結合降低。
41.根據權利要求22到32中任一項的羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白的用途，其中所述羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白是選自以下的多肽
(a)包含缺失C端最后10個氨基酸的成熟人骨鈣蛋白的片段；
(b)包含缺失N端前10個氨基酸的成熟人骨鈣蛋白的片段；
(c)包含SEQ ID NO2中62-90位氨基酸的片段；
(d)包含成熟人骨鈣蛋白1-36位氨基酸的片段；和
(e)上述的變體。
42.羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白在治療病癥中的用途，所述病癥選自糖尿病、血管病癥和肥胖癥、葡萄糖不耐受和代謝綜合征。
43.根據權利要求42的羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白的用途，其中所述糖尿病是1型糖尿病。
44.根據權利要求42的羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白的用途，其中所述糖尿病是2型糖尿病。
45.根據權利要求42的羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白的用途，其中所述病癥是肥胖癥。
46.根據權利要求42的羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白的用途，其中所述病癥是糖尿病，且所述羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白產生選自以下的效果葡萄糖耐量提高、胰島素產生提高、胰島素敏感性提高、胰腺β-細胞增殖提高，以及脂連蛋白血清水平提高。
47.根據權利要求42的羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白的用途，其中所述病癥是血管病癥。
48.根據權利要求47的羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白的用途，其中所述血管病癥是動脈粥樣硬化。
49.根據權利要求47的羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白的用途，其中所述羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白產生選自以下的效果氧化磷脂減少、動脈粥樣硬化斑塊消退、炎性蛋白的生物合成減少、血漿膽固醇減少、血管平滑肌細胞(VSMC)的增殖和數量減少，以及動脈斑塊的厚度減小。
50.根據權利要求42的羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白的用途，其中所述糖尿病是葡萄糖不耐受。
51.根據權利要求42的羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白的用途，其中所述糖尿病是代謝綜合征。
52.根據權利要求50或51的羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白的用途，其中所述羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白產生選自以下的效果葡萄糖耐量提高、胰島素產生提高、胰島素敏感性提高、胰腺β-細胞增殖提高，以及脂連蛋白血清水平提高。
53.根據權利要求42到52中任一項的羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白的用途，其與用于預防骨丟失的藥劑相組合。
54.根據權利要求42到52中任一項的羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白的用途，其中所述羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白中對應于成熟人骨鈣蛋白17、21和24位的位置上的至少一個谷氨酸未被羧化。
55.根據權利要求42到52中任一項的羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白的用途，其中所述羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白中對應于成熟人骨鈣蛋白17、21和24位的位置上的所有三個谷氨酸均未被羧化。
56.根據權利要求42到52中任一項的羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白的用途，其中羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白是羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白的制備物，其中該制備物中對應于成熟人骨鈣蛋白17、21和24位的位置上的全部Glu殘基中多于約20％未被羧化。
57.根據權利要求42到52中任一項的羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白的用途，其中將所述羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白與成熟人骨鈣蛋白以最高序列同源性進行比對時，羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白與成熟人骨鈣蛋白共有至少80％的氨基酸序列同一性。
58.根據權利要求42到52中任一項的羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白的用途，其中將所述羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白與成熟人骨鈣蛋白以最高序列同源性進行比對時，該羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白與成熟人骨鈣蛋白共有至少85％的氨基酸序列同一性。
59.根據權利要求42到52中任一項的羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白的用途，其中將所述羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白與成熟人骨鈣蛋白以最高序列同源性進行比對時，該羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白與成熟人骨鈣蛋白共有至少90％的氨基酸序列同一性。
60.根據權利要求42到52中任一項的羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白的用途，其中所述羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白是選自以下的多肽
(a)包含缺失C端最后10個氨基酸的成熟人骨鈣蛋白的片段；
(b)包含缺失N端前10個氨基酸的成熟人骨鈣蛋白的片段；
(c)包含SEQ ID NO2中62-90位氨基酸的片段；
(d)包含成熟人骨鈣蛋白中1-36位氨基酸的片段；和
(e)上述的變體。
61.診斷有發生與能量代謝和OST-PTP信號轉導途徑相關疾病風險之患者的方法，所述方法包括(i)測定來自該患者的生物樣品中羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白與總骨鈣蛋白的比值；和(ii)將該比值與標準比值進行比較；其中，如果患者的比值低于標準比值，則該患者有發生與OST-PTP信號轉導途徑相關之疾病的風險。
62.權利要求61的方法，其中與OST-PTP信號轉導途徑相關的疾病選自代謝綜合征、葡萄糖不耐受、1型糖尿病、2型糖尿病、動脈粥樣硬化和肥胖癥。
63.權利要求61或62任一項的方法，其中與OST-PTP信號轉導相關之疾病的特征是胰島素產生降低、胰島素敏感性降低、葡萄糖耐量降低和/或脂肪量提高。
64.權利要求61-63中任一項的方法，其中所述生物樣品是血。
65.權利要求61-63中任一項的方法，其中所述標準比值選自5％-10％、10％-15％、15％-20％、20％-25％、25％-30％和30％-35％。
66.用于在哺乳動物中治療或預防糖尿病的藥物組合物，其包含有效量的未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白。
67.權利要求66的藥物組合物，其中所述糖尿病是1型糖尿病。
68.權利要求66的藥物組合物，其中所述糖尿病是2型糖尿病。
69.權利要求66到68的藥物組合物，其中所述未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白的量是有效產生下述效果的量，所述效果選自葡萄糖耐量提高、胰島素產生提高、胰島素敏感性提高、胰腺β-細胞增殖提高，以及脂連蛋白血清水平提高。
70.用于在哺乳動物中治療或預防血管病癥的藥物組合物，其包含有效量的未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白。
71.權利要求70的藥物組合物，其中所述血管病癥是動脈粥樣硬化。
72.權利要求70或71的藥物組合物，其中所述未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白量是有效產生下述效果的量，所述效果選自氧化磷脂減少、動脈粥樣硬化斑塊消退、炎性蛋白的生物合成減少、血漿膽固醇減少、血管平滑肌細胞(VSMC)的增殖和數量減少，以及動脈斑塊的厚度減小。
73.用于治療或預防肥胖癥的藥物組合物，其包含有效量的未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白。
74.權利要求73的藥物組合物，其中所述未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白的量是有效產生下述效果的量，所述效果選自葡萄糖耐量提高、胰島素產生提高、胰島素敏感性提高、胰腺β-細胞增殖提高，以及脂連蛋白血清水平提高。
75.用于治療或預防葡萄糖不耐受的藥物組合物，其包含有效量的未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白。
76.用于治療或預防代謝綜合征的藥物組合物，其包含有效量的未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白。
77.權利要求75或76的藥物組合物，其中所述未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白的量是有效產生下述效果的量，所述效果選自葡萄糖耐量提高、胰島素產生提高、胰島素敏感性提高、胰腺β-細胞增殖提高，以及脂連蛋白血清水平提高。
78.權利要求66到77中任一項的藥物組合物，其中所述哺乳動物是人。
79.權利要求66到77中任一項的藥物組合物，其中所述未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白與用于預防骨丟失的藥劑相組合。
80.權利要求66到77中任一項的藥物組合物，其中所述羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白中對應于成熟人骨鈣蛋白17、21和24位的位置上的至少一個谷氨酸未被羧化。
81.權利要求66到77中任一項的藥物組合物，其中所述羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白中對應于成熟人骨鈣蛋白17、21和24位的位置上的所有三個谷氨酸均未被羧化。
82.根據權利要求66到77中任一項的藥物組合物，其中所述羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白是羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白的制備物，其中該制備物中對應于成熟人骨鈣蛋白17、21和24位的位置上的全部Glu殘基中多于約20％未被羧化。
83.根據權利要求66到77中任一項的藥物組合物，其中將所述羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白與成熟人骨鈣蛋白以最高序列同源性進行比對時，該羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白與成熟人骨鈣蛋白共有至少80％的氨基酸序列同一性。
84.根據權利要求66到77中任一項的藥物組合物，其中將所述羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白與成熟人骨鈣蛋白以最高序列同源性進行比對時，該羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白與成熟人骨鈣蛋白共有至少85％的氨基酸序列同一性。
85.根據權利要求66到77中任一項的藥物組合物，其中將所述羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白與成熟人骨鈣蛋白針對最高序列同源性進行比對時，該羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白與成熟人骨鈣蛋白共有至少90％的氨基酸序列同一性。
86.權利要求66到77中任一項的藥物組合物，其中羧化不足/未羧化的骨鈣蛋白是選自以下的多肽
(a)包含缺失C端最后10個氨基酸之成熟人骨鈣蛋白的片段；
(b)包含缺失N端前10個氨基酸之成熟人骨鈣蛋白的片段；
(c)包含SEQ ID NO2中62-90位氨基酸的片段；
(d)包含成熟人骨鈣蛋白中1-36位氨基酸的片段；和
(e)上述的變體。
87.用于在哺乳動物中治療或預防與能量代謝相關之病癥的方法，包括施用選自以下的組合物未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白、降低OST-PTP磷酸化酶活性的藥劑、降低γ-羧化酶活性的藥劑、增加未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白的藥劑，以及使骨鈣蛋白脫羧的藥劑。
88.根據權利要求66的方法，其中與能量代謝相關的病癥選自代謝綜合征、葡萄糖耐量、糖尿病、血管疾病和肥胖癥。
89.權利要求65到88的方法，其中所述組合物以產生下述效果的量施用，所述效果選自葡萄糖耐量提高、胰島素產生提高、胰島素敏感性提高、胰腺β-細胞增殖提高、脂連蛋白血清水平提高、氧化磷脂減少、動脈粥樣硬化斑塊消退、炎性蛋白的生物合成減少、血漿膽固醇減少、血管平滑肌細胞(VSMC)的增殖和數量減少，以及動脈斑塊的厚度減小。
90.用于在哺乳動物中提高胰島素敏感性的方法，包括施用有效量的未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白。
91.用于在哺乳動物中提高胰島素產生的方法，包括施用有效量的未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白。
92.用于在哺乳動物中提高葡萄糖耐量的方法，包括施用有效量的未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白。
93.用于在哺乳動物中提高胰腺β-細胞增殖的方法，包括施用有效量的未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白。
94.用于在哺乳動物中提高脂連蛋白血清水平的方法，包括施用有效量的未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白。
95.權利要求66到94中任一項的方法，其中所述哺乳動物是人。
96.選自未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白、降低OST-PTP磷酸化酶活性的藥劑、降低γ-羧化酶活性的藥劑、增加未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白的藥劑以及使骨鈣蛋白脫羧之藥劑的藥劑用于制備在哺乳動物中治療或預防與能量代謝相關之病癥的藥物的用途。
97.根據權利要求96的藥劑的用途，其中所述與能量代謝相關的病癥選自代謝綜合征、葡萄糖耐量、糖尿病、血管疾病和肥胖癥。
98.根據權利要求96到97的藥劑的用途，其中所述藥劑以產生下述效果的量施用，所述效果選自葡萄糖耐量提高、胰島素產生提高、胰島素敏感性提高、胰腺β-細胞增殖提高、脂連蛋白血清水平提高、氧化磷脂減少、動脈粥樣硬化斑塊消退、炎性蛋白的生物合成減少、血漿膽固醇減少、血管平滑肌細胞(VSMC)的增殖和數量減少，以及動脈斑塊的厚度減小。
99.有效量的未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白用于制備在哺乳動物中提高胰島素敏感性的藥物的用途。
100.有效量的未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白用于制備在哺乳動物中提高胰島素產生的藥物的用途。
101.有效量的未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白用于制備在哺乳動物中提高葡萄糖耐量的藥物的用途。
102.有效量的未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白用于制備在哺乳動物中提高胰腺β-細胞增殖的藥物的用途。
103.有效量的未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白用于制備在哺乳動物中提高脂連蛋白血清水平的藥物的用途。
104.根據權利要求96到103中任一項的用途，其中所述哺乳動物是人。
105.選自未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白、降低OST-PTP磷酸化酶活性的藥劑、降低γ-羧化酶活性的藥劑、增加未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白的藥劑以及使骨鈣蛋白脫羧之藥劑的藥劑作為在哺乳動物中治療或預防能量代謝相關病癥的藥物的用途。
106.根據權利要求105的藥劑的用途，其中所述與能量代謝相關的病癥選自代謝綜合征、葡萄糖耐量、糖尿病、血管疾病和肥胖癥。
107.根據權利要求104到105的藥劑的用途，其中所述藥劑以產生下述效果的量施用，所述效果選自葡萄糖耐量提高、胰島素產生提高、胰島素敏感性提高、胰腺β-細胞增殖提高、脂連蛋白血清水平提高、氧化磷脂減少、動脈粥樣硬化斑塊消退、炎性蛋白的生物合成減少、血漿膽固醇減少、血管平滑肌細胞(VSMC)的增殖和數量減少，以及動脈斑塊的厚度減小。
108.有效量的未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白作為在哺乳動物中提高胰島素敏感性的藥物的用途。
109.有效量的未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白作為在哺乳動物中提高胰島素生產的藥物的用途。
110.有效量的未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白作為在哺乳動物中提高葡萄糖耐量的藥物的用途。
111.有效量的未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白作為在哺乳動物中提高胰腺β-細胞增殖的藥物的用途。
112.有效量的未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白作為在哺乳動物中提高脂連蛋白血清水平的藥物的用途。
113.根據權利要求105到112中任一項的用途，其中所述哺乳動物是人。
114.用于在哺乳動物中治療或預防能量代謝相關之病癥的藥物組合物，包含選自以下的組合物未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白、降低OST-PTP磷酸化酶活性的藥劑、降低γ-羧化酶活性的藥劑、增加未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白的藥劑，以及使骨鈣蛋白脫羧的藥劑。
115.根據權利要求114的藥物組合物，其中所述與能量代謝相關的病癥選自代謝綜合征、葡萄糖耐量、糖尿病、血管疾病和肥胖癥。
116.權利要求114到115的藥物組合物，其中該藥劑的量是產生下述效果的量，所述效果選自葡萄糖耐量提高、胰島素產生提高、胰島素敏感性提高、胰腺β-細胞增殖提高、脂連蛋白血清水平提高、氧化磷脂減少、動脈粥樣硬化斑塊消退、炎性蛋白的生物合成減少、血漿膽固醇減少、血管平滑肌細胞(VSMC)的增殖和數量減少，以及動脈斑塊的厚度減小。
117.用于在哺乳動物中提高胰島素敏感性的藥物組合物，其包含有效量的未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白。
118.用于在哺乳動物中提高胰島素產生的藥物組合物，其包含有效量的未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白。
119.用于在哺乳動物中提高葡萄糖耐量的藥物組合物，其包含有效量的未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白。
120.用于在哺乳動物中提高胰腺β-細胞增殖的藥物組合物，其包含有效量的未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白。
121.用于在哺乳動物中提高脂連蛋白血清水平的藥物組合物，其包含有效量的未羧化/羧化不足的骨鈣蛋白。
122.權利要求114到121中任一項的方法，其中所述哺乳動物是人。
全文摘要
本發明涉及用于治療和診斷能量代謝及OST-PTP信號轉導途徑(包括γ-羧化酶、骨鈣蛋白和脂連蛋白)相關病癥的方法和組合物。這些病癥包括但不僅限于代謝綜合征、葡萄糖不耐受、1型和2型糖尿病、動脈粥樣硬化和肥胖癥。
文檔編號A61K38/00GK101610780SQ200780042023
公開日2009年12月23日 申請日期2007年9月13日 優先權日2006年9月13日
發明者杰拉爾德·卡爾桑蒂, 帕特里夏·F·迪西 申請人:紐約市哥倫比亞大學托管會