專利名稱：作為組蛋白去乙酰化酶抑制劑的2-吲哚滿酮衍生物、其制法和用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及具有組蛋白去乙酰化酶抑制活性的2-吲哚滿酮衍生物的合成及其在治療與組蛋白去乙酰化酶活性異常相關的疾病方面的臨床應用。
背景技術：
組蛋白去乙酰化酶(HDAC)蛋白在調控體內的基因表達方面起著關鍵作用，它改變轉錄因子到染色體組DNA的可達性。尤其是HDAC去除組蛋白中乙酰化賴氨酸殘基的乙酰基，從而導致核小體重構(Grunstein，M.，1997，Nature，389349-352)。由于HDAC蛋白在基因表達中起著關鍵作用，所以它們與許多細胞功能密切相關，包括細胞周期調控、細胞增殖、分化、基因程序化表達和癌癥發生(Ruijter，A-J-M.，2003，Biochem.J.，370737-749；Grignani，F.，1998，Nature，391815-818；Lin，R-J.，1998，391811-814；Marks，P-A.，2001，Nature Reviews Cancer，1194)。由組蛋白去乙酰化酶誤調所致的異常去乙酰化與許多臨床疾病密切相關，如魯-泰(Rubinstein-Taybi)二氏綜合征、脆性X染色體綜合癥、白血病和其它各種癌癥(Langley B etal.，2005，Current Drug Targets-CNS & Neurological Disorders，441-50)。試驗表明，IIDAC抑制劑能夠抑制人類及動物體內的腫瘤的生長，包括肺癌、胃癌、乳腺癌、前列腺癌和淋巴瘤等(Dokmanovic，M.，2005，J.Cell Biochenm.，96293-304)。
組蛋白去乙酰化酶活性異常與各種神經系統疾病及神經退化疾病密切相關，包括中風、亨廷頓舞蹈(Huntington)疾病、肌萎縮側索硬化(Amyotrophic Lateral Sclerosis)和阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease)。抑制組蛋白去乙酰化酶能夠誘導抗有絲分裂和抗凋亡基因的表達，如p21和HSP-70，有利于正常細胞的存活。HDAC抑制劑也能夠作用于中樞神經系統的其他神經細胞，如反應性星形膠質細胞和小神經膠質細胞，降低在神經損傷或疾病中的炎癥和二次傷害。通過HDAC抑制劑增加乙酰化，可以誘導樹突發芽(突觸數量增加)，重建學習行為，進入長期記憶。HDAC抑制劑可以逆轉弗里德賴希共濟失調癥(Friedreich’s ataxia)的基因沉默。這些數據表明，HDAC抑制是一種極具希望的治療許多中樞神經系統疾病的方法(LangleyB et al.，2005，Current Drug Targets-CNS & Neurological Disorders，441-50；Fischer A.，et al，2007，Nature 447(10)178-183；Herman D.，et al.，2006，Nature Chemical Biology 2(10)551-558)。
依據序列同源性，哺乳動物的HDACs可以分為三類。第一類由酵母Rpd3-類蛋白組成(HDAC 1，2，3，8和11)。第二類由酵母HDA1-類蛋白組成(HDAC 4，5，6，7，9和10)。第三類由酵母SIR2-類蛋白組成(SIRT 1，2，3，4，5，6和7)。
HDAC1的活性和細胞增殖(癌癥的標志)相關。哺乳動物細胞通過siRNA降低HDAC1表達，具有抗增殖性(Glaser，K-B.，2003，Biochem.Biophys.Res.Comm.，310529-536)。HDAC1基因敲除鼠是胚胎致死的，其余細胞表現出不一樣的細胞生長(Lagger，G.，2002，EMBO J.，212672-2681)。HDAC1過度表達的老鼠細胞顯示G2和M期延長及生長速度降低(Bartl.S.，1997，Mol.Cell Biol.，175033-5043)。因此，試驗數據表明，HDAC1與細胞周期調控及細胞增殖密切相關。
HDAC2調控許多胎心肌蛋白異構體的表達。HDAC2缺乏或是通過化學方法抑制組蛋白去乙酰化酶可以阻止胚胎基因的再表達，減少心室肥大。抗肥大和肌醇多磷酸鹽-5-磷酸酶f(Inpp5f)編碼基因表達增加有關，這種增加導致胸腺瘤濾過性病毒的原癌基因(Akt)和3-磷酸肌醇-依賴的蛋白激酶-1失活，激活了糖原合成酶激酶3β(Gsk3β)。相反，HDAC2轉基因鼠心室肥大增加，這與失活的Gsk3β有關。通過化學方法抑制活化的Gsk3β使得HDAC2-缺乏的成人對心室肥大的刺激變得敏感。這些結果表明，在心臟中HDAC2是HDAC抑制劑的一個重要的分子靶標。HDAC2和Gsk3β都是調控通路的組成部分，這為治療心室肥大和心力衰竭提供了極具吸引力的治療靶標(Trivedi，C-M.，2007，Nat.Med，.13324-331)。
HDAC3在正常小腸的增殖隱窩細胞中表達最多。在結腸癌細胞系中HDAC3表達沉默導致細胞生長抑制、細胞存活降低和細胞凋亡增加。沉默HDAC2表達可以觀察到類似的效果，而對于HDAC1，效果則沒有那么顯著。HDAC3基因沉默也選擇性的引起堿性磷酸酯酶的表達(結腸細胞成熟的標志)。HDAC3的過度表達抑制基礎轉錄及丁酸酯誘導的P21轉錄，而沉默HDAC3則刺激P21基因啟動了的活性和表達。這些發現表明HDAC3是在人體結腸癌中進行下調的基因，是結腸細胞成熟和P21表達的一種新型的調節劑(Wilson，A-J.，2006，J.Biol.Chem.，28113548-13558)。
HDAC6是HDAC家族的一個亞型，它脫去α-微管蛋白的乙酰基，增加細胞運動性。在九組口腔鱗狀細胞癌(OSCC)的細胞系和正常的口腔角化細胞(NOKs)上運用定量實時逆轉錄聚合酶鏈反應和Western Blots技術分析，與NOKs相比，HDAC6 mRNA和蛋白表達水平在所有的癌細胞中都升高了。通過免疫熒光法分析，在OSCC細胞系的細胞質中檢測到了HDAC6蛋白。和OSCC細胞系相似，在早期的人體OSCC腫瘤中HDAC6上調明顯，mRNA達74％，蛋白達51％。通過對臨床變量的分析，人們發現臨床腫瘤的發展階段和HDAC6的表達狀態相關。分析表明，HDAC6的表達水平在腫瘤早期(I和II期)和晚期(III和IV期)存在顯著差異(P＝0.014)。這些結果表明HDAC6的表達可能和腫瘤的惡性程度有關，這也為設計新的治療方法提供了線索(Sakuma，T.，2006，Int.J.Oncol.，29117-124)。
IIa類HDAC包括HDAC4，5和7。在過去幾年中，研究人員確定了IIa類HDAC在活體中的一些重要生理功能。令人吃驚的是，這些看似沒有聯系的生理過程有著共同的特征，它們都依賴于IIa類HDAC對MEF2轉錄活動的嚴密控制。諸如骨骼肌的形成、心肥大、骨發育、T-細胞分化和神經元存活等關鍵生理過程都被IIa類HDAC所控制，這一事實意味著許多人類病理學的干預療法是有可能的，包括血管類疾病如動脈硬化、中風和動脈瘤、腫瘤血管生成和轉移、侏儒癥、骨骼畸形、自身免疫和淋巴增生綜合征、神經退化性疾病和心肌肥大(MartinM.et al，2007，Oncogene 265450-5467)。
HDAC使功能染色體表觀基因沉默是許多病理過程的主要機制之一。其中，功能相關基因被HDAC抑制或重調，導致在終末分化、成熟和生長控制中表型缺失，并且喪失組織功能。例如，腫瘤抑制基因經常在癌癥的發展過程中被沉默，HDAC抑制劑能夠誘導這些腫瘤抑制基因的表達，從而抑制腫瘤細胞生長和分化(Glaros S et al.，2007，Oncogene June 4 Epub ahead ofprint；Mai，A，et al.，2007，Int J.Biochem Cell Bio.，April 4，Epub ahead of print；Vincent A.et al.，2007，Oncogene，April 30，Epub ahead of print；our unpublished results)。結構基因(如與Friedreich’s運動失調相關的FXN基因和與脊柱肌肉萎縮相關的SMN基因)的抑制可以被HDAC逆轉，使得FXN和SMN基因重新表達，并恢復組織功能(Herman D et al.，2006，NatureChemical Biology，2(10)551-8；Avila AM et al.，2007，J Clinic Investigation，117(3)659-71；de BoreJ，2006，Tissue Eng.12(10)2927-37)。HDAC抑制劑在染色體6p21-22重調HDAC“熱點”程序，誘導了整個MHC II家族基因表達，進一步延伸了免疫識別和免疫響應的表觀基因調控(Gialitakis M et al.，2007，Nucleic Acids Res.，34(1)；765-72)。
目前已經確定了幾類HDAC抑制劑，包括1)短鏈脂肪酸，如丁酸和苯丁酸；2)有機羥肟酸，如suberoylanilide hydroxamic acid(SAHA)和trichostatin A(TSA)；3)含有2-胺基-8-氧-9，10-環氧癸酰基(AOE)的環四肽，如trapoxin和HC-toxin；4)不含2-氨基-8-氧-9，10-環氧癸酰基的環四肽，如apicidin和FK228；5)苯酰胺類，如MS-275(歐洲專利EP 0847992A1，美國專利2002/0103192A1，世界專利02/26696A1，世界專利01/70675A2，世界專利01/18171A2)。盡管HDAC是一個極具前景的藥物靶標，但目前Merck公司研制的SAHA僅僅局限于對皮膚T細胞淋巴瘤的治療，而對實體瘤療效并不明顯。因此，有必要繼續研制新的化合物，使其具有更強的HDAC抑制活性、更強的抗癌活性、更好的HDAC亞型選擇性和更低的毒性。
發明內容
本發明的目的在于提供一種具有組蛋白去乙酰化酶抑制活性的2-吲哚滿酮衍生物； 本發明的另一目的在于提供一種制備上述化合物的方法； 本發明的進一步目的在于提供一種治療魯-泰二氏綜合征、脆性X染色體綜合癥、白血病、癌癥、免疫學疾病、心肌肥大、骨骼疾病、神經系統疾病和神經退化性疾病的藥用制劑。
本發明的另一目的在于提供上述化合物和藥用制劑，可以有選擇性地抑制組蛋白去乙酰化酶，在用于治療與組蛋白去乙酰化酶活性異常相關的疾病，如魯-泰(Rubinstein-Taybi)二氏綜合征、脆性X染色體綜合癥、白血病、癌癥、免疫學疾病、心肌肥大、骨骼疾病和各種神經系統疾病和神經退化性疾病的藥物中的應用。
本發明所述化合物，其化學結構如通式(I)所示
其中， R1、R2、R3和R4分別為氫、鹵素、烷基、烷氧基、硝基或三氟甲基； R5為-NHOH或
R6、R7、R8和R9分別為氫、鹵素、烷基、烷氧基或三氟甲基； Ar為苯環或2，4-二甲基-1H-吡咯； 當Ar為苯環時，X為＝CH-或＝N-N＝CH-；當Ar為2，4-二甲基-1H-吡咯時，X為＝N-N＝CH-； n為1到7的整數； 包括其游離形式、鹽的形式、對映異構體、非對映異構體或水合物。
所述鹵素為氟、氯、溴、碘中的一種，優選為氟或氯，最優選為氟。
所述烷基包括直鏈、支鏈或環狀烷基，優選為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、特丁基、正戊基、異戊基、正己基、異己基、環丙基、環丁基、環戊基、環己基中的一種；更優選為甲基、乙基、正丙基、異丙基中的一種；最優選為甲基或乙基。
所述烷氧基指烷基與氧原子相連所形成的基團，其中，氧原子具有自由成鍵能力，優選為甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基、異丙氧基、特丁氧基、環丙氧基、環己基氧基中的一種；更優選為甲氧基、乙氧基、丙氧基中的一種；最優選為甲氧基、乙氧基。
本發明所說的化合物的合成路線如下所示 (a)將化合物1與化合物2進行縮合反應得到化合物3；
(b)將化合物3水解得到化合物4；
(c)將化合物4與羥胺進行縮合反應得到化合物5a；
(d)將化合物4與化合物6進行縮合反應得到化合物5b。
上述縮合反應(a)和(d)以肽縮合劑為催化劑，如1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺(EDC)，N，N’-二環己基碳二亞胺(DCC)，N，N’-碳酰二咪唑(CDI)等。反應溫度為0～80℃，反應時間為4～72小時。反應所用溶劑為常用溶劑，如苯、甲苯、四氫呋喃、二氧六環、一氯甲烷、氯仿、N，N-二甲基甲酰胺等。必要時，也可以加入堿如氫氧化鈉、三乙胺或吡啶。
上述縮合反應(c)以ClCOOEt為縮合劑，反應溫度為0～80℃，反應時間為1～24小時。反應所用溶劑為常用溶劑，如苯、甲苯、四氫呋喃、二氧六環、二氯甲烷、氯仿、N，N-二甲基甲酰胺等。必要時，也可以加入堿如氫氧化鈉、三乙胺或吡啶。
上述水解反應(b)以氫氧化鋰，氫氧化鈉或氫氧化鉀為水解試劑，反應溫度為0～80℃，反應時間為2～72小時。反應所用溶劑為常用溶劑，如水、甲醇、乙醇、四氫呋喃、1，4-二氧六環、N，N-二甲基甲酰胺等。
上述縮合反應(a)所使用的化合物1，當X為＝CH-時，其制備方法為
該反應的反應溫度為70～80℃，反應時間為4～72小時，反應所用溶劑為乙醇。
上述縮合反應(a)所使用的化合物1，當X為＝N-N＝CH-時，其制備方法為 步驟1
步驟2
其中，步驟1的反應溫度為70～100℃，反應時間為1～10小時，反應所用溶劑為水；步驟2的反應溫度為70～80℃，反應時間為2～72小時，反應所用溶劑為乙醇。
通式(I)所述的化合物及中間體(3)和中間體(4)，可以采用常見的分離方法進行純化，如萃取、重結晶、柱層析等。
本發明的化合物和藥用制劑具有組蛋白去乙酰化酶抑制活性，可用于制備治療與組蛋白去乙酰化酶活性異常相關的疾病的藥物，尤其對魯-泰(Rubinstein-Taybi)二氏綜合征、脆性X染色體綜合癥、白血病、癌癥、免疫學疾病、心肌肥大、骨骼疾病和各種神經系統疾病和神經退化性疾病具有優異療效。
本發明所述的化合物，可以按照藥學領域的常規生產方法加工成常用的藥用制劑，如片劑、膠囊、粉劑、糖漿、液劑、懸浮劑、針劑。該制劑包括作為活性組分的通式(I)的化合物，以及藥用載體、輔料或稀釋劑。該制劑中通常含有0.5～70％的活性成分，較佳含量為1～20％。該藥用制劑的劑型規格為0.0001～200mg。
本發明所說的藥用載體、輔料或稀釋劑，包括《藥用輔料手冊》(本手冊原著名為《Handbookof Pharmaceutical Excipients》由美國Pharmaceutical Press出版)所列的載體填料，但并不局限于這些載體填料。
本發明所述的化合物，在臨床上可以通過口服或注射方式對哺乳動物(包括人)進行用藥，其中尤以口服方式最佳。用藥劑量為每日0.0001～200mg/kg體重，較佳用藥劑量為每日0.01～100mg/kg體重，最佳用藥劑量為每日0.1～50mg/kg體重，同時，最佳劑量視個體而定，通常開始時劑量較小，然后逐漸增加用量。
本發明所述的代表性化合物如表1所示。化合物編號與實施例部分中的“實施例編號”相一致，即表1中化合物5的合成在“實施例5”中得到描述，表1中化合物58的合成在“實施例58”中得到描述。
表1 本發明代表性化合物
下面結合實例進一步闡明本發明的內容，但本發明的保護范圍并不僅僅局限于這些實例。本發明所述的百分比除特別注明外，均為重量百分比。說明書中所描述的數值范圍，如計量單位、反應條件、化合物物理狀態或百分比，均是為了提供明白無誤的書面參考。本領域熟練技術人員在實踐本專利時，使用在此范圍之外或有別于單個數值的溫度、濃度、數量、碳原子數等，仍然可以得到預期的結果。
實施例1 4-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酸及 3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酸的制備
于反應瓶中加入1.51g(10mmol)5-氟-2-吲哚酮(US7,179,910 B2，Examplel)、1.50g(10mmol)4-羧基苯甲醛(購于Alfa Aesar公司)、1.28g(15mmol)哌啶和25ml無水乙醇，加熱回流反應6小時，冷至室溫，過濾。將濾餅轉入燒杯中，加入100ml水，用2M鹽酸中和至pH＝4，過濾收集固體，固體用水洗滌，真空干燥得棕色固體4-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酸(1.33g，產率47％)。LC-MS(m/z)284(M+1)。
以5-氟-2-吲哚酮和3-羧基苯甲醛(購于Alfa Aesar公司)為原料，采用類似方法制得3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酸，LC-MS(m/z)284(M+1)。
實施例2 5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)- 2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸等化合物的制備
于反應瓶中加入8.25g(50mmol)5-氟靛紅(購于Aldrich公司)和150ml50％水合肼，于80～90℃反應3小時，冷至室溫，過濾，水洗，收集固體，真空干燥得黃色固體5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基肼(6.0g，產率67％)。LC-MS(m/z)180(M+1)。
于反應瓶中加入1.79g(10mmol)5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基肼、1.67g(10mmol)5-甲酰基-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸(US 7,179,910 B2，Examplel)、1.28g(15mmol)哌啶和25ml無水乙醇，加熱回流反應6小時，冷至室溫，過濾。將濾餅轉入燒杯中，加入100ml水，用2M鹽酸中和至pH＝4，過濾收集固體，固體用水洗滌，真空干燥得紅色固體5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸(1.18g，產率36％)。LC-MS(m/z)329(M+1)。
以靛紅(購于Aldrich公司)為原料，采用類似方法制得5-(((2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸，LC-MS(m/z)311(M+1)。
以5-氯靛紅(購于Aldrich公司)為原料，采用類似方法制得5-(((5-氯-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸，LC-MS(m/z)345(M+1)。
以4-甲基靛紅(Sadler P.W.，1956，J.Org.Chem，Vol.2169)為原料，采用類似方法制得5-(((4-甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸，LC-MS(m/z)325(M+1)。
以5-硝基靛紅(購于Aldrich公司)為原料，采用類似方法制得5-(((5-硝基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸，LC-MS(m/z)356(M+1)。
以6-甲氧基靛紅(Sadler P.W.，1956，J.Org.Chem，Vol.2169)為原料，采用類似方法制得5-(((6-甲氧基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸，LC-MS(m/z)341(M+1)。
以6-三氟甲基靛紅(Simet L.，1963，J.Org.Chem，Vol.283580-3581)為原料，采用類似方法制得5-(((6-三氟甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸，LC-MS(m/z)398(M+1)。
以5-氟靛紅(購于Aldrich公司)及4-羧基苯甲醛(購于Alfa Aesar公司)為原料，采用類似方法制得4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酸，LC-MS(m/z)312(M+1)。
實施例3 2-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)乙酸甲酯的制備
將328mg(1mmol)5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸溶于8毫升DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和151.8mg(1.2mmol)甘氨酸甲酯鹽酸鹽。混合物在室溫下攪拌24小時。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得紅色固體2-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)乙酸甲酯(244mg，產率61％)。LC-MS(m/z)400(M+1)。
實施例4 2-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)乙酸的制備
將399mg(1mmol)2-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)乙酸甲酯溶于300ml甲醇中，然后加入25ml4M的氫氧化鋰水溶液。混合物在室溫下攪拌24小時。將混合物用鹽酸中和至pH值為7，減壓除去甲醇。殘留物用鹽酸調節pH值至3。真空抽濾收集固體，水洗，真空干燥得紅色固體2-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)乙酸(128mg，產率33％)。LC-MS(m/z)386(M+1)。
實施例5 2-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)-N-羥基乙酰胺的制備
將385mg(1mmol)2-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)乙酸、151mg(1.5mmol)三乙胺溶于20ml DMF中，于0℃加入163mg(1.5mmol)氯甲酸乙酯。混合物在0℃下攪拌2小時后加入1.32g(20mmol)50％的羥胺水溶液。混合物在室溫下繼續攪拌3小時，然后用1000ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體，水洗，真空干燥得得紅色固體2-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)-N-羥基乙酰胺(140mg，產率35％)。LC-MS(m/z)401(M+1)。
實施例6 2-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基苯基)乙酰胺的制備
將385mg(1mmol)2-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)乙酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和432mg(4mmol)鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌24小時。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得紅色固體2-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基苯基)乙酰胺(342mg，產率72％)。LC-MS(m/z)476(M+1)。
實施例7 5-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)戊酸甲酯的制備
將328mg(1mmol)5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸溶于8毫升DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和202mg(1.2mmol)5-氨基戊酸甲酯鹽酸鹽。混合物在室溫下攪拌24小時。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得紅色固體5-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)戊酸甲酯(300mg，產率68％)。LC-MS(m/z)442(M+1)。
實施例8 5-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)戊酸的制備
將441mg(1mmol)5-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)戊酸甲酯溶于300ml甲醇中，然后加入25ml4M的氫氧化鋰水溶液。混合物在室溫下攪拌24小時。將混合物用鹽酸中和至pH值為7，減壓除去甲醇。殘留物用鹽酸調節pH值至3。真空抽濾收集固體，水洗，真空干燥得紅色固體5-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)戊酸(167mg，產率39％)。LC-MS(m/z)428(M+1)。
實施例9 5-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基苯基)戊酰胺的制備
將427mg(1mmol)5-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)戊酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)二乙胺和432mg(4mmol)鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌24小時。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得紅色固體5-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基苯基)戊酰胺(388mg，產率75％)。LC-MS(m/z)518(M+1)。
實施例10 5-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基-4-氟苯基)-戊酰胺的制備
將427mg(1mmol)5-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)戊酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和151mg(1.2mmol)4-氟鄰苯二胺(購于Alfa Aesar公司)。混合物在室溫下攪拌24小時。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得紅色固體5-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基-4-氟基苯基)戊酰胺(439mg，產率82％)。LC-MS(m/z)536(M+1)。
實施例11 6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)己酸甲酯等化合物的制備
將328mg(1mmol)5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸溶于8毫升DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和219mg(1.2mmol)6-氨基己酸甲酯鹽酸鹽。混合物在室溫下攪拌24小時。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得紅色固體6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸甲酯(287mg，產率63％)。LC-MS(m/z)456(M+1)。
以5-(((2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸為原料，采用類似方法制得6-(5-(((2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸甲酯，LC-MS(m/z)438(M+1)。
以5-(((5-氯-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸為原料，采用類似方法制得6-(5-(((5-氯-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸甲酯，LC-MS(m/z)472(M+1)。
以5-(((4-甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸為原料，采用類似方法制得6-(5-(((4-甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸甲酯，LC-MS(m/z)452(M+1)。
以5-(((5-硝基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸為原料，采用類似方法制得6-(5-(((5-硝基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸甲酯，LC-MS(m/z)483(M+1)。
以5-(((6-甲氧基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸為原料，采用類似方法制得6-(5-(((6-甲氧基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸甲酯，LC-MS(m/z)468(M+1)。
以5-(((6-三氟甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸為原料，采用類似方法制得6-(5-(((6-三氟甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸甲酯，LC-MS(m/z)506(M+1)。
實施例12 6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)己酸等化合物的制備
將455mg(1mmol)6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸甲酯溶于300ml甲醇中，然后加入25ml4M的氫氧化鋰水溶液。混合物在室溫下攪拌24小時。將混合物用鹽酸中和至pH值為7，減壓除去甲醇。殘留物用鹽酸調節pH值至3。真空抽濾收集固體，水洗，真空干燥得紅色固體6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸(163mg，產率37％)。LC-MS(m/z)442(M+1)。
以6-(5-(((2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸甲酯為原料，采用類似方法制得6-(5-(((2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸，LC-MS(m/z)424(M+1)。
以6-(5-(((5-氯-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸甲酯為原料，采用類似方法制得6-(5-(((5-氯-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸，LC-MS(m/z)458(M+1)。
以6-(5-(((4-甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸甲酯為原料，采用類似方法制得6-(5-(((4-甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸，LC-MS(m/z)438(M+1)。
以6-(5-(((5-硝基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸甲酯為原料，采用類似方法制得6-(5-(((5-硝基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸，LC-MS(m/z)469(M+1)。
以6-(5-(((6-甲氧基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸甲酯為原料，采用類似方法制得6-(5-(((6-甲氧基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸，LC-MS(m/z)454(M+1)。
以6-(5-(((6-三氟甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸甲酯為原料，采用類似方法制得6-(5-(((6-三氟甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸，LC-MS(m/z)492(M+1)。
實施例13 6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)-N-羥基己酰胺的制備
將441mg(1mmol)6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸、151mg(1.5mmol)三乙胺溶于20ml DMF中，于0℃加入163mg(1.5mmol)氯甲酸乙酯。混合物在0℃下攪拌2小時后加入1.32g(20mmol)50％的羥胺水溶液。混合物在室溫下繼續攪拌3小時，然后用1000ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體，水洗，真空干燥得得紅色固體6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)-N-羥基己酰胺(201mg，產率44％)。LC-MS(m/z)457(M+1)。
實施例14 6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基-4-氟苯基)己酰胺的制備
將441mg(1mmol)6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和151mg(1.2mmol)4-氟鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌24小時。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得紅色固體6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基-4-氟苯基)己酰胺(417mg，產率76％)。1HNMR(DMSO-d6)δ 1.35(m，2H，CH2)，1.53(m，2H，CH2)，1.62(m，2H，CH2)，2.30(t，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，2.33(s，3H，pyrrole-CH3)，2.43(s，3H，pyrrole-CH3)，3.21(m，2H，NCH2)，5.12(s，2H，benzene-NH2)，6.28(m，1H，Ar-H)，6.47(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，6.85(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.07(td，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.20(td，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.64(t，J＝4.0Hz，CONH)，8.33(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，8.63(s，1H，vinyl-H)，9.02(s，1H，benzene-NH)，10.72(s，1H，indolinone-NH)，11.82(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)550(M+1)。
實施例15 6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基苯基)己酰胺的制備
將441mg(1mmol)6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和432mg(4mmol)鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌24小時。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得紅色固體6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基苯基)己酰胺(430mg，產率81％)。1H NMR(DMSO-d6)δ 1.38(m，2H，CH2)，1.54(m，2H，CH2)，1.62(m，2H，CH2)，2.30(s，3H，pyrrole-CH3)，2.32(t，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，2.41(s，3H，pyrrole-CH3)，3.22(m，2H，NCH2)，4.82(s，2H，benzene-NH2)，6.51(t，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，6.69(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，6.87(m，2H，Ar-H)，7.14(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，7.20(m，1H，Ar-H)，7.65(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，8.33(dd，J＝4.0 and8.0Hz，1H，Ar-H)，8.63(s，1H，vinyl-H)，9.11(s，1H，benzene-NH)，10.73(s，1H，indolinone-NH)，11.82(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)532(M+1)。
實施例16 6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基-4-氯苯基)己酰胺的制備
將441mg(1mmol)6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和171mg(1.2mmol)4-氯鄰苯二胺(購于Alfa Aesar公司)。混合物在室溫下攪拌24小時。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得紅色固體6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基-4-氯苯基)己酰胺(402mg，產率71％)。LC-MS(m/z)566(M+1)。
實施例17 6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基-4-甲基苯基)己酰胺的制備
將441mg(1mmol)6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和146mg(1.2mmol)4-甲基鄰苯二胺(購于Alfa Aesar公司)。混合物在室溫下攪拌24小時。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得紅色固體6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基-4-甲基苯基)己酰胺(376mg，產率69％)。LC-MS(m/z)546(M+1)。
實施例18 6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基-4-甲氧基苯基)己酰胺的制備
將441mg(1mmol)6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和166mg(1.2mmol)4-甲氧基鄰苯二胺(購于Alfa Aesar公司)。混合物在室溫下攪拌24小時。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得紅色固體6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基-4-甲氧基苯基)己酰胺(427mg，產率76％)。LC-MS(m/z)562(M+1)。
實施例19 6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基-4-三氟甲基苯基)己酰胺的制備
將441mg(1mmol)6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺內基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和211mg(1.2mmol)4-三氟甲基鄰苯二胺(購于Alfa Aesar公司)。混合物在室溫下攪拌24小時。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得紅色固體6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基-4-三氟甲基苯基)己酰胺(390mg，產率65％)。LC-MS(m/z)600(M+1)。
實施例20 6-(5-(((2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基苯基)己酰胺的制備
將423mg(1mmol)6-(5-(((2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和432mg(4mmol)鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌24小時。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得紅色固體6-(5-(((2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基苯基)己酰胺(395mg，產率77％)。LC-MS(m/z)514(M+1)。
實施例21 6-(5-(((5-氯-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基苯基)己酰胺的制備
將458mg(1mmol)6-(5-(((5-氯-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和432mg(4mmol)鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌24小時。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得紅色固體6-(5-(((5-氯-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基苯基)己酰胺(438mg，產率80％)。LC-MS(m/z)548(M+1)。
實施例22 6-(5-(((4-甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基苯基)己酰胺的制備
將437mg(1mmol)6-(5-(((4-甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和432mg(4mmol)鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌24小時。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得紅色固體6-(5-(((4-甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基苯基)己酰胺(427mg，產率81％)。LC-MS(m/z)528(M+1)。
實施例23 6-(5-(((5-硝基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基苯基)己酰胺的制備
將468mg(1mmol)6-(5-(((5-硝基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和432mg(4mmol)鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌24小時。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得紅色固體6-(5-(((5-硝基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基苯基)己酰胺(402mg，產率72％)。LC-MS(m/z)559(M+1)。
實施例24 6-(5-(((6-甲氧基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基苯基)己酰胺的制備
將453mg(1mmol)6-(5-(((6-甲氧基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和432mg(4mmol)鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌24小時。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得紅色固體6-(5-(((6-甲氧基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基苯基)己酰胺(408mg，產率75％)。LC-MS(m/z)544(M+1)。
實施例25 6-(5-(((6-三氟甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4- 二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基苯基)己酰胺的制備
將491mg(1mmol)6-(5-(((6-三氟甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和432mg(4mmol)鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌24小時。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得紅色固體6-(5-(((6-三氟甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基苯基)己酰胺(384mg，產率66％)。LC-MS(m/z)582(M+1)。
實施例26 8-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)辛酸甲酯的制備
將328mg(1mmol)5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸溶丁8毫升DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和251mg(1.2mmol)8-氨基辛酸甲酯鹽酸鹽。混合物在室溫下攪拌24小時。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得紅色固體8-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)辛酸甲酯(287mg，產率59％)。LC-MS(m/z)484(M+1)。
實施例27 8-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)辛酸的制備
將483mg(1mmol)8-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)辛酸甲酯溶于300ml甲醇中，然后加入25ml4M的氫氧化鋰水溶液。混合物在室溫下攪拌24小時。將混合物用鹽酸中和至pH值為7，減壓除去甲醇。殘留物用鹽酸調節pH值至3。真空抽濾收集固體，水洗，真空干燥得紅色固體8-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)辛酸(159mg，產率34％)。LC-MS(m/z)470(M+1)。
實施例28 8-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)-N-羥基辛酰胺的制備
將469mg(1mmol)8-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)辛酸、151mg(1.5mmol)三乙胺溶于20ml DMF中，于0℃加入163mg(1.5mmol)氯甲酸乙酯。混合物在0℃下攪拌2小時后加入1.32g(20mmol)50％的羥胺水溶液。混合物在室溫下繼續攪拌3小時，然后用1000ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體，水洗，真空干燥得得紅色固體8-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)-N-羥基辛酰胺(237mg，產率49％)。LC-MS(m/z)485(M+1)。
實施例29 8-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基-4-氟苯基)辛酰胺的制備
將469mg(1mmol)8-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)辛酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和151mg(1.2mmol)4-氟鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌24小時。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得紅色固體8-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基-4-氟苯基)辛酰胺(386mg，產率67％)。LC-MS(m/z)578(M+1)。
實施例30 8-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基苯基)辛酰胺的制備
將469mg(1mmol)8-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)辛酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和432mg(4mmol)鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌24小時。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得紅色固體8-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基苯基)辛酰胺(402mg，產率72％)。LC-MS(m/z)560(M+1)。
實施例31 6-(4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酰胺基)- 己酸甲酯的制備
將311mg(1mmol)4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酸溶于8毫升DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和219mg(1.2mmol)6-氨基己酸甲酯鹽酸鹽。混合物在室溫下攪拌24小時。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得棕色固體6-(4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酰胺基)己酸甲酯(114mg，產率28％)。LC-MS(m/z)439(M+1)。
實施例32 6-(4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酰胺基) 己酸的制備
將438mg(1mmol)6-(4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酰胺基)己酸甲酯溶于300ml甲醇中，然后加入25ml 4M的氫氧化鋰水溶液。混合物在室溫下攪拌24小時。將混合物用鹽酸中和至pH值為7，減壓除去甲醇。殘留物用鹽酸調節pH值至3。真空抽濾收集固體，水洗，真空干燥得棕色固體6-(4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酰胺基)己酸(119mg，產率28％)。LC-MS(m/z)425(M+1)。
實施例33 6-(4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酰胺基)- N-羥基己酰胺的制備
將424mg(1mmol)6-(4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酰胺基)己酸、151mg(1.5mmol)三乙胺溶于20ml DMF中，于0℃加入163mg(1.5mmol)氯甲酸乙酯。混合物在0℃下攪拌2小時后加入1.32g(20mmol)50％的羥胺水溶液。混合物在室溫下繼續攪拌3小時，然后用1000ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體，水洗，真空干燥得得棕色固體6-(4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酰胺基)-N-羥基己酰胺(224mg，產率51％)。LC-MS(m/z)440(M+1)。
實施例34 6-(4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酰胺基)- N-(2-氨基苯基)己酰胺的制備
將424mg(1mmol)6-(4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酰胺基)己酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和432mg(4mmol)鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌24小時。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得棕色固體6-(4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酰胺基)-N-(2-氨基苯基)己酰胺(375mg，產率76％)。LC-MS(m/z)515(M+1)。
實施例35 8-(4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酰胺基) 辛酸甲酯的制備
將311mg(1mmol)4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酸溶于8毫升DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和251mg(1.2mmol)8-氨基辛酸甲酯鹽酸鹽。混合物在室溫下攪拌24小時。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得棕色固體8-(4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酰胺基)辛酸甲酯(290mg，產率62％)。LC-MS(m/z)467(M+1)。
實施例36 8-(4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酰胺基) 辛酸的制備
將466mg(1mmol)8-(4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酰胺基)辛酸甲酯溶于300ml甲醇中，然后加入25ml4M的氫氧化鋰水溶液。混合物在室溫下攪拌24小時。將混合物用鹽酸中和至pH值為7，減壓除去甲醇。殘留物用鹽酸調節pH值至3。真空抽濾收集固體，水洗，真空干燥得棕色固體8-(4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酰胺基)辛酸(149mg，產率33％)。LC-MS(m/z)453(M+1)。
實施例37 8-(4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酰胺基)- N-(2-氨基苯基)辛酰胺的制備
將452mg(1mmol)8-(4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酰胺基)辛酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和432mg(4mmol)鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌24小時。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得棕色固體8-(4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酰胺基)-N-(2-氨基苯基)辛酰胺(423mg，產率72％)。LC-MS(m/z)543(M+1)。
實施例38 8-(4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酰胺基)- N-(2-氨基-4-氟苯基)辛酰胺的制備
將452mg(1mmol)8-(4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酰胺基)辛酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和151mg(1.2mmol)4-氟鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌24小時。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得棕色固體8-(4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-氫吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酰胺基)-N-(2-氨基-4-氟苯基)辛酰胺(358mg，產率64％)。LC-MS(m/z)561(M+1)。
實施例39 6-(4-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)己酸甲酯的制備
將283mg(1mmol)4-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酸溶于8毫升DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和219mg(1.2mmol)6-氨基己酸甲酯鹽酸鹽。混合物在室溫下攪拌24小時。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得棕色固體6-(4-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)己酸甲酯(362mg，產率88％)。LC-MS(m/z)411(M+1)。
實施例40 6-(4-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)己酸的制備
將410mg(1mmol)6-(4-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)己酸甲酯溶于300ml甲醇中，然后加入25ml 4M的氫氧化鋰水溶液。混合物在室溫下攪拌24小時。將混合物用鹽酸中和至pH值為7，減壓除去甲醇。殘留物用鹽酸調節pH值至3。真空抽濾收集固體，水洗，真空干燥得棕色固體6-(4-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)己酸(305mg，產率77％)。LC-MS(m/z)397(M+1)。
實施例41 6-(4-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N- (2-氨基苯基)己酰胺的制備
將396mg(1mmol)6-(4-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)己酸溶于8mlDMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和432mg(4mmol)鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌24小時。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得棕色固體6-(4-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N-(2-氨基苯基)己酰胺(394mg，產率81％)。1H NMR(DMSO-d6)δ 1.38(m，2H，CH2)，1.54(m，2H，CH2)，1.60(m，2H，CH2)，2.32(t，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，3.28(m，2H，NCH2)，4.80(s，2H，benzene-NH2)，6.52(t，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，6.69(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，6.86(m，2H，Ar-H)，7.14(m，2H，Ar-H)，7.71(s，1H，vinyl-H)，7.76(m，1H，Ar-H)，7.92(m，1H，Ar-H)，7.96(m，1H，Ar-H)，8.39(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，8.50(m，1H，Ar-H)，9.09(s，1H，benzene-NH)，10.68(s，1H，CONH)。LC-MS(m/z)487(M+1)。
實施例42 6-(4-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N- (2-氨基-4-氟苯基)己酰胺的制備
將396mg(1mmol)6-(4-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)己酸溶于8mlDMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和151mg(1.2mmol)4-氟鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌24小時。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得棕色固體6-(4-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N-(2-氨基-4-氟苯基)己酰胺(348mg，產率69％)。1H NMR(DMSO-d6)δ 1.36(m，2H，CH2)，1.60(m，2H，CH2)，1.60(m，2H，CH2)，2.30(t，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，3.29(m，2H，NCH2)，5.12(s，2H，benzene-NH2)，6.27(t，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，6.46(dd，J＝4.0Hz and 8.0Hz，1H，Ar-H)，6.88(m，1H，Ar-H)，7.10(m，2H，Ar-H)，7.71(s，1H，vinyl-H)，7.77(m，1H，Ar-H)，7.92(m，1H，Ar-H)，7.96(m，1H，Ar-H)，8.39(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，8.50(m，1H，Ar-H)，9.01(s，1H，benzene-NH)，10.68(s，1H，CONH)。LC-MS(m/z)505(M+1)。
實施例43 6-(4-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N- 羥基己酰胺的制備
將396mg(1mmol)6-(4-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)己酸、151mg(1.5mmol)三乙胺溶于20ml DMF中，于0℃加入163mg(1.5mmol)氯甲酸乙酯。混合物在0℃下攪拌2小時后加入1.32g(20mmol)50％的羥胺水溶液。混合物在室溫下繼續攪拌3小時，然后用1000ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體，水洗，真空干燥得得棕色固體6-(4-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N-羥基己酰胺(189mg，產率46％)。LC-MS(m/z)412(M+1)。
實施例44 6-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲胺基)己酸甲酯的制備
將283mg(1mmol)3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酸溶于8毫升DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和219mg(1.2mmol)6-氨基己酸甲酯鹽酸鹽。混合物在室溫下攪拌24小時。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得棕色固體6-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)己酸甲酯(332mg，產率81％)。LC-MS(m/z)411(M+1)。
實施例45 6-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)己酸的制備
將410mg(1mmol)6-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)己酸甲酯溶于300ml甲醇中，然后加入25ml 4M的氫氧化鋰水溶液。混合物在室溫下攪拌24小時。將混合物用鹽酸中和至pH值為7，減壓除去甲醇。殘留物用鹽酸調節pH值至3。真空抽濾收集固體，水洗，真空干燥得棕色固體6-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)己酸(289mg，產率73％)。LC-MS(m/z)397(M+1)。
實施例46 6-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N- (2-氨基苯基)己酰胺的制備
將396mg(1mmol)6-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)己酸溶于8mlDMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和432mg(4mmol)鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌24小時。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得棕色固體6-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N-(2-氨基苯基)己酰胺(379mg，產率78％)。1H NMR(DMSO-d6)δ 1.36(m，2H，CH2)，1.59(m，4H，CH2)，2.30(t，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，3.29(t，J＝8.0Hz，2H，NCH2)，4.80(s，2H，benzene-NH2)，6.50(t，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，6.69(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，6.87(m，2H，Ar-H)，7.12(m，2H，Ar-H)，7.54(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，7.64(m，1H，Ar-H)，7.73(s，0.6H，vinyl-H)，7.83(m，1H，Ar-H)，7.94(m，1H，Ar-H)，8.15(s，0.4H，vinyl-H)，8.57(m，1H，Ar-H)，9.08(s，1H，benzene-NH)，10.68(s，1H，CONH)。LC-MS(m/z)487(M+1)。
實施例47 6-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N- (2-氨基-4-氟苯基)己酰胺的制備
將396mg(1mmol)6-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)己酸溶于8mlDMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和151mg(1.2mmol)4-氟鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌24小時。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得棕色固體6-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N-(2-氨基-4-氟苯基)己酰胺(373mg，產率74％)。1H NMR(DMSO-d6)δ 1.36(m，2H，CH2)，1.59(m，4H，CH2)，2.30(t，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，3.28(t，J＝8.0Hz，2H，NCH2)，5.12(s，2H，benzene-NH2)，6.26(t，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，6.46(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，6.87(m，1H，Ar-H)，7.12(m，3H，Ar-H)，7.64(m，1H，Ar-H)，7.73(s，0.6×1H，vinyl-H)，7.83(m，1H，Ar-H)，7.94(m，1H，Ar-H)，8.16(s，0.4×1H，vinyl-H)，8.57(m，1H，Ar-H)，9.02(s，1H，benzene-NH)，10.68(s，1H，CONH)。LC-MS(m/z)505(M+1)。
實施例48 6-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N- 羥基己酰胺的制備
將396mg(1mmol)6-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)己酸、151mg(1.5mmol)三乙胺溶于20ml DMF中，于0℃加入163mg(1.5mmol)氯甲酸乙酯。混合物在0℃下攪拌2小時后加入1.32g(20mmol)50％的羥胺水溶液。混合物在室溫下繼續攪拌3小時，然后用1000ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體，水洗，真空干燥得得棕色固體6-(4-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N-羥基己酰胺(168mg，產率41％)。LC-MS(m/z)412(M+1)。
實施例49 5-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基) 戊酸甲酯的制備
將283mg(1mmol)3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酸溶于8毫升DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和202mg(1.2mmol)5-氨基戊酸甲酯鹽酸鹽。混合物在室溫下攪拌24小時。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得棕色固體5-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)戊酸甲酯(337mg，產率89％)。LC-MS(m/z)397(M+1)。
實施例50 5-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)戊酸的制備
將396mg(1mmol)5-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)戊酸甲酯溶于300ml甲醇中，然后加入25ml4M的氫氧化鋰水溶液。混合物在室溫下攪拌24小時。將混合物用鹽酸中和至pH值為7，減壓除去甲醇。殘留物用鹽酸調節pH值至3。真空抽濾收集固體，水洗，真空干燥得棕色固體5-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)戊酸(294mg，產率77％)。LC-MS(m/z)383(M+1)。
實施例51 5-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N- (2-氨基苯基)戊酰胺的制備
將382mg(1mmol)5-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)戊酸溶于8mlDMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和432mg(4mmol)鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌24小時。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得棕色固體5-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N-(2-氨基苯基)戊酰胺(382mg，產率81％)。LC-MS(m/z)473(M+1)。
實施例52 5-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N- (2-氨基-4-氟苯基)戊酰胺的制備
將382mg(1mmol)5-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)戊酸溶于8mlDMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和151mg(1.2mmol)4-氟鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌24小時。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得棕色固體5-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N-(2-氨基4-氟苯基)戊酰胺(372mg，產率76％)。LC-MS(m/z)491(M+1)。
實施例53 5-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N- 羥基戊酰胺的制備
將382mg(1mmol)5-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)戊酸、151mg(1.5mmol)三乙胺溶于20ml DMF中，于0℃加入163mg(1.5mmol)氯甲酸乙酯。混合物在0℃下攪拌2小時后加入1.32g(20mmol)50％的羥胺水溶液。混合物在室溫下繼續攪拌3小時，然后用1000ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體，水洗，真空干燥得得棕色固體5-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N-羥基戊酰胺(186mg，產率47％)。LC-MS(m/z)398(M+1)。
實施例54 8-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)- 辛酸甲酯的制備
將283mg(1mmol)3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酸溶于8毫升DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和251mg(1.2mmol)8-氨基辛酸甲酯鹽酸鹽。混合物在室溫下攪拌24小時。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得棕色固體8-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)辛酸甲酯(333mg，產率76％)。LC-MS(m/z)439(M+1)。
實施例55 8-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)辛酸的制備
將438mg(1mmol)8-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)辛酸甲酯溶于300ml甲醇中，然后加入25ml 4M的氫氧化鋰水溶液。混合物在室溫下攪拌24小時。將混合物用鹽酸中和至pH值為7，減壓除去甲醇。殘留物用鹽酸調節pH值至3。真空抽濾收集固體，水洗，真空干燥得棕色固體8-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)辛酸(305mg，產率72％)。LC-MS(m/z)425(M+1)。
實施例56 8-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N- (2-氨基苯基)辛酰胺的制備
將424mg(1mmol)8-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)辛酸溶于8mlDMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和432mg(4mmol)鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌24小時。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得棕色固體8-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N-(2-氨基苯基)辛酰胺(426mg，產率83％)。LC-MS(m/z)515(M+1)。
實施例57 8-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N- (2-氨基-4-氟苯基)辛酰胺的制備
將424mg(1mmol)8-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)辛酸溶于8mlDMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和151mg(1.2mmol)4-氟鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌24小時。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得棕色固體8-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N-(2-氨基-4-氟苯基)辛酰胺(436mg，產率82％)。LC-MS(m/z)533(M+1)。
實施例58 8-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N- 羥基辛酰胺的制備
將424mg(1mmol)8-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)辛酸、151mg(1.5mmol)三乙胺溶于20ml DMF中，于0℃加入163mg(1.5mmol)氯甲酸乙酯。混合物在0℃下攪拌2小時后加入1.32g(20mmol)50％的羥胺水溶液。混合物在室溫下繼續攪拌3小時，然后用1000ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體，水洗，真空干燥得得棕色固體8-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N-羥基辛酰胺(224mg，產率51％)。LC-MS(m/z)440(M+1)。
實施例59 片劑的制備 處方(1000片) 化合物13 5g 微晶纖維素 90g 羧甲基淀粉鈉 5g 4％聚維酮K30無水乙醇溶液 50g 滑石粉 0.5g 制備工藝將化合物13過100目篩，將微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉和滑石粉過80目篩，稱取處方量的微晶纖維素和羧甲基淀粉鈉，混合均勻，然后將化合物13與其按等量遞加法混勻，加入4％聚維酮K30無水乙醇溶液適量制粒，干燥后加入處方量滑石粉混勻，壓片即得。
實施例60 膠囊的制備 處方(1000粒) 化合物13 5g 微晶纖維素 55g 乳糖 35g 羧甲基淀粉鈉 5g 硬脂酸鎂 0.5g 制備工藝將化合物13過100目篩，將微晶纖維素、乳糖、羧甲基淀粉鈉和硬脂酸鎂過80目篩，稱取處方量的微晶纖維素、乳糖和羧甲基淀粉鈉，混合均勻，然后將化合物13與其按等量遞加法混勻，加入處方量硬脂酸鎂混勻，灌裝膠囊即得。
實施例61 注射液的制備 處方 化合物11 1.00mg 藥用DMSO 0.10ml 藥用乙醇 1.00ml 制備工藝將化合物11溶于藥用DMSO，加入藥用乙醇即得。
實施例62 化合物7-56體外抑制HDAC總酶活性，體外抑制HDAC 亞型活性及細胞內微管蛋白乙酰化和總蛋白乙酰化的試驗 一、體外HDAC總酶活性的測定 體外HDAC總酶活性的測定是我們采用BIOMOL公司的HDAC Fluorimetric Assay/DrugDiscovery Kit對抑制劑的體外抑制活性進行測試。實驗的原理如下一種特殊的底物Fluor deLys在組蛋白去乙酰化酶(實驗中采用HeLa細胞的核提取物，富含多種亞型的HDAC)的作用下會去掉一個乙酰基，暴露出游離的氨基，當加入Developer后會產生一種可誘導的熒光。這種熒光的激發波長為360nm，發射波長為460nm。底物去乙酰化越充分，誘導的熒光值就越高，在無抑制劑情況下的熒光值為對照；而當有抑制劑存在的時候，被誘導的熒光值會降低，而無酶時(相當于酶活性完全被抑制)的熒光值為空白。而一般抑制后的熒光值會介于對照和空白之間。在分析時我們將空白作為0，對照作為1進行計算，值越小則說明抑制活性越高。
二、報告基因對抑制劑HDAC亞型選擇性的測定 HDAC不同亞型可以與不同的轉錄因子結合，參與不同基因的表達調控中。選擇合適轉錄因子的調控元件構建成報告基因，可以用來評估抑制劑對HDAC亞型的選擇性抑制作用。在轉染前一天將HeLa細胞種入96孔板使轉染時密度達到50-80％的融合。在熒光素酶基因上游插入了p21-啟動子，gdf11-啟動子，MEF-結合元件，Nur77-啟動子等調控序列的報告基因質粒分別使用FuGene6(Roche)轉染試劑，根據操作說明進行轉染。同時為了校正轉染效率，共轉染了綠色熒光蛋白(GFP)的表達質粒。在轉染24小時后加入化合物或溶劑對照(DMSO)。再過24小時后收集并裂解細胞，按照操作說明使用熒光素酶(Promega)檢測試劑盒對熒光素酶的量進行評估。同時進一步測定GFP的含量，對轉染效率進行校正。
三、細胞內乙酰化水平的測定 (一)微管蛋白乙酰化水平的ELISA檢測 材料和試劑 1.96孔組織培養白板 2.A549細胞系 3.抗乙酰化-微管蛋白抗體(Upstate) 4.HRP-標記的羊抗鼠lgG(Uptate) 5.固定液95％乙醇，5％乙酸 6.TBS0.15M NaCl，0.02M Tris-Cl pH7.4 7.ADSTBS+2％BSA+0.1％Triton X-100 8.加強化學發光試劑(ECL)(Amersham) (二)賴氨酸乙酰化水平的ELISA檢測 材料和試劑 1.96孔組織培養白板 2.A549細胞系 3.抗賴氨酸乙酰化-抗體(Upstate) 4.HRP-標記的羊抗鼠1gG(Uptate) 5.固定液95％乙醇，5％乙酸 6.TBS0.15M NaCl，0.02M Tris-Cl pH7.4 7.ADSTBS+2％BSA+0.1％Triton X-100 8.加強化學發光試劑(ECL)(Amersham)。
實驗結果見表2。
表2
實施例63 化合物26-56 對腫瘤細胞增值抑制的MTS試驗。
將腫瘤細胞用胰酶消化后，以3000個每孔的密度分種于96孔微孔板，在含10％FBS的完全培養基里培養24小時。加入待測化合物和溶劑對照，最終化合物濃度為100nmol/L到100μmol/L。然后在完全培養基里培養72小時。根據說明書的方法加入MTS試劑(Promega)，在37℃CO2培養箱中培養2小時，然后在ELISA酶標儀上讀取490nm的吸收值。
實驗結果見表3。
表3
nd＊未測定。
權利要求
1.一種具有通式(I)的2-吲哚滿酮衍生物
其中，
R1、R2、R3和R4分別為氫、鹵素、烷基、烷氧基、硝基或三氟甲基；
R5為-NHOH或
R6、R7、R8和R9分別為氫、鹵素、烷基、烷氧基或三氟甲基；
Ar為苯環或2，4-二甲基-1H-吡咯；
當Ar為苯環時，X為＝CH-或＝N-N＝CH-；當Ar為2，4-二甲基-1H-吡咯時，X為＝N-N＝CH-；
n為1到7的整數；
包括其游離形式、鹽的形式、對映異構體、非對映異構體或水合物。
2.通式(I)的化合物的制備方法，該方法包括如下步驟
(a)將化合物1與化合物2進行縮合反應得到化合物3；
(b)將化合物3水解得到化合物4；
(c)將化合物4與羥胺進行縮合反應得到化合物5a；
(d)將化合物4與化合物6進行縮合反應得到化合物5b；
其中，
R1、R2、R3和R4分別為氫、鹵素、烷基、烷氧基、硝基或三氟甲基；
R5為-NHOH或
R6、R7、R8和R9分別為氫、鹵素、烷基、烷氧基或三氟甲基；
Ar為苯環或2，4-二甲基-1H-吡咯；
當Ar為苯環時，X為＝CH-或＝N-N＝CH-；當Ar為2，4-二甲基-1H-吡咯時，X為＝N-N＝CH-；
n為1到7的整數。
3.如權利要求2所述的制備方法，其特征在于，反應步驟(a)和(d)均使用肽縮合劑作催化劑。
4.如權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述肽縮合劑選自1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺，N，N’-二環己基碳二亞胺或N，N’-碳酰二咪唑。
5.如權利要求2所述的制備方法，其特征在于，反應步驟(c)使用ClCOOEt作縮合劑。
6.如權利要求2所述的制備方法，其特征在于，反應步驟(b)使用水解試劑進行反應。
7.如權利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述水解試劑選自氫氧化鋰、氫氧化鈉或氫氧化鉀中的一種。
8.一種用于治療魯-泰二氏綜合征、脆性X染色體綜合癥、白血病、癌癥、免疫學疾病、心肌肥大、骨骼疾病、神經系統疾病和神經退化性疾病的藥用制劑，它包括作為活性組分的權利要求1所述通式(I)的化合物，以及藥用載體、輔料或稀釋劑。
9.如權利要求1所述化合物在制備用于治療魯-泰二氏綜合征、脆性X染色體綜合癥、白血病、癌癥、免疫學疾病、心肌肥大、骨骼疾病、神經系統疾病和神經退化性疾病的藥物中的應用。
全文摘要
本發明公開了一種2-吲哚滿酮衍生物、其制備方法及用途，其結構如通式(I)所示，其中，R1、R2、R3、R4、R5、X、Ar和n的定義同說明書。該類化合物具有組蛋白去乙酰化酶抑制活性，可以用于治療與組蛋白去乙酰化酶活性異常相關的疾病，包括魯-泰(Rubinstein-Taybi)二氏綜合征、脆性X染色體綜合癥、白血病、癌癥、免疫學疾病、心肌肥大、骨骼疾病、神經系統疾病和神經退化性疾病。
文檔編號A61P9/00GK101397295SQ20081017216
公開日2009年4月1日 申請日期2008年11月12日 優先權日2008年11月12日
發明者魯先平, 李志斌, 余金迪, 松 山, 馬保順, 吳仲聞, 王祥輝, 寧志強 申請人:深圳微芯生物科技有限責任公司