唾液酸類似物及其在制備抗流感病毒藥物中的應用的制作方法

專利名稱：唾液酸類似物及其在制備抗流感病毒藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及化學技術領域，尤其涉及一組唾液酸類似物；本發明還涉及所述化合物在制備抗病毒藥物中的應用。

背景技術：
流感是一種常見的呼吸道疾病，可以使病人身體虛弱、引起多種并發癥，有時需要入院治療并可能致死，傳染性強，對于年老體弱的抵抗力比較弱的人，很容易相互感染，引起一定范圍的流行。每年流感流行可引起三百萬到五百萬的嚴重病例，并導致30萬—50萬人死亡。年齡大于65歲、小于兩歲免疫力差的人是可能發生嚴重病情和死亡的高危人群。
甲型流感病毒具有廣泛的宿主范圍和分段的基因組，在其感染和復制的過程中容易發生基因突變或基因重配形成新的變種，這是流感病毒抗原性具有高度變異性的根本原因，人類很難對其產生穩定而持久的免疫能力。目前使用的流感疫苗對流感樣疾病的預防僅達60％-75％，對老年人或伴發基礎疾病者保護力僅為40％。目前臨床應用的對流感病毒有效的藥物主要有M2離子通道阻滯劑和神經氨酸酶抑制劑兩大類。
M2離子通道阻滯劑是傳統的治療甲型流感病毒藥物，有金剛烷胺(Amantadine，分子式C10H17N.HCl)和金剛乙胺(Rimantadine，分子式C12H21N.HCl)兩種，我國僅有金剛烷胺應用于臨床。這兩種藥物通過改變宿主細胞的表面電荷，抑制病毒穿入敏感細胞和釋放核酸的過程，從而抑制病毒的繁殖。但該類藥物副作用大，易出現耐藥毒株的傳播，使用兩藥治療流感，約三分之一患者出現耐藥毒株，并存在交叉耐藥現象。一般在治療開始后2-3天耐藥，而且只對甲型流感有療效，因此限制了其在臨床上的應用。M2離子通道蛋白抑制藥比神經氨酸酶抑制藥更容易造成耐藥病毒株的出現和傳播，原因是其M蛋白位點的單個氨基酸點突變，這使病毒M2蛋白跨膜區的氨基酸發生改變，抗藥變異株以亞群存在。美國疾病控制和預防中心(CDC)一項關于金剛烷胺類藥物耐藥性的報告指出，2003年—2005年間，此類藥物的耐藥性出現了顯著增長，從1.9％增至12.3％。就美國而言，耐藥性已經從2004年的1.9％增高至2004-2005年流感季節前6個月期間的14.5％。藥物的濫用使我國此類藥物耐藥性已上升至70％。
神經氨酸酶抑制劑選擇性地抑制神經氨酸酶的活性，阻止子代的病毒顆粒在宿主細胞的復制和釋放，從而有效地預防流感和緩解癥狀。其作用在于結構中親脂基團與酶的疏水部分相結合，使病毒失去分解唾液酸的能力，阻斷復制后的病毒顆粒通過呼吸道黏液層；阻止流感病毒向周圍細胞的繼續擴散。
扎那米韋(Zanamivir)是由葛蘭素史克公司開發上市的第一個新型的抗流感病毒的神經氨酸酶抑制劑，分子式為C12H20N4O7，化學名為4-胍基-2-脫氧-2，3-二脫氫-N-乙酰神經氨酸(抗病毒化合物的制備方法，1991.4.24，CN1036849C)。扎那米韋是基于神經氨酸酶三維結構設計出來的唾液酸類似物，能選擇性地抑制流感病毒神經氨酸酶的活性。它作用于神經氨酸酶功能團相對穩定的保守位點，對病毒的各種變異株均有作用。扎那米韋口服利用度低，體內分布容積小，腎臟清除快，只能作為局部用藥，經鼻腔內給藥或吸入給藥。生物利用度分別為10％和20％。臨床試驗證實扎那米韋能顯著減少流感主要癥狀持續的平均時間(12.5天)，流感患者在發病30-36小時內的給與扎那米韋療效明顯，并且可以減少病程中解熱鎮痛藥物的用量(李卓榮.廣譜高效抗流感病毒新藥扎那米韋.國外醫學抗生素分冊，2001，22(4)183-187)。Gulareva等(Dunn C.J.，Goa K.I.Zanamivira review of itsuse in influenza.Drugs，1999，58(4)761-784)在離體實驗中證實，扎那米韋能特異性地抑制神經氨酸酶9種亞型中的甲型禽流感病毒的神經氨酸酶，另外它還對H5N1感染的小鼠有保護作用。這些實驗都表明扎那米韋有對抗人類新型甲型流感病毒的可能。其主要缺點包括口服生物利用度差而且易被快速排泄，在臨床上只能采用鼻腔或者口腔吸入給藥；其常見不良反應為鼻喉部不適、惡心腹瀉、頭痛咳嗽、眩暈、鼻出血等。


發明內容
本發明的目的是提供一種具有顯著抑制流感病毒的活性的唾液酸類似物。
本發明的另一個目的是提供所述化合物在制備抗病毒藥物中的應用。
本發明首先以扎那米韋為先導化合物，對其分子結構中的C6位側鏈進行改造，得到C6位帶氨基側鏈、C6位側鏈帶有親水性羥基的新型扎那米韋類似物。對上述化合物進行了體外抗病毒活性研究。結果顯示，本發明所述化合物在體外表現出顯著抑制流感病毒的活性。該項研究成果，為今后該類化合物的結構改造提示了方向。
本發明化合物結構通式如式(I)所示
其中，R1為氨基或胍基，R2為乙酰胺基。
R’為含氮和/或氧的側鏈，選自如下基團 a.通式(Ia)所示基團
其中，A為C或0；R3為氫，羥基，C1-4烷氧基，芳香烷氧基等；R4、R5可以相同也可以不同，為氫，C1-4烷基，C1-4烷氧基等；A為0時，R3不代表任何原子。
b.通式(Ib)所示基團
其中，R6、R7可以相同也可以不同，為C1-4烷基，C1-4多羥基取代的烷基等。
c.通式(Ic)所示基團
其中，n＝1，2，3，4，5。
d.通式(Id)所示基團
其中Y為0、NH。
e、其他基團，選自如下之一

或

或

或
本發明上述通式(I)化合物的制備以唾液酸為起始原料，通過氨化還原反應和羥醛縮合反應對扎那米韋的C6側鏈進行改造，合成目標分子。
本發明化合物優選為 (2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(哌啶-1-甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸 (2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(4-羥基哌啶-1-甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸 (2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((甲基(乙基)氨基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸 (2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((二乙基氨基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸 (2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(二(2-羥基乙基)氨基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸 (2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(2，3-二羥基乙基(甲基)氨基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸 (2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(((2S，6R)-2，6-二甲嗎啡啉)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸 (2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((4-甲氧基哌啶)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸 (2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((4-(芐氧基)哌啶)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸 (2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((4-(烯丙基)哌啶)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸 (2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((3-(烯丙基)哌啶)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸 (2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(羥基(2-羰基環戊基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸 (2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(羥基(2-羰基環己基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸 (2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(1，3，4-三羥基叔丁基-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸 或如下化合物 (3R，4S)-3-乙酰胺基-4-胍基-2-(羥基(2-羥基環戊基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧酸 (3R，4S)-3-乙酰胺基-4-胍基-2-(羥基(2-羥基環己基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧酸 (3R，4S)-3-乙酰胺基-4-胍基-2-(羥基(2-羥基四氫-2H-吡喃基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧酸 (3R，4S)-3-乙酰胺基-4-胍基-2-(羥基(4-羥基哌啶-3-基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧酸 (2S)-3-乙酰胺基-4-胍基-2-(((3S，4S)-3，4-二羥基吡咯-1-甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧酸 (2S)-3-乙酰胺基-4-胍基-2-(((2S，4R)-4羥基-2-羥甲基吡咯-1-甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧酸 本發明上述化合物可制作成為藥物組合物，其以含有治療有效量的上述化合物為活性成分，以及含有一種或多種藥學上可接受的載體，采用現有制藥工藝即可得到。
本發明提供的上述藥物組合物的各種劑型，可以按照藥學領域的常規生產方法制備，例如使活性成分與一種或多種載體混合，然后將其制成所需的劑型。
本發明所述化合物及其藥物組合物可用于制備抗流感病毒藥物。
本發明化合物經測定具有顯著抑制流感病毒的活性，因此，本發明化合物有望應用于制備抗流感病毒藥物。

具體實施例方式 下面通過實施例對本發明內容做進一步描述 制備例1(3R，4S)-3-乙酰胺-4-疊氮-2-甲醛-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制備a)(4S，5R)-5-乙酰氨基-4-疊氮基-6-醛基-5，6-二氫-4H-吡喃-2-羧酸甲酯的制備 制法參見J.CHEM.PERKIN TRANS I 1995.1173-1180. b)(3R，4S)-3-乙酰胺-4-疊氮-2-甲醛-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制備
化合物N-乙酰基-2，4-二脫氧-2，3-脫氫-4α-疊氮基-D-神經氨酸甲酯加入到甲醇/水(v/v＝3:1)混合液中，冰水浴下攪拌至完全溶解，慢慢加入NaIO4后，允許溫度慢慢升至室溫并且繼續攪拌大概16小時，TLC(二氯甲烷/甲醇＝9:1，v/v)跟蹤原料消失，蒸去溶劑后加入無水甲醇，用無水硫酸鎂干燥后再次蒸干溶劑，得黃褐色黏稠物，收率為90.3％。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ ppm 9.69-9.56(d，CHO，J＝20.1Hz)，6.15(d，NH，J＝8.0Hz)，4.76(d，3-CH，J＝2.6Hz)，4.66-.456(m，6-CH)，4.15(m，5-CH)，4.11-4.10(dd，4-CH，J＝2.6，0.1Hz)，3.884(s，NHCOCH3)，2.01(s，COOCH3). 實施例1(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(哌啶-1-甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸的制備 a)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-疊氮基-2-(哌啶-1-甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制備

將(3R，4S)-3-乙酰胺-4-疊氮-2-甲酰基-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯200mg(0.75mmol)和六氫吡啶76.5mg(0.9mmol)加入到25ml圓底燒瓶中，加入無水甲醇5ml，氮氣保護下室溫攪拌至固體溶解，加入冰醋酸1滴，繼續攪拌10min后，加入NaBH3CN 57mg(0.9mmol)，室溫下攪拌16小時，TLC(二氯甲烷/甲醇＝9:1，v/v)跟蹤原料消失，加入少量飽和NaHCO3水溶液，二氯甲烷萃取后，無水硫酸鈉干燥，旋轉蒸去溶劑得黃褐色粘稠物，硅膠柱純化色譜(二氯甲烷/甲醇＝13:1，v/v)，得黃色透明液(8a)，收率為26％。
ESI-MS m/z338.4(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ ppm 6.51(d，NH，J＝9.4Hz)，5.99-5.98(d，3-CH，J＝.3Hz)，4.38(m，6-CH，)，4.26-4.24(m，5-CH)，4.16-4.14(t，4-CH，J＝7.3，0.4Hz)，3.82(s，COOCH3)，2.78-2.77(d，7-CH，J＝6.4Hz)，2.70-2.68(d，7-CH，J＝6.7Hz)，2.63～2.59(t，NCH2CH2，J＝3.9Hz)，2.53-2.50(t，NCH2CH2，J＝3.5Hz)，2.02(s，CH3CONH)，1.65-1.59(m，NCH2CH2)，1.47-1.42(m，NC H2CH2CH2) 13C-NMR(400MHZ，CDCl3)δ ppm 170.49(COOCH3)，162.23(CH3CONH)，144.54

，107.15(3-C)，75.79(6-C)，58.47(5-C)，56.74(COOCH3)，55.89(NCH2CH2)，52.64(7-C)，49.67(1-4)，25.63(NCH2CH2)，23.79(NCH2CH2CH2)，23.25(CH3CONH). b)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(哌啶-1-甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制備
將中間體(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-疊氮基-2-(哌啶-1-甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯溶解于無水甲醇中，加入催化量Lindlar催化劑，在H2保護下室溫攪拌2小時，TLC(二氯甲烷/甲醇＝9:1，v/v)跟蹤原料消失，加入適量硅藻土，砂芯漏斗過濾，旋轉蒸干濾液得黃色透明物，硅膠柱純化(二氯甲烷/甲醇＝6:1，v/v)得黃色透明液體，收率為63.8％。。
ESI-MS m/z312.4(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，CDCl3.)δ ppm 7.13(d，NH，J＝14.1Hz)，6.00-5.99(d，3-CH，J＝10Hz)，3.79(m，6-CH，3.77(s，COOCH3)，3.76(m，5-CH，)，3.50-3.48(t，4-CH，J＝10.4，10Hz)，2.80-2.71(d，7-CH2，J＝3.9Hz)，2.68-2.67(t，NCH2CH2，J＝4.1Hz)，2.49-2.47(t，NCH2CH2，J＝3.4Hz)，2.05(s，CHNCOCH3)，1.64-1.59(m，NCH2CH2，J＝4.1，3.4Hz)，1.50-1.48(m，NCH2CH2CH2). c)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(哌啶-1-甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸的制備
將黃色透明物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(哌啶-1-甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯溶解在THF/H2O(v/v＝3/1)混合溶劑中，攪拌下加入等當量的1N KOH水溶液，繼續攪拌1小時，TLC(二氯甲烷/甲醇＝6:1，v/v)跟蹤原料消失，旋轉蒸去溶解，于殘留物中加入2ml無水甲醇，輕輕震蕩后過濾，濾液用磺酸樹脂調節至微酸性，過濾，蒸干濾液，制備色譜純化(二氯甲烷/甲醇＝2:1，v/v)，得黃白色粉末，收率為51.3％。
ESI-MS m/z298.6(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，D2O.)δ ppm 5.57-5.56(d，NH，J＝8.1Hz)，4.46(d，3-CH，J＝5.0Hz)，4.08-4.03(m，6-CH)，3.53-3.47(m，5-CH，)，3.40-3.37(dd，4-CH，J＝5.0，0.5Hz)，2.82-2.76(d，7-CH，J＝5.0Hz)，2.72(t，NCH2CH2，J＝4.8Hz)，2.71(t，NCH2CH2，J＝4.7Hz)，2.58-2.56(d，7-CH，J＝6.0Hz)，2.49(t，NCH2CH2，J＝3.8Hz)，1.90(s，CH3CON)，1.52(m，NCH2CH2CH2)，1.37(m，NCH2CH2CH2). 實施例2(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(4-羥基哌啶-1-甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸的制備 a)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-疊氮基-2-(4-羥基哌啶-1-甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制備
(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-疊氮基-2-(4-羥基哌啶-1-甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯通過中間體(3R，4S)-3-乙酰胺-4-疊氮-2-甲酰基-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯與4-羥基哌啶參照實施例1(a)的實驗操作獲得，硅膠柱色譜純化條件(二氯甲烷/甲醇＝13:1，v/v)，收率為22.6％。
ESI-MS m/z354.4(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，CDCl3.)δ ppm 6.24-6.22(d，NH，J＝8.2Hz)5.98-5.97(d，3-CH，J＝12.4Hz)，4.36-4.22(m，6-CH)，4.17-4.15(m，NCH2CH2CHO)，3.80(s，COOCH3)，3.68-3.66(m，5-CH)，2.88(dd，4-CH，J＝12.4，5.1Hz)，2.78-2.73(dd，7-CH2，J＝6.3Hz)，2.63-2.54(dd，NCH2CH2，J＝2.9Hz)，2.31-2.21(m，NCH2CH2)，1.99(s，CH3CONH)，1.89-1.88(m，NCH2CH2)，1.62-1.58(m，NCH2CH2). 13C-NMR(400MHz，CDCl3)δ 170.27(COOCH3)，162.17(CH3CONH)，144.46(2-C)，106.70(3-C)，76.21(6-C)，67.44(NCH2CH2CHO)，57.19(5-C)，56.13(7-C)，51.34(4-C)，29.35(2×NCH2CH2CHO)，34.46(2×NCH2CH2CHO)，23.25(CH3CONH). b)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(4-羥基哌啶-1-甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制備
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(4-羥基哌啶-1-甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯參照實施例1(b)的實驗操作獲得，硅膠柱色譜純化(二氯甲烷/甲醇＝6:1，v/v)，收率為41.9％。
ESI-MS m/z328.5(M+H)+ 1H-NMR(400MHZ，CDCl3.)δ ppm 7.24(s，NH)，6.21(s，3-CH)，5.51-5.45(m，6-CH)，5.44(m，CHOH)，5.41(m，5-CH)，5.00-4.95(m，4-CH)，4.85(m，NCH2CH2)4.78-4.66(m，NCH2CH2)，4.64(m，7-CH)，4.55-4.45(m，7-CH)，3.61(m，NCH2CH2)，3.53(s，CH3CONH)，3.30-3.27(m，NCH2CH2). c)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(4-羥基哌啶-1-甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸的制備
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(4-羥基哌啶-1-甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸參照實施例1(c)的實驗操作獲得，制備色譜純化(二氯甲烷/甲醇＝2:1，v/v)，得黃白色粉末，收率為51.3％。
ESI-MS m/z314.5(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，D2O.)δ ppm 5.73-5.73(d，3-CH，J＝7.5Hz)，4.39-4.33(m，6-CH)，4.02-4.00(m，NCH2CH2CHO)，3.97-3.95(m，5-CH)，3.84-3.74(dd，4-CH，J＝7.5，0.5Hz)，3.41(m，OH)，3.31-3.29(t，NCH2CH2J＝5.1Hz)，3.25-3.22(m，7-CH2，J＝4.6，1.4Hz)，3.14-3.11(t，NCH2CH2)，2.90(m，7-CH2，J＝5.9，1.4Hz)，2.04(s，CH3CONH)，2.02-2.00(m，NCH2CH2)，1.87-1.78(m，NCH2CH2). 實施例3(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((甲基(乙基)氨基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸的制備 a)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-疊氮基-2-((甲基(乙基)氨基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制備
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-疊氮基-2-((甲基(乙基)氨基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯通過中間體(3R，4S)-3-乙酰胺-4-疊氮-2-甲酰基-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯與甲乙胺參照實施例1(a)的實驗操作獲得，硅膠柱純化(二氯甲烷/甲醇＝15:1，v/v)，得黃色透明液，收率為30.8％。
ESI-MS m/z312.5(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ ppm 6.64-6.58(d，NH，J＝9.5Hz)，5，98-5.95(d，3-CH，J＝7.4Hz)，4.42-4.40(m，6-CH)，4.25-4.26(m，5-CH)，4.12-4.03(dd，4-CH，J＝7.4，0.5Hz)，3.81(s，COOCH3)，2.88-2.84(dd，7-CH2，J＝6.1Hz)，2.78-2.73(q，CH3CH2N)，2.39(s，NCH3)，2.03(s，CH3CONH)，1.12-1.09(t，CH3CH2N，J＝6.6Hz). 13C-NMR(400MHz，CDCl3.)δ ppm 179.54(COOCH3)，162.06(CH3CONH)，144.52(2-C)，107.13(3-C)，76.22(6-C)，56.74(7-C)，56.55(5-C)，52.63(COOCH3)，52.00(CH3CH2N)，49.54(4-C)，41.78(CH3N)，23.23(CH3CONH)，11.43(CH3CH2N). b)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((甲基(乙基))氨基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制備
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((甲基(乙基))氨基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯參照實施例1(b)的實驗操作獲得，硅膠柱純化(二氯甲烷/甲醇＝8:1，v/v)得黃色透明液體，收率為43.6％。
ESI-MS m/z386.5(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，CDCl3.)δ ppm 7.18-7.17(d，NH，J＝13.4Hz)，6.00-5.99(d，3-CH，J＝9.6Hz)，4.29-4.27(m，6-CH)，3.82-3.80(m，5-CH)，3.78(s，COOCH3)，3.60-3.58(dd，4-CH，J＝9.6，0.8Hz)，3.02-2.88(dd，7-CH2，J＝5.0，0.5Hz)，2.86-2.80(q，CH3CH2N)，2.50(s，NCH3)，2.06(s，CH3CONH)，1.18-1.13(t，CH3CH2N，J＝6.7Hz). a)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((甲基(乙基))氨基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸的制備
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((甲基(乙基))氨基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸參照實施例1(c)的實驗操作獲得，制備色譜純化(二氯甲烷/甲醇＝4:1，v/v)，得到黃白色粉末，收率為42.1％。
ESI-MS m/z272.6(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，D2O)δppm5.78(d，3-CH，J＝8.8Hz)，4.20(m，6-CH)，4.16(m，5-CH)，3.57-3.52(dd，4-CH，J＝8.8，2.3Hz)，3.47-3.31(dd，7-CH2，J＝2.9，0.6Hz)，3.30-3.21(q，CH3CH2N)，2.85(s，NCH3)，2.02(s，CH3CONH)，1.32-1.29(t，CH3CH2N，J＝7.9Hz). 實施例4(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((二乙基氨基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸的制備 a)(2S，3R，4S)-3乙酰氨基-4-疊氮基-2-((二乙基氨基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制備
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-疊氮基-2-((二乙基氨基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯通過中間體(3R，4S)-3-乙酰胺-4-疊氮-2-甲酰基-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯與二乙胺參照實施例1(a)的實驗操作獲得，硅膠柱純化(二氯甲烷/甲醇＝15:1，v/v)，得黃色透明液，收率為40.1％。
ESI-MS m/z326.4(M+H)+. 1H-NMR(400MHz，CDCl3.)δ ppm 6.24(d，NH，J＝7.8Hz)，6.01-6.00(d，3-CH，J＝7.4Hz)，4.44-4.40(t，6-CH，J＝6.0，0.6Hz)，4.28-4.24(m，5-CH)，4.16-4.11(dd，4-CH，J＝7.4Hz)，3.82(s，COOCH3)，2.94-2.81(dd，7-CH2，J＝6.0，0.5Hz)，2.75-2.70(q，2×NCH2CH3)，2.02(s，CH3CONH)，1.10-1.06(t，2×NCH2CH3，J＝6.6Hz). 13C-NMR(400MHz，CDCl3)δ ppm 170.74(COOCH3)，161.98

，107.41(3-C)，76.37(6-C)，56.09(7-C)，53.09(5-C)，52.60(COOCH3)，49.42(4-C)，47.40(2×CH3CH2N)，23.21(CH3CONH)，10.51(2×CH3CH2N). b)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((二乙基氨基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制備
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((二乙基氨基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯參照實施例1(b)的實驗操作獲得，硅膠柱純化(二氯甲烷/甲醇＝8:1，v/v)得黃色透明液體，收率為72.4％。
ESI-MS m/z300.4(M+H)+ 1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ ppm 7.54-7.52(d，NH，J＝14.6Hz)，6.03(d，3-CH，J＝9.6Hz)，4.54-4.51(dd，6-CH，J＝5.1，2.6Hz)，3.89-3.82(m，5-CH2)，3.80(s，COOCH3)，3.63-3.61(dd，4-CH，J＝9.6，0.8Hz)，3.26-3.22(m，7-CH2)，3.13-2.94(q，2×NCH2CH3)，2.11(s，CH3CONH)，1.13-1.23(t，2×NCH2CH3，J＝8.0Hz). c)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((二乙基氨基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸的制備
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((二乙基氨基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸參照實施例1

的實驗操作獲得，制備色譜純化(二氯甲烷/甲醇＝4:1，v/v)，得黃白色粉末，收率為52.5％。
ESI-MS m/z286.4(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，D2O)δ ppm 8.48(d，NH，J＝16.0Hz)，5.83-5.82(d，3-CH，J＝5.6Hz)，4.78(m，6-CH)，4.47-4.43(m，5-CH2)，4.42(dd，4-CH，J＝5.6，0.2Hz)，3.70-3.69(d，7-CH2，J＝4.3Hz)，3.67-3.66(q，NCH2CH3)，3.61-3.59(q，NCH2CH3)，3.58-3.56(d，7-CH2，J＝4.8Hz)，3.36(s，CH3CONH)，2.11(t，CH3CH2N，J＝6.0Hz)，1.94(3H，t，CH3CH2N，J＝6.8Hz). 實施例5(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(二(2-羥基乙基)氨基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸的制備 a)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-疊氮基-2-(二(2-羥基乙基)氨基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制備
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-疊氮基-2-(二(2-羥基乙基)氨基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯通過中間體(3R，4S)-3-乙酰胺-4-疊氮-2-甲酰基-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯與二乙胺參照實施例1(a)的實驗操作獲得，硅膠柱純化(二氯甲烷/甲醇＝13:1，v/v)，得黃色透明液，收率為28％。
ESI-MS m/z358.8(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ ppm 7.11-7.03(d，NH，J＝11.2Hz)，5.95-5.94(d，3-CH，J＝6.6Hz)，4.32(m，6-CH)，4.29(m，5-CH)，4.12-4.00(dd，4-CH，J＝6.6，0.6Hz)，3.80(s，COOCH3)，3.59-3.56(t，2×CH2OH，J＝3.4Hz)，2.84(m，7-CH2)，2.73-2.63(t，2×NCH2CH2，J＝3.4Hz)，2.01(s，CH3CONH). 13C-NMR(400MHz，CDC13.)δ ppm 170.99(COOCH3)，162.51(CH3CONH)，144.37(2-C)，107.51(3-C)，76.72(6-C)，57.45(2×CH2OH)，57.11(2×NCH2CH2)，54.96(5-C)，52.82(7-C)，49.90(COOCH3)，23.13(CH3CONH). b)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(二(2-羥基乙基)氨基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制備
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(二(2-羥基乙基)氨基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯參照實施例1(b)的實驗操作獲得，硅膠柱純化(二氯甲烷/甲醇＝8:1，v/v)得黃色透明液體，收率為72.4％。(附圖7) ESI-MS m/z332.8(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，D2O)δ ppm 6.02-6.01(d，3-CH，J＝9.5Hz)，4.17-4.12(m，6-CH)，3.80(s，COOCH3)，3.79-3.76(m，5-CH)，3.74-3.64(m，2×CH2OH)，3.63-3.61(m，4-CH)，2.93-2.91(d，7-CH2)，2.86-2.73(m，2×CH2CH2N)，2.04(s，CH3CONH). c)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(二(2-羥基乙基)氨基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸的制備
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(二(2-羥基乙基)氨基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸參照實施例1(c)的實驗操作獲得，制備色譜純化(二氯甲烷/甲醇＝2:1，v/v)，得黃白色粉末，收率為42.1％。
ESI-MS m/z356.5(M+K)+ 1H-NMR(400MHz，D2O)δ ppm 5.67-5.67(d，3-CH，J＝8.6Hz)，4.03(m，6-CH)，3.71-3.48(m，2×CH2OH)，3.61-3.59(m5-CH)，3.50-3.48(m，4-CH)，2.85-2.74(m，2×CH2CH2N)，2.71-2.66(m，7-CH2)，2.03(s，CH3CONH)。
實施例6(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(2，3-二羥基乙基(甲基)氨基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸的制備 a)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-疊氮基-2-(2，3-二羥基乙基(甲基)氨基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制備
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-疊氮基-2-(2，3-二羥基乙基(甲基)氨基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯通過中間體(3R，4S)-3-乙酰胺-4-疊氮-2-甲酰基-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯與3-甲氨基-1，2-丙二醇參照實施例1(a)的實驗操作獲得，硅膠柱純化(二氯甲烷/甲醇＝13:1，v/v)，得黃色透明液，收率為23.6％。
ESI-MS m/z358.1(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ ppm 6.66-6.64(.d，NH，J＝9.4Hz)，5.99-5.98(d，3-CH，J＝9.9Hz)，4.37-4.36(m，6-CH)，4.29-4.27(m，5-CH)，4.00-3.98(m，CH2OH)，3.81(s，COOCH3)，3.75-3.74(m，CH2OH)，3.70-3.66(m，NCH2CHOH)，3.51-3.47(t，4-CH，J＝9.9，3.1Hz)，2.87-2.82(dd，7-CH2，J＝6.0，0.9Hz)，2.63-2.60(dd，7-CH2，J＝6.9，0.9Hz)，2.63-2.57(m，NCH2CHOH)，2.37(s，NCH3)，2.00(s，NHCO CH3). 13C-NMR(400MHz，CDCl3)δ ppm 170.39(COOCH3)，162.12 .(CH3CONH)，144.38(2-C)，106.64(3-C)，76.01(6-C)，67.88(NCH2CHOH)，64.34(CH2OH)，59.86(NCH2CH)，56.79(7-C)，54.14(5-C)，52.74(COOCH3)，50.83(4-C)，43.70(NCH3)，23.21(CH3CONH). b)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(2，3-二羥基乙基(甲基)氨基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制備
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(2，3-二羥基乙基(甲基)氨基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯參照實施例1(b)的實驗操作獲得，硅膠柱純化(二氯甲烷:MeOH＝4:1，v/v)得到黃色透明液體，收率為44.9％。(附圖8) ESI-MS m/z332.1(M+H)+ 1H-NMR(400MHZ，D2O)δ ppm 6.12-6.11.(d，3-CH，J＝9.1Hz)，4.30-4.30(m，6-CH)，4.02-4.00(m，5-CH)，3.87(s，COOCH3)，3.84-3.73(t，4-CH，J＝9.1，0.7Hz)

3.71-3.68(m，CH2OH)，3.67-3.63(m，CH2OH)，3.59-3.55(m，NCH2CHOH)，3.13-3.07(dd，7-CH2，J＝4.6，0.6Hz)，2.98-2.94(dd，7-CH2，J＝5.3，0.6Hz)，2.83-2.80(m，NCH2CHOH)，2.57(s，NCH3)，2.11(s，NHCOCH3). c)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(2，3-二羥基乙基(甲基)氨基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸的制備
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(2，3-二羥基乙基(甲基)氨基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸參照實施例1(c)的實驗操作獲得，制備色譜純化(二氯甲烷/甲醇＝2:1，v/v)，得到黃白色粉末，收率為32.2％。
ESI-MS m/z318.1(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，D2O)δ ppm 8.47(d，NH，J＝18Hz)，5.80-5.79(d，3-CH，J＝7.6Hz)，4.44-4.41(m，6-CH)，3.95-3.94(m，5-CH)，3.90-3.89 .(dd，4-CH，J＝7.6，0.2Hz.)，.3.64-3.63(m，CH2OH)，3.60-3.59(m，CH2OH)，3.40-3.37(m，7-CH2)，3.28(m，NCH2CHOH)，3.14-3.10(m，NCH2CHOH)，2.84(s，NCH3)，2.10(s，NHCOCH3). 實施例7(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(((2S，6R)-2，6-二甲嗎啡啉)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸的制備 a)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-疊氮基-2-(((2S，6R)-2，6-二甲嗎啡啉)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制備
將(3R，4S)-3-乙酰胺-4-疊氮-2-甲酰基-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯200.0mg(0.75mmol)和2，6-二甲基嗎啡啉三氟乙酸鹽96.6mg(0.9mmol)加入到25ml圓底燒瓶中，加入無水甲醇5ml，氮氣保護下室溫攪拌至固體溶解，加入NaBH3CN 57mg(0.9mmol)，室溫下攪拌16小時，TLC(二氯甲烷/甲醇＝9:1，v/v)跟蹤原料(化合物7)消失，加入少量飽和NaHCO3水溶液，二氯甲烷萃取后，無水硫酸鈉干燥，旋轉蒸去溶劑得黃褐色粘稠物，硅膠柱(二氯甲烷/甲醇＝15:1，v/v)純化，得黃色透明液(8g)，收率為45.4％。(附圖9) ESI-MS m/z368.0(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ ppm 6.42-6.40(d，NH，J＝9.6Hz)，6.03-6.01(d，3-CH，J＝8.3Hz)，4.13-4.11(m，6-CH)，4.02(m，5-CH)，3.95-3.93(dd，4-CH，J＝8.3，0.3Hz)，3.76(s，COOCH3)，3.60-3.58(m，2×OCHCH3)，2.75-2.63(dd，7-CH2，J＝5.5，0.5Hz)，2.59-2.56(m，NCH2CH)，1.89(s，NCOCH3)，1.83-1.77(m，NCH2CH)，1.08-1.03(m，2×OCHCH3). 13C-NMR(400MHz，CDCl3.)δ ppm 170.44(COOCH3)，162.01(CH3CONH)，105.26(3-C)，72.28(6-C)，71.61(2×OCHCH3)，59.85

，58.11(5-C)，54.68(7-C)，52.65(COOCH3)，48.17(4-C)，22.95(CH3CONH)，18.95(2×OCHCH3). b)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4氨基-2(((2S，6R)-2，6-二甲嗎啡啉)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制備
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(((2S，6R)-2，6-二甲嗎啡啉)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯參照實施例1(b)的實驗操作獲得，硅膠柱純化(二氯甲烷/甲醇＝8:1，v/v)得到黃色透明液體，收率為64.7％。
ESI-MS m/z342.3(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，CDCl3)δppm 6.08(.d，NH，J＝8.3Hz)，6.07(d，3-CH，J＝10.7Hz)，4.18(m，6-CH)，4.00-3.98(m，5-CH)，3.79(s，COOCH3)，3.65-3.65(m，2×OCH CH3)，3.39-3.38(dd，4-CH，J＝10.7，2.4Hz)，2.87-2.84(d，7-CH2，J＝5.2，1.0Hz)，2.73-2.66(m，NCH2CH)，2.62-2.61(d，7-CH2，J＝6.4，1.0Hz)，1.95(s，NHCOCH3)，1.91-1.83(m，NCH2CH)，1.14-1.12(m，2×OCHCH3). c)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(((2S，6R)-2，6-二甲基嗎啡啉)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸的制備
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(((2S，6R)-2，6-二甲基嗎啡啉)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸參照實施例1(c)的實驗操作獲得，制備色譜純化(二氯甲烷/甲醇＝2:1，v/v)，得到黃白色粉末，收率為66.4％。
ESI-MS m/z:328.3(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，D2O.)δ ppm 5.82-5.81(d，3-CH，J＝10.3Hz)，4.03(t，6-CH，J＝3.6Hz)，3.87-3.83(m，2×OCHCH3)，3.72-3.70(m，5-CH)，3.23-3.3.20(t，4-CH，J＝10.3，1.9Hz)，3.12-3.07(dd，7-CH2，J＝3.6，0.2Hz)，2.83-2.02(m，2×NCH2CH)，1.97(s，NHCOCH3)，1.16-1.10(m，2×OCHCH3). 實施例8(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((4-甲氧基哌啶)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸的制備 a)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-疊氮基-2-((4-甲氧基哌啶)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制備
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-疊氮基-2-((4-甲氧基哌啶)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯通過中間體(3R，4S)-3-乙酰胺-4-疊氮-2-甲酰基-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯與4-甲氧基哌啶三氟乙酸鹽參照實施例7(a)的實驗操作獲得，硅膠柱純化(二氯甲烷/甲醇＝13:1，v/v)，得黃色透明液，收率為27.2％。
ESI-MS m/z368.1(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ ppm 6.33-6.31(d，NH，J＝8.4Hz)，5.97-5.91(d，3-CH，J＝7.2Hz)，4.35-4.31(m，6-CH)，4.22-4.20(m，5-CH)，4.16-4.13(dd，4-CH，J＝7.2，0.2Hz)，3.79(s，COOCH3)，3.44-3.44(m，CHOCH3)，3.03(s，CHOCH3)，3.20-3.19(d，7-CH，J＝4.6Hz)，2.82-2.81(d，7-CH，J＝6.1Hz)，2.78-2.57(m，NCH2CH2)，2.36-2.21(m，NCH2CH2)，1.98(s，CH3CONH)，1.86(m，NCH2CH2)，1.58-1.55(m，NCH2CH2). 13C-NMR(400MHz，CDCl3)δ ppm 170.34(COOCH3)，162.13(CH3CONH)，144.50(2-C)，106.84(3-C)，76.18(CHOCH3)，75.61(6-C)，57.53(5-C)，49.47(2×NCH2CH2)，29.69(2×NCH2CH2)，23.25(CH3CONH). b)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((4-甲氧基哌啶)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制備
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((4-甲氧基哌啶)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯參照實施例1(b)的實驗操作獲得，硅膠柱純化(二氯甲烷/甲醇＝6:1，v/v)得到黃色透明液體，收率為44.8％。
ESI-MS m/z342.1(M+H)+ 1H-NMR(400MHZ，CD3OD)δ ppm 5.90(1H，d，3-CH)，4.02(1H，t，6-CH)，3.74-3.70(1H，t，5-CH)，3.72(3H，s，COOCH3)，3.58(1H，t，4-CH)，，3.51-3.49(1H，m，CHOCH3)，3.24(3H，s，CHOCH3)，2.83-2.82(2H，dd，7-CH2)，2.73-2.68(2H，t，NCH2CH2)，2.42-2.39(2H，m，NCH2CH2)，1.94(3H，s，CH3CONH)，1.89-1.85(2H，m，NCH2CH2)，1.59-1.56(2H，m，NCH2CH2). c)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((4-甲氧基哌啶)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸的制備
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((4-甲氧基哌啶)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸參照實施例1(c)的實驗操作獲得，制備色譜純化(二氯甲烷:Me0H＝2:1，v/v)，得黃白色粉末，收率為41.7％。(附

圖10) ESI-MS m/z328.2(M+H)+ 實施例9(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((4-(芐氧基)哌啶)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸的制備 a)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-疊氮基-2-((4-(芐氧基)哌啶)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制備
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-疊氮基-2-((4-(芐氧基)哌啶)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯通過中間體(3R，4S)-3-乙酰胺-4-疊氮-2-甲酰基-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯與4-芐氧基哌啶三氟乙酸鹽參照實施例7(a)的實驗操作獲得，硅膠柱色譜(二氯甲烷/甲醇＝15:1，v/v)純化，得黃色透明液，收率為26％。
ESI-MS m/z444.0(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ ppm 7.26-7.18(C6H5)，6.32-6.30(d，NH，J＝8.9Hz)，5.92-5.91(d，3-CH，J＝10.1Hz)，4.45(s，C6H5CH2)，4.31-4.30(m，6-CH)，4，19-4.17(m，CHOCH2)，4.10-4.04(m5-CH)，3.74(s，COOCH3)，3.38-3.35(dd，4-CH，J＝10.1，2.9Hz)，2.82-2.73(t，NCH2CH.2，J＝3.6Hz)，2.70-2.55(t，NCH2CH.2，J＝4.7Hz)，2.34-2.20(m，7-CH2)，1.94(s，CH3CONH)，1.91-1.84(m，NCH2CH2)，1.66-1.57(mNCH2CH2，). 13C-NMR(400MHz，CDCl3)δ ppm 170.65(COOCH3)，162.18.(CH3CONH)，.144.47(2-C)，138.70.(1C，C6H5)，128.38(2C，C6H5)，127.53(3C，C6H5)，107.10(3-C)，76.08(CH2C6H5)，69.82(6-C)，57.72(CHOCH2)，56.59(5-C)，53.47(COOCH3)，52.67(7-C)，51.26(4-C)，49.53(2C，2×NCH2CH2)，30.86(NCH2CH2)，29.67(NCH2CH2)，23.20(CH3CONH). b)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((4-(芐氧基)哌啶)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制備
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((4-(芐氧基)哌啶)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯參照實施例1(b)的實驗操作獲得，硅膠柱純化(二氯甲烷/甲醇＝9:1，v/v)得到黃色透明液體，收率為55.3％。
ESI-MS m/z418.0(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，CDCl3.)δ ppm 7.36-7.28(m，C6H5)，6.00-5.99(d，3-CH，J＝11.6Hz)，4.52(s，C6H5CH2)，3.83-3.80(m，6-CH)，3.57(s，COOCH3)，3.57(m，CHOCH2)，3.55(m，5-CH)，3.09(dd，4-CH，J＝11.6，1.8Hz)，3.03-2.98(t，7-CH2，J＝3.2Hz)，2.89-2.85(t，NCH2CH2，J＝2.3Hz)，2.67-2.63(t，NCH2CH2，J＝3.3Hz)，2.07(s，CH3CONH)，2.03-2.00(m，NCH2CH2)，1.84-1.83(m NCH2CH2). c)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((4-(芐氧基)哌啶)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸的制備
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((4-(芐氧基)哌啶)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸參照實施例1(c)的實驗操作獲得，制備色譜純化(二氯甲烷/甲醇＝4:1，v/v)，得黃白色粉末，收率為74.4％。
ESI-MS m/z404.1(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，D2O)δ ppm 7.44-7.42(m，C6H5)，5.92(d，3-CH，J＝8.3Hz)，4.79(m，6-CH)，4.64-4.59(m，CHOCH2)，4.25(s，C6H5CH2)，3.99(m，5-CH)，3.83-3.80(dd，4-CH，J＝8.3，0.6Hz)，3.52-3.59(m，7-CH2)，3.52-3.44(t，NCH2CH2，J＝5.8Hz)，3.19-3.13(t，NCH2CH2，J＝4.8Hz)，2.07(s，CH3CONH)，2.06-2.02(m，NCH2CH2)，1.99-1.98(m，NCH2CH2). 實施例10(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((4-(烯丙基)哌啶)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸的制備 a)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-疊氮基-2-((4-(烯丙基)哌啶)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制備
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-疊氮基-2-((4-(烯丙基)哌啶)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯通過中間體(3R，4S)-3-乙酰胺-4-疊氮-2-甲酰基-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯與4-烯丙氧基哌啶三氟乙酸鹽參照實施例7(a)的實驗操作獲得，硅膠柱色譜純化(二氯甲烷/甲醇＝13:1，v/v)，得黃色透明液，收率為28.4％。
ESI-MS m/z394.5(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ ppm 5.25-5.23(d，NH，J＝4.5Hz)，5.98-5.97(d，3-CH，J＝10.0Hz)，5.94-5.87(m，CH2＝CH)，5.29-5.41(m，CH2＝CH)，4.37-4.34(m，CHOCH2)，4.33-4.32(m，6-CH)，4.12-4.11(m，5-CH)，4.03-3.93(m，OCH2CH)，3.81(s，COOCH3)，3.47-3.44(dd，4-CH，J＝10.0，2.6Hz)，2.83-2.77(m，NCH2CH2)，2.64-2.59(m，7-CH2)，2.27-2.25(m，NCH2CH2)，1.99(s，NHCOCH3)，1.80-1.75(m，NCH2CH2CH2)，1.74-1.71(m，NCH2CH2CH2) b)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((4-(烯丙基)哌啶)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制備
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((4-(烯丙基)哌啶)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯參照實施例1(b)的實驗操作獲得，硅膠柱純化(二氯甲烷/甲醇＝6:1，v/v)得到黃色透明液體，收率為21.3％。
ESI-MS m/z370.9(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ ppm 7.02-7.01(d，NH，J＝12.8Hz)，5.98(d，3-CH，J＝9.9Hz)，4.01-3.96(m，6-CH)，3.78(s，COOCH3)，3.79-3.73(m，5-CH)，3.50-3.49(dd，4-CH，J＝9.9，1.2Hz)，3.41-3.32(m，CHOCH2CH2)，2.73-2.69(m，NCH2CH)，2.67-2.64(m，7-CH2)，2.44-2.28(m，NCH2CH2)，2.03(s，NHCOCH3)，1.77-1.75(m，NCH2CH2CH2)，1.58-1.48(m，OCH2CH2CH3)，1.45-1.43(m，NC H2CH2CH2)，0.92-0.88(t，OCH2CH2CH3，J＝2.6Hz). c)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((4-(烯丙基)哌啶)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸的制備
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((4-(烯丙基)哌啶)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸參照實施例1(c)的實驗操作獲得，制備色譜純化(二氯甲烷/甲醇2:1，v/v)，得黃白色粉末，收率為31.2％。
ESI-MS m/z356.3(M+H)+ 實施例11(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((3-(烯丙基)哌啶)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸的制備 a)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-疊氮基-2-((3-(烯丙基)哌啶)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制備
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-疊氮基-2-((3-(烯丙基)哌啶)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯通過中間體(3R，4S)-3-乙酰胺-4-疊氮-2-甲酰基-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯與3-烯丙氧基哌啶三氟乙酸鹽參照實施例7(a)的實驗操作獲得，硅膠柱純化(二氯甲烷/甲醇＝13:1，v/v)，得黃色透明液，收率為27.5％。
ESI-MS m/z394.5(M+H)+ 1HNMR(400MHz，CDCl3)δ ppm 6.24-6.22(d，NH，J＝8.5Hz)，5.97-5.96(d，3-CH，J＝10.5Hz)，5.89-5.88(m，CH2＝CH)，5.28-5.11(m，CH2＝CH)，4.33-4.31(m，CHOCH2)，4.23-4.21(m，6-CH)，4.12-4.11(m，5-CH)，4.15-4.12(m，OCH2CH＝CH2)，3.79(s，COOCH3)，3.35-3.33(dd，4-CH，J＝10.5Hz)，2.83-2.81(m，NCH2CH2)，2.76-2.71(m，NCH2CH2)，2.60-2.57(m，NCH2CH2)，2.27-2.25(m，NCH2CH2)，2.30-2.22(m，7-CH2)，1.98(s，NHCOCH3)，1.87-1.84(m，NCH2CH2CH)，1.60-1.57(m，NCH2CH2CH). 13C-NMR(400MHz，CDCl3)δ ppm 170.22(COOCH3)，162.13(CH3CONH)，144.56(2-C)，135.32(CH＝CH2)，116.44(CH＝CH2)，106.99(3-C)，76.25(6-C)，68.80(CH2CH＝CH2)，57.56(CHOCH2)，56.29(5-C)，52.85(COOCH3)，51.87(7-C)，51.40(4-C)，49.66(2×NCH2CH2)，31.34(2×NCH2CH2)，23.21(CH3CONH). b)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((3-(烯丙基)哌啶)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制備
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((3-(烯丙基)哌啶)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯參照實施例1(b)的實驗操作獲得，硅膠柱純化(二氯甲/甲醇＝4:1，v/v)，得黃色透明液體，收率為44.4％。
ESI-MS m/z370.5(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ ppm 6.89-6.88(d，NH，J＝13.5Hz)，5.99-5.98(d，3-CH，J＝12.1Hz)，4.07-4.06(m，6-CH)，3.78(s，COOCH3)，3.51-3.49(m，5-CH)，3.39-3.33(m，CHOCH2)，2.96-2.95(m，4-CH)，2.83-2.71(m，2×NCH2CH2)，2.53-2.30(m，7-CH2)，2.03(s，NHCOCH3)，1.60-1.57(m，2×NCH2CH2)，1.25(m，OCH2CH2CH3)，0.93-0.91(t，OCH2CH2CH3，J＝3.8Hz). c)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((3-(烯丙基)哌啶)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸的制備
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((3-(烯丙基)哌啶)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸參照實施例1(c)的實驗操作獲得，制備色譜純化(二氯甲烷/甲醇＝2:1，v/v)，得黃白色粉末，收率為51.9％。
ESI-MS m/z356.5(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，D2O)δ ppm 5.96-5.68(d，3-CH，J＝9.4Hz)，4.24(m，6-CH)，3.62-3.62(m，5-CH)，3.60-3.59(m，4-CH)，3.48-3.44(m，CHOCH2CH2)，3.10-3.07(m，7-CH2)，2.91-2.85(m，2×NCH2CH2)，2.69-2.65(m，7-CH2)，2.02(s，NHCOCH3)，2.01-1.98(m，NCH2CH2)，1.74-1.71(m，NCH2CH2)，1.54-1.49(m，OCH2CH2CH3)，0.85-0.82(t，OCH2CH2CH3，J＝2.8Hz). 實施例12(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(羥基(2-羰基環戊基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸的制備 a)(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-疊氮基-2-(羥基(2-羰基環戊基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制備
將(3R，4S)-3-乙酰胺-4-疊氮-2-甲醛-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯410.0mg(1.53mmol)與L-脯氨酸53mg(0.46mmol)加入25ml圓底燒瓶中，加入DMS010ml常溫下攪拌溶解，慢慢加入環戊酮192.5mg(2.29mmol)，繼續攪拌24小時，TLC跟蹤原料消失，加入5ml純凈水，用乙酸乙酯萃取(20ml×3)，合并有機層，用飽和食鹽水洗滌三次，無水硫酸鈉干燥后，旋轉蒸發去掉溶劑，殘留物用硅膠柱純化(石油醚/乙酸乙酯＝7:3，v/v)，得黃色粘稠液，收率52.1％。
b)(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-疊氮基-2-(羥基(2-羥基環戊基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制備
將化合物(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-疊氮基-2-(羥基(2-羰基環戊基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯220.0mg(0.62mmol)用10ml無水甲醇在室溫下攪拌溶解在25ml圓底燒瓶中，加入NaBH425.0mg(0.66mmol)，繼續攪拌1小時，TLC(二氯甲烷/甲醇＝97:3，v/v)跟蹤原料消失，用1N HCl溶液調節pH7，旋轉蒸去甲醇，殘留液用乙酸乙酯萃取(10ml×3)，無水硫酸鈉干燥后，旋轉蒸去溶劑，殘留物用硅膠柱純化(二氯甲烷/甲醇＝97:3，v/v)，得化合物，收率為90.9％。
ESI-MS m/z327.5(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ ppm 5.75(d，3-CH，J＝9.5Hz)，4.18-4.17(m，6-CH)，3.90(m，5-CH)，3.65(m，CHOH)，3.64(s，COOCH3)，3.38(m，4-CH)，1.90-1.88(m，CH2CH2CH2)，1.83-1.82(m，CHCH2)，1.09(s，NHCOCH3). c)(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(羥基(2-羥基環戊基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制備
將化合物(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-疊氮基-2-(羥基(2-羥基環戊基)甲基)-3，4二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯溶解在無水甲醇中，加入催化量的Lindlar催化劑，抽去反應體系的空氣后在氫氣的保護下，室溫攪拌1小時，TLC(二氯甲烷/甲醇＝15:1，v/v)跟蹤原料消失，加入少量硅藻土，過濾，旋轉蒸干濾液，殘留物用硅膠柱純化得到兩個產物(38.4％)。
ESI-MS m/z351.1(M+Na)+ 1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ ppm 6.93(d，3-CH，J＝11.0Hz)，5.90(m，6-CH)，5.28(m，5-CH)，4.17-4.15(m，4-CH)，3.84-3.80(t，CHCHOH)，3.77(s，COOCH3)，3.56-3.45(m，CH2CHOH)，2.21(m，HOCHCHCHOH)，2.08(s，NHCOCH3)，1.92-1.82(m，CH2CHOH)，1.62-1.56(m，CH2CH2). ESI-MS m/z329.1(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ ppm 6.96(d，NH，J＝12.2Hz)，5.89-5.88(d，3-CH，J＝8.0Hz)，4.07-4.05(m，6-CH)，3.90(m，5-CH)，3.88-3.86(m，4-CH)，3.76(s，CO OCH3)，3.64-3.63(m，CHCHOH)，3.56-3.55(m，CH2CHOH)，2.21(m，HOCH CHCHOH)，2.07(s，NHCOCH3)，1.70-1.67(m，CH2CHOH)，1.55-1.50(m，CH2CH2). d)(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(羥基(2-羥基環戊基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸的制備
將化合物(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(羥基(2-羥基環戊基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯溶解在THF/H2O(v/v＝3:1)中，加入等當量的1N KOH水溶液，室溫下攪拌至原料消失，旋轉蒸去溶劑，在殘留物中加入無水甲醇溶解產物后濾去不溶物，加入磺酸樹脂調節pH7，過濾濾去樹脂后蒸干甲醇，殘留物用制備硅膠板純化(二氯甲烷/甲醇＝6:1，v/v)，得黃白色粉末，收率為29.4％。
ESI-MS m/z358.1(M+K)+ 1H-NMR(400MHz，CDOH)δ ppm 5.60(d，3-CH，J＝6.6Hz)，4.37-4.36(m，6-CH)，3.90(m，5-CH)，3.94(m，4-CH)，3.92(m，CHCHOH)，3.60-3.59(m，CH2CHOH)，2.14-2.11(m，HOCHCHCHOH)，2.04(s，NHCOCH3)，1.91-1.89(m，CH2CHO H)，1.61-1.57(m，CH2CH2). 實施例13(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(羥基(2-羰基環己基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸的制備 a)(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-疊氮基-2-(羥基(2-羰基環己基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯和(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-疊氮基-2-(羥基(2-羥基環己基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制備的制備
選用環己酮，參考化合物實施例12(a)的實驗操作獲得(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-疊氮基-2-(羥基(2-羰基環己基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯，收率73.1％，隨后用實施例12(b)同樣的還原方法獲得(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-疊氮基-2-(羥基(2-羥基環己基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的粗產品，用硅膠柱純化(二氯甲烷/甲醇＝15:1，v/v)，得化合物(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-疊氮基-2-(羥基(2-羥基環己基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯，收率72.4％。
ESI-MS m/z391.1(M+Na)+ 1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ ppm 6.65-6.55(d，NH，J＝9.8Hz)，5.95-5.93(d，3-CH，J＝9.0Hz)，4.53-4.51(m，6-CH)，4.21-4.19(m，5-CH)，4.12-4.10(m，CHOH)，3.80(s，COOCH3)，3.70-3.68(dd，4-CH，J＝9.0，2.0Hz)，3.57-3.55(m，CHCOCH2)，2.07(s，NHCOCH3)，1.89-1.66(m，4×CH2). b)(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(羥基(2-羥基環己基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯和(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(羥基(2-羥基環己基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸的制備
參考實施例12(c)和(d)的實驗操作，還原水解(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(羥基(2-羥基環己基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯和(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(羥基(2-羥基環己基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸，兩步的收率分別是42.7％和40.9％。
ESI-MS m/z341.1(M+H)+ ESI-MS m/z321.1(M+Na)+ 實施例14(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(1，3，4-三羥基叔丁基-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸的制備
選用羥基丙酮與中間體(3R，4S)-3-乙酰胺4-疊氮-2-甲醛-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸甲酯參照實施例12(a)、(b)、(c)和(d)的實驗操作，經過羥醛縮合反應、還原羰基、Lindlar催化劑催化還原疊氮、KOH水解等反應獲得目標化合物(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(1，3，4-三羥基叔丁基-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸，四步的收率分別是46.5％、40.3％、95％和91.4％。
ESI-MS m/z317.1(M+H)+ ESI-MS m/z341.1(M+Na)+ 制備例2(3R，4S)-甲基-3-乙酰氨基-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-醛基-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧酸酯的制備 a)(3R，4S)-甲基-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((1R，2R)-1，2，3-三羥基丙基-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧酸酯的制備
室溫下，向攪拌著的(3R，4S)-甲基-3-乙酰氨基-4-疊氮基-2-((1R，2R)-1，2，3-三羥基丙基-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧酸酯(3.0g)的甲醇(50mL)中加入林德拉催化劑，并通入氫氣。4天后，過濾，濾液減壓蒸餾并得到2.2g產品。
b)(3R，4S)-甲基-3-乙酰氨基-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-((1R，2R)-1，2，3-三羥基丙基-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧酸酯的制備

室溫下，向攪拌著的(3R，4S)-甲基-3-乙酰氨基-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-((1R，2R)-1，2，3-三羥基丙基-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧酸酯(2.76g，9.08mmol)的DMF(100mL)溶液中依次加入三乙胺(5mL，36，32mmol)，(BocHN)2CS(5.27g，19.07mmol)和HgCl2(4.93g，18.16mmol)。攪拌過夜，過濾，濾液中加入水并用乙酸乙酯萃取三次。飽和食鹽水洗3次。無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾并得產物4.5g。過硅膠柱(DCM/MeOH(96:4，v/v，50g硅膠)得1.5g產品。
c)(3R，4S)-甲基-3-乙酰氨基-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-醛基-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧酸酯的制備

室溫下，向攪拌著的(3R，4S)-甲基-3-乙酰氨基-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-((1R，2R)-1，2，3-三羥基丙基-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧酸酯(0.6g，1.10mmol)的甲醇/水(120mL，31，v/v)溶液中加入NaIO4(0.49g，2.31mmol)。100分鐘后，過濾，濾液減壓蒸餾以除去甲醇。用乙酸乙酯萃取三次，飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸餾得產品0.54g. 實施例15(3R，4S)-3-乙酰胺基-4-胍基-2-(羥基(2-羥基環戊基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧酸的制備 a)(3R，4S)-甲基-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-(羥基(2-羰基環戊基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧基酯的制備
室溫下，向攪拌著的(3R，4S)-甲基-3-乙酰氨基-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-醛基-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧酸酯(0.15g，0.31mmol)的DMSO(10mL)溶液中依次加入環戊酮(1mL)和L-脯氨酸(0.011g，0.093mmol)。8天后，加入水并用乙酸乙酯萃取3次，飽和食鹽水洗3次，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸餾并得棕色泡沫(0.227g).過硅膠柱(DCM/Ether(92:8，v/v)，7g硅膠)。
b)(3R，4S)-甲基-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-(羥基(2-羥基環戊基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧基酯的制備
室溫下，向攪拌著的(3R，4S)-甲基-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-(羥基(2-羰基環戊基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧基酯(0.065g，0.11mmol)的甲醇(10mL)溶液中加入NaBH4(0.005g)。45分鐘后，減壓蒸餾除去甲醇，加水后用乙酸乙酯萃取3次，飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸餾并得到透明油狀物(0.066g)。
c)(3R，4S)-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-(羥基(2-羥基環戊基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧酸的制備
室溫下，向攪拌著的(3R，4S)-甲基-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-(羥基(2-羥基環戊基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧基酯(0.039g。0.068mmol)的THF/H2O(5mL，4:1，v/v)溶液中加入LiOH至pH10左右。10分鐘后，鹽酸(1mol L-1)中和。減壓蒸餾除去THF，乙酸乙酯萃取3次，飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸餾。
d)(3R，4S)-3-乙酰胺基-4-胍基-2-(羥基(2-羥基環戊基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧酸的制備
室溫下，向攪拌著的(3R，4S)-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-(羥基(2-羥基環戊基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧酸(0.032g，0.057mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中加入CF3COOH(1mL)，4小時后，減壓蒸餾除去溶劑和CF3COOH，得棕色油狀物(0.03g)。
實施例16(3R，4S)-3-乙酰胺基-4-胍基-2-(羥基(2-羥基環己基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧酸的制備 a)(3R，4S)-甲基-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-(羥基(2-羰基環己基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧基酯的制備
(3R，4S)-甲基-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-(羥基(2-羰基環己基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧基酯的制備參照實施例1(a)。
b)(3R，4S)-甲基-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-(羥基(2-羰基環己基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧基酯的制備
(3R，4S)-甲基-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-(羥基(2-羰基環己基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧基酯的制備參照實施例1(b)。
c)(3R，4S)-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-(羥基(2-羥基環己基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧酸的制備
(3R，4S)-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-(羥基(2-羥基環己基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧酸的制備參照實施例1(c)。
d)(3R，4S)-3-乙酰胺基-4-胍基-2-(羥基(2-羥基環戊基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧酸的制備
-乙酰胺基-4-胍基-2-(羥基(2-羥基環戊基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧酸的制備參照實施例1(d)。
實施例17(3R，4S)-3-乙酰胺基-4-胍基-2-(羥基(2-羥基四氫-2H-吡喃基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧酸的制備 a)(3R，4S)-甲基-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)2(羥基(2-羰基四氫-2H-吡喃基)甲基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧基酯的制備
(3R，4S)-甲基-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-(羥基(2-羰基四氫-2H-吡喃基)甲基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧基酯的制備參照實施例1(a)。
b)(3R，4S)-甲基-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-(羥基(2-羥基四氫-2H-吡喃基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧基酯的制備
(3R，4S)-甲基-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-(羥基(2-羥基四氫-2H-吡喃基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧基酯的制備參照實施例1(b)。
c)(3R，4S)-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-(羥基(2-羥基四氫-2H-吡喃基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧酸的制備
(3R，4S)-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-(羥基(2-羥基四氫-2H-吡喃基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧酸的制備參照實施例1(c)。
d)(3R，4S)-3-乙酰胺基-4-胍基-2-(羥基(2-羥基四氫-2H-吡喃基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧酸的制備
(3R，4S)-3-乙酰胺基-4-胍基-2-(羥基(2-羥基四氫-2H-吡喃基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧酸的制備參照實施例4(d)。
實施例18(3R，4S)-3-乙酰胺基-4-胍基-2-(羥基(4-羥基哌啶-3-基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧酸的制備 a)(3R，4S)-甲基-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-((1-叔丁氧羰基)-4-羥基哌啶-3-基)(羥基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧基酯的制備
(3R，4S)-甲基-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-((1-叔丁氧羰基)-4-羥基哌啶-3-基)(羥基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧基酯的制備參照實施例1(a)。
b)(3R，4S)-甲基-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-(羥基(2-羥基四氫-2H-吡喃基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧基酯的制備
甲基-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-(羥基(2-羥基四氫-2H-吡喃基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧基酯的制備參照實施例1(b)。
c)(3R，4S)-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-((1-叔丁氧羰基)-4-羥基哌啶-3-基)(羥基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧酸的制備
(3R，4S)-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-((1-叔丁氧羰基)-4-羥基哌啶-3-基)(羥基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧酸的制備參照實施例1(c)。
d)(3R，4S)-3-乙酰胺基-4-胍基-2-(羥基(4-羥基哌啶-3-基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧酸的制備
(3R，4S)-3-乙酰胺基-4-胍基-2-(羥基(4-羥基哌啶-3-基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧酸的制備參照實施例1(d)。
實施例19
取三醇1(122.2mg，0.224mmol)溶于18ml甲醇和6ml水，加入高碘酸鈉(105mg，2.2equiv)，室溫下攪拌24小時。減壓出去絕大部分甲醇，余下部分加入乙酸乙酯，進行萃取，乙酸乙酯層用飽和食鹽水洗，無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓除去溶劑得到定量反應的產物醛2，2直接投入下一步反應無需進一步的純化。
醛2(51.7mg，0.099mmol)溶于2ml無水乙氰，加入胺6(11mg，1.1equiv)在2ml甲醇中的溶液，混合均勻后，加入約0.2g無水硫酸鎂，室溫下攪拌1小時，向反應混合物加入7mg氰基硼氰化鈉。一小時后過濾，減壓出去溶劑，硅膠柱純化得到32mg白色固體3，收率約57％。
酯3(32mg，0.056mmol)溶于2ml四氫呋喃，加入0.1ml 1N氫氧化鈉溶液，室溫下攪拌2小時；加入離子交換樹脂，調整pH至約6.0。減壓蒸干得到白色固體，溶于2ml二氯甲烷，加入0.5ml三氟醋酸，2h后減壓蒸干得到產品，HPLC純化，收率約70％。
下面對本發明化合物對流感病毒抑制活性進行測試 流感病毒神經氨酸酶測定方法 實驗材料NA酶液流感病毒感染雞胚的尿囊液 酶促反應體系330mmol/L的MES緩沖液(pH3.5) 200μmol/L的MUNANA 4mmol/L的CaCl2溶液 終止液14mmol/L的NaOH溶液(14mmol/L，83％的乙醇) 奧司他韋1mmol/L 酶活性測定 NA酶液(不同稀釋濃度) 40μl MES(330mmol/L) 10μl CaCl2(4mmol/L) 10μl MUNANA(200μmol/L) 10μl H2O 30μl 混勻孵育15min后 終止液150μl EX＝355nm XM＝460nm 注為了驗證酶反應系統是否正常，可以不加終止液，測定熒光值的動力曲線。
NA抑制劑篩選實驗操作 1、奧司他韋或化合物110，1100，11000，110000稀釋 2、反應步驟NA酶液 30μl奧司他韋或化合物 10μl 混勻后孵育30min，加入以下成分MES(330mmol/L)10μlCaCl2(4mmol/L)10μlMUNANA(200μmol/L)10μlH2O30μl 混勻后孵育15min，加入終止液150μl 混勻后測定熒光值EX＝355nm XM＝460nm 3、數據分析GraphPad Prism Demo分析。
目標化合物活性測定結果如下表所示




從以上測試結果可以看出，當化合物的C4為胍基時，其活性顯著增加，而且實施例15，16，17，18的化合物的活性均高于扎納米韋，實施例19化合物的活性接近于扎納米韋，都有望開發為新藥。
權利要求
1.唾液酸類似物，其結構如以下通式I所示
其中R1為氨基或胍基，R2為乙酰胺基，R’為含氮和/或氧的側鏈，選自以下通式所示基團a.通式(Ia)所示基團，結構如下
其中，A為C或0，R3選自如下之一氫、羥基、C1-4烷氧基、芳香烷氧基，R4和R5選自如下之一氫、C1-4烷基、C1-4烷氧基；A為0時，R3不代表任何原子；
b.通式(Ib)所示基團，結構如下
其中，R6和R7為C1-6烷基或C1-6多羥基取代的烷基；
c.通式(Ic)所示基團，結構如下
其中，n＝1，2，3，4，5；
d.通式(Id)所示基團，結構如下
其中X與Y為0或S或CH2或NH；n＝1，2，3，4，5；
e.如下基團之一
或
或
或
2.權利要求1所述的唾液酸類似物，其特征在于所述唾液酸類似物選自如下之一
(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(哌啶-1-甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸；
(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(4-羥基哌啶-1-甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸；
(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((甲基(乙基)氨基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸；
(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((二乙基氨基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸；
(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(二(2-羥基乙基)氨基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸；
(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(2，3-二羥基乙基(甲基)氨基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸；
(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(((2S，6R)-2，6-二甲嗎啡啉)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸；
(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((4-甲氧基哌啶)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸；
(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4氨基-2-((4-(芐氧基)哌啶)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸；
(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((4-(烯內基)哌啶)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸；
(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((3-(烯丙基)哌啶)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸；
(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(羥基(2-羰基環戊基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸；
(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(羥基(2-羰基環己基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸；
(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(1，3，4-三羥基叔丁基3，4-二氫-2H-吡喃-6-甲酸。
3、權利要求1所述的唾液酸類似物，其特征在于所述唾液酸類似物選自如下之一
(3R，4S)-3-乙酰胺基-4-胍基-2-(羥基(2-羥基環戊基)甲基)3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧酸；
(3R，4S)-3-乙酰胺基-4-胍基-2-(羥基(2-羥基環己基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧酸；
(3R，4S)-3-乙酰胺基-4-胍基-2-(羥基(2-羥基四氫-2H-吡喃基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧酸；
(3R，4S)-3-乙酰胺基-4-胍基-2-(羥基(4-羥基哌啶-3-基)甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧酸；
(2S)-3-乙酰胺基-4-胍基-2-(((3S，4S)-3，4-二羥基吡咯-1-甲基)-3，4-二氫2H-吡喃-6-羧酸；
(2S)-3-乙酰胺基-4-胍基-2-(((2S，4R)-4-羥基-2-羥甲基吡咯-1-甲基)-3，4-二氫-2H-吡喃-6-羧酸。
4、權利要求1或2或3所述的唾液酸類似物的藥用組合物。
5、權利要求1或2或3所述的唾液酸類似物在制備抗流感病毒藥物中的應用。
全文摘要
本發明提供了一種具有顯著抑制流感病毒的活性的唾液酸類似物，并提供了所述化合物在制備抗病毒藥物中的應用。本發明首先以扎那米韋為先導化合物，對其分子結構中的C6位側鏈進行改造，得到C6位帶氨基側鏈、C6位側鏈帶有親水性羥基的新型扎那米韋類似物。對上述化合物進行了體外抗病毒活性研究。結果顯示，本發明所述化合物在體外表現出顯著抑制流感病毒的活性。因此，本發明唾液酸類似物有望應用于制備抗流感病毒藥物。
文檔編號A61K31/433GK101362744SQ20081019878
公開日2009年2月11日 申請日期2008年9月26日 優先權日2008年9月26日
發明者張健存, 儀明君, 燕 劉, 宇 趙, 凌 陳 申請人:中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院