一種中藥降血糖藥及其制備方法

專利名稱：一種中藥降血糖藥及其制備方法
技術領域：
本發明屬于中藥新藥研發領域。涉及利用傳統中藥制備降血糖藥及其制備方法， 尤其涉及采用現代提取分離、技術，從中藥柞樹葉中獲得具有降血糖作用的有效組分，制備 降血糖藥。
背景技術：
糖尿病為一種常見病，全世界現有糖尿病患者1. 5億，據預測到2025年患者人數 將增加到3. 33億.糖尿病中醫辨證屬于“消渴”病范疇。究其病機主要在于陰津虧損，燥熱 偏甚，而以陰虛為本，燥熱為標。燥熱內生，津干液枯，氣血澀滯，久而為瘀。近幾年新的防治 技術主要有胰島細胞移植、胰腺移植、胰島素泵代替胰島素注射以及糖尿病的免疫療法等， 臨床常用的治療藥物有雙胍類降糖藥物-鹽酸二甲雙胍和降糖靈(苯乙雙胍)。降糖靈主 要副作用是胃腸道反應，有厭食、口苦、惡心、嘔吐、腹瀉等癥狀，因經肝臟代謝，易誘發乳酸 中毒。雖然二甲雙胍誘乳酸酸中毒的可能性比降糖靈顯著減少，但仍然有此副作用。最近， 美國已根據受體學說，開發出第三代治療糖尿病的藥物——曲格列酮，據目前報道來看，遠 期療效穩定，但有一定的副作用，仍未大面積推廣。因此，如何使糖尿病病人的血糖長期保 持穩定，需要研發療效好、副作用少且小、標本兼治的降糖中藥現代制劑。柞樹葉為殼斗科植物蒙櫟Quercus mongolica Fisch的樹葉，味微苦、澀、性平，清 熱止痢，止咳，解毒消腫。主治痢疾，腸炎，消化不良，支氣管炎，癰腫，痔瘡。國內外關于其化 學成分研究僅見谷留醇、羽扇豆醇、粘霉烯醇及脂肪烴類成分。參見《中華本草》(第 2 卷，438-440 頁)

發明內容
本發明要解決的技術問題是從柞樹葉中，研究開發降血糖的有效組分的中藥現代 制劑。副作用顯著減少并降低，使其便于患者長期服用仍相當安全。能夠減輕或抑制糖尿 病并發癥的發生和發展。本發明要解決的技術問題還包括研究制備上述降血糖中藥組合物 的提取分離方法，該方法應重現性好，能夠用于工業化生產。為解決上述技術問題，本發明研究制定了如下技術方案本發明提供了一種具有降血糖作用的柞樹葉有效組分。該組合物的制備方法，包括如下步驟(1)取柞樹葉藥材，用水和/或低級醇提取，得到提取液，將所得提取液濃縮，干 燥，即為有效組分；或者，(2)將步驟1)提取液直接上大孔吸附樹脂柱，或者將步驟1)提取液先濃縮再分散 后，上大孔吸附樹脂柱；依次用0-95%低級醇對大孔吸附樹脂柱進行梯度洗脫，分別收集 各洗脫物；將其中45-55%低級醇洗脫物和/或85-99%低級醇洗脫物，濃縮干燥后即為有 效組分；或者，(3)取步驟2)中45-55%低級醇洗脫物和/或85_99%低級醇洗脫物濃縮后，用15-60目聚酰胺進行層析，用0-95%低級醇進行梯度洗脫，收集其30%和/或50%低級醇 濃度的洗脫物，濃縮干燥得到有效組分。所述提取物制備方法中，提取或者梯度洗脫時，所用的低級醇是指碳數為C1-C5 的直鏈或支鏈低級醇(所述低級醇優選甲醇、乙醇、丙醇或正丁醇)；水和低級醇是V/V混 合(例如，在一定毫升數的低級醇中，加入一定毫升數的水)。步驟⑴提取中低級醇濃度為0-95% ；用回流、浸漬、滲漉或水煎方法提取；步驟2)中所述大孔樹脂為聚苯乙烯型、聚丙烯酸酯型或聚甲基丙烯酸酯型 中的任意一種或幾種為骨架材料的樹脂；步驟2)中大孔吸附樹脂柱梯度洗脫較好的方法 是先用5%以下的低級醇除去雜質，再用5-95%低級醇洗脫；收集50%低級醇洗脫物和/ 或95%低級醇洗脫物，濃縮，即得柞樹葉有效組分；步驟3)中聚酰胺層析梯度洗脫優選用濃度為低于5%的低級醇除去雜質，再用濃度5-95%低級醇；收集30%和/或50%低級醇濃度的洗脫物，濃縮，即得 柞樹葉有效組分；前述制備方法中優選提取所用溶劑是0-95%乙醇；提取溶劑用量為藥材用量的10-12倍；提取時間為2h/次；共提取3次；大孔吸附樹脂柱的梯度洗脫是 先用0-40%乙醇除去雜質，再用50-95%乙醇洗脫，收集50%低級醇洗脫物和/或95%低 級醇洗脫物，濃縮得有效組分；提取或者對大孔吸附樹脂柱或聚酰胺層析進行梯度洗脫時， 所用低級醇選自甲醇、乙醇、丙醇或正丁醇中的任意一種或它們的混合物；對大孔吸附樹脂 柱進行洗脫時，洗脫溶劑的用量為所用樹脂體積的8-12倍量，優選10倍量；對聚酰胺柱洗 脫時，各洗脫溶劑的用量為所用聚酰胺體積的2-5倍量，優選3倍量。所述大孔樹脂選自 AB-8、D101型樹脂；濃縮干燥選用減壓、真空、冷凍或噴霧方法中的任意一種方法進行。更優選的制備方法中，梯度洗脫是先用0-5%乙醇雜質，再用10% -20%乙醇洗脫 雜質；再用50% -95%乙醇洗脫，收集50%低級醇洗脫物和/或95%低級醇洗脫物，濃縮得 有效組分。前述任一種預防或治療高血糖組有效組分，將前述人一種柞樹葉有效組分，與藥 學上可接受載體混合，制成口服制劑或注射劑。所述的藥學可接受載體，輔料和對本發明藥 效沒有明顯影響的抗氧化劑、氨基酸、維生素、碳水化合物或植物提取物。所述口服制劑為 膠囊劑、軟膠囊劑、顆粒劑、口服液、片劑或滴丸，所述注射劑包括凍干粉針劑或注射液。前述降血糖有效組分，將前述任一種柞樹葉有效組分與其它中藥組成復方，所述 的中藥包括活血化淤藥丹參、川芎、龜箭羽、赤芍、牡丹皮、水蛭、當歸；益氣養陰藥黃芪、人 參、山茱萸、枸杞子；及滋陰清熱藥黃連、麥冬、地骨皮、知母、地黃、玉竹、黃精。前述任一種柞樹葉有效組分在制備預防或治療高血糖疾病的藥物或保健品中的 應用，所述高血糖疾病包括糖尿病。本發明以活性為先導，對柞樹葉降糖的活性組分進行了追蹤。實驗從不同提取部 位著手，選用正常的和化學性糖尿病小鼠模型，在整體水平進行降血糖藥學學比較，初步確 定柞樹葉降糖的有效組分。為了得到具有降血糖作用的柞樹葉有效組分，本發明人利用柞樹葉為原料，經過 水或極性有機溶劑提取、大孔吸附樹脂洗脫、洗脫液濃縮干燥，得到柞樹葉有效組分。本發 明以柞樹葉有效組分為有效活性組分，用于制備預防或治療降血糖藥物或保健品，該藥物或保健品以柞樹葉有效組分和藥學上可接受的載體混合，藥學上可接受的載體包括口服制 劑輔料、或胃腸外途徑給藥的輔料。給藥途徑可以口服、注射、局部給藥等。根據本發明的技術方案，該中藥制劑或保健品制劑，其中口服制劑或折射用制劑， 其中口服制劑包括膠囊劑、軟膠囊劑、顆粒劑、口服液、片劑或滴丸等。所述注射劑包括凍干 粉針劑或注射液。所用輔料包括，如淀粉、蔗糖、乳糖、糖粉、葡萄糖、甘露醇、木糖醇、聚乙二 醇、異丙醇、土溫-80、甘油、丙二醇、微晶纖維素鈉、糊精、環糊精、氯化鈉、維生素C、半胱氨 酸、檸檬酸、硫代硫酸鈉、亞硫酸鈉、硬脂酸鹽和明膠等常規輔料。也包括對本發明藥效沒有 明顯影響的抗氧化劑、氨基酸、維生素、碳水化合物或植物提取物。所述藥用制劑為口服制 劑，包括膠囊劑、軟膠囊劑、顆粒劑、口服液、片劑或滴丸等；或者為注射劑，包括凍干粉針劑 和注射液等；或者為局部給藥制劑，包括霜劑、軟膏劑、貼劑、噴霧劑、皮下植入劑等。制劑的 后期制備工藝均屬制藥領域的常規技術，本發明對此不作限定。糖尿病胰島細胞受損，胰島素分泌不足而引起的代謝紊亂的一種內分泌疾病，一 般認為降血糖的作用機制主要涉及兩個方面一是促進胰島素的分泌和釋放或是胰高糖素 的分泌；二是影響胰島素受體后代謝的某些環節，主要是抑制肝臟的糖異生作用，其目的均 是降低并控制血糖水平。研究結果顯示柞樹葉對健康小鼠血糖無明顯影響，提示其沒有明 顯的刺激胰島素釋放作用或胰島素樣作用；柞樹葉中提取分離的有效組分在低劑量條件 下，對四氧嘧啶所致的血糖升高有明顯的降低作用，這表明其均有修復受損傷的B細胞的 功能和降低機體對胰島素的拮抗性。糖尿病中醫辨證屬于“消渴”病范疇。究其病機主要在于陰津虧損，燥熱偏甚，而 以陰虛為本，燥熱為標。燥熱內生，津干液枯，氣血澀滯，久而為瘀。故治療糖尿病當以養陰 清熱、活血化淤為主。柞樹葉性平，味微苦、澀，具清熱止痢，止咳，解毒消腫。柞樹葉中提取 分離的有效組分，其治療消渴能兼顧標本，切中消渴病病機。本發明研究發現，柞樹葉可與 人參、黃連、肉桂、黃芪、山萸肉、當歸等中藥，組成具有降糖作用的復方，降糖效果明顯。由于采用了中藥現代化技術中的樹脂技術，制備工藝簡單，成本低，適合工業化生 產。
具體實施例方式本發明人通過以下實施例詳細說明本發明技術方案的實施，但不應以此限定本發 明的實施范圍。實施例1 柞樹葉有效組分的制備方法稱取5kg藥材，用10倍藥材量水提取藥材，回流提取三次，每次1小時，合并三 次提取液，抽濾提取液，濃縮至干，得210g樣品，即得。樣品溶解后，進行α-萘酚試驗 (Molish)反應取溶液lml，加10% α -萘酚醇液1滴，搖勻，沿管壁緩慢加入&H2S0410滴， 不振搖，觀察兩液介面間有出現紫紅色杯，說明存在糖、苷類成分；利用TLC(薄層色譜)檢 識(展開劑n-BuOH HAc H20 = 4 1 5，V/V)，在 254nm 下有暗斑，FeCl3 溶液噴灑， 顯深藍色斑點；實施例2 柞樹葉有效組分的制備方法稱取5kg藥材，用10倍藥材量95%乙醇提取藥材，回流提取三次，每次1小時，合 并三次提取液，抽濾提取液，濃縮至干，得143g樣品，即得。樣品溶解后，進行α-萘酚試驗 (Molish)反應取溶液1ml，加10% α -萘酚醇液1滴，搖勻，沿管壁緩慢加入濃H2SO4IO滴，不振搖，觀察兩液介面間有出現紫紅色杯，說明存在糖、苷類成分；利用TLC(薄層色譜)檢 識(展開劑CHCl3 MeOH = 9 1，V/V))，在254nm下有暗斑，香蘭醛-硫酸溶液噴灑，后 加熱，有深紅色斑點出現。實施例3 柞樹葉有效組分的制備方法稱取5kg藥材，用10倍藥材量水提取藥材，回流提取三次，每次1小時，合并三次 提取液，抽濾提取液，上樣于5kg處理好的DlOl大孔樹脂，流速15ml/min，上樣完成后，水 洗脫至洗脫液近無色，共用水50升，20%乙醇洗脫至洗脫液近無色，洗脫了 40升，50%乙醇 洗脫至洗脫液近無色，洗脫了 40升，80 %乙醇洗脫至洗脫液近無色，洗脫了 30升，最后用 95%乙醇洗脫30升。濃縮，干燥，收集樣品。各洗脫物濃縮后所得樣品重量分別為2. 60g、 157. 5g、22. 40g、4. 60g和3. 7g。樣品溶解后，進行α -萘酚試驗(Molish)反應取溶液lml， 加10% α _萘酚醇液1滴，搖勻，沿管壁緩慢加入濃H2SO4IO滴，不振搖，觀察兩液介面間有 出現紫紅色杯，說明存在糖、苷類成分。實施例4 柞樹葉有效組分的制備方法稱取5kg藥材，用10倍藥材量水提取藥材，回流提取三次，每次1小時，合并三次 提取液，抽濾提取液，上樣于5kg處理好的AB-8大孔樹脂，流速15ml/min，上樣完成后，水洗 脫至洗脫液近無色，共用水50升，20%乙醇洗脫至洗脫液近無色，洗脫了 40升，50%乙醇洗 脫至洗脫液近無色，洗脫了 40升，80 %乙醇洗脫至洗脫液近無色，洗脫了 30升，最后用95 % 乙醇洗脫30升。濃縮干燥，收集樣品。各洗脫物濃縮后所得樣品重量分別為3. 20g、130. 0g、 26. 40g、8. 60g和5. 3g。樣品溶解后，進行α-萘酚試驗(Molish)反應取溶液lml，加10% α -萘酚醇液1滴，搖勻，沿管壁緩慢加入濃貼0410滴，不振搖，觀察兩液介面間有出現紫紅 色杯，說明存在糖、苷類成分；利用TLC(薄層色譜)檢識(展開劑CHCl3 MeOH = 9 1， V/V))，在254nm下有暗斑，香蘭醛-硫酸溶液噴灑，后加熱，有深紅色斑點出現。實施例5 柞樹葉聚酰胺層析分離的有效組分的制備方法稱取5kg藥材，用10倍藥材量水提取藥材，回流提取三次，每次1小時，合并三次 提取液，抽濾提取液，上樣于5kg處理好的DlOl大孔樹脂，流速15ml/min，上樣完成后，水洗 脫至洗脫液近無色，共用水50升，20%乙醇洗脫至洗脫液近無色，洗脫了 40升，50%乙醇洗 脫至洗脫液近無色，洗脫了 40升，80 %乙醇洗脫至洗脫液近無色，洗脫了 30升，最后用95 % 乙醇洗脫30升。濃縮，干燥，收集樣品，即得。取上述柞樹葉50%乙醇洗脫物組分，用15-60 目聚酰胺進行層析，用含水乙醇梯度洗脫，分別收集其30%乙醇濃度的洗脫部位，得到有效 組分6. 4g ；利用TLC (薄層色譜)檢識(展開劑:n-BuOH HAc H2O = 4 1 5，V/V)， 在254nm下有暗斑，FeCl3溶液噴灑，顯深藍色斑點。實施例6 柞樹葉聚酰胺層析分離的有效組分的制備方法稱取5kg藥材，用10倍藥材量水提取藥材，回流提取三次，每次1小時，合并三次 提取液，抽濾提取液，上樣于5kg處理好的DlOl大孔樹脂，流速15ml/min，上樣完成后，水洗 脫至洗脫液近無色，共用水50升，20%乙醇洗脫至洗脫液近無色，洗脫了 40升，50%乙醇洗 脫至洗脫液近無色，洗脫了 40升，80 %乙醇洗脫至洗脫液近無色，洗脫了 30升，最后用95 % 乙醇洗脫30升。濃縮，干燥，收集樣品，即得。取上述柞樹葉50%乙醇洗脫物組分，用15-60 目聚酰胺進行層析，用含水乙醇梯度洗脫，分別收集其50%乙醇濃度的洗脫部位，得到有效 組分9. 6g ；利用TLC (薄層色譜)檢識(展開劑n-BuOH HAc H2O = 4 1 5，V/V)，
7在254nm下有暗斑，FeCl3溶液噴灑，顯深藍色斑點。實施例7 柞樹葉有效組分的膠囊劑制備取實施例5或實施例6方法制備的柞樹葉有效組分100g，60°C干燥，研磨粉碎，過 80目篩，加過80目篩的微晶纖維素100g，混合均勻，用70%乙醇適量制成軟材，過30目篩 制顆粒，烘干，使水分小于5%，過40目篩整粒，分裝于3號膠囊中。每粒膠囊含柞樹葉有效 組分0. Ig,用鋁塑復合包裝，即得。口服給藥，每日3次，每次1粒。實施例8 柞樹葉有效組分的片劑制備取實施例5或實施例6方法制備的柞樹葉有效組分60g，加入微晶纖維素60g，以 2%的羥丙甲纖維素作為粘合劑進行制軟材，制粒干燥整粒，加入4%的崩解劑羧甲基淀粉 鈉和潤滑劑0. 5 %硬脂酸鎂與細粉混合均勻，干粒加入硬脂酸鎂，整粒，混勻，壓片，即得。每 片含柞樹葉有效組分0. lg。口服給藥，每日3次，每次1片。實施例9 柞樹葉水、醇提取物對四氧嘧啶致小鼠高血糖的影響取健康ICR小鼠88只，其中正常對照組10只，尾靜脈注射生理鹽水0. lml/10g,其 余小鼠尾靜脈注射四氧嘧啶生理鹽水溶液(45mg/kg)(造模劑量根據預試驗結果定的)，造 模72h后測空腹血糖，血糖值大于11. lmmol/L的小鼠為糖尿病動物模型，按血糖值隨機分 為模型對照組、陽性對照組(降糖靈150mg/kg)、柞樹葉水提取物(實施例1所得樣品)小 (IOg生藥/kg)、大(20g生藥/kg)劑量組，柞樹葉醇提取物(實施例2所得樣品)小(IOg 生藥/kg)、大(20g生藥/kg)劑量組共6組。各給藥組均按0.2ml/10g體積灌胃給藥，每 天1次，連續14天，正常對照組和模型對照組給予等體積生理鹽水。給藥第7天眶后取血 測空腹血糖，第14天摘眼球取血，測空腹血糖值。實驗數據用表示，組間用t檢驗進行 統計學處理。表1柞樹葉水、醇提取物對四氧嘧啶致小鼠高血糖的影響，藥后7天和14天小鼠
血糖結果(x±s)

注與模型對照組比較*P < 0. 05**P < 0. 01***P < 0. 001與正常對照組比較ΔΔΔΡ
< 0. 001由表1血糖值結果可知，模型組與正常組比較，血糖值明顯升高，經統計學處理差異有極顯著性(P <0.001)；陽性組與模型組比較血糖值明顯降低，經統計學處理差異有 極顯著性(P <0.001)；柞樹葉水提取物大劑量組與模型組比較，給藥14天血糖值明顯降 低，經統計學處理差異有顯著性(P < 0.05)，降糖率為20.49% ；柞樹葉醇提取物小、大劑 量組與模型組比較，給藥14天血糖值明顯降低，經統計學處理差異有顯著性(P < 0. 05-P < 0.01)，降糖率分別為12. 13%和22. 49%。實施例10 柞樹葉大孔吸附樹脂洗脫物對四氧嘧啶致小鼠高血糖的影響取健康ICR小鼠87只，其中正常對照組10只，尾靜脈注射生理鹽水0. lml/10g, 其余小鼠尾靜脈注射四氧嘧啶生理鹽水溶液(45mg/kg)(造模劑量根據預試驗結果定的)， 造模72h后測空腹血糖，血糖值大于11. lmmol/L的小鼠為糖尿病動物模型，按血糖值隨機 分為模型對照組、陽性對照組(降糖靈150mg/kg)、柞樹葉(實施例3所得樣品)水洗脫 物組(200mg/kg)、20%乙醇洗脫物組(200mg/kg)、50%乙醇洗脫物組(200mg/kg)、80 %乙 醇洗脫物組(200mg/kg)、95%乙醇洗脫物組(200mg/kg)共7組。各給藥組均按0. 2ml/10g 體積灌胃給藥，每天1次，連續14天，正常對照組和模型對照組給予等體積生理鹽水。給藥 第7天眶后取血測空腹血糖，第14天摘眼球取血，測空腹血糖值。實驗數據用表示，組 間用t檢驗進行統計學處理。表2柞樹葉大孔吸附樹脂洗脫物藥后7天和14天對四氧嘧啶誘發高血糖小鼠血
糖的影響( 士S)
動物數(只) 劑量 血糖(mmol/L) 降糖率(％) 組別--- 注與模型對照組比較，***P < 0. 001廣P <0.01,*P< 0. 05 ；與空白對照組比較， ΔΔΔΡ < 0. 001.由表2血糖值結果可知，藥前血糖值各造模組與空白對照組比較，小鼠血 糖值明顯升高，差異具有顯著性(P < 0. 001)，符合隨機分組要求。給藥7天血糖值模型對 照組與空白對照組比較，小鼠的血糖值明顯升高，差異有顯著性(P <0.001)；降糖靈組與 模型對照組比較，小鼠的血糖值明顯降低，差異有顯著性(P < 0. 001)，降糖率為56. 2%;柞樹葉50%乙醇洗脫物組、95%乙醇洗脫物組與模型對照組比較，小鼠的血糖值有所降低，出 現顯著性差異(P < 0. 05)，降糖率分別為21. 6%,23. 6% ；柞樹葉水洗脫物組、柞樹葉20% 乙醇洗脫物組、柞樹葉80%乙醇洗脫物組與模型對照組比較，小鼠的血糖值有所降低，但均 未出現顯著性差異(P > 0. 05)，降糖率分別為9. 0%、3. 4%、9. 9%。給藥14天血糖值模型 對照組與空白對照組比較，小鼠的血糖值明顯升高，差異有顯著性(P<0.001)；降糖靈組 與模型對照組比較，小鼠的血糖值明顯降低，差異有顯著性(P < 0. 001)，降糖率為50. 6%； 柞樹葉50%乙醇洗脫物組、95%乙醇洗脫物組與模型對照組比較，小鼠的血糖值有所降低， 出現顯著性差異(P < 0. 05)，降糖率分別為25. 3%,24.9% ；；柞樹葉水洗脫物組、柞樹葉 20%乙醇洗脫物組、柞樹葉80%乙醇洗脫物組與模型對照組比較，小鼠的血糖值有所降低， 但均未出現顯著性差異(P > 0. 05)，降糖率分別為5.4%、11.4%、11.7%。實施例11 柞樹葉聚酰胺柱洗脫物對四氧嘧啶致小鼠高血糖的影響取健康ICR小鼠54只，其中正常對照組10只，尾靜脈注射生理鹽水0. lml/10g, 其余小鼠尾靜脈注射四氧嘧啶生理鹽水溶液(45mg/kg)(造模劑量根據預試驗結果定的)， 造模72h后測空腹血糖，血糖值大于11. lmmol/L的小鼠為糖尿病動物模型，按血糖值隨機 分為模型對照組、陽性對照組(降糖靈150mg/kg)、柞樹葉(實施例5和6所得樣品)30% 乙醇洗脫物組(200mg/kg)和50%乙醇醇洗脫物組(200mg/kg)共4組。各給藥組均按 0. 2ml/10g體積灌胃給藥，每天1次，連續14天，正常對照組和模型對照組給予等體積生理 鹽水。給藥第7天眶后取血測空腹血糖，第14天摘眼球取血，測空腹血糖值。實驗數據用
表示，組間用t檢驗進行統計學處理。表3柞樹葉聚酰胺柱洗脫物藥后7天和14天對四氧嘧啶誘發高血糖小鼠血糖的 影響(x±S ) 注與模型對照組比較，***Ρ < 0. 001廣P < 0. 01，*Ρ < 0. 05 ；與空白對照組比較， ΔΔΔΡ < 0. 001.由表2血糖值結果可知，藥前血糖值模型對照組與空白對照組比較，小鼠 血糖值明顯升高，差異具有顯著性(P < 0.001)，各給藥組與模型對照組比較，小鼠血糖值 沒有明顯變化，未出現統計學差異(P >0.05)，符合隨機分組要求。給藥7天血糖值模型 對照組與空白對照組比較，小鼠的血糖值明顯升高，差異有顯著性(Ρ<0.001)；降糖靈組 與模型對照組比較，小鼠的血糖值明顯降低，差異有顯著性(P < 0. 001)，降糖率為54. 8%； 柞樹葉30%乙醇洗脫物組、50%乙醇洗脫物組與模型對照組比較，小鼠的血糖值明顯降低，出現顯著性差異(？<0.01)，降糖率分別為23.1%、25.8%。給藥14天血糖值模型對照 組與空白對照組比較，小鼠的血糖值明顯升高，差異有顯著性(P <0.001)；降糖靈組與模 型對照組比較，小鼠的血糖值明顯降低，差異有顯著性(P < 0. 001)，降糖率為56. 5%;柞樹 葉30%乙醇洗脫物組、50%乙醇洗脫物組與模型對照組比較，小鼠的血糖值明顯降低，出現 顯著性差異(P < 0. Ol-P < 0.001)，降糖率分別為25. 2%,27. 1%0實施例12 含柞樹葉的降糖復方具體處方組成如下柞樹葉20g|、人參15g、黃連5g以上各味藥按比例混合后，加入500_600ml水，文火煎煮30min，過濾藥渣，煎煮兩 次。早晚各一次，口服。實施例13 含柞樹葉的降糖復方具體處方組成如下柞樹葉30g|、肉桂5g、生地10g、知母10g、紅花5g以上各味藥按比例混合后，加入SOO-IOOOml水，文火煎煮30min，過濾藥渣，煎煮 兩次。早晚各一次，口服。實施例14 含柞樹葉的降糖復方具體處方組成如下柞樹葉20g|、人參15g、黃連5g、山萸肉IOg以上各味藥按比例混合后，加入500-600ml水，文火煎煮30min，過濾藥渣，煎煮兩 次。早晚各一次，口服。實施例15 含柞樹葉的降糖復方具體處方組成如下柞樹葉30g|、黃芪20g、葛根10、山萸肉10、黃連5g以上各味藥按比例混合后，加入600-800ml水，文火煎煮30min，過濾藥渣，煎煮兩 次。早晚各一次，口服。實施例16 含柞樹葉的降糖復方具體處方組成如下柞樹葉30g|、黃芪20g、淫羊藿10g、當歸10g、黃連5g以上各味藥按比例混合后，加入SOO-IOOOml水，文火煎煮30min，過濾藥渣，煎煮
兩次。早晚各一次，口服。
權利要求
一種降血糖的藥物組合物，其特征在于包括治療有效量的有效組分，所述有效組分選自下述提取物柞樹葉的水和/或低級醇提取物。
2.權利要求1的藥物組合物，其特征在于低級醇選自碳數為C卜C5的直鏈或支鏈低級 醇；其中水和低級醇是V/V混合。
3.權利要求2的藥物組合物，其中低級醇選自甲醇、乙醇、丙醇或正丁醇中的任意一種 或它們的混合物。
4.一種降血糖的藥物組合物的制備方法，其特征在于將治療有效量的有效組分和藥學 上可接受載體混合，所述有效組分用如下方法制得1)取柞樹葉藥材，用水和/或低級醇提取，得到提取液，將所得提取液濃縮，干燥，即為 有效組分；或者，2)將步驟1)提取液直接上大孔吸附樹脂柱，或者將步驟1)提取液先濃縮再分散后， 上大孔吸附樹脂柱；依次用0-95%低級醇對大孔吸附樹脂柱進行梯度洗脫，分別收集各洗 脫物；將其中45-55%低級醇洗脫物和/或85-99%低級醇洗脫物，濃縮干燥后即為有效組 分；或者，3)取步驟2)中45-55%低級醇洗脫物和/或85-99%低級醇洗脫物濃縮后，用15-60 目聚酰胺進行層析，用0-95%低級醇進行梯度洗脫，收集其30%和/或50%低級醇濃度的 洗脫物，濃縮干燥得到有效組分。
5.權利要求4的制備方法，其中，提取或者對大孔吸附樹脂柱或聚酰胺層析進行梯度洗脫時，所述低級醇是碳數為C1-C5 的直鏈或支鏈低級醇；其中水和低級醇是V/V混合；步驟1)提取中低級醇濃度為0-95% ；用回流、浸漬、滲漉或水煎方法提取；步驟2)中所述大孔樹脂為聚苯乙烯型、聚丙烯酸酯型或聚甲基丙烯酸酯型中的任意 一種或幾種為骨架材料的樹脂；步驟2)中大孔吸附樹脂柱梯度洗脫是先用濃度為低于5% 的低級醇洗脫除去雜質，再用濃度為X的低級醇洗脫，其中X ( 95% ；收集50%低級 醇洗脫物和/或95%低級醇洗脫物，濃縮；步驟3)中聚酰胺層析梯度洗脫是先用濃度為低于5%的低級醇洗脫除去雜質，再用濃 度為X的低級醇洗脫，其中X < 95%;收集其30%和/或50%低級醇濃度的洗脫物， 濃縮。
6.權利要求4的制備方法，其中，提取或者對大孔吸附樹脂柱或聚酰胺層析進行梯度 洗脫時，所用低級醇選自甲醇、乙醇、丙醇或正丁醇中的任意一種或它們的混合物；所述大 孔樹脂選自AB-8、D101型樹脂；濃縮干燥選用減壓、真空、冷凍或噴霧方法中的任意一種方 法進行。
7.權利要求4的制備方法，其中，提取所用溶劑是0-95%乙醇；大孔吸附樹脂柱的梯度 洗脫是先用0-40%乙醇除去雜質，再用50-95%乙醇洗脫，收集50%低級醇洗脫物和/或 95%低級醇洗脫物，濃縮得有效組分。
8.權利要求7制備方法，大孔吸附樹脂柱的梯度洗脫是先用0-5%乙醇除去雜質，后用 10% -20%乙醇洗脫除去雜質；再用50% -95%乙醇洗脫，收集50%低級醇洗脫物和/或 95%低級醇洗脫物，濃縮得有效組分。
9.權利要求4的制備方法，所述藥學上可接受載體包括常規口服制劑輔料，或者包括常規口服制劑輔料和對本發明藥效沒有明顯影響的抗氧化劑、氨基酸、維生素、碳水化合物 或植物提取物。
10.權利要求1至9任一項中的柞樹葉有效組分在制備預防或治療高血糖疾病的藥物 或保健品中的應用。
11.權利要求10的應用，所述高血糖疾病包括糖尿病。
全文摘要
本發明涉及一種柞樹樹葉的提取物在制備防治高血糖疾病藥物中的應用。本發明提供了從該樹葉中分離得到提取物的制備方法，并通過藥理試驗證明，該提取物具有明顯的降低血糖作用。本發明同時還提供該提取物用于制備防治糖尿病的藥物制劑。
文檔編號A61P3/10GK101890063SQ20091014331
公開日2010年11月24日 申請日期2009年5月20日 優先權日2009年5月20日
發明者周亞偉 申請人:周亞偉