專利名稱：：六味痛風散配方的制作方法
技術領域：
：本發明涉及一種六味痛風散配方，尤其是涉及六味痛風散治療急性痛風性關節炎的配方。
背景技術：
：痛風病是一個代謝性疾病，其發病原因比較復雜，主要是尿酸生成過多或腎臟排泄尿酸減少引起血中尿酸升高并在關節腔內沉積形成尿酸結晶，引起關節紅腫疼痛而發病。傳統的治療方法主要是口服秋水仙堿或別嘌呤，從而達到強制性抑制尿酸升高和大量排出尿酸，很難從根本上治療痛風，且長期服用此類西藥對身體造成的傷害遠比治療效果多，常見的有胃潰瘍，胃出血、胃穿孔，骨髓造血系統的抑制，引發出血癥(血小板減少癥)貧血(紅細胞減少)，肝功能損害，腎功能損害，特別是對腎功能損害可加重痛風后期發作程度，形成藥物性腎功能損害，痛風病發作加重，更嚴重的腎損，導致腎功能衰竭，尿毒癥死亡的惡性發展。
發明內容本發明的目的是提供一種六味痛風散配方，它具有抗炎消腫及鎮痛作用，可以減輕關節腫脹、疼痛，改變關節周圍組織病理變化，抑制炎癥細胞因子(匪P-3、IFN-Y)，又可以降尿酸、抑制黃嘌呤氧化酶的活性，既可以應用于治療痛風性關節炎的急性發作，又可用于痛風間歇期及高尿酸血癥的降尿酸治療。為了解決
背景技術：
所存在的問題，本發明是采用以下技術方案它是由虎杖30g、秦皮12g、紅藤30g、土茯苓30g、郁金15g、大黃6g組成；各藥混勻加水煎成含生藥2.2g/ml的溶液經高溫消毒后封瓶，配制藥液置4t:冰箱中備用。陽性對照藥秋水仙堿0.5mg/片，用蒸餾水按3mg/100ml配制成懸濁液；醋氯芬酸50mg/片，用蒸餾水按95mg/100ml配制成懸濁液。配制液置4。C冰箱中備用。本發明具有以下有益效果具有抗炎消腫及鎮痛作用，可以減輕關節腫脹、疼痛，改變關節周圍組織病理變化，抑制炎癥細胞因子(匪P-3、IFN-Y)，又可以降尿酸、抑制黃嘌呤氧化酶的活性，既可以應用于治療痛風性關節炎的急性發作，又可用于痛風間歇期及高尿酸血癥的降尿酸治療。具體實施例方式本具體實施方式采用以下技術方案它是由虎杖30g、秦皮12g、紅藤30g、土茯苓30g、郁金15g、大黃6g組成；各藥混勻加水煎成含生藥2.2g/ml的溶液經高溫消毒后封瓶，配制藥液置4t:冰箱中備用。陽性對照藥秋水仙堿0.5mg/片，用蒸餾水按3mg/100ml配制成懸濁液；醋氯芬酸50mg/片，用蒸餾水按95mg/100ml配制成懸濁液。配制液置4。C冰箱中備用。本具體實施方式具有抗炎消腫及鎮痛作用，可以減輕關節腫脹、疼痛，改變關節周圍組織病理變化，抑制炎癥細胞因子(匪P-3、IFN-Y)，又可以降尿酸、抑制黃嘌呤氧化酶的活性，既可以應用于治療痛風性關節炎的急性發作，又可用于痛風間歇期及高尿酸血癥的降尿酸治療。實施例實驗動物分組將50只Wistar大鼠飼養1周后，按組間均衡一致原則，隨機分為5組。即正常對照組10只(A組)、模型組10只(B組)、中藥清肝化濁飲(六味痛風散)組10只(C組)、西藥秋水仙堿組10只(D組)、西藥醋氯芬酸組10只(E組)。實驗中，均開架分籠飼養，每籠5只，自由攝食，自然光照，并定期清潔、消毒。模型制作及給藥方法給藥方法根據人用藥量與實驗動物用藥量的體表面積法換算公式，計算出每只大鼠每次灌清肝化濁飲11g/kg，秋水仙堿0.3mg/kg，醋氯芬酸9.5mg/kg，每組每只大鼠每日給藥1次，連續6天，空白組、模型組給等量蒸餾水。模型制作第4天在各鼠右踝關節處，按關節周徑法測定各鼠踝關節周徑2次，取平均值作為各鼠致炎前正常關節周徑；灌胃給藥后30min，立即以碘酒消毒局部，用6號滅菌注射針在大鼠右側踝關節背側，從45。方向插入至脛跗關節腔內，注射O.2mlMSU混懸液，正常組注入生理鹽水0.2ml，每個動物僅注射1次，標本采集末次給藥后24h，斷頭處死大鼠。每組取12只大鼠右踝關節組織，用10%福爾馬林液灌注固定，立即送山東中醫藥大學附屬醫院病理科備檢。每組8只取受試關節，切開受試關節囊，用lml生理鹽水灌洗關節腔，收集關節液，然后以銳利刀片切取少量關節囊、滑膜等周圍軟組織稱重，加入Ph7.2，0.2mo1L—屮BS緩沖液稀釋，以不銹鋼勻漿器勻漿，一并離心(4000r/minX5min)，取上清液，分裝于EPPENDROF管中，于-8(TC冰箱保存待檢測。檢測項目及方法一般情況主要觀察大鼠體毛、活動、飲食、排便、死亡等情況。步態變化造模后24h觀察各組各鼠的步態變化，進行統計學統計，按Coderre等介紹的步態分級標準[6'7]:0級正常行走；1級輕微跛行，受試下肢略有彎曲；11級中度跛行，受試下肢剛觸及地面；III級重度跛行，受試下肢離開地面，3足著地行走。大鼠關節周徑的變化實驗第4天于造模前，用軟皮尺測量各鼠右踝關節最大周徑，在處死動物前(即造模后72h)，再用軟皮尺在前次相同部位測量關節周徑。整個實驗過程均由同一個人操作。比較各組動物造模前后關節周徑的增大程度，進行統計學分析。受試關節以及周圍組織病理學觀察造模后72h，取下受試大鼠右踝關節及其周圍軟組織后，至10X福爾馬林液中固定48h，脫鈣液(EDTA)脫鈣，逐級乙醇脫水，二甲苯透明、浸蠟，石蠟包埋，常規切片4um，進行蘇木精-伊紅(HE)染色，光鏡觀察受試關節及其周圍軟組織、滑膜上皮、炎癥細胞浸潤等情況。測定動物模型受試關節周圍組織炎癥細胞因子含量基質金屬蛋白酶-3(匪P-》含量的測定，操作步驟(l)取出酶標板，依照次序對應分別加入50ul的標準品于空白微孔中；(2)分別標記樣品編號，加入50ul樣品于空白微孔中；(3)在樣品孔中加入10ul的生物標記液；(4)在標準品孔和樣品孔中加入50ul的酶標記溶液；(5)36士2t:孵育反應60分鐘;(6)洗板機清洗5次，每次靜置10-20秒;(7)每孔加入底物A、B液各50ul;(8)36±2°C避光孵育反應15分鐘；每孔加入50ul終止液，終止反應。結果判斷(l)儀器值于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的0D值。(2)以OD值為縱坐標，以標準品的濃度為橫坐標，繪制曲線圖。(3)根據樣品的OD值查找對應的濃度范圍。(4)敏感度0.01ng/ml。Y_干擾素(IFN-Y)含量的測定操作步驟(l)按IFNlELISA試劑盒的要求配制試劑標準品加入標準品/標本稀釋液(lb)lml至凍干標準品(la)中，待徹底溶解后，靜置15分鐘混勻(濃度為1000pg/ml)。標準曲線使用以下濃度1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、Opg/ml。生物素化抗體工作液以生物素化抗體稀釋液(2b)稀釋濃縮生物素化抗體(2a)(1:100)。酶結合物工作液以酶結合物稀釋液(3b)稀釋濃縮酶結合物(3a)(1:100)。(2)從已平衡至室溫的密封袋中取出所需板條。(3)除空白孔外，分別將標本或不同濃度標準品(100ul/孔)加入相應孔中，用封板膠紙封住反應孔，37t:孵箱孵育90分鐘。(4)除空白孔外，加入生物素化抗體工作液(100ul/孔)。用封板膠紙封住反應孔，37t:孵箱孵育60分鐘。(5)用自動洗板機，注入350ul的洗滌液，注入與吸出間隔1530秒，洗板4次。(6)除空白孔外，加入酶結合物工作液(100ul/孔)。用封板膠紙封住反應孔，37t:孵箱孵育60分鐘。(7)用自動洗板機，注入350ul的洗滌液，注入與吸出間隔1530秒，洗板4次。(8)加入顯色劑飾1/孔，避光37t:孵箱孵育1015分鐘。(9)加入終止液飾1/孔，混勻后即刻測量0045。值(5分鐘內)。抗炎因子白細胞介素-4(IL-4)含量的測定按IL-4ELISA試劑盒的要求配制，步驟同3.5.2。觀察各組動物模型鎮痛情況扭體鎮痛實驗清潔級全雌昆明種小鼠40只，體質量1822g，飼養環境溫度2425t:，濕度60%-70%。按抽簽法隨機分為空白對照組、清肝化濁飲(清肝定痛散)組、秋水仙堿組及醋氯芬酸組，每組各IO只。采用醋酸扭體法。空白對照組生理鹽水灌胃，西藥秋水仙堿、醋氯芬酸組，六味痛風飲組灌胃，均為40ml/kg。灌胃lh后，每組動物腹腔注射6g/L醋酸溶液0.2ml/只，觀察注射后20min內各鼠的扭體反應次數，作統計學分析。實驗結果與分析大鼠一般情況造模前3天，模型組、清肝化濁飲(清肝定痛散)組大鼠皮毛光澤色白，精神佳，活潑好動，飲食正常，體重增長正常；醋氯芬酸組及秋水仙堿組大鼠皮毛干枯發黃，倦怠懶動，進食量少，秋水仙堿組有4只出現便溏，有5只出現體重下降，其余5只體重增長緩慢。并于給藥后第4天清晨發現死亡1只。造模后l-6h觀察，模型組大鼠局部關節膚溫增高，活動明顯減少，攝食及飲水次數也明顯減少；六味痛風飲組大鼠活動、攝食、飲水與平素無明顯差異；秋水仙堿組及醋氯芬酸組與造模前相比無明顯變化。步態變化藥物對步態變化的影響見表1表1藥物對步態變化的影響(n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>通過Ridit分析，模型組與清肝化濁飲組、秋水仙堿組及醋氯芬酸組比較均Ap<0.05，差異有顯著性意義。各治療組之間相比較均P>0.05，沒有統計學意義。表1顯示，清肝化濁飲組、秋水仙堿組及醋氯芬酸組與模型組比較，均能明顯改善模型大鼠的步態(均P<0.05)，各治療組之間無明顯差異(P>0.05)。5.3大鼠關節周徑的變化造模前后各組受試關節周徑變化見表2表2造模前后各組受試關節周徑變化(7±S，n=8)組別n造模前(cm)造模后(cm)2.85±0.26空白組82.81±0.18<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注各組動物造模前后關節周徑均有不同程度的增加，其中，模型組增大最為明顯，均為+P<0.05;造模后，模型組與六味痛風飲組、秋水仙堿組、醋氯芬酸組組間比較AP<0.05，空白組與模型組造模后組間比較AAP<0.01。由表2可見，模型組、清肝化濁飲組、秋水仙堿組、醋氯芬酸組造模前后比較均P<0.05，模型組的關節周徑增加量高于其他治療組。六味痛風飲組、秋水仙堿組、醋氯芬酸組與模型組比較均P<0.05，而清肝化濁飲組、秋水仙堿組、醋氯芬酸組各組之間兩兩比較均P>0.05，說明各治療組之間對抑制關節周徑增大差異無顯著性意義。由此可知，中藥清肝化濁飲均能抑制關節周徑增大，減輕關節腫脹，并與西藥具有同樣的效果。受試關節及其周圍組織的組織病理改變正常組踝關節及其周圍組織結構正常清晰，無任何組織病理學改變。痛風模型組局部解剖時發現有尿酸鹽結晶沉著于踝關節腔內。光鏡下可見明顯的關節炎病理改變，脛骨跗骨周圍有明顯的異物肉芽腫形成，表現為異物肉芽腫組織中出現較多的異物多核巨細胞，新生小血管形成及較多的成纖維細胞。中藥清肝化濁飲組局部解剖時有尿酸鹽結晶沉著于踝關節腔內。光鏡下可見關節炎病理改變，異物多核巨細胞較少見到、有新生小血管形成及較少成纖維細胞；局部軟骨組織亦有破壞。但總體結構上，明顯好于痛風模型組，肉芽組織增生明顯減少，有的幾乎已恢復正常。西藥秋水仙堿組局部解剖時尿酸鹽結晶沉著于踝關節腔內。光鏡下可見關節炎病理改變，異物多核巨細胞較少見到、單核細胞、淋巴細胞、漿細胞明顯減少、有新生小血管形成及較少成纖維細胞。但總體結構上，明顯好于痛風模型組，有的幾乎已恢復正常。西藥醋氯芬酸組局部解剖時尿酸鹽結晶沉著于踝關節腔內。光鏡下可見關節炎病理改變明顯減輕，異物多核巨細胞較少見到、單核細胞、淋巴細胞、漿細胞明顯減少、有新生小血管形成及較少成纖維細胞。總體結構，明顯好于痛風模型組，有的幾乎已恢復正常。動物模型受試關節周圍組織細胞因子含量變化各組基質金屬蛋白酶-3(MMP_3)含量的變化見表3表3各組基質金屬蛋白酶_3(MMP_3)比較(7±S,n=8)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注模型組與空白組、清肝化濁飲組、秋水仙堿組、醋氯芬酸組組間比較Ap<0.05;清肝化濁飲組、秋水仙堿組、醋氯芬酸組之間兩兩比較均A'^P>0.05。由表3可見，模型組受試關節周圍軟組織匪P-3增高，與空白組比較有差異(P<0.05)，說明急性痛風性關節炎模型關節周圍組織有匪P-3增高。清肝化濁飲組、秋水仙堿組、醋氯芬酸組與模型組比較，均有差異(P<0.05)，模型組的匪P-3明顯高于各中西藥治療組，說明清肝化濁飲組、秋水仙堿組、醋氯芬酸組均能抑制匪P-3表達。而清肝化濁飲組、秋水仙堿組、醋氯芬酸組之間兩兩比較均P>0.05，說明各治療組之間對匪P-3抑制差異無顯著性意義。結果顯示，中藥清肝化濁飲組、秋水仙堿組、醋氯芬酸組可以減少炎性關節內MMP-3含量。各組y-干擾素(IFN-y)含量的變化見表4表4各組Y-干擾素(IFN-Y)比較(I±s，n=8)組別n均值士標準差空白組8179.64±210.49<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>注模型組與空白組、清肝化濁飲組、秋水仙堿組、醋氯芬酸組組間比較均AP<0.05;六味痛風飲組、秋水仙堿組、醋氯芬酸組之間兩兩比較均A^P>0.05。由表4可見，模型組受試關節周圍組織有IFN-y增高，與空白組比較有差異(P<0.05)，說明急性痛風性關節炎模型關節內IFN-y表達。清肝化濁飲組、秋水仙堿組、醋氯芬酸組與模型組比較，均有差異(P〈0.05)，模型組的IFN-y明顯高于各中西藥治療組，說明清肝化濁飲組、秋水仙堿組、醋氯芬酸組均能抑制IFN-y表達。而清肝化濁飲組、秋水仙堿組、醋氯芬酸組之間兩兩比較均有P>0.05，說明各治療組之間對IFN-y抑制無顯著性差異。結果顯示，中藥六味痛風飲可以減少炎性關節內IFN-y含量，并與西藥具有同樣的效果。<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>注模型組與空白組、清肝化濁飲組、秋水仙堿組、醋氯芬酸組組間比較均P>0.05。由表5可見，模型組與空白組比較(PX).05)，說明本實驗中急性痛風性關節炎模型滑膜炎癥中IL-4含量變化不明顯；清肝化濁飲組、秋水仙堿組、醋氯芬酸組受試關節周圍組織中IL-4含量雖比模型組升高，但與模型組組間比較無統計學意義(均P>0.05);表明本實驗清肝化濁飲抑制痛風性關節炎的關節腫脹，可能與IL-4的表達無關。各組動物模型的鎮痛作用見表6表6各組動物鎮痛實驗比較(Z±S，n=8)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注清肝化濁飲組、秋水仙堿組、醋氯芬酸組與模型組比較均Ap<0.Ol，各用藥組之間相比均P>0.05。由表6可見，各用藥組與模型組比較，差異均有非常顯著性意義(P<0.01)，提示各用藥組對醋酸引起的小鼠腹部疼痛均有緩解作用。各用藥組之間相比，沒有統計學意義(P>0.05)。由此可見，中藥清肝化濁飲與西藥秋水仙堿及醋氯芬酸有同樣鎮痛效果。權利要求六味痛風散配方，其特征在于它是由虎杖30g、秦皮12g、紅藤30g、土茯苓30g、郁金15g、大黃6g組成；各藥混勻加水煎成含生藥2.2g/ml的溶液經高溫消毒后封瓶，配制藥液置4℃冰箱中備用；陽性對照藥秋水仙堿0.5mg/片，用蒸餾水按3mg/100ml配制成懸濁液；醋氯芬酸50mg/片，用蒸餾水按95mg/100ml配制成懸濁液。配制液置4℃冰箱中備用。全文摘要六味痛風散配方，它涉及六味痛風散治療急性痛風性關節炎的配方。它是由虎杖30g、秦皮12g、紅藤30g、土茯苓30g、郁金15g、大黃6g組成；各藥混勻加水煎成含生藥2.2g/ml的溶液經高溫消毒后封瓶，配制藥液置4℃冰箱中備用；具有抗炎消腫及鎮痛作用，可以減輕關節腫脹、疼痛，改變關節周圍組織病理變化，抑制炎癥細胞因子(MMP-3、IFN-γ)，又可以降尿酸、抑制黃嘌呤氧化酶的活性，既可以應用于治療痛風性關節炎的急性發作，又可用于痛風間歇期及高尿酸血癥的降尿酸治療。文檔編號A61P19/06GK101716312SQ20091022358公開日2010年6月2日申請日期2009年11月24日優先權日2009年11月24日發明者張茂全,張蓉,朱維平,許寧,趙云昇申請人:青島市第五人民醫院