專利名稱：冬凌草總萜提取物高度分散制劑的制作方法
技術領域：
本發明涉及生物醫藥領域，特別涉及冬凌草總萜提取物高度分散制劑。
背景技術：
冬凌草系唇形科香茶菜屬植物，廣泛分布于黃河流域及其以南廣大地區。冬凌草 中的主要成分為萜類化合物，其中含量較高的為二萜和三萜類。二萜中的主要有效成分為 冬凌草甲素和冬凌草乙素，三萜中的主要有效成分為齊墩果酸和熊果酸。藥理實驗證明冬 凌草甲、乙素具有較強的抗腫瘤活性，它們對體外培養的HeLa細胞、人體食管癌109細胞及 肝癌BEL-7402細胞有明顯的細胞毒作用，對多種移植性動物腫瘤如ECA、S180、P388、L1210 肝癌及ARS有明顯抗腫瘤作用。臨床上用于肝癌、食管癌及胰腺癌的治療，取得了一定療 效。齊墩果酸具有保肝、降酶、抗炎、升白細胞、增強機體免疫功能等方面的作用，是當前治 療肝炎的有效藥物之一，近年又證明有抗癌活性。1991年我國衛生部批準將冬凌草干燥葉 及地上部分作為中藥材，收入部頒中藥材標準。我國從二十世紀70年代起對冬凌草的化學 成分、藥理作用及臨床應用開始研究，并提取得到冬凌草總萜提取物。 冬凌草總萜提取物為類白色粉末，難溶于水，溶于乙醇等溶劑。如果采用冬凌草總 萜提取物乙醇溶液靜脈注射，大量乙醇對人體產生一定剌激，產生嚴重靜脈炎等副作用，影 響了患者適應性，有時會很難給藥。 藥物制劑的劑型有很多種，如常用的片劑、膠囊、微丸、混懸液等，但高度分散制劑 對于脂溶性藥物的給藥有特殊優勢。高度分散制劑包括脂質體、非離子表面活性劑泡囊、微 粒、納米粒、膠束、納米凝膠、固體分散制劑等。 脂質體(Liposomes)是一種由磷脂雙分子層構成的泡囊(Vesicles)，是一種可 以在水溶液中高度分散的傳遞系統，可以作為很多種藥物的載體。它的高度分散性使其在 體內具有耙向、緩釋等效果，口服具有淋巴趨向性，較易攜帶藥物穿越血腦屏障，容易通過 融合、內吞等途徑進入細胞內(basic DD肌d P即ahadjopoulos D丄iposomes revisited. Science, 1995， 267 :1275)。修飾后的磷脂組成的脂質體還可以有體內長循環、溫度靶向、 pH靶向、磁靶向、主動靶向等功能。脂質體的局部(眼、鼻、皮膚)給藥有生物相容性好、促 進藥物滲透的作用。脂質體還是生物化學和分子生物學研究領域中經常使用的一種轉染試 劑，現在還是基因治療的一禾中重要載體(Kikuchi H， et al. Genedelivery using liposome technology. J Controlled Rel，1999，62 :269)。 脂質體泡囊的磷脂雙分子層膜將內部包裹的水相和外部水相隔開，雙分子層內呈 疏水性。藥物根據其物理化學性質的不同分別包裹在內水相或膜中。 一般地，水溶性藥物 在內水相中；脂溶性藥物在膜層中。脂質體的制備是磷脂分子在水中自組裝的過程，內外水 相的體積比例不能很大。這些因素決定了大部分水溶性藥物的包裹率較低(<50%)，有 時還會很低(<5%)，并且包裹的藥物有滲漏到外水相的可能。如果有合適的脂溶性基團 (如脂肪鏈)，脂溶性藥物分子就可插入到磷脂雙分子層中，結合比較牢固，藥物分子不容 易脫掉，所以藥物的包裹率較高。因此為了增加某些水溶性藥物在脂質體中的包裹率，人們
3往往采用了制備成帶有長脂肪鏈的脂溶性前體藥物的方式(Gulati M， et al. Lipophilic drug derivatives in liposomes. Int J Pharm，1998，165 :129)。 非離子表面活性劑泡囊(Niosomes)是指某些非離子表面活性劑(如司盤60) 在一定條件下在水中自組裝成泡囊結構，類似脂質體。它同樣可以作為藥物載體，具有 類似月旨質體的一些體內夕卜特征(Uchegbu IF， Vyas SP. Non—ionic surfactant based vesicles (niosomes)in drug delivery. Int J Pharm，1998，172 :33-70)。
微粒(Microparticles) —般指粒徑在微米級的粒子，范圍可從1微米到1000微 米。由于其高度分散性，在體內可產生黏附，高的表面積也有助于藥物特別是脂溶性藥物 的溶出，也會g產生控釋效果(Hombreiro-Perez M， et al. Non_degradable microparticles conteining a hydrophilic and/or a lipophilic drug-preparation,characterization and drug release modeling. J Controlled Rel，2003，88 :413-428)。微球(Microspheres) 一般指藥物溶解或分散在基質中的微粒(Freiberg S，Zhu XX. Polymer microspheres for controlled drug release. Int JPharm， 2004， 282 :1-18 二 )。將固體藥物或液體藥物作 囊心物包裹而成藥庫型微小膠囊稱微囊(Microcapsules)(陸彬主編.藥物新劑型與新技 術.北京人民衛生出版社，1998)。 納米粒(Nanoparticles) —般指是納米級分散的固體粒子，由于其高度分散性， 它作為藥物載體有提高藥物生物利用度、增強靶向性等特點。固體脂質納米粒(SLN)采 用人體相容的脂質材料作為主要輔料形成納米粒，具有普通納米粒的特點和生物相容性 好的特點，近年來研究較多。納米囊(Nanocapsules)特指藥物包裹在成膜材料中形成的 纟內米粒子，同樣具有纟內米粒的體內夕卜特點。(Kreuter J. Nanoparticles—a historical perspective. Int JPharm，2007，331 :1-10) 膠束(Micelles)對藥物，特別是脂溶性藥物有很好的增溶作用，可用作藥物傳遞 系統(Rangel-Yagui C0，et al.Micellar solubilization of drugs. J PharmPharmaceut Sci，2005，8 :147-163)。近年來，聚合物膠束作為傳遞系統的作用越來越受到重視 (Torchilin VP.Micellar nanocarriers :Pharmaceuticalperspectives. Pharm Res， 2007,24 :1-16)。 納米凝膠(Nanogels)是近年來開始被研究的 一種納米傳遞系統，藥物包裹 在內部，并顯示出纟內米粒子的體內夕卜特點(Xu D—M， et al. Size—d印endentproperties of M_PEIs nanogels for gene delivery in cancer cells.Int J Pharm，2007，338 : 291-296)。 固體分散體指藥物以微粒、微晶或分子狀態等形式均勻分散在固態載體物質中的 體系。固體分散體能夠增加一些難溶性藥物的溶解度和釋放速度、提高口服生物利用度。
發明內容
本發明人出乎意料地發現將冬凌草總萜提取物制備成高度分散制劑后，具有突出 的優勢。由于高度分散制劑的特點，冬凌草總萜提取物可以充分發揮其治療特點，例如增強 生物利用度、緩控釋、靶向等，根據具體劑型和處方組成呈現不同的特點。因此本發明人設 計了本發明。 本發明中的冬凌草總萜提取物高度分散制劑，其粒子成高度分散狀態，一般地粒
4子直徑小于1000微米，優選的粒子直徑小于100微米，更優選的粒子直徑小于1微米，進一 步優選的是小于0. 5微米，更進一步優選的是小于0. 2微米。高度分散制劑一般以水性分 散液的形式存在并給藥，也可以經過適當處理如干燥過程獲得固態或半固態形式。高度分 散制劑的劑型選自脂質體、非離子表面活性劑泡囊、微粒、納米粒、膠束、納米凝膠、固體分 散體制劑，優選自脂質體、納米粒、固體分散體制劑。高度分散制劑根據其具體組成和給藥 途徑，在體內會表現出促吸收、靶向、緩釋或控釋等作用。 根據參考文獻，可以從冬凌草中提取得到冬凌草總萜提取物，主要是用95%純度 以上的乙醇提取，方法包括冷浸提取、滲漉提取、破碎提取、回流提取。 冬凌草總萜提取物脂質體制備方法可參考相關文獻和專業技術(如NewRRC ed. Liposome :a practical approach. Oxford :0xford University Press,1990 ; 鄧英 杰.脂質體技術.北京人民衛生出版社，2007)，包括薄膜分散法、反相蒸發法、注入法、冷
凍干燥法、凍融法等。 一般地，如果采用薄膜分散法制備脂質體，可以將冬凌草總萜提取物 與磷脂等膜材共同溶于有機溶劑，盛入燒瓶中，減壓旋轉蒸發，得到一層薄膜，然后加入水 或適當緩沖液，進行振蕩和超聲，直至形成均勻的混懸液。如果超聲時間延長，還可能得到 納米級分散系統。如果采用反相蒸發法制備脂質體，可以將冬凌草總萜提取物與磷脂等膜 材共同溶于有機溶劑，加入水或緩沖液，高速攪拌或超聲制備成，然后減壓旋轉蒸發，得到 凝膠態物質，然后加入水或適當緩沖液或不加，繼續減壓旋轉蒸發，直至形成均勻的脂質體 混懸液。脂質體混懸液還可以選擇適當處方并在適當條件下進行冷凍干燥或噴霧干燥，形 成固態，這樣可以保證制劑的穩定性，臨用前加入水溶液振搖即可得到脂質體混懸液。運用 相近的技術可以獲得冬凌草總萜提取物非離子表面活性劑泡囊。選擇合適的處方和工藝就 可以得到較理想的冬凌草總萜提取物脂質體和非離子表面活性劑泡囊。 冬凌草總萜提取物微粒包括微球和微囊。微球的制備方法可參考相關文獻和專 業技術。 一般地，可將藥物與聚合物共同溶于有機溶劑中，然后利用0/W乳化法制備得到 微球。還有很多其他制備微球的方法，在許多文獻中都可以找到(如Freiberg S， Zhu XX. Polymer microspheres for controlled drugrelease. Int J Pharm，2004，282 :1-18)， 包括單體聚合法、溶劑揮發法、噴霧干燥法。微囊的制備方法包括相分離法、液中干燥法、噴
霧干燥法等(如陸彬主編.藥物新劑型與新技術.北京人民衛生出版社，1998)。選擇合 適的處方和工藝就可以得到較理想的冬凌草總萜提取物微粒。 冬凌草總萜提取物納米粒制備方法有很多種，文獻也很多，根據納米粒的材料和 要求不同，可參考相關文獻和專業技術。 一般地，聚合物納米粒的制備方法包括聚合法、沉 淀法、溶劑揮發法、鹽析法；固體脂質納米粒(SLN)的制備方法包括高壓乳勻法、微乳法、溶 劑揮發法；無機納米粒的制備方法包括沉淀法。納米囊的方法一般地包括單體界面聚合法 和聚合物界面納米沉積法。冬凌草總萜提取物納米粒混懸液還可以選擇適當處方并在適當 條件下進行冷凍干燥或噴霧干燥，形成固體粉末狀，這樣可以保證制劑的穩定性，臨用前加 入水溶液振搖即可得到納米粒混懸液。選擇合適的處方和工藝就可以得到較理想的冬凌草 總萜提取物納米粒。 固體脂質納米粒作為冬凌草總萜提取物納米粒劑型的優選。 一般地，將冬凌草總 萜提取物與常溫下為固態的脂質，如磷脂、脂肪酸、甘油酯，共同加熱熔融，然后加入水或適 當緩沖液，在加熱情況下在高壓乳勻機上循環乳化多次，形成納米分散的乳滴，迅速冷卻，使之固化，即得到冬凌草總萜提取物固體脂質納米粒。用微乳法也可制得冬凌草總萜提取 物固體脂質納米粒。 冬凌草總萜提取物膠束制備可以參考相應文獻。聚合物膠束在本發明中 作為優選，其制備方法參考相應文獻(如Torchilin VP. Micellar nanocarriers : Pharmaceutical perspectives. Pharm Res，2007，24 :1-16)， 一般地包括透析法、乳化法、 薄膜分散法。選擇合適的處方和工藝就可以得到較理想的冬凌草總萜提取物膠束。
冬凌草總鵬提取物納米凝膠制備可以參考相應文獻(如Shin Y， et al. Hybrid nanogels for sustainable positive thermosensitive drug release. JControlled Rel，2001，73 :1-6)。 一般采用具有兩親性的共聚物分散在水中形成。 冬凌草總萜提取物固體分散體制劑中的冬凌草總萜提取物固體分散體的成分包 括冬凌草總萜提取物和作為載體的輔料。其中輔料選自能和冬凌草總萜提取物混合均勻的 各種輔料，優選自水溶性輔料、胃溶性輔料、腸溶性輔料，更優選自水溶性輔料。水溶性輔料 選自聚乙二醇類化合物、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素類化合物、糖類化合物、醇類化合物、有機 酸類化合物、表面活性劑。聚乙二醇類化合物選自分子量大于1000的聚乙二醇，具體如聚 乙二醇1500、聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、聚乙二醇12000，優選自聚乙 二醇1500、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000。聚乙烯吡咯烷酮類化合物選自聚乙烯吡咯烷酮 K15、聚乙烯吡咯烷酮K30、聚乙烯吡咯烷酮K90。纖維素類化合物選自甲基纖維素、羥丙甲 纖維素。糖類化合物選自右旋糖、半乳糖、葡萄糖、葡聚糖、蔗糖、乳糖、果糖、木糖。醇類化合 物選自甘露醇、山梨醇、木糖醇、肌醇、乳糖醇、麥芽糖醇、聚乙烯醇。有機酸類化合物選自檸 檬酸、酒石酸、琥珀酸、順丁烯二酸、膽酸、脫氧膽酸、蘋果酸。表面活性劑選自泊洛沙姆、賣 澤、磷脂、蔗糖脂肪酸酯。胃溶性輔料選自聚丙烯酸樹脂IV號和相應的優特奇(Eudragit) 系列中的胃溶性聚丙烯酸樹脂，如Eudragit E 100。腸溶性輔料選自可在腸內溶解的材料， 具體選自羥丙甲纖維素酞酸酯、羥丙甲纖維素酞酸酯、醋酸纖維素酞酸酯、醋酸羥丙甲纖維 素琥珀酸酯、聚丙烯酸樹脂II號、聚丙烯酸樹脂III號、Eudragit L和S系列聚丙烯酸樹 脂。上述輔料可單獨使用，也可混合使用。固體分散體的制備方法根據不同材料組合可以 選自熔融法、溶劑法、溶劑-熔融法、溶劑-噴霧(冷凍)干燥法、研磨法。采用參考公開資 料或用本專業領域現有的常規技術可獲得滿意的冬凌草總萜提取物固體分散體。冬凌草總 萜提取物固體分散體制劑的劑型選自片劑、膠囊劑、顆粒劑、干混懸劑、滴丸劑。
本發明中冬凌草總萜提取物高度分散制劑，如果其組成或表面吸附有高度親水的 分子或分子片斷，由于在體外環境或體內環境可以形成親水性保護層，可以阻滯粒子間的 聚合或在體內阻滯調理化作用而獲得長循環效果。常用的親水性分子或分子片斷是聚乙二 醇(PEG)。在本發明中，可以采用添加帶有聚乙二醇鏈的脂肪類衍生物如聚乙二醇化磷脂、 聚乙二醇化膽固醇、聚山梨酯的方法制備得到表面親水的冬凌草總萜提取物的高度分散制 劑。
具體實施例方式
實施例1、冬凌草總萜提取物fl旨質體 取冬凌草總萜提取物(30mg)、大豆磷脂(0. 2g)于200ml燒瓶中，用20ml 二氯甲烷 溶解，減壓旋轉蒸發，得到一層有機脂溶性膜，加入PH7. 4的磷酸鹽緩沖液10ml，振蕩，大部分膜脫落，熱水浴超聲，直至得到均勻混懸液，顯微鏡下觀察，大部分粒子直徑小于2微米， 即為冬凌草總萜提取物脂質體。 輔你12、錄鼠麵麵,軒表麗舌體體 取冬凌草總萜提取物(25mg)、司盤60(0. lg)于250ml燒瓶中，用20ml 二氯甲烷溶 解，減壓旋轉蒸發，得到一層有機脂溶性膜，加入PH7. 4的Tris緩沖液10ml，振蕩，大部分膜 脫落，超聲，直至得到冬凌草總萜提取物非離子表面活性劑泡囊的均勻混懸液，粒度分析儀 檢測，平均粒徑為520nm。 棚列3、錄鼠麵是驗份綱旨制本 取冬凌草總萜提取物(50mg)、大豆磷脂(0. 215g) 、 PEG化二硬脂酰磷脂酰乙醇胺 (PEG-DSPE) (0. 03g)于燒瓶中，用20ml氯仿:異丙醚(1 : 1，v/v)溶解，加入適量蒸餾水， 超聲使其成為，減壓旋轉蒸發，得到凝膠態物質，加入少量水，繼續減壓旋轉蒸發，凝膠態物 質脫落并分散成均勻混懸液，顯微鏡下觀察，大部分粒子直徑小于1微米，即為冬凌草總萜 提取物長循環脂質體。 輔你l 4、錄鼠麵是耳又麵jfe來立 取冬凌草總萜提取物(45mg)、單硬脂酸甘油酯(0.8g)、吐溫80(0.05g)于燒杯中 加熱至8(TC，逐漸加入含十二烷基硫酸鈉(10mg)的8(TC水(10ml)，保持溫度不變，呈透明 液體。再將其用注射器注入到高速攪拌的ot:水中，呈透明液體。在原子力顯微鏡下觀察， 多為100納米以下的粒子。該冬凌草總萜提取物固體脂質納米粒混懸液可常溫放置10天 未見沉淀析出。該固體脂質納米粒混懸液添加適當保護劑后凍干成固體粉末，臨用前加入 水，即成冬凌草總萜提取物固體脂質納米粒混懸液。
實施例5、冬凌草總萜提取物微球 取冬凌草總萜提取物(40mg)、聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA) (0. 4g)溶于5ml 二 氯甲烷中，加入3%的聚乙烯醇(PVA)水溶液(20ml)，高速攪拌，形成乳液，轉移至30ml的 3% PVA水溶液中，在室溫下，攪拌4小時，揮發二氯甲烷，微球固化。離心微球混懸液，所得 微球以蒸餾水洗滌3次，加入適量甘露醇，冷凍干燥，即得到白色粉末。用少量水分散后，可 在顯微鏡下觀察到10微米以下的圓整微球，即為冬凌草總鵬提取物微球。
實施例6、冬凌草總萜提取物聚合物膠束取冬凌草總鵬提取物(10mg)溶于5ml 二甲基亞砜(DMSO)中，加入50mg乳酸-羥 基乙酸-乙二醇共聚物溶解，放入透析袋中，再放入盛有蒸餾水的燒杯中，攪拌24小時，取 出透析袋，測定粒度，大部分粒子在50nm以下，即為冬凌草總萜提取物聚合物膠束。
實施例7、冬凌草總萜提取物納米凝膠 取冬凌草總鵬提取物(10mg)溶于5ml 二甲基亞砜(DMSO)中，加入50mg膽固醇基 普魯蘭溶解，用微量注射器緩慢注射到水中，測定分散液中的粒子直徑，大部分粒子在80nm 以下，即為冬凌草總萜提取物納米凝膠。
實施例8、冬凌草總萜提取物固體分散體片劑 取5g冬凌草總鵬提取物溶解在熱的100ml乙醇中，與300ml含10%聚乙烯吡咯烷 酮K30的乙醇溶液混合，然后在旋轉蒸發器中減壓揮發盡乙醇，得到白色粉末狀固體，即為 冬凌草總萜提取物的聚乙烯吡咯烷酮固體分散體。該固體分散體能快速溶于水。
取上述方法制備得到冬凌草總萜提取物固體分散體35g，加入微晶纖維素50g，羧
7甲基淀粉鈉10g，混勻，再加入lg硬脂酸鎂，混勻，用10mm淺凹沖壓片，得到白色光潔片劑， 平均片重380g，含冬凌草總萜提取物20mg。該片劑能快速在水中崩解和分散。
權利要求
一種冬凌草總萜提取物高度分散制劑。
2. 如權利要求1所述的冬凌草總萜提取物高度分散制劑，其粒子直徑小于1微米。
3. 如權利要求1所述的冬凌草總萜提取物高度分散制劑，劑型選自脂質體、非離子表面活性劑泡囊、微粒、納米粒、膠束、納米凝膠、固體分散體制劑。
4. 如權利要求1所述的冬凌草總萜提取物高度分散制劑，劑型是脂質體。
5. 如權利要求1所述的冬凌草總萜提取物高度分散制劑，劑型是微粒，并選自聚合物微粒和脂質微粒。
6. 如權利要求1所述的冬凌草總萜提取物高度分散制劑，劑型是納米粒，并選自聚合物納米粒和脂質納米粒。
7. 如權利要求1所述的冬凌草總萜提取物高度分散制劑，劑型是聚合物膠束。
8. 如權利要求1所述的冬凌草總萜提取物高度分散制劑，是固體分散體制劑。
全文摘要
本發明公開了冬凌草總萜提取物高度分散制劑，劑型選自脂質體、非離子表面活性劑泡囊、微粒、納米粒、膠束、納米凝膠、固體分散體制劑。該制劑穩定性好，粒徑小，可用于靜脈注射、肌肉注射或口服。由于制劑的高度分散性，能提高冬凌草總萜提取物的生物利用度、緩控釋性或靶向性，有利于腫瘤或其他疾病的治療。
文檔編號A61K9/00GK101721461SQ20091022330
公開日2010年6月9日 申請日期2009年11月17日 優先權日2009年11月17日
發明者佟麗, 常菁 申請人:常菁;佟麗