玉足海參多糖的制備方法

專利名稱：玉足海參多糖的制備方法
技術領域：
本發明屬于中藥制備技術領域，具體涉及玉足海參多糖的制備方法。
背景技術：
癌癥目前已成為人類面臨的一大殺手，死亡率僅次于心血管疾病，而且呈逐年上 升的趨勢。目前的化學合成藥物雖然抗腫瘤作用確切，療效顯著，但有不良反應大、長期應 用易產生耐藥性等缺點，所以，人們迫切希望找到療效好且不良反應低的藥物，我國的傳統 中藥在這方面顯示出了優勢。近年來，廣大學者對中藥進行了廣泛的研究。
侵襲和轉移是腫瘤最基本的生物學特征，也是惡性腫瘤的致死主因。據統計，臨床 診斷出原發腫瘤時，約50%的患者已產生遠處的轉移，而目前的手術、放化療等方法對已多 灶性分布的惡性瘤的治療效果也不顯著，因此，尋找有效的抗腫瘤轉移藥物對于防治腫瘤， 降低癌癥病死率具有重要意義。王光鳳等采用多種腫瘤模型，研究橘皮中提取的黃酮化合 物川陳皮素的抗腫瘤作用。結果顯示，川陳皮素8 32mg/kg小鼠黑色素瘤B16的抑瘤率 為42. 24% 65. 95%，對小鼠Lewis肺癌的抑瘤率為38. 84% 59. 09% ；對小鼠S180肉 瘤的抑瘤率為36. 02% 45. 98%。川陳皮素與小劑量的紫杉醇、絲裂霉素、52氟尿嘧啶、 順鉬和阿霉素聯用時，表現明顯的協同效應。川陳皮素對小鼠Lewis肺癌腋皮下接種肺轉 移的抑制率為33. 63% 38. 94% ；對小鼠Colon26結腸癌腹腔接種腹膜轉移的抑制率為 37. 74% 43. 40%。(王光鳳，王小晨，肖磷，等.柑橘黃酮川陳皮素的抗腫瘤作用研究，中 草藥，2007,38(11) 1694-1697)蛇床子水提物、總香豆素及蛇床子素等單體成分抗腫瘤及 相關研究表明，蛇床子不僅本身抗腫瘤效價明顯，對腫瘤引起的免疫功能低下、炎癥反應及 癌性疼痛具有一定的治療價值，在腫瘤的預防及治療中配合放化療，對于克服腫瘤的多藥 耐藥以及減毒增效作用都有積極的意義。蛇床子不僅有明顯的抗誘變活性，其本身也沒有 致突變性和致瘤性，并且可以誘導腫瘤細胞向正常細胞轉化。(周則衛，劉培勛.蛇床子化 學成分及抗腫瘤活性的研究進展，中國中藥雜志，2005,30(17) 1309-1312)但以上研究都 只能對某種腫瘤細胞發揮作用，研究還不夠深入。

發明內容
發明目的本發明的目的在于提供玉足海參多糖的制備方法。技術方案一、玉足海參多糖的制備將海參洗凈，放入研缽，加入液氮(15mL/g)，迅速冷凍，將凍塊壓碎，轉移至研缽研 磨，邊研磨邊加液氮，直至成細末(150目)；將研磨好的玉足海參細末轉移至凍干瓶中，應 用冷凍干燥機冷凍干燥，冷凍干燥分為預凍、升華和二次升華三個階段，預凍階段將箱內 溫度降至_38°C至_42°C，維持6小時；升華階段當冷凝器的溫度達到_38°C以下時，對整 個系統抽真空，壓強設置在15-20帕之間，溫度在20-30分鐘升至1_3°C，維持16-18小時； 二次升華階段將溫度升至22-28°C，維持8-12小時，制成玉足海參多糖凍干粉，制成玉足海參多糖凍干粉。優選方法為上述玉足海參多糖的制備方法，預凍階段先將冷凍干燥箱內溫度降 至-40°C，維持7小時；升華階段當冷凝器的溫度達到_38°C以下時，對整個系統抽真空，壓 強設置在18帕，溫度在25分鐘時升至2V，維持17小時；二次升華階段將溫度升至25°C， 維持10小時，制成玉足海參多糖凍干粉。
二、玉足海參粘多糖(HS)對自發性B16F10黑色素瘤轉移模型的影響1.實驗材料1.1實驗動物與細胞清潔級C57BL/6小鼠(雌性，6_8周齡，16_20g)，上海斯萊克實驗動物有限責任公 司，許可證號SCXK (滬)2007-0005 ；B16F10黑色素瘤細胞株，南京大學徐強教授惠贈。1.2實驗藥物HS，常州海洋生物工程有限公司，批號060201。1.3實驗試劑DMEM(美國GIBCO公司批號1340114)，PBS (實驗室自制)，小牛血清(天津 市洋生物制品科技有限公司批號:QWTC0701), Trypsin(AMRESC0公司批號=2009/08) EDTA(AMRESC0公司批號0105)，甲醛(上海久億化學試劑有限公司批號20070610)，生理 鹽水(上海華源長富藥業有限公司批號070405045)，NaHC03(南京化學試劑有限公司批 號050480039)，液體石蠟(上海久億化學試劑有限公司批號20040701)。1.4實驗器材萊卡倒置熒光顯微鏡(德國萊卡公司型號DM1L)，精密移液器(法國吉爾森公 司型號P2)，全自動高壓滅菌鍋(日本SANYO公司型號MLS-3020)，超凈工作臺(蘇凈集 團安泰公司制造型號SW-CJ-ZFD)，超低溫冰箱(美國紐艾爾公司型號Nu-6511)，C02培 養箱(FORMA型號3111)，純水儀(美國Spring公司型號S/N 020579)，電子天平(德 國賽多利斯有限公司型號BT323S)，臺式電熱鼓風干燥箱(上海精密實驗設備公司型號 DHG9123A)，冰箱(西門子公司型號KG18V21TI)，液氮罐(CBS型號:2001)，離心機(上海安 亭科學儀器廠型號KA-1000)，PH計(HANNA公司型號HI_221)，注射器。2.實驗方法2. 1體內劑量的選擇實驗室前期實驗已經闡明HS具有抗凝活性，前期實驗觀察HS對健康小鼠凝血時 間的影響，選取健康的ICR小鼠58只，隨機分成6組，HS組尾靜脈注射(41. 6mg/kg、10. 4mg/ kg、5. 2mg/kg、2. 6mg/kg和1. 3mg/kg)，對照組尾靜脈注射等體積的生理鹽水，采用玻片法 和毛細血管法兩種方法測定凝血時間，進行比較發現HS以41. 6mg/kg劑量尾靜脈注射，5只 受試小鼠測得凝血時間均大于lOmin，除了 1.3mg/kg劑量組以外，其余各組與對照組相比 均有顯著性差異(P <0.01),結果如下表1-1 =HS對健康ICR小鼠凝血時間的影響(χ ± SD )Table 1-1 :The effect of HS on clotting time of health ICR mice ( 士 SD) 注與對照組相比，*P< 0.01。從結果可以看出，HS在劑量為2. 6mg/kg時已經影響了凝血時間，改變了小鼠血 液流變學的某些過程，而HS的抗凝活性是我們選擇其作為研究其對腫瘤轉移影響的基礎， 所以基于體內抗凝劑量我們來確定本研究課題的體內給藥劑量。由于荷瘤鼠狀態較差，而 且對于腫瘤模型的研究一般使用的是C57BL/6小鼠，此小鼠通體全黑，尾巴很細，尾靜脈不 容易找到且要持續給藥很長時間，所以我們采用腹腔注射給藥方式，將體內最小劑量定為 5. 2mg/kg，最大劑量定為最小劑量的五倍，為26mg/kg，中劑量取兩者中間值定為11. 6mg/
kg ο2.2制備B16F10細胞懸液常規培養B16F10腫瘤細胞，實驗前4-5天，按1 10細胞傳代于細胞培養瓶中， 以免細胞生長過度而出現不完全融合。每個培養瓶大約含6-8 X 106細胞，取對數生長期的 細胞，棄去培養液，用PBS洗凈，加入ImL 0. 25%胰酶+0. 02% EDTA消化液，放入細胞培養 箱中，l-3min后，輕敲培養瓶使細胞脫落。加IOmL DMEM，用移液管吹打細胞，獲得單細胞懸 液，轉入50mL聚丙烯離心管。離心細胞(1200rpmX10min)，然后用PBS洗兩遍。用苔盼藍 計數細胞，調整細胞濃度為lX107/mL。2. 3復制B16F10自發性腫瘤轉移模型每只C57BL/6小鼠左后肢足墊皮下注射含5 X 105個B16F10細胞的懸液0. 05mL, 這些小鼠每五天稱一次體重。于接種后第八天按照左足墊上原發瘤的大小將小鼠隨機分 為四組模型組對照組(生理鹽水組)、HS低劑量組(5. 2mg/kg小鼠體重)、HS中劑量組 (11.6mg/kg小鼠體重)、HS高劑量組(26mg/kg小鼠體重)，每組動物數為10只。從接種的 第九天開始各組腹腔注射給予相應劑量的藥物，模型組給予相應的生理鹽水，每日一次，直 至處死動物，采集標本。在接種后第23天，麻醉小鼠，截除荷瘤下肢，10% PBS-福爾馬林固 定原發瘤組織，稱取原發腫瘤重量以及用直尺測量原發瘤的長軸(Li)和縱軸(L2)，按照以 下公式計算原發瘤的體積0. 5236XL1X (L2)2，最后用石蠟包埋用于免疫組化實驗觀察原 發位的血管生成以及各因子表達的情況。切除原發灶后22天處死小鼠，取出肺，避免鑷子 觸及臟器表面損傷組織，用PBS洗凈組織。10% PBS-福爾馬林固定肺組織，稱取肺重，拍照 并且在解剖顯微鏡下計算肺腫瘤結節數。3.實驗結果3. IHS對B16F10黑色素瘤自發性轉移模型肺轉移的影響實驗結果采用Excel統計軟件學生t檢驗進行檢驗，由實驗數據可以看出，HS各 劑量組與對照組相比對黑色素瘤自發性轉移模型的肺轉移結節數均有抑制作用，且呈現劑 量相關性=HS 5. 2mg/kg 劑量組(P < 0. 05)、HS 11. 6mg/kg 劑量組(P < 0. 01)、HS 26mg/ kg劑量組(P < 0. 01)。對于肺重的影響，HS 26mg/kg劑量組的肺重明顯低于對照組的肺重(P <0.01)，其他兩組無明顯作用。3. 2HS對B16F10黑色素瘤原發位腫瘤體積和重量的影響從表1-2可以看出，與生理鹽水組相比，HS對于接種B16F10黑色素瘤細胞后的小 鼠足墊部的原發位腫瘤無論是體積以及重量都沒有明顯的影響作用。從表1-2的小鼠給藥 前后的體重記錄可以得出，與對照組相比，HS給藥組的小鼠體重并未明顯低。表1-2 =HS對B16F10原發位腫瘤生長以及小鼠體重的影響(又士S. D.) 4.結論HS能夠抑制B16F10黑色素瘤肺轉移，而且也抑制轉移灶的生長，但是對原發腫瘤 細胞增殖沒有影響，從小鼠體重變化可以看出，HS的毒副作用很小，為今后體內安全用藥提 供基礎。三、HS對細胞增殖作用的影響1.實驗材料1. 1實驗用細胞株B16F10黑色素瘤細胞株由南京大學徐強教授惠贈，常規培養在含有10%小牛血 清和2mg/mL NaHC03的DMEM培養液中；原代的人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)由本實驗室從人 的臍靜脈中分離得到，方法是通過在37°C下用0. 25%胰酶對人臍靜脈消化8-10分鐘，將含 有內皮細胞的胰蛋白酶液1200rpm離心10分鐘后，棄上清，加入培養液，吹打混勻制成細胞 懸液后種于培養瓶中。本課題使用的HUVEC均為2-7代，所用的培養液是含有LSGS的M199 培養液。1. 2實驗藥物HS，常州海洋生物工程有限公司，批號060201。1. 3實驗試劑DMEM(美國GIBCO公司批號1340114)，DPBS(實驗室自制)，小牛血清(天津 市灝洋生物制品科技有限公司批號QWTC0701)，Trypsin(AMRESCC)公司批號2009/08)， EDTA (AMRESC0 公司批號0105)，LSGS (Cascade biologies 公司批號#070418_901)， M199(美國Sigma公司批號:083K83581)，胎牛血清(美國GIBCO公司)，MTS (Promega公司 批號G111A 22258402)，PMS (AMRESC0公司批號0361)，NaHC03 (南京化學試劑有限公司批號050480039)。1. 4實驗器材可見-紫外光微孔板檢測儀(美國MD公司型號SPECTRA MAX 190)，萊卡倒置 熒光顯微鏡(德國萊卡公司型號DM1L)，精密移液器(法國吉爾森公司型號P2)，全自動 高壓滅菌鍋(日本SANYO公司型號MLS-3020)，超凈工作臺(蘇凈集團安泰公司制造型 號SW-CJ-ZFD)，超低溫冰箱(美國紐艾爾公司型號Nu-6511)，CO2培養箱(FORMA型號 3111)，純水儀(美國Spring公司型號S/N 020579)，電子天平(德國賽多利斯有限公司 型號BT323S)，臺式電熱鼓風干燥箱(上海精密實驗設備公司型號DHG9123A)，冰箱(西 門子公司型號KG18V21TI)，液氮 罐(CBS型號2001)，離心機(上海安亭科學儀器廠型號 KA-1000)，pH 計(HANNA 公司型號HI_221)，96 孔細胞培養板(Corningcostar 公司)，Tip 頭若干。2.實驗方法MTS法測定HS對常規培養的B16F10細胞和HUVEC增殖的影響，具體方法如下在 完全培養液中收集處于對數期生長的HUVEC細胞和B16F10細胞，調整細胞懸液濃度，分于 96孔板，每孔200 μ L，5000個細胞/孔，置37°C、5% CO2培養箱孵育24小時使細胞貼壁。對 于B16F10細胞，細胞貼壁后棄上清，更換新鮮的培養液，180 μ L/孔并加入20 μ 1溶于DMEM 的各濃度HS藥液，HS的終濃度分別為0. 001 μ Μ，0. 01 μ Μ，0. 1 μ Μ，1 μ Μ，10 μ M禾口 100 μ Μ, 空白對照僅加入20 μ L DMEM，每組4個復孔，置搖床上低速振蕩混勻，繼續培養24小時； 對于HUVEC細胞，貼壁后棄上清，先用M199培養液漂洗細胞后加入含有1 %胎牛血清的 M199 (180 μ L/孔)，繼續培養6小時后加入相應的劑量的HS，使其終濃度分別為0. 08 μ Μ, 0. 4 μ Μ，2 μ Μ，10 μ M和50 μ Μ，每組5個復孔，再繼續培養30小時。在與相應藥物共同孵育 相應時間之后，加入40 μ L/孔MTS/PMS溶液，MTS的終濃度為333 μ g/mL, PMS的終濃度為 25 μ Μ,繼續培養4小時，然后置搖床上低速振蕩lOmin，測量各孔在490nm處的吸光值。3.實驗結果實驗結果采用Excel統計軟件學生t檢驗進行檢驗，實驗重復三次，結果為三次獨 立實驗的平均值，本實驗結果中將空白對照組所得出的吸光度均值歸一化設定為100%，HS 各劑量組的值就表達為％空白對照。3. IHS對B16F10黑色素瘤細胞增殖的影響100倍顯微鏡下觀察細胞形態，與對照組相比，HS各劑量組對于B16F10細胞形態 均無明顯影響，但HSl μ MUO μ M和100 μ M劑量組的細胞密度明顯要比對照組的稀疏一些， 490nm處吸光度實驗數據顯示，HS 1 μ M和10 μ M能抑制B16F10細胞增殖(P < 0. 05)，而 100 μ M HS 能明顯抑制 B16F10 生長(P < 0. 01)。3. 2HS對HUVEC細胞增殖的影響從測得的吸光度以及100倍顯微鏡下觀察發現HS在濃度高達50 μ M時會對HUVEC 細胞的正常生長有明顯的抑制作用(P < 0.01)，其他各劑量組無論從形態上還是實際測得 的吸光度對HUVEC細胞的正常生長均無顯著的影響。4.結論從實驗的結果不難看出，共同孵育30小時之后，HS在低于50 μ M對HUVEC細胞的 正常生長并未產生任何的抑制作用，提示在本課題之后使用HUVEC細胞來研究HS抗血管生成作用時HS的劑量不應超過50 μ M且HS的作用時間應在30小時之內，而對于B16F10細胞 所使用的劑量應低于1 μ Μ,且作用時間不超過24小時，為后面體外實驗劑量的確定提供依 據。從這個實驗可以看出，劑量大于ΙμΜ就能夠抑制B16F10生長，但對于正常細胞HUVEC 細胞的生長，HS劑量高達50 μ M才會產生抑制作用，說明HS對腫瘤細胞的殺傷力要明顯強 于正常細胞。四、HS對B16F10黑色素瘤細胞實驗性肺轉移影響1.實驗材料 1. 1實驗動物與細胞清潔級C57BL/6小鼠(雌性，6_8周齡，16_20g)，上海斯萊克實驗動物有限責任公 司，許可證號SCXK (滬)2007-0005 ；B16F10黑色素瘤細胞株，南京大學徐強教授惠贈。1. 2實驗藥物HS，常州海洋生物工程有限公司，批號060201。1. 3實驗試劑DMEM(美國GiBCO公司批號1340114)，PBS(實驗室自制)，小牛血清(天津市 灝洋生物制品科技有限公司批號:QWTC0701), Trypsin (AMRESC0公司批號2009/08), EDTA(AMRESC0公司批號0105)，甲醛(上海久億化學試劑有限公司批號20070610)，生理 鹽水(上海華源長富藥業有限公司批號070405045)，NaHCO3(南京化學試劑有限公司批 號050480039)。1. 4實驗器材萊卡倒置熒光顯微鏡(德國萊卡公司型號DM1L)，精密移液器(法國吉爾森公 司型號P2)，全自動高壓滅菌鍋(日本SANYO公司型號MLS-3020)，超凈工作臺(蘇凈集 團安泰公司制造型號SW-CJ-ZFD)，超低溫冰箱(美國紐艾爾公司型號Nu-6511)，CO2培 養箱(FORMA型號3111)，純水儀(美國Spring公司型號S/N 020579)，電子天平(德 國賽多利斯有限公司型號BT323S)，臺式電熱鼓風干燥箱(上海精密實驗設備公司型號 DHG9123A)，冰箱(西門子公司型號KG18V21TI)，液氮罐(CBS型號:2001)，離心機(上海安 亭科學儀器廠型號KA-1000)，PH計(HANNA公司型號HI_221)，注射器。2.實驗方法2.1制備細胞懸液常規培養B16F10腫瘤細胞，實驗前4-5天，按1 10，細胞傳代于細胞培養瓶中， 以免細胞生長過度而出現不完全匯合。每個培養瓶大約含6-8 X 106細胞，取對數生長期的 細胞，棄去培養液，用PBS洗凈，加入ImL 0. 25%胰酶-0. 02% EDTA消化液，放入細胞培養 箱當中，l-3min后，輕敲培養瓶使細胞脫落。加IOmL DMEM，用移液管吹打細胞，獲得單細胞 懸液，轉入50mL聚丙烯離心管。離心細胞(1200rpmX10min)，然后用PBS洗兩遍。用苔盼 藍計數細胞，調整細胞濃度為2. 5 X 106個/mL。2. 2復制B16F10實驗性腫瘤轉移模型取C57BL/6小鼠置于小鼠注射固定器，尾靜脈注射0. 2mL細胞懸液(含5X 105腫 瘤細胞)。接種過腫瘤細胞的小鼠隨機分為4組模型組對照組(生理鹽水)，HS低劑量 組(5. 2mg/kg)，HS中劑量組(11. 6mg/kg)，HS高劑量組(26mg/kg)，腹腔注射給藥，每日一 次。給藥23天，處死小鼠，取肺臟。避免鑷子觸及臟器表面，防止損傷組織，用PBS洗凈組織。10% PBS-福爾馬林固定肺組織，稱取肺重，拍照，評價HS對B16F10腫瘤血行肺轉移的影響。3.實驗結果實驗結果采用Excel統計軟件學生t檢驗，從各組取出的肺組織可以看出，模型組的肺組織轉移腫瘤結節數目顯著多于給藥組，由于肺結節太多，無法計數統計，對肺重的統 計分析表明，HS高劑量組(26mg/kg)和中劑量組(11.6mg/kg)均能抑制小鼠肺組織重量，P 值分別為P < 0. 01和P < 0. 05。HS給藥前后小鼠體重差異不大，且與對照組相比，小鼠體 重未發現有大幅度減少，各組的死亡率顯示，HS藥物對于小鼠的體內毒性較小。4.結論HS給藥組小鼠的死亡率與對照組相當，而且體重與給藥前也沒有明顯的減少，說 明HS的毒副作用很小，HS可以很好的抑制實驗性B16F10黑色素瘤肺轉移，HS對于B16F10 細胞直接入血之后的血行過程，黏附過程以及穿出血管過程有一定的抑制作用。有益效果玉足海參粘多糖是從廣東省、海南島一帶的民間海洋生物玉足海參Hojothuria leucospilota中提取出的一種酸性粘多糖，性微寒，味甘、成。歸肺、腎、大腸經。具有補腎 益精；養血潤燥；止血的功效，主治精血虧損；虛弱勞怯；陽痿；夢遺；腸燥便秘；肺虛咳嗽 咯血，腸風便血，外傷出血。現代藥理學研究，玉足海參粘多糖具有抑制腫瘤轉移作用。將海參用普通烘箱80°C烘干后打粉，測定其中海參粘多糖的含量為2.5%，而采 用液氮冷凍，并凍干后的海參粘多糖的含量為4. 8%。
具體實施例方式結合具體實施方式
，對本發明進一步說明如下海參為海洋生物玉足海參 Ho jothurialeucospilota。實施例1取海參5g，洗凈，放入研缽，加入液氮75mL，迅速冷凍，將凍塊壓碎，轉移至研缽研 磨，邊研磨邊加液氮，直至成150目細末；將研磨好的玉足海參細末轉移至凍干瓶中，應用 冷凍干燥機冷凍干燥，冷凍干燥分為預凍、升華和二次升華三個階段，預凍階段將箱內溫 度降至_38°C，維持6小時；升華階段當冷凝器的溫度達到_38°C以下時，對整個系統抽真 空，壓強設置在15-20帕之間，溫度在20-30分鐘升至;TC，維持16-18小時；二次升華階段 將溫度升至22°C，維持8-12小時，制成玉足海參多糖凍干粉，制成玉足海參多糖凍干粉。實施例2取海參5g，洗凈，放入研缽，加入液氮75mL，迅速冷凍，將凍塊壓碎，轉移至研缽研 磨，邊研磨邊加液氮，直至成150目細末；將研磨好的玉足海參細末轉移至凍干瓶中，應用 冷凍干燥機冷凍干燥，冷凍干燥分為預凍、升華和二次升華三個階段，預凍階段先將冷凍干 燥箱內溫度降至-40°C，維持7小時；升華階段當冷凝器的溫度達到_38°C以下時，對整個系 統抽真空，壓強設置在18帕，溫度在25分鐘時升至2°C，維持17小時；二次升華階段將溫 度升至25°C，維持10小時，制成玉足海參多糖凍干粉。實施例3一種玉足海參多糖的制備方法，將海參洗凈后用液氮冷凍成塊狀，將凍塊壓碎后轉移至研缽研磨，邊研磨邊加液氮，直至磨成細末；將研磨好的玉足海參細末轉移至凍干瓶 中，應用冷凍干燥機冷凍干燥預凍階段先將冷凍干燥箱內溫度降至_38°C，維持8小時； 升華階段當冷凝器的溫度達到_38°C以下時，對整個系統抽真空，壓強設置在15帕，溫度 在20分鐘升至1°C，維持18小時；二次升華階段將溫度升至22°C，維持12小時，制成玉足 海參多糖凍干粉。實施例4
一種玉足海參多糖的制備方法，將海參洗凈后用液氮冷凍成塊狀，將凍塊壓碎后 轉移至研缽研磨，邊研磨邊加液氮，直至磨成細末；將研磨好的玉足海參細末轉移至凍干瓶 中，應用冷凍干燥機冷凍干燥預凍階段先將冷凍干燥箱內溫度降至_42°C，維持5小時； 升華階段當冷凝器的溫度達到_38°C以下時，對整個系統抽真空，壓強設置在20帕，溫度 在20分鐘升至3°C，維持16小時；二次升華階段將溫度升至28°C，維持8小時，制成玉足 海參多糖凍干粉。
權利要求
一種玉足海參多糖的制備方法，其特征在于將海參洗凈后用液氮冷凍成塊狀，將凍塊壓碎后轉移至研缽研磨，邊研磨邊加液氮，直至磨成細末；將研磨好的玉足海參細末轉移至凍干瓶中，應用冷凍干燥機冷凍干燥a.預凍階段先將冷凍干燥箱內溫度降至-38℃至-42℃，維持5～8小時；b.升華階段當冷凝器的溫度達到-38℃以下時，對整個系統抽真空，壓強設置在15～20帕之間，溫度在20-30分鐘升至1～3℃，維持16～18小時；c.二次升華階段將溫度升至22～28℃，維持8～12小時，制成玉足海參多糖凍干粉。
2.根據權利要求書1所述玉足海參多糖的制備方法，其特征在于所述預凍階段先將冷 凍干燥箱內溫度降至-40°C，維持7小時；升華階段當冷凝器的溫度達到_38°C以下時，對整 個系統抽真空，壓強設置在18帕，溫度在25分鐘內升至2°C，維持17小時；二次升華階段 將溫度升至25°C，維持10小時，制成玉足海參多糖凍干粉。
全文摘要
一種玉足海參多糖的制備方法，將海參洗凈后用液氮冷凍成塊狀，將凍塊壓碎后轉移至研缽研磨，邊研磨邊加液氮，直至磨成細末；將研磨好的玉足海參細末轉移至凍干瓶中，應用冷凍干燥機冷凍干燥預凍階段先將冷凍干燥箱內溫度降至-38℃至-42℃，維持5～8小時；升華階段當冷凝器的溫度達到-38℃以下時，對整個系統抽真空，壓強設置在15～20帕之間，溫度在20-30分鐘升至1～3℃，維持16～18小時；二次升華階段將溫度升至22～28℃，維持8～12小時，制成玉足海參多糖凍干粉。將海參用普通烘箱80℃烘干后打粉，測定其中海參粘多糖的含量為2.5％，而采用液氮冷凍，并凍干后的海參粘多糖的含量為4.8％。
文檔編號A61P35/00GK101863997SQ20101018049
公開日2010年10月20日 申請日期2010年5月24日 優先權日2010年5月24日
發明者張偉偉, 徐波, 王愛云, 鄭仕中, 陸茵, 陳磊, 雷娜 申請人:南京中醫藥大學