專利名稱：九味痔瘡膠囊的質量檢測方法
技術領域：
本發明涉及九味痔瘡膠囊技術領域，特別是涉及一種九味痔瘡膠囊的質量檢測方法。
背景技術：
人體直腸末端粘膜下和肛管皮膚下靜脈叢發生擴張和屈曲所形成的柔軟靜脈團， 稱為痔，又名痔瘡、痔核、痔病、痔疾等。醫學所指痔瘡包括內痔、外痔、混合痔，是肛門直腸底部及肛門粘膜的靜脈叢發生曲張而形成的一個或多個柔軟的靜脈團的一種慢性疾病。九味痔瘡膠囊為膠囊劑，內容物為棕褐色至黑褐色的顆粒；氣微，味苦、微辛。九味痔瘡膠囊的功能主治，苗醫認為能夠旭嘎幟沓痂，參象檔象，泱安檔猛，肛干灑，杠千就假； 中醫認為能夠清熱解毒，燥濕消腫，涼血止血。用于濕熱蘊結所致內痔出血，外痔腫痛
處方三月泡400g、虎杖150g、地榆200g、貴州桑寄生100g、無花果葉100g、菊花50g、 雞子白20g、黃連150g、大黃50g，制成1000粒。制法以上九味，雞子白、黃連及三月泡133g、貴州桑寄生30g烘干粉碎成細粉，備用；剩余的三月泡、貴州桑寄生與其余菊花等五味加水煎煮二次，每次2小時，濾過，合并濾液，濃縮至相對密度為1. 30 1. 35 (80°C)的浸膏；將浸膏與藥粉混勻、干燥、制成顆粒，裝入膠囊，即得。用法用量口服，一次5 6粒，一日3次。或遵醫囑。禁忌孕婦忌服規格每粒裝0. 4g 貯藏密封。有效期3年。現有九味痔瘡膠囊的質量檢測方法不能很好的保證藥品的穩定性，為了提高藥品質量，保證藥品的臨床療效，申請人對九味痔瘡膠囊的質量檢測方法進行了研究和改進。
發明內容
本發明所要解決的技術問題是提供一種九味痔瘡膠囊的質量檢測方法，以提高藥品穩定性，保證藥品的臨床療效。為了解決上述技術問題，本發明采用如下的技術方案
本發明九味痔瘡膠囊的質量檢測方法，包括性狀、鑒別、檢查和含量測定，所述鑒別包括用黃連對照藥材和鹽酸小檗堿照薄層色譜法鑒別膠囊中的黃連藥材，用大黃對照藥材和大黃素照薄層色譜法鑒別膠囊中的大黃藥材；所述含量測定是以鹽酸小檗堿為對照品，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-磷酸二氫鉀溶液-十二烷基硫酸鈉為流動相，照高效液相色譜法對膠囊中鹽酸小檗堿的含量進行測定。具體的，上述鑒別包括
(1)黃連藥材的鑒別取膠囊內容物4g，用濃氨溶液濕潤，放置后加氯仿振搖，放置，濾過，濾液作為供試品溶液；取黃連對照藥材1. 5g，同供試品溶液制備方法制成黃連對照藥材溶液，另取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每Iml含0. Img的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法，吸取供試品溶液、對照藥材溶液和對照品溶液各2 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯-甲醇一異丙醇一濃氨試液為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品及對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；
(2)大黃藥材的鑒別取膠囊內容物lg，置具塞燒瓶中，加乙醇超聲處理，濾過，濾液蒸干，殘渣加10%鹽酸溶解后加氯仿，置70°C水浴中水解，冷卻，移至分液漏斗中，分取氯仿層，揮去氯仿，殘渣加乙醇溶解，即得供試品溶液；取大黃對照藥材0. Ig,同供試品溶液制備方法制成大黃對照藥材溶液，另取大黃素對照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法，吸取供試品溶液、對照藥材溶液和對照品溶液各3 μ 1，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠H薄層板上，以30 60°C石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品及對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；置氨蒸氣中熏后，日光下檢視，斑點變為紅色。進一步的，前述鑒別包括如下各項
(1)黃連藥材的鑒別取膠囊內容物4g，用濃氨溶液濕潤，放置30分鐘，加氯仿30ml， 振搖10分鐘，放置1小時，濾過，濾液作為供試品溶液；取黃連對照藥材1. 5g，同供試品溶液制備方法制成黃連對照藥材溶液，另取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每Iml含0. Img 的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法，吸取供試品溶液、對照藥材溶液和對照品溶液各 2 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯-甲醇一異丙醇一濃氨試液的體積比為6 :3 :1.5:1.5 :0. 5為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品及對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；
(2)大黃藥材的鑒別取膠囊內容物lg，置具塞燒瓶中，加乙醇20ml，超聲處理1小時， 濾過，濾液蒸干，殘渣加10%稀鹽酸IOml溶解，再加氯仿20ml，置70°C水浴中水解30分鐘， 冷卻，移至分液漏斗中，分取氯仿層，揮去氯仿，殘渣加乙醇Iml溶解，即得供試品溶液；取大黃對照藥材0. lg，同供試品溶液制備方法制成大黃對照藥材溶液，另取大黃素對照品，力口甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法，吸取供試品溶液、對照藥材溶液和對照品溶液3 μ 1，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠H薄層板上，以 30 60°C石油醚甲酸乙酯甲酸的體積比為15 :5 :1的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品及對照藥材色譜相應的位置上， 顯相同顏色的熒光斑點；置氨蒸氣中熏后，日光下檢視，斑點變為紅色。前述九味痔瘡膠囊的質量檢測方法中所述含量測定為照高效液相色譜法對膠囊中鹽酸小檗堿的含量進行測定
色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈0. lmol/L 磷酸二氫鉀溶液0. 025mol/L十二烷基硫酸鈉溶液的體積比為50 25 25為流動相，檢測波長為345nm，理論板數按鹽酸小檗堿峰計應不低于3000 ；
對照品溶液的制備取鹽酸小檗堿對照品適量，精密稱定，加甲醇溶解制成Iml含 0. Img的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備取膠囊內容物0. 4g，精密稱定，精密加入10%鹽酸甲醇的體積比為1 :99的溶液50ml，稱定重量，60°C水浴加熱15分鐘，超聲處理30分鐘，放冷，稱重，加甲醇補足減失的重量，搖勻，靜置，取上清液用微孔濾膜濾過，取續濾液，即得；
測定法分別吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。在前述含量測定項下在制備供試品溶液時，超聲處理的功率為250W、頻率為 25ΚΗζ，微孔濾膜為0. 45 μ m。按照前述含量測定方法測定，每粒膠囊含黃連以鹽酸小檗堿(C2qH17NCVHCI)計，不得少于3. 5mg。為了得到上述技術方案，申請人做了大量的實驗，具體如下 一、鑒別
(1)在對膠囊中黃連藥材進行鑒別時，除了以鹽酸小檗堿為對照品進行鑒別外，增加以黃連為對照藥材的薄層色譜鑒別，經實驗證明，斑點明顯，故收入正文。(2)在對膠囊中大黃藥材進行鑒別時，分別用大黃對照藥材和虎杖對照藥材以及大黃素作對照，結果顯示，虎杖對照藥材薄層鑒別斑點與大黃對照藥材斑點相重合，但大黃對照藥材薄層鑒別斑點比虎杖對照藥材薄層鑒別斑點多2個斑點，故選增加大黃對照藥材作對照，收入正文。二、含量測定
1.藥品與試劑鹽酸小檗堿對照品(中國藥品生物制品檢定所提供含量測定用對照品，批號0713-9906)；甲醇、鹽酸、磷酸二氫鉀、十二烷基硫酸鈉(均為AR級)，乙腈(色譜純)；九味痔瘡膠囊及其缺黃連陰性藥品均為貴州萬勝藥業有限責任公司提供。2.儀器與分析條件儀器為LC-lOAvp島津高效液相色譜儀；SPD-lOAvp檢測器； 杭州普惠SEPU-2000色譜工作站；色譜柱為迪馬鉆石ODS (18柱(200\4. 6 mm)。3.測定成份的選擇本藥處方中，黃連具有清熱燥濕、瀉火解毒之功效，含原小檗型生物堿(protoberberine alkaloids),小檗堿(berhrine),巴馬亭(pal-matine), 藥根堿(jatrorrhizine),黃連堿(optisine),甲基黃連堿(worenine),表小檗堿 (epiberberine), Berberastine 禾口 Groenlandicine0 另含有二十禾中無機兀素Cu、Mn、Zn、 Fe、Co、Se、Ni、Sr、Ti、Al、Mg、K、Ca, Pb、Cd、Hg、As、Ba, B、P。其它味藥材據資料報道均不含鹽酸小檗堿等生物堿成分，鹽酸小檗堿作為黃連的有效成分之一，其含量測定方法有重量法、滴定法，薄層色譜法、高效液相色譜法、流動注射分析法、酶法等。其中高效液相色譜法是近年來使用較多，分析效果較好的方法。故擬定了產品中鹽酸小檗堿的高效液相色譜含量測定的方法，對方法的分離性能及條件，樣品處理， 分析結果的重復性，精密度，回收率等進行了考察。4.供試品溶液的制備鹽酸小檗堿屬于原小檗型生物堿，其鹽酸鹽易溶于甲醇中，故以鹽酸-甲醇提取，參照《貴州省中藥材，民族藥材質量標準》(2003年版)及《中國藥典》2000年版，黃連項的含量測定法中提取方法，采用水浴加熱(60°C )和超聲提取法制備供試液。結果顯示，以鹽酸-甲醇(1 :99，體積比)和鹽酸-甲醇(1 :100，體積比)測定結果相差不大，超聲60min和超聲30min含量測定結果均無太大差別，故提取條件采用以鹽酸_甲醇(1 :99，體積比)為溶劑，超聲提取30min的提取方法。供試品制備方法為取九味痔瘡膠囊0. 4g，精密稱定，精密加入鹽酸-甲醇(1 :99，體積比)50ml，稱定重量，60°C水浴加熱15分鐘，超聲處理(功率250W，頻率25KHz) 30分鐘，放冷，稱重，加甲醇補足減失的重量，搖勻， 靜置，取上清液用微孔濾膜(0.45μπι)濾過，取續濾液，即得。5.對照品，樣品及陰性樣品鹽酸小檗堿對照品為中國藥品生物制品檢定所提供含量測定用，不需作純度檢查。在標準操作條件下，將本處方除黃連外其余各味藥材制成本品陰性對照樣，經檢測，陰性對照未見鹽酸小檗堿的吸收峰，樣品中鹽酸小檗堿的吸收峰與對照品完全一致。6.測定原理
鹽酸小檗堿易溶于甲醇中，其含量測定波長多選擇為345nm。結果顯示在345nm波長的吸收峰靈敏度較好，色譜峰較理想，故選用345nm波長檢測。7.系統適應性試驗
在參考文獻的基礎上，采用ODS (C18) 200X4.6 mm色譜柱，經實驗以乙腈_0. lmol/L 磷酸二氫鉀溶液-0. 025mol/L十二烷基硫酸鈉(50 :25 :25，體積比)為流動相分離效果最佳。理論板數以鹽酸小檗堿峰計達到8800，實際上理論板數達到3000以上即可分離鹽酸小檗堿，故理論板數定為不低于3000。8.標準曲線
吸取鹽酸小檗堿對照品液(0. l(X3mg/ml)4、8、12、16、20y 1進樣，記錄色譜，以峰面積A (uV. S)對濃度(μ g)回歸計算。得回歸方程C ( μ g) =2. 23492 X IO-7A-O. 022443，相關系數r =0.9998 (表1 )，擬合為過原點方程為C ( μ g) =2. 20209X 1(Γ7Α，用一供試品溶液進樣分析所得峰面積分別代入上兩方程計算，結果相對偏差為0. 48%，由此可視截距近似為零，故正文采用外標一點法計算含量。線性范圍為0. 412 2. 06 μ g。鹽酸小檗堿配制成0. 1 mg/ml的濃度與供試液含鹽酸小檗堿的濃度基本相當， 這樣可減少誤差，提高準確度。故對照品制備采用Iml含鹽酸小檗堿0.1 mg的甲醇溶液。表1 標準曲線
權利要求
1.九味痔瘡膠囊的質量檢測方法，包括性狀、鑒別、檢查和含量測定，其特征在于所述鑒別包括用黃連對照藥材和鹽酸小檗堿照薄層色譜法鑒別膠囊中的黃連藥材，用大黃對照藥材和大黃素照薄層色譜法鑒別膠囊中的大黃藥材；所述含量測定是以鹽酸小檗堿為對照品，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-磷酸二氫鉀溶液-十二烷基硫酸鈉為流動相，照高效液相色譜法對膠囊中鹽酸小檗堿的含量進行測定。
2.按照權利要求1所述九味痔瘡膠囊的質量檢測方法，其特征在于所述鑒別包括(1)黃連藥材的鑒別取膠囊內容物4g，用濃氨溶液濕潤，放置后加氯仿振搖，放置，濾過，濾液作為供試品溶液；取黃連對照藥材1. 5g，同供試品溶液制備方法制成黃連對照藥材溶液，另取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每Iml含0. Img的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法，吸取供試品溶液、對照藥材溶液和對照品溶液各2 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯-甲醇一異丙醇一濃氨試液為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品及對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；(2)大黃藥材的鑒別取膠囊內容物lg，置具塞燒瓶中，加乙醇超聲處理，濾過，濾液蒸干，殘渣加10%鹽酸溶解后加氯仿，置70°C水浴中水解，冷卻，移至分液漏斗中，分取氯仿層，揮去氯仿，殘渣加乙醇溶解，即得供試品溶液；取大黃對照藥材0. Ig,同供試品溶液制備方法制成大黃對照藥材溶液，另取大黃素對照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法，吸取供試品溶液、對照藥材溶液和對照品溶液各3 μ 1，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠H薄層板上，以30 60°C石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品及對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；置氨蒸氣中熏后，日光下檢視，斑點變為紅色。
3.按照權利要求2所述九味痔瘡膠囊的質量檢測方法，其特征在于所述鑒別包括如下各項(1)黃連藥材的鑒別取膠囊內容物4g，用濃氨溶液濕潤，放置30分鐘，加氯仿30ml， 振搖10分鐘，放置1小時，濾過，濾液作為供試品溶液；取黃連對照藥材1. 5g，同供試品溶液制備方法制成黃連對照藥材溶液，另取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每Iml含0. Img 的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法，吸取供試品溶液、對照藥材溶液和對照品溶液各 2 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯-甲醇一異丙醇一濃氨試液的體積比為6 :3 :1. 5 :1. 5 :0. 5為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品及對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；(2)大黃藥材的鑒別取膠囊內容物lg，置具塞燒瓶中，加乙醇20ml，超聲處理1小時， 濾過，濾液蒸干，殘渣加10%稀鹽酸IOml溶解，再加氯仿20ml，置70°C水浴中水解30分鐘， 冷卻，移至分液漏斗中，分取氯仿層，揮去氯仿，殘渣加乙醇Iml溶解，即得供試品溶液；取大黃對照藥材0. Ig,同供試品溶液制備方法制成大黃對照藥材溶液，另取大黃素對照品，力口甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法，吸取供試品溶液、對照藥材溶液和對照品溶液3 μ 1，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠H薄層板上，以 30 60°C石油醚甲酸乙酯甲酸的體積比為15 :5 :1的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品及對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；置氨蒸氣中熏后，日光下檢視，斑點變為紅色。
4.按照權利要求1所述九味痔瘡膠囊的質量檢測方法，其特征在于所述含量測定為照高效液相色譜法對膠囊中鹽酸小檗堿的含量進行測定色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈0. lmol/L磷酸二氫鉀溶液0. 025mol/L十二烷基硫酸鈉溶液的體積比為50 25 25為流動相，檢測波長為345nm，理論板數按鹽酸小檗堿峰計應不低于3000 ；對照品溶液的制備取鹽酸小檗堿對照品適量，精密稱定，加甲醇溶解制成Iml含 0. Img的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備取膠囊內容物0. 4g，精密稱定，精密加入10%鹽酸甲醇的體積比為1 :99的溶液50ml，稱定重量，60°C水浴加熱15分鐘，超聲處理30分鐘，放冷，稱重，加甲醇補足減失的重量，搖勻，靜置，取上清液用微孔濾膜濾過，取續濾液，即得；測定法分別吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。
5.按照權利要求4所述九味痔瘡膠囊的質量檢測方法，其特征在于在制備供試品溶液時，超聲處理的功率為250W、頻率為25ΚΗζ，微孔濾膜為0. 45 μ m0
6.按照權利要求4或5所述九味痔瘡膠囊的質量檢測方法，其特征在于每粒膠囊含黃連以鹽酸小檗堿(C2ciH17N(VHCl)計，不得少于3. 5mg。
全文摘要
本發明公開了一種九味痔瘡膠囊的質量檢測方法，包括性狀、鑒別、檢查和含量測定，所述鑒別包括用黃連對照藥材和鹽酸小檗堿照薄層色譜法鑒別膠囊中的黃連藥材，用大黃對照藥材和大黃素照薄層色譜法鑒別膠囊中的大黃藥材；所述含量測定是以鹽酸小檗堿為對照品，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-磷酸二氫鉀溶液-十二烷基硫酸鈉為流動相，照高效液相色譜法對膠囊中鹽酸小檗堿的含量進行測定，本發明的質量檢測方法有效保證了藥品的穩定性，從而保證藥品的臨床療效。
文檔編號A61K36/739GK102552478SQ20101059036
公開日2012年7月11日 申請日期2010年12月16日 優先權日2010年12月16日
發明者宋玉 申請人:貴州萬勝藥業有限責任公司