專利名稱：用于治療傷口、瘢痕、外科手術后粘連形成的含有透明質酸的組合物的制作方法
技術領域：
本發明涉及增強生物學活性肽，尤其是來源于人乳鐵蛋白的肽的療效的藥物組合物。所述組合物有效用于治療和/或預防傷口、瘢痕和外科手術后粘連。背景腹膜粘連是外科創傷或其它類型的損傷后腹部結構之間的纖維組織連接。普通腹部外科手術、血管外科手術、婦科外科手術、泌尿外科手術和矯形外科手術可導致至多達 95% 患者中的粘連形成(Ellis 等，1999. Adhesion-related hospital readmissions after abdominal and pelvic surgery -.a retrospective cohort study (腹部禾口盆月空夕卜科手術后粘連相關的再次入院回顧件隊列研究).LanceU柳葉刀)353,1476-1480)。外科手術后粘連被認為是小腸梗阻的主要原因(Menzies等，2001. Small bowel obstruction due to postoperative adhesions treatment patterns and associated costs in IlOhospital admissions (手術后粘連導致的小腸梗阻110例醫院入院者的治療模式和相關費用)· Ann R Coll Surg Engl (英格蘭皇家外科醫師學院年報)83,40-46.)，小腸梗阻是女性中繼發不孕的熟知的病因(Marana等，1995. Correlation between the American Fertility Society classifications of adnexal adhesions and distal tubal occlusion, salpingoscopy, and reproductive outcome in tubal surgery (附件豐占連禾口遠側輸卵管閉塞的美國生育學會分類，輸卵管鏡檢查和輸卵管外科手術中的生殖結果之間的相關件).Fertil Steril (牛育和不育)64,924-929),以及是術后痛的可能原因(I^ajanen
2005. Laparoscopy in chronic abdominal pain -.a prospective nonrandomized long-term follow-up study (慢性腹部疼痛的腹腔鏡檢查前瞻性非隨機化的長期隨訪研究)·丄Clin Gastroenterol (臨床胃腸病學雜志)39,110-114)。超過30%的經歷下腹外科手術的個體在他們生命的一些時期由于與粘連形成直接或間接相關的病癥再次入院 (Lower 2000.The impact of adhesions on hospital readmissions over ten years after 8849 open gynaecological operations :an assessment from the Surgical and Clinical Adhesions Research Study (8849例開放式婦科手術后10年間粘連對醫院再次入院的影響來自于外科和臨床粘連調杳研究的評估).Biog(英國產科學和婦科學雜志)107,855-862.)。數十年中，已經嘗試通過減少外科創傷(避免干燥、輕柔組織處理、仔細止血) 和異物對腹腔的污染(使用無淀粉手套、無絨紗布和可吸收縫線)來減少外科手術后粘連(Holmdahl 等，1997. Adhesions !pathogenesis and prevention-panel discussion and summary (粘連發病機理和預防-小組討論和總結).Eur T Surg SuddI (歐洲外科學雜志增刊)，56-62.)。重要的是，腹腔鏡技術不足以克服手術后粘連形成的問題(Duron 等，2000. Prevalence and mechanisms of small intestinal obstruction following laparoscopic abdominal surgery :a retrospective multicenter study (月復 I空鏡月復部外科手術后小腸梗阻的患病率和機制回顧性多中心研究).French Association forSurgical Research (法國外科學研究學會).Arch Surg (外科學檔案)135, 208-212)。因此，腹膜內粘連仍然是重要臨床問題，現在認為通過優秀外科技術僅可能少量影響未來的改善。相反，焦點是開發預防粘連形成的專用產品，其與外科介入聯合施用。
在粘連的預防中測試的大部分治療策略是醫療裝置產品。已經評價了不同類型的物理屏障，其中在介入過程中應用的生物可降解膜在腹膜愈合的關鍵期期間用于使受損傷的腹部表面分開。兩種最廣泛使用的減少粘連的屏障是化切1^擾(1 (Johnson & Johnson Medical Inc.(強生醫療公司)，Arlington (阿靈頓)，TX)和 S印rafilm (Genzyme (健贊)，Cambridge(劍橋)，MA，美國)。由透明質酸鈉和羧甲基纖維素(CMC)構成的 Seprafi lm 在放置后大約對_4他形成粘的凝膠，其在1周內被緩慢吸收(Diamond， 1996. Reduction of adhesions after uterine myomectomy by Seprafilm membrane (HAL-F) :a blinded，prospective, randomized, multicenter clinical study (子宮肌瘤切除術后通a^prafilm膜(HAL-F)減少粘連盲法、前瞻性、隨機化、多中心臨床研究).kprafilm Adhesion Study Group (Seprafilm 粘連研究組)· Fertil Steril (牛育禾口不育)66,904-910 ;Beck, 1997. The role of Seprafilm bioresorbable membrane in adhesion prevention (S印rafilm生物可再吸收膜在粘連預防中的作用).Eur T Surg Suppl (歐洲外科學雜志增刊)，49-55)。已經顯示kprafilm 減少臨床表現中的外科手術后粘連(Vri jland等，2002. Fewer intraperitoneal adhesions with use of hyaluronic acid-carboxymethyIcellulose membrane -.a randomized clinical trial ( il! M 3 明質酸-羧甲基纖維素膜具有更少的腹膜內粘連隨機化臨床試驗).Ann Surg(外科學年報)235，193-199. ；Beck 等，2003·A prospective, randomized, multicenter，controlled study of the safety of Seprafilm adhesion barrier in abdominopelvic surgery of the intestine (小腸腹盆腔外科手術中Seprafilm粘連屏障安全性的前瞻性、隨機化、 多中心、對照研究.Dis Colon Rectum(結腸和直腸疾病)46,1310-1319 ；Tang等，2003. Bioresorbable adhesion barrier facilitates early closure of the defunctioning ileostomy after rectal excision :aprospective，randomized trial (生物可再吸收粘連屏障促進肓腸切除術后輔助性回腸造口術的早期閉合).Dis Colon ReCtum(結腸和盲腸疾病)46,1200-1207),然而，該裝置難以應用，因為其粘附手套和器官并目.是易碎的 (DeCherney 禾口 diZerega，1997· Clinical problem of intraperitoneal postsurgical adhesion formation following general surgery and the use of adhesion prevention barriers (普通外科手術后腹膜內外科手術后粘連形成的臨床問題和粘連預防屏障的使用).Sun Clin North Am(北美外科學臨床)77，671-688)。另夕卜，kprafilm 增加了吻合口瘺相關的后遺癥并且不適合于腹腔鏡操作(肚^^叩￡1等，2002^ randomized, controlled pilot study of the safety and efficacy of 4% icodextrin solution in the reduction of adhesions following laparoscopic gynaecological surgery(4% 艾考糊精溶液在減少腹腔鏡婦科外科手術后粘連中的安全性和功效的隨機化、對照先導研究).Hum Reprod (人類生殖)17，1031-1038)。由氧化再生纖維素構成的Interceed轉化為覆蓋受損腹膜的凝膠物質并且已經在數個臨床研究中顯示預防粘連的功效(Mais等， 1995.Prevention of de-novo adhesion formation after laparoscopic myomectomy a randomized trial to evaluate the effectiveness of an oxidized regeneratedcellulose absorbable barrier (預防腹腔鏡子宮肌瘤切除術后粘連的從頭形成評價氧化再牛纖維素可吸收屏障的效力的隨機化試驗)Hum Reprod (人類牛殖).10,3133-3135 ； Mais等，1995 Reduction of adhesion reformation after laparoscopic endometriosis surgery :a randomized trial with an oxidized regenerated cellulose absorbable barrier(減少腹腔鏡子宮內膜異位外科手術后粘連再形成使用氧化再生纖維素可吸收屏障的隨機化試驗)Obstet Gynecol (婦產科學).86,512-515 ；Wallwiener 等，1998. Adhesion formation of the parietal and visceral peritoneum :an explanation for the controversy on the use of autologous and alloplastic barriers ？(壁層禾口臟層腹膜的粘連形成對使用自體和異體屏障的爭議的解釋？ )Fertil Steril (牛育和不育)69,132-137)。然而，Interceed的應用需要完全止血，因為即使少量腹膜內出血消除這種屏障的任何有益效果(DeCherney和dikrega，1997.見上文)。使用物理屏障的一般限制是產品的部位特異性，需要外科醫師預測將在哪里發生粘連和它們將最可能在哪里導致臨床問題。作為對屏障的替代品，在外科手術后已經以足以允許腹部結構漂浮的量施用用于腹內灌注的不同液體諸如艾考糊精(Ad印t，Baxter Healthcare Corporation(百特醫療用品公司)，IL，美國)或乳酸鹽林格溶液，從而預防受損的表面相互觸及(Yaacobi等， 1991.Effect of Ringer' s lactate irrigation on the formation of postoperative abdominal adhesions (林格乳酸鹽灌冼對手術后腹部粘連形成的效應).T Invest Surg(研究外科學雜志)4,31-36 :Cavallari 等，2000. Inability of University of Wisconsin solution to reduce postoperative peritoneal adhesions in rats (威斯康星大學溶液不能減少大鼠中的手術后腹膜粘連).Eur T Surg(歐洲外科學雜志)166, 650-653. ；dikrega等，見上文)。然而，重力通過阻止所述液體在腹中的均勻分布而導致問題。另外，所述溶液從腹腔中被吸收的速度比腹膜愈合所需的時間更快。已經測試了有限數目的藥理學活性化合物來預防外科手術后粘連。作為一些實例，傷口愈合級聯的炎癥成分和成纖維細胞增殖已經是分別使用類固醇藥物和細胞毒性藥物的藥物療法的靶標。然而，這些藥劑已經顯示不確定的功效和潛在的嚴重副作用 (LeGrand 等，1995. Comparative efficacy of nonsteroidal anti-inflammatory drugs and anti-thromboxane agents in a rabbit adhesion-prevention model (
抗炎藥和抗-血栓烷劑在兔粘連預防模型中的功效比較).T Invest Surg (研究外科學雜志)8,187-194 ；Li 等，2004. Synthesis and biological evaluation of a cross-linked hyaluronan-mitomycin C hydrogel (交聯的透明質烷-絲裂霉素C水凝膠的合成和生物學評價)· Biomacromolecules (生物大分子)5，895-902)。由于所測試療法的有限功效和難以處理，當今腹腔中實施的大多數外科介入沒有應用任何產品預防粘連形成，術后粘連繼續導致患者的痛苦且帶給社會大量費用(Ray 等，1998.Abdominal adhesiolysis :inpatient care and expenditures in the United States in 1994 (腹部粘連松解術美國1994年住院病人護理和開支).J Am Coll Sun (美國外科醫師學會雜志)186，1-9. ；2005) 0本發明的目的是提供一種方式，其具有預防術后粘連形成的能力，而不具有當前可得的藥物組合物、裝置和操作的不需要的副作用。發明的描述
本發明人描述了使用來源于人乳鐵蛋白的生物學活性肽預防腹內粘連形成的新方法，所述肽配制于增強所述肽的療效的藥物組合物中。所述生物學活性肽對瘢痕形成的最重要的標志顯示抑制效應減少感染風險，抑制炎癥和促進纖維蛋白溶解作用。所述肽與天然存在的親水聚合物透明質酸一起配制，透明質酸提供藥物的緩釋特性并通過物理屏障效應促進最終結果。使用大鼠中的側壁缺陷盲腸擦傷模型(Sidewall defect-cecum abrasion model)，其被普遍公認為抗粘連藥物臨床功效的適宜的非-臨床預測器，顯示配制于透明質酸中的來源于人乳鐵蛋白的生物學活性肽顯著減少外科手術后腹內粘連。當配制于透明質酸中時，所述肽改善的效應是出人意料的，并且與單獨給予所述肽的效應和單獨給予透明質酸的效應相比是顯著協同的。因此，本發明涉及增強生物學活性肽，尤其是來源于人乳鐵蛋白的肽的療效的藥物組合物。本發明一方面提供用于治療和/或預防傷口、瘢痕和外科手術后粘連的藥物組合物，所述藥物組合物包含i) 一種或多種來源于人乳鐵蛋白的生物學活性肽，和ii)高分子量透明質酸。本發明另一方面提供i) 一種或多種來源于人乳鐵蛋白的生物學活性肽，和ii)高分子量透明質酸在制備用于治療和/或預防傷口、瘢痕和外科手術后粘連的藥物組合物中的用途。本發明還一方面提供用于治療、防止和/或預防傷口、瘢痕和外科手術后粘連的方法，包括向需要所述治療的受試者施用藥物組合物，所述藥物組合物包含i) 一種或多種來源于人乳鐵蛋白的生物學活性肽，和ii)高分子量透明質酸。所述"來源于人乳鐵蛋白的生物學活性肽"意思是這樣的生物學活性肽包含部分或完整地來源于人乳鐵蛋白序列的至少一個序列基序，其中這種序列基序可包含一種或多種氨基酸置換。所述"生物學活性"肽意思是具有一種或多種活性的肽，所述活性諸如抗炎活性，免疫調節活性，溶解纖維蛋白活性，抗-血管生成活性和抗-微生物活性，諸如抗菌活性、抗病毒活性或抗真菌活性。適合根據本發明使用的生物學活性肽描述于例如PCT/EP2008/064062，PCT/ EP2008/065186, WO 00/01730，相應的 EP 1095061 和 US 7253143，其通過引用并入本文。所述生物學活性肽可選自包含氨基酸序列Phe-Xl-X2-X3-X4-X5-X6-X7-Lys-Val-Arg(SEQ ID NO 1)的肽，其中氨基酸Xl是Gln或Ala，氨基酸X2是Trp或Leu，氨基酸X3是Gln，Ala，Orn, Nle或Lys，氨基酸X4是Arg，Ala或Lys，氨基酸)(5是Asn，Ala, Orn或We，氨基酸)(6是 Met, Ala 或 Leu,氨基酸 X7 是 Arg, Ala 或 Lys0優選的所述生物學活性肽可選自根據式(I)的肽和根據式(II)的肽Rl-Cys-Phe-Xl-X2-X3-X4-X5-X6-X7-Lys-Val-Arg-R2 式(I)其中Rl是無氨基酸，Lys或肽序列，所述肽序列選自Gly-Arg-Arg-Arg-Argler-Val-Gln-Trp-Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys. . . (SEQ ID NO 2)及其 N 端截短的片段，包括Arg-Arg-Arg-Arg-Ser-Val-Gln-Trp-Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys,
Arg-Arg-Arg-Ser-Val-Gln-Trp-Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys,Arg-Arg-Ser-Val-Gln-Trp-Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys,Arg-Ser-Val-Gln-Trp-Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys,Ser-Val-Gln-Trp-Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys,Val-Gln-Trp-Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys,Gln-Trp-Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys,Trp-Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys,Cys-Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys,Ala-Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys,Val-Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys,
Ser-Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys,
Gln-Pro-Glu-Ala-Thr-Lys,
Pro-Glu-Ala-Thr-Lys,
Glu-Ala-Thr-Lys,
Ala-Thr-Lys,
Thr-Lys-；并且其中R2是無氨基酸，Gly或肽序列，所述肽序列選自Gly-Pr0-Pr0-Val-Ser-Cys-Ile-Lys-Arg (SEQ ID NO 3)及其C端截短的片段，包括Gly-Pro-Pro-Val-Ser-Cys-Ile-Lys,Gly-Pro-Pro-Val-Ser-Cys-Ile,Gly-Pro-Pro-Val-Ser-Cys,Gly-Pro-Pro-Val-Ser,Gly-Pro-Pro-Val,Gly-Pro-ProJPGly-Pro。
權利要求
1.一種藥物組合物，包含i)一種或多種生物學活性肽，所述生物學活性肽包含氨基酸序列Phe-Xl-X2-X3-X4-X 5-X6-X7-Lys-Val-Arg(SEQ ID NO :1)，其中氨基酸Xl是Gln或Ala，氨基酸X2是Trp或Leu，氨基酸X3是Gln，Ala，Orn，Nle 或Lys，氨基酸X4是Arg，Ala或Lys，氨基酸)(5是Asn，Ala, Orn或We，氨基酸)(6是Met， Ala或Leu,氨基酸X7是Arg, Ala或Lys，和ii)高分子量透明質酸或高分子量透明質酸的藥用鹽。
2.根據權利要求1的藥物組合物，其中所述生物學活性肽是包含氨基酸序列SEQID NO 4的肽。
3.根據權利要求2的藥物組合物，其中所述生物學活性肽是包含氨基酸序列SEQID NO 56的環肽，其中兩個半胱氨酸形成半胱氨酸橋。
4.根據權利要求1的藥物組合物，其中所述生物學活性肽是包含氨基酸序列SEQID NO 50的肽。
5.根據權利要求1-4中任意一項的藥物組合物，其中所述高分子量透明質酸具有高于 300，OOODa，最優選高于800，OOODa的平均分子量。
6.根據權利要求1-5中任意一項的藥物組合物，其中所述肽以0.lmg/ml和100mg/ml 之間，最優選0. 5mg/ml和25mg/ml之間的濃度存在。
7.根據權利要求1-6中任意一項的藥物組合物，其中所述透明質酸以0.1和10% (w/ w)之間，最優選0. 5和2. 5% (w/w)之間的濃度存在。
8.根據權利要求1-7中任意一項的藥物組合物，其用于治療和/或預防傷口、瘢痕和外科手術后粘連。
9.i)來源于乳鐵蛋白的生物學活性肽，其包含氨基酸序列Wie-Xl-X2-X3-X4-X5-X6-X 7-Lys-Val-Arg(SEQ ID N0:l)jPii)高分子量透明質酸在制備用于治療和/或預防傷口、 瘢痕和外科手術后粘連的藥物中的用途。
10.一種用于治療、預防和/或防止傷口、瘢痕和外科手術后粘連的方法，包括向需要所述治療的受試者施用根據權利要求1-7中任意一項的藥物組合物。
11.一種用于減少外科手術后粘連形成的方法，包括施用根據權利要求1-7中任意一項的藥物組合物，并且其中所述施用導致外科手術后粘連形成的減少。
12.—種減少瘢痕形成的方法，包括施用根據權利要求1-7中任意一項的藥物組合物， 并且其中所述施用導致瘢痕形成的減少。
全文摘要
本發明涉及增強生物學活性肽，尤其是來源于人乳鐵蛋白的肽的療效的藥物組合物。所述組合物有效用于治療和/或預防傷口、瘢痕和外科手術后粘連。
文檔編號A61K9/06GK102271658SQ201080004064
公開日2011年12月7日 申請日期2010年1月12日 優先權日2009年1月13日
發明者韋羅妮卡·舍斯特蘭德, 馬爾吉特·馬拉普, 馬蒂亞斯·明尼希 申請人:瑞典外科制藥公司