專利名稱：氫氣飽和生理鹽水在制備治療高脂血癥疾病藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及醫藥技術領域，具體地說，是關于氫氣飽和生理鹽水在制備治療高脂血癥疾病藥物中的應用。
背景技術：
大量的基礎研究資料和臨床實踐證明，高脂血癥，包括高膽固醇血癥是腦卒中、冠心病、心肌梗死、心臟猝死等的重要危險因素。此外，高脂血癥也是促進高血壓、糖耐量異常、糖尿病的一個重要危險因素。高脂血癥還可導致脂肪肝、肝硬化、膽石癥、胰腺炎、眼底出血、失明、周圍血管疾病、跛行、高尿酸血癥等。對人體來說，高脂血癥的危害很大，血脂過高是加速動脈粥樣硬化多個因素中的最危險(易患)因素。目前臨床上應用的降脂藥物主要有兩類，即HMG-CoA還原酶抑制劑(他汀)類與貝丁酸(貝特)類。他汀類主要通過抑制HMG-CoA還原酶，減少體內膽固醇的合成，減少低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)的生成，從而反饋性刺激細胞膜表面(主要為肝細胞)LDL受體數量和活性增加、使血清膽固醇清除增加、水平降低。貝特類藥物對降低血漿甘油三酯(TG)和升高高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)都有明顯的效果。上述兩類藥物是目前常用的調血脂藥物，這些藥物各有其優缺點，人們也一直沒有停止過研究開發新型的降脂藥物。氫是自然界最簡單的元素，氫氣是無色、無嗅、無味、具有一定還原性的雙原子氣體。過去大部分生物學家一直認為，氫氣屬于生理性惰性氣體。最近的研究發現，氫氣不僅不是生理性惰性氣體，而且是一種非常理想的抗氧化物質，并啟動一個新的研究方向氫分子醫學。2007年7月，Ohsawa I等在《自然醫學》報道，動物呼吸洲的氫氣就可有效清除自由基，顯著改善腦缺血再灌注損傷，他們采用化學反應、細胞學等手段證明，氫氣溶解在液體中可選擇性中和羥自由基和亞硝酸陰離子，而后兩者是氧化損傷的最重要介質，目前體內尚未找到內源性特異性清除途徑。因此認為，氫氣治療腦缺血再灌注損傷的基礎是選擇性抗氧化作用。該研究迅速引起廣泛關注，并引起了研究氫氣治療疾病的熱潮。隨后的研究發現，氫對很多疾病具有治療作用，具有十分廣泛的應用前景，也推翻了氫氣屬于生理性惰性氣體的觀點。2008年日本學者曾經報道連續飲用6月氫氣水能對抗先天性基因缺陷引起的小鼠動脈粥樣硬化的發生發展(該文獻主要從抗炎、抗氧化這兩個方面研究)，我們團隊的研究結果亦證實了這一點。血脂過高是加速動脈粥樣硬化多個因素中的最危險(易患)因素之一，但迄今氫氣是否具有直接的降血脂作用仍無相關報道。故本研究我們采用高脂血癥金黃地鼠模型和可以自發產生動脈粥樣硬化的apoE基因敲除小鼠(apoE 7 )研究了氫氣的調脂作用及可能的機制。中國專利公開號CN101347451A公開了一種具有治療缺血再灌注損傷功能的含氫注射液，該發明是一種可用于治療腦、心、腎等組織器官缺血再灌注損傷的注射液。制備方法為將醫用注射液軟包裝袋置于低壓下脫氣處理，抽除氣體后進行低溫預處理，再注入氫氣進行加壓助溶，使氫氣溶于注射液，在常壓4°C左右保存備用，穩定M小時后就可使用。 但是關于氫氣飽和生理鹽水在制備治療高脂血癥疾病藥物中的應用目前還未見報道。
發明內容
本發明的目的是針對現有技術中的不足，提供一種氫氣飽和生理鹽水在制備治療高脂血癥疾病藥物中的新用途。本發明的再一的目的是，提供一種含氫口服液在制備降脂保健品中的新用途。為實現上述目的，本發明采取的技術方案是
氫氣飽和生理鹽水在制備治療高脂血癥疾病藥物中的應用。所述的高脂血癥疾病是指原發性高脂血癥或繼發性高脂血癥
需要說明的是原發性高脂血癥，就是原來無任何其他疾病而發生高脂血癥，一般是因為遺傳因素。繼發性高脂血癥，就是由于各種原因引起的高脂血癥，比如糖尿病、甲狀腺功能減退、腎病綜合征、腎移植、膽道阻塞、暴飲暴食、嗜酒、偏食、飲食不規律等、長期服用避孕藥、激素類藥物導致的高脂血癥。為實現上述第二個目的，本發明采取的技術方案是 一種含氫口服液在制備降脂保健品中的應用。所述的口服液選自純凈水、生理鹽水或葡萄糖生理鹽水。本發明優點在于
1、本發明開發了氫氣飽和生理鹽水的新用途，采用高脂血癥金黃地鼠模型，氫氣飽和生理鹽水腹腔注射4周后，取血檢測血漿膽固醇含量，結果顯示，氫氣治療組血漿總膽固醇 (TC)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平均明顯降低。2、氫生理鹽水制備簡單、注射濃度高、使用方便且無爆炸風險，成本很低，且無副作用，從動物實驗的結果來看具有良好的治療優勢，大大減少高脂血癥患者藥物副作用風險，并大大降低醫療成本。3、本發明還開發了一種含氫口服液在制備降脂保健品中的新用途，含氫口服液制備簡單，方便病人飲用，且無毒副作用，具有很好的治療高脂血癥的優勢。
圖1.氫氣飽和生理鹽水減少金黃地鼠LDL內載脂蛋白B含量。應用超速離心法分離血漿LDL (密度=1.006 - 1.063 g/ml)，將含有相同膽固醇含量的LDL上樣4-1 SDS-PAGE梯度膠，考馬斯亮藍染色觀察載脂蛋白B含量的變化。A，氫氣飽和生理鹽水對 apoE-/-小鼠血漿載脂蛋白B含量的影響(SDS-PAGE) ；B, SDS-PAGE光密度定量分析(n = 3)采用Quantity One軟件。# P < 0.01和模型組對照。圖2.氫氣飽和生理鹽水減少apoE-/-小鼠血漿載脂蛋白B含量。A，氫氣飽和生理鹽水對apoE-/-小鼠血漿載脂蛋白B含量的影響(western blot) ；B, western blot數據的光密度定量分析(n = 5)采用Quantity One軟件，* P < 0. 05，# P < 0. 01和模型組對照。
具體實施例方式下面結合附圖對本發明提供的具體實施方式
作詳細說明。實施例1一，材料和方法 (一)模型建立及分組
動物適應性飼養1周后分別造模，8周齡雄性金黃地鼠(110-140 g)除正常對照組外給予高脂飼料(15%豬油和0. 2%膽固醇)喂養，連續4周后內眥取血檢測血清總膽固醇TC含量。兼顧TC水平，按體重隨機分為4組，分別為模型組(生理鹽水腹腔注射組)、吐低劑量組 (1 ml/kg/d)、H2中劑量組(2. 5 ml/kg/d)和吐高劑量組(5 ml/kg/d)，每組10只。腹腔注射生理鹽水或氫氣飽和生理鹽水共4周。另外，45只雄性7-8周齡雄性apoE-/-小鼠用于本實驗。7-8周齡時，將M只給予高脂飲食(15.8%脂肪and 1.25%膽固醇)的apoE-/-小鼠隨機分成3組，模型組(生理鹽水腹腔注射組，n=8)、H2治療組(2. 5-5 ml/kg/d) (n=8，每組8只)。其余21只apoE-/-小鼠給予正常飲食，隨機分為3組，模型組(生理鹽水腹腔注射組，ri=7)、H2治療組(2. 5-5 ml/kg/d) (n=7，每組7只)。所有apoE-/"小鼠給予腹腔注射生理鹽水或氫氣飽和生理鹽水共8周。(二)氫氣飽和生理鹽水的制備
在0. 5 MI^a壓力下加壓暴露4 h，將純氫氣溶解于正常無菌生理鹽水中達到飽和水平，4°C貯存于移除氣體的密封生理鹽水袋中。所用氫氣飽和生理鹽水均為1周內配置，以維持氫氣濃度不低于0. 6 mM。(三)血漿學分析
金黃地鼠給予氫氣飽和生理鹽水腹腔注射4周后，禁食12小時并麻醉后，經內眥靜脈取血。ApoE-/"小鼠給予氫氣飽和生理鹽水腹腔注射8周，禁食12小時并麻醉后，經內眥靜脈取血。使用酶法(BioSino)測定血漿總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)。Non-HDL-C的含量為TC減去HDL-C。(四)血漿脂蛋白分析
應用超速離心法分離血漿脂蛋白VLDL (密度=0.95 1.006 g/ml), LDL (密度= 1. 006 - 1. 063 g/ml)和 HDL (density = 1. 063 - 1. 21 g/ml)。將含有相同膽固醇含量的 LDL上樣4-1 SDS-PAGE梯度膠，考馬斯亮藍染色觀察載脂蛋白B含量的變化。(五)免疫印跡
取0. 2 μ 1血漿置于90°C變性10分鐘后上樣SDS-PAGE，采用anti_apoB抗體(Abeam) 進行蛋白的免疫印記(western blot)分析。蛋白的觀察和量化分析采用化學發光法 (Pierce)和 Quantity One (Bio-Rad)軟件系統。(六)統計學分析
統計學分析用GraphPad Prism programme ver. 4. 0進行單因素方差分析檢驗。結果顯示為平均值士標準偏差。P值小于0.05為有顯著性差異。二，結果
(一)氫氣飽和生理鹽水對高脂血癥模型金黃地鼠血脂水平的影響表1實驗結果表明，金黃地鼠給予高脂飼料喂養后血漿Tc、LDL-C水平明顯升高，表明高脂血癥金黃地鼠模型造模成功。給予不同劑量氫氣飽和生理鹽水腹腔注射后，血漿中升高的TC、LDL-C水平顯著降低，HDL-C無明顯改變，表明氫氣飽和生理鹽水具有明顯的調血脂作用。表1.氫氣飽和生理鹽水對高脂血癥模型金黃地鼠血脂水平的影響
權利要求
1.氫氣飽和生理鹽水在制備治療高脂血癥疾病藥物中的應用。
2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述的高脂血癥疾病是指原發性高脂血癥或繼發性高脂血癥。
3.一種含氫口服液在制備降脂保健品中的應用。
4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述的口服液選自純凈水、生理鹽水或葡萄糖生理鹽水。
全文摘要
本發明涉及氫氣飽和生理鹽水在制備治療高脂血癥疾病藥物中的應用，本發明還提供了含氫口服液在制備降脂保健品中的應用。本發明開發了氫氣飽和生理鹽水的新用途，采用高脂血癥金黃地鼠模型，氫氣飽和生理鹽水腹腔注射4周后，取血檢測血漿膽固醇含量，結果顯示，氫氣治療組血漿總膽固醇(TC)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平均明顯降低。氫生理鹽水制備簡單、注射濃度高、使用方便且無爆炸風險，成本很低，且無副作用，從動物實驗的結果來看具有良好的治療優勢，大大減少高脂血癥患者藥物副作用風險，并大大降低醫療成本。
文檔編號A61P3/06GK102210701SQ201110160429
公開日2011年10月12日 申請日期2011年6月15日 優先權日2011年6月15日
發明者宋國華, 宗傳龍, 田華, 秦樹存 申請人:泰山醫學院