專利名稱：無羈萜-3β-醇在制備抗血管性癡呆的藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及無羈萜-3 β -醇的應用，具體地說，涉及無羈萜-3 β -醇在制備抗血管性癡呆的藥物中的應用。
背景技術：
血管性癡呆(Vascular Dementia，VD)是指各種腦血管疾病引起的腦功能障礙而產生的獲得性智能損害綜合癥。以記憶、認知功能缺損為主，可伴有言語、運動、視空間及人格障礙為主要臨床表現的一組神智異常癥候群。血管性癡呆是中老年人群的多發病、常見病，是老年期癡呆的主要類型之一。統計表明，在歐美國家中，血管性癡呆占老年癡呆總數的15%;在中國、日本等亞洲國家，血管性癡呆占老年癡呆總數的50%。目前，我國的血管性癡呆患病率為324/10萬，彡65歲人群中血管性癡呆的患病率為1. 3%。在各種腦血管疾病中，缺血性腦病的發病率最高，也是血管性癡呆最主要的致病因素。研究表明，腦缺血引起的遲發性神經元損傷以細胞凋亡為主，而大腦皮質和海馬神經元凋亡與學習記憶密切相關，是導致學習、記憶障礙的重要因素，這也是目前研究血管性癡呆的熱點之一。多數學者認為，凋亡的發生既是凋亡相關基因表達的結果，又受許多內外因素的調節。可能與以下幾個因素有關①缺血缺氧本身激活了凋亡發生基因；②腦缺血再灌注后產生大量自由基對神經細胞造成嚴重損傷的同時，也誘導了凋亡的發生；③Ca2+ 超載激活一系列鈣依賴性酶促反應，促進了凋亡的發生。目前，血管性癡呆治愈尚較困難，但多能通過藥物治療改善癥狀。主要的治療原則包括①用腦代謝賦活劑(輔酶Q1(l、胞二磷膽堿)和腦循環促進劑(氫化麥角堿、氟桂嗪)激活腦代謝，間接抑制癡呆的發展。腦代謝賦活劑主要通過促進葡萄糖吸收、代謝，繼發擴張腦血管，改善營養代謝，而腦循環促進劑是直接擴張腦血管的藥物；②治療神經傳遞阻滯的藥物，如金剛烷胺能促進多巴胺釋放，抑制其重攝取；高泛酸鈣可促進葡萄糖的腦內吸收和代謝，增加腦組織內5-羥色胺濃度和腦血流量，明顯改善神經癥狀；乙酰膽堿前體藥(卵磷脂、氯化膽堿)和膽堿脂酶抑制劑(毒扁豆堿、四氫胺基吡啶)通過增加乙酰膽堿系統的功能，改善神經癥狀；神經肽能夠提高老年人認識、記憶能力，減輕抑郁和無力癥狀；③對癥治療，常用甲硫達嗪、氟奮乃靜、氟呱丁醇等控制血管性癡呆患者急躁和過激行為；常用利他林、氯酯酰改善血管性癡呆患者抑郁癥狀；常用安定改善血管性癡呆患者焦慮癥狀。無羈萜-3 β -醇，提取于衛矛科植物衛矛[Euonymus alatus (Thunb. ) Sieb.] 及冬青衛矛[Euonymus japonicus Thunb.]白勺卩十；菊禾斗植物澤蘭[Eupatorium japonicum Thunb.]的葉、莖；大戟科植物金剛綦[Euphorbia antiquorum L.]及重陽木[Bischofia polycarpa (Levi. ) Airy Shaw]的莖、葉。分子式C3(1H520，分子量4 . 73，CAS 登錄號 5085-72-3，化學名稱24, 25，26-Trinoro 1 eanan-3-o 1, 5，9，13-trimethyl-, (3a, 4b, 5b, 8a, 9b, 10a, 13a, 14b)-。我們研究發現，無羈萜_3 β -醇可以有效抑制血管性癡呆大鼠神經組織形態學改變，提高血管性癡呆大鼠的認知、學習和記憶能力，明顯減輕血管性癡呆癥狀，治療效果優于麥角新堿、胞二磷膽堿、高泛酸鈣、金剛烷胺、卵磷脂。
發明內容
本發明的目的在于提供無羈萜-3 β -醇在制備抗血管性癡呆的藥物方面的新用途。具體地說，本發明涉及無羈萜-3 β -醇在制備抗血管性癡呆的藥物中的應用。其中，所述血管性癡呆，其特征在于，因各種腦血管疾病引起的腦功能障礙而產生的獲得性智能損害綜合癥，以記憶、認知功能缺損為主，可伴有言語、運動、視空間及人格障礙為主要臨床表現的一組神智異常癥候群。本發明所述無羈萜-3 β -醇提取于衛矛科植物衛矛[Euonymus alatus (Thunb.) Sieb.]及冬青衛矛[Euonymus japonicus Thunb.]的葉；菊科植物澤蘭[Eupatorium japonic· Thunb.]的葉、莖；大戟科植物金剛綦[Euphorbia antiquorum L.]及重陽木 [Bischofia polycarpa (Levi. ) Airy Shaw]的蓮、葉。本發明所述藥物是指以無羈萜-3 β-醇為主要活性成分，與可藥用載體制成的醫療上可接受的制劑，如片劑、丸劑或膠囊劑等。本發明所述藥物，其服用量以無羈萜-3 β-醇計成人，l(Tl5mg/次，3次/日；兒童，ο. Γο. ang/kg·次，3次/日，即可達到抑制血管性癡呆臨床癥狀的效果，特別地，孕婦等特殊人群服用時需遵醫囑。本發明所述無羈萜-3 β -醇可以直接通過市售得到，也可以通過植物提取得到。本發明通過大鼠跳臺試驗、大鼠避暗試驗證明了天然產物無羈萜-3 β-醇可以有效提高血管性癡呆大鼠的認知、學習、記憶能力，治療效果優于麥角新堿、胞二磷膽堿、高泛酸鈣、金剛烷胺、卵磷脂。本發明通過光鏡觀察發現，無羈萜-3 β -醇明顯抑制血管性癡呆大鼠海馬CAl區三層錐體細胞排列紊亂、錐體細胞腫脹、炎細胞浸潤、星形膠質細胞增生、部分錐體細胞胞體變小或呈三角形、頂樹突延長、核固縮和破裂、胞漿嗜伊紅色、基質疏松伴微空泡形成、血管周圍有紅細胞滲出等形態學改變。本發明通過電鏡觀察發現，無羈萜-3 β -醇明顯抑制管性癡呆大鼠海馬CAl區錐體細胞胞核固縮、染色質聚集、異染色質增多、核周高電子密度團塊出現、線粒體嵴融合等形態學改變。本發明的有益效果在于
1、本發明提供了無羈萜-3β-醇的新用途，其對血管性癡呆癥狀有很好的抑制作用。 無羈萜-3 β -醇明顯抑制血管性癡呆大鼠海馬CAl區三層錐體細胞形態學的改變，有效提高血管性癡呆大鼠的認知、學習、記憶能力，治療效果優于氫化麥角堿、胞二磷膽堿、高泛酸鈣、金剛烷胺、卵磷脂。
2、本發明采用的無羈萜-3β -醇提取來自純天然原料，化學結構和分子量明確，質量可控，符合國際市場第三代中藥產品的要求，有廣闊的市場前景。如果研究成功，將提高我國傳統中藥的國際地位，對保障人類健康及提高老年人生活質量做出貢獻。
圖1無羈萜-3β_醇對血管性癡呆大鼠跳臺、避暗試驗潛伏期的影響(殳±s)(與血管性癡呆模型組比較，*P<0.05 ；與高劑量無羈萜-3 β-醇組比較，#〈0.05)。
試驗結果顯示，無羈萜-3 β -醇明顯提高血管性癡呆大鼠跳臺、避暗試驗潛伏期，并且具有顯著的劑量依賴性；與氫化麥角堿、胞二磷膽堿、高泛酸鈣、金剛烷胺、卵磷脂對照組比較， 有明顯差異(P < 0. 05)。圖2無羈萜_3β-醇對血管性癡呆大鼠跳臺、避暗試驗錯誤次數的影響(^ 士 S)
(與血管性癡呆模型組比較，*Ρ<0. 05 ；與高劑量無羈萜-3 β-醇組比較，#<0. 05)。試驗結果顯示，無羈萜-3 β-醇明顯減少血管性癡呆大鼠跳臺、避暗試驗錯誤次數，并且具有顯著的劑量依賴性；與氫化麥角堿、胞二磷膽堿、高泛酸鈣、金剛烷胺、卵磷脂對照組比較，有明顯差異(P < 0. 05)。圖3 無羈萜-3 β-醇對血管性癡呆大鼠海馬CAl區皮層錐體細胞形態學的影響(光鏡0. 4ΚΧ )。血管性癡呆模型組海馬CAl區三層錐體細胞排列紊亂；部分錐體細胞腫脹，并有炎細胞浸潤，星形膠質細胞增生；部分錐體細胞胞體變小或呈三角形，頂樹突延長， 有核固縮和破裂現象，胞漿呈均勻嗜伊紅色；部分錐體細胞胞核變淺，基質疏松伴微空泡形成；血管周圍有紅細胞滲出，個別可見小血管增生。高劑量無羈萜-3 β-醇明顯抑制海馬 CAl錐體細胞形態學改變，細胞形態基本正常，可見典型的三層細胞排列。圖4無羈萜-3β-醇對血管性癡呆大鼠海馬CAl區皮層錐體細胞形態學的影響 (電鏡UKX )。血管性癡呆模型組海馬CAl區錐體細胞胞核固縮，染色質聚集成團、邊集，異染色質增多，核周可見高電子密度團塊；線粒體腫脹，有嵴融合并出現空泡變性。高劑量無羈萜-3 β -醇明顯抑制海馬CAl錐體細胞胞核及細胞器損傷，細胞器形態基本正常。
具體實施例方式以下通過實施例及試驗例來進一步闡述本發明的無羈萜-3 β-醇的新用途及其有益效果，但不用來限制本發明的范圍。試驗例1 檢測無羈萜-3 β -醇對大鼠跳臺、避暗試驗的影響。1、藥物無羈萜-3 β-醇(上海科興商貿有限公司)、氫化麥角堿(上海華太藥業股份有限公司)、胞二磷膽堿(蘇州天馬精細化學品股份有限公司)、高泛酸鈣(上海佳倫生物科技有限公司)、金剛烷胺(石家莊市三和藥業有限公司)、卵磷脂(廣州邦利生物科技有限公司)。2、儀器大鼠跳臺記錄系統(淮北正華生物儀器設備有限公司)、大鼠避暗儀(淮北正華生物儀器設備有限公司)。3、動物Sprague-Dawley (SD)大鼠，6周齡、雄性、180 220g、清潔級(河南省實驗動物中心)。4、實驗分組分組(1)空白對照組健康SD大鼠20只，每天清晨空腹三蒸水灌胃(灌胃容量為10ml/kg)，連續灌胃8周；(2)血管性癡呆模型組2V0法制備血管性癡呆大鼠模型20只；(3)低劑量無羈萜-3 β -醇組血管性癡呆模型大鼠20只，每天清晨空腹無羈萜-3 β -醇溶液灌胃(灌胃濃度0. lmg/kg,灌胃容量為10ml/kg)給藥，連續灌胃8周； (4)中劑量無羈萜-3 β -醇組血管性癡呆模型大鼠20只，每天清晨空腹無羈萜-3 β -醇溶液灌胃(灌胃濃度0. 5mg/kg，灌胃容量為10ml/kg)給藥，連續灌胃8周；(5)高劑量無羈萜-3 β -醇組血管性癡呆模型大鼠20只，每天清晨空腹無羈萜-3 β -醇溶液灌胃(灌胃濃度1.0mg/kg，灌胃容量為10ml/kg)給藥，連續灌胃8周；(6)氫化麥角堿組血管性癡呆模型大鼠20只，每天清晨空腹氫化麥角堿溶液灌胃(灌胃濃度2. Omg/kg,灌胃容量為IOml/ kg)給藥，連續灌胃8周；(7)胞二磷膽堿組血管性癡呆模型大鼠20只，每天清晨空腹胞二磷膽堿溶液灌胃(灌胃濃度1. Omg/kg，灌胃容量為10ml/kg)給藥，連續灌胃8周；(8)高泛酸鈣組血管性癡呆模型大鼠20只，每天清晨空腹高泛酸鈣溶液灌胃(灌胃濃度ang/kg， 灌胃容量為10ml/kg)給藥，連續灌胃8周；(9)金剛烷胺組血管性癡呆模型大鼠20只，每天清晨空腹金剛烷胺溶液灌胃(灌胃濃度0. 5mg/kg，灌胃容量為10ml/kg)給藥，連續灌胃 8周；(10)卵磷脂組血管性癡呆模型大鼠20只，每天清晨空腹卵磷脂溶液灌胃(灌胃濃度 0. ang/kg，灌胃容量為10ml/kg)給藥，連續灌胃8周。5、實驗內容大鼠跳臺試驗、大鼠避暗試驗。6、統計學方法所有數據以均數士標準差(^ 士 s)表示。組間差異比較用ANOVA 及Newman-Student多重比較；t檢驗分析，由SPSS 13. O統計軟件完成，雙側P < 0. 05認為差異有顯著性。7、結果
7. 1 無羈萜-3 β-醇對血管性癡呆大鼠跳臺試驗的影響試驗結果顯示，無羈萜-3 β -醇明顯提高血管性癡呆大鼠跳臺試驗潛伏期、減少錯誤次數，并且具有顯著的劑量依賴性；與氫化麥角堿、胞二磷膽堿、高泛酸鈣、金剛烷胺、卵磷脂對照組比較，存在明顯的差異(P <0.05)。(結果見表1)
表1無羈萜-3 β-醇對血管性癡呆大鼠跳臺試驗的影響(^ 士 s)
權利要求
1.無羈萜-3β -醇在制備抗血管性癡呆的藥物中的應用。
2.根據權利要求1所述的無羈萜-3β -醇，其特征在于，提取于衛矛科植物衛矛 [Euonymus alatus (Thunb.) Sieb.]及冬青衛矛[Euonymus japonicus Thunb.]白勺0十； 菊科植物澤蘭[Eupatorium japonicum Thunb.]的葉、莖；大戟科植物金剛綦[Euphorbia antiquorum L]及重陽木[Bischofia polycarpa (Levi.) Airy Shaw]的蓮、葉。
3.根據權利要求1所述的無羈萜-3β -醇，其特征在于，分子式=C3tlH52O,分子量 428. 73，CAS 登錄號5085-72_3，化學名稱24，25，26-Trinoro 1 eanan-3-o 1, 5，9，13-trime thyl-, (3a, 4b, 5b, 8a, 9b, 10a, 13a, 14b)-，結構式
4.根據權利要求1所述的血管性癡呆，其特征在于，因各種腦血管疾病引起的腦功能障礙而產生的獲得性智能損害綜合癥，以記憶、認知功能缺損為主，可伴有言語、運動、視空間及人格障礙為主要臨床表現的一組神智異常癥候群。
全文摘要
本發明提供了天然產物無羈萜-3β-醇在制備抗血管性癡呆的藥物中的應用。本發明經在體動物試驗驗證，無羈萜-3β-醇可以有效抑制血管性癡呆大鼠神經組織形態學改變，提高血管性癡呆大鼠的認知、學習和記憶能力，明顯減輕血管性癡呆癥狀。
文檔編號A61P25/18GK102397279SQ20111036633
公開日2012年4月4日 申請日期2011年11月18日 優先權日2011年11月18日
發明者孫瑞利, 尹雅玲, 張群妹, 朱利紅, 李嘉, 李建華, 李鵬, 楊麗霞, 楊靜, 段樹鵬, 王倩倩, 王國紅, 白瑞櫻, 趙蘊, 陳麗, 高建輝 申請人:新鄉醫學院