專利名稱：連翹苷在制備抗慢性粒細胞白血病的藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及連翹苷的應用，具體地說，涉及連翹苷在制備抗慢性粒細胞白血病的藥物中的應用。
背景技術：
慢性粒細胞白血病(chronic myelogenous leukemia，CML)是伴有獲得性染色體異常的多能干細胞水平上的惡性變而引起的一種細胞株病。Wi染色體t (9:22) (q34； qll)是其特征性的細胞遺傳學標志，P210BCR-ABL是其分子學發病基礎。該病起病緩慢，早期多無癥狀，主要表現為周身乏力、消瘦、多汗、食欲不振、腹脹、低熱，部分病例有不同程度出血。該病屬于造血干細胞惡性增殖性疾病，以粒系增生為主，無病態造血。骨髓增生呈極度活躍或明顯活躍狀態，粒紅比例可增至1(Γ50 :1，分類中常以中性中幼粒細胞、中性晚幼粒細胞及桿狀核細胞為主。外周血象中白細胞增高，一般在(10(Γ250) X 109/L,甚至可高達 1000X 109/L，分類中可見各階段粒細胞，以中性中幼粒細胞、中性晚幼粒細胞及桿狀、分葉核粒細胞為主。目前，臨床上CML的藥物治療方法主要包括①單種藥物治療，如馬利蘭壙8mg或羥基脲1.5 3.0g，靜注，1次/日；②聯合化療，如COAP方案(環磷酰胺400mg，靜注，1次/ 日，第1、4天使用；長春新堿廣ang，靜注，1次/日，第1天使用；阿糖胞苷50mg，靜注，每12 小時一次，連續使用5、天；強的松20mg，靜注，1次/日，連續使用5天；停藥7 10天后， 根據病情可重復應用直到癥狀完全緩解)或HA方案(三尖杉酯堿^ig/日，靜注，1次/日， 連續使用3天；阿糖胞苷10(T200mg，靜注，1次/日，連續使用7天；休息5 7天后，重復應用，共2 3療程；以后三尖杉酯堿lmg，靜注，1次/日，連續使用20天);③干擾素(IFN)治療，如 IFN-a-2b，2X106U/m2 5X106U/m2 或用 2X 107U/m2，靜注，1 次 / 日。傳統的慢性粒細胞白血病的治療目標著眼于殺傷細胞進而抑制增殖。這種療法通常在殺傷白血病細胞的同時對正常的造血細胞也可以產生抑制。自上世紀80年代中期，我國學者開展的全反式維甲酸有效治療急性早幼粒細胞白血病的研究，使腫瘤的誘導分化治療成為現實。迄今為止，已發現許多藥理活性物質如佛波酯、丁酸鈉、5-氮雜脫氧胞苷等均能誘導癌細胞分化，其中包括白血病細胞和某些實體瘤細胞。連翹苷，提取于木犀科植物連翹[Forsythia suspensa (Thunb. ) Vahl]的干燥果實，分子式為C27H34O11,分子量為534. 55。我們研究發現，連翹苷能夠抑制K562白血病細胞增殖、誘導K562白血病細胞向紅系分化。
發明內容
本發明的目的在于提供連翹苷在制備抗慢性粒細胞白血病的藥物方面的新用途。具體地說，本發明涉及連翹苷在制備抗慢性粒細胞白血病的藥物中的應用。其中，所述的應用，其特征在于抑制K562白血病細胞增殖、誘導K562白血病細胞向紅系分化。
本發明所述的連翹苷提取于木犀科植物連翹[Forsythia suspensa (Thunb.) Vahl]的干燥果實。本發明所述藥物是指以連翹苷為主要活性成分，與可藥用載體制成的醫療上可接受的制劑，如注射液、片劑、丸劑或膠囊劑等。本發明所述藥物，其用量以連翹苷計成人，4(T50mg/次，2次/日；兒童， l(Tl5mg/kg·次，2次/日，即可達到抑制白血病細胞增殖并誘導分化的作用。特別地，孕婦等特殊人群應用時需遵醫囑。本發明所述連翹苷可以直接通過市售得到，也可以通過植物提取得到。本發明通過2，3-雙(2-甲氧基-4-硝基-5磺基苯)_5_ [(苯胺基)羰基)]-二氫-四氮唑氫(XTT)試驗證明了連翹苷可以抑制K562白血病細胞增殖。本發明通過集落形成試驗證明了連翹苷可以抑制K562白血病細胞增殖。本發明通過形態學試驗證明了連翹苷可以抑制K562白血病細胞增殖，并有誘導分化的趨勢。本發明通過流式細胞儀檢測K562白血病細胞周期，發現連翹苷對K562白血病細胞的增殖抑制作用可能是由于將K562白血病細胞周期阻滯在S期所致。本發明通過血紅蛋白聯苯胺染色證明了連翹苷具有誘導K562白血病細胞向產生血紅蛋白的終末細胞分化的能力。本發明通過流式細胞儀檢測K562白血病細胞胞膜上⑶71表面標記，證明了連翹苷可以誘導K562白血病細胞向紅系分化。本發明的有益效果在于
1、本發明提供了連翹苷的新用途，其對K562白血病細胞有很好的抑制增殖作用，并可以誘導K562白血病細胞向紅系分化。
2、本發明采用的連翹苷提取于純天然植物，其化學結構和含量明確，質量可控，符合國際市場第三代中藥產品的要求，有廣闊的市場前景。如果研究成功，將提高我國傳統中藥的國際地位，對保障人類健康做出貢獻。
圖1連翹苷對K562白血病細胞形態學的影響(X400)。試驗結果顯示，K562白血病細胞經連翹苷處理后細胞體積變大，核漿比例減少，有核切跡，核染色質濃集、變粗，部分細胞核仁比較明顯，胞質增多、淺染，核周胞質出現淡染區，表現一定程度的分化。圖2連翹苷對K562白血病細胞內血紅蛋白聯苯胺染色的影響。試驗結果顯示， 連翹苷具有誘導K562白血病細胞向產生血紅蛋白的終末細胞分化的能力，并具有劑量依賴性。圖3連翹苷對K562白血病細胞膜⑶71表面標記的影響。試驗結果顯示，連翹苷可以誘導K562白血病細胞向紅系分化，并具有劑量依賴性。
具體實施例方式以下通過實施例及試驗例來進一步闡述本發明的連翹苷的新用途及其有益效果， 但不用來限制本發明的范圍。
試驗例1 連翹苷對K562白血病細胞的增殖抑制作用。1、藥物連翹苷(上海科興商貿有限公司)，XTT (美國Sigma公司)。2、儀器ELX_800酶標儀(美國Bio-Tek公司)。3、細胞K562白血病細胞(中國科學院上海生科院細胞資源中心)。4、實驗分組(1)空白對照組；(2)10_5mol/L羥基脲對照組；(3)10_7mol/L連翹苷組；(4) KTmol/L連翹苷組；(5) lO—W/L連翹苷組；(6) lO—W/L連翹苷組。5、實驗內容XTT試驗。6、統計學方法采用SPSS13.0軟件，實驗數據以( χ 士S)表示，細胞計數多組間比較采用重復測量方差分析，多均數間比較采用單因素方差分析，以Ρ<0. 05為差異有統計學意義。7、結果10_4mol /L連翹苷可以顯著抑制K562白血病細胞增殖，與空白對照組相比，具有顯著性差異(P<0. 05 )；與10_5mo 1/L羥基脲對照組相比，無顯著性差異(P > 0. 05 )； 連翹苷抑制K562白血病細胞增殖作用具有明顯的劑量依賴性。(表1)
表1連翹苷對K562白血病細胞XTT的影響
權利要求
1.連翹苷在制備抗慢性粒細胞白血病的藥物中的應用。
2.根據權利要求1所述的連翹苷，其特征在于，提取于木犀科植物連翹[Forsythia suspensa (Thunb. ) Vahl]的干燥果實。
3.根據權利要求1所述的連翹苷，其特征在于，分子式=C27H34O11,分子量534.55， CAS 登錄號487-41-2，化學名稱b-D-Glucopyranoside，4-[4-(3，4-dimethoxyphenyl) tetrahydro-ΙΗ, 3H-furo[3, 4-c]furan-l-yl]-2-methoxyphenyl, [IS- (la,3aa,4b,6a a)]_，結構式:
4.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，抑制K562白血病細胞增殖、誘導K562白血病細胞向紅系分化。
全文摘要
本發明提供了連翹苷在制備抗慢性粒細胞白血病的藥物中的應用。本發明經細胞試驗驗證，連翹苷能夠抑制K562白血病細胞增殖、誘導K562白血病細胞向紅系分化。
文檔編號A61K31/7048GK102406652SQ20111036633
公開日2012年4月11日 申請日期2011年11月18日 優先權日2011年11月18日
發明者侯麗娟, 劉雨晴, 尚校軍, 尹雅玲, 律海峽, 朱利紅, 李嘉, 李福林, 李鵬, 段樹鵬, 潘國聘, 王倩倩, 王蘇, 賈建偉, 趙繁榮, 高建輝 申請人:新鄉醫學院