專利名稱：一種ctx介導的靶向納米載體及納米載藥體系的制作方法
技術領域：
本發明屬于藥物靶向載體領域，特別涉及ー種CTX介導的靶向納米載體及納米載藥體系。
背景技術：
腫瘤的靶向治療主要有被動靶向、主動靶向及抑制腫瘤部位血管生成等方式。被動靶向作用是基于腫瘤組織對大分子的增強滲透與保留(EPR)效應而實現的；主動靶向是采用單克隆抗體及其他配體如葉酸、鐵傳遞蛋白等作用于靶向位點；抑制血管生成的治療主要包括阻止腫瘤部位血管生成所必需的生長因子或酶的合成及抑制內皮細胞的分化、活化、遷移及増殖等。較于一般的抗腫瘤藥物，靶向給藥具有以下特點(I)靶向性，藥物集中于靶區；(2)減少用藥劑量，提高療效；(3)持續性；(4)減少藥物的毒副作用。Chlorotoxin(CTX)是ー種含有30-35個氨基酸的分子量約為4_kD的蝎毒素活性肽，在動物模型中表現出腦腫瘤細胞靶向性；通過對不同病例組織切片研究發現CTX對于神經外胚層來源的腫瘤包括周圍神經外胚層腫瘤細胞和神經膠質瘤細胞均表現出高度特異性和結合能力，而對于正常細胞則表現為陰性，這表明CTX具有腦腫瘤特異性，可用于神經源性腫瘤的靶向作用。隨后研究進ー步發現CTX的高度特異性表現在特異性地識別細胞表面的基質金屬蛋白酶-2(MMP-2)，MMP-2是神經源性腫瘤細胞的膜結合酶，在內皮細胞分化增殖過程中分泌產生，可降解細胞外基質而促使腫瘤組織的遷移與浸潤，因此CTX可抑制腫瘤細胞的遷移與浸潤，從而抑制腫瘤部位的血管生成。進ー步的體內外納米探針研究顯示CTX具有良好的靶向性，與熒光分子結合可作為特異作用位點的有效標記。以上結果表明CTX可作為具有高度特異性的靶向分子，因此研制CTX介導的靶向載體具有重要的研究意義及應用。
發明內容
本發明的目的在于提供ー種CTX介導的靶向納米載體。 本發明的目的同時在于提供ー種CTX介導的靶向納米載藥體系。為了實現上述目的，本發明采用的技術方案如下ー種CTX介導的靶向納米載體，通過包括以下步驟的制備方法制得(I)配制質量體積比為O. 01-0. I g/ml的、PH = 7-9的殼聚糖親水性衍生物緩沖溶液；向其中加入聚こニ醇-琥珀酰亞胺酷水溶液，殼聚糖親水性衍生物與聚こニ醇-琥珀酰亞胺酯的摩爾比I : (O. 2-5)，反應I. 5-2. 5h，得殼聚糖親水性衍生物-聚こニ醇溶液；(2) CTX用巰基試劑修飾，CTX與巰基試劑的摩爾比是I : (2_6)，得CTX-巰基試劑；(3)將殼聚糖親水性衍生物-聚こニ醇與CTX-巰基試劑以摩爾比I : (3-8)混合，室溫反應l_3h，加入こ醇析出沉淀，混合液與こ醇的體積比I : (2-5)，過濾，得CTX-殼聚糖親水性衍生物；
(4)配制質量體積比為O. 01-0. I g/ml的CTX-殼聚糖親水性衍生物溶液，加入其體積(2. 5-10) %的ニ氯甲烷，混勻，抽真空，加入ニ氯甲烷體積O. 5-1倍的固化劑，攪拌固化50_60min,得CTX介導的革巴向納米載體。步驟(I)中的殼聚糖親水性衍生物是羧甲基殼聚糖或殼聚糖季銨鹽親水性衍生物。步驟(I)中的殼聚糖親水性衍生物緩沖溶液是殼聚糖親水性衍生物磷酸鹽緩沖溶液。步驟(2)中的巰基試劑是2-亞氨基硫烷鹽酸鹽。步驟(4)中混勻時超聲或高速均質。步驟(4)中的固化劑是O. 25%的多聚磷酸鈉溶液或O. 5%的氫氧化鈣溶液。
ー種CTX介導的靶向納米載藥體系，通過包括以下步驟的制備方法制得(I)配制質量體積比為O. 01-0. I g/ml的、PH = 7-9的殼聚糖親水性衍生物緩沖溶液；向其中加入聚こニ醇-琥珀酰亞胺酷水溶液，殼聚糖親水性衍生物與聚こニ醇-琥珀酰亞胺酯的摩爾比I : (O. 2-5)，反應I. 5-2. 5h，得殼聚糖親水性衍生物-聚こニ醇溶液；(2) CTX用巰基試劑修飾，CTX與巰基試劑的摩爾比是I : (2_6)，得CTX-巰基試劑；(3)將殼聚糖親水性衍生物-聚こニ醇與CTX-巰基試劑以摩爾比I : (3-8)混合，室溫反應l_3h，加入こ醇析出沉淀，混合液與こ醇的體積比I : (2-5)，過濾，得CTX-殼聚糖親水性衍生物；(4)向質量體積比為O. 01-0. I g/ml的CTX-殼聚糖親水性衍生物溶液中加入活性物質，所述活性物質的用量是CTX-殼聚糖親水性衍生物質量的O. 01-1倍，混勻，再加入CTX-殼聚糖親水性衍生物溶液體積(2. 5-10) %的ニ氯甲烷，混勻，抽真空，加入ニ氯甲烷體積O. 5-1倍的固化劑，攪拌固化50-60min，得CTX介導的靶向納米載體。ー種CTX介導的靶向納米載藥體系，通過包括以下步驟的制備方法制得(I)配制質量體積比為O. 01-0. I g/ml的、PH = 7-9的殼聚糖親水性衍生物緩沖溶液；向其中加入聚こニ醇-琥珀酰亞胺酷水溶液，殼聚糖親水性衍生物與聚こニ醇-琥珀酰亞胺酯的摩爾比I : (O. 2-5)，反應I. 5-2. 5h，得殼聚糖親水性衍生物-聚こニ醇溶液；(2) CTX用巰基試劑修飾，CTX與巰基試劑的摩爾比是I : (2_6)，得CTX-巰基試劑；(3)將殼聚糖親水性衍生物-聚こニ醇與CTX-巰基試劑以摩爾比I : (3-8)混合，室溫反應l_3h，加入こ醇析出沉淀，混合液與こ醇的體積比I : (2-5)，過濾，得CTX-殼聚糖親水性衍生物；(4)配制質量體積比為O. 01-0. I g/ml的CTX-殼聚糖親水性衍生物溶液，加入其體積(2. 5-10) %的ニ氯甲烷，混勻，抽真空，加入ニ氯甲烷體積O. 5-1倍的固化劑，攪拌固化50-60min,得CTX介導的革巴向納米載體；(5)向CTX介導靶向納米載體中加入活性物質，所述活性物質的用量是CTX-殼聚糖親水性衍生物質量的0.01-1倍，繼續攪拌，得到CTX介導的靶向納米載藥體系。所述的活性物質是阿霉素、巰嘌呤、紫杉醇、5-氟尿嘧啶任ー種。相對于現有技術，本發明有以下優點(I)本發明的CTX介導的靶向納米載體體系生物相容性、緩釋性能及靶向性良好。(2)由于CTX-殼聚糖衍生物具有CTX的高度靶向選擇性，使納米載體識別并結合于腫瘤細胞表面的MMP-2起到靶向作用，同時阻止腫瘤組織的血管生成；而載體攜帶的活性物質,可定位釋放于腫瘤部位以殺死腫瘤細胞,因此該載體系統可以起到雙重的靶向抑制及殺死腫瘤細胞的作用。(3)本發明納米載體和載藥體系的制備方法操作簡便、エ藝穩定、成本低廉，對原材料有廣泛的適用性，所有具有親水性取代基團的殼聚糖衍生物均可，原料來源十分廣泛。
圖I為實施例I納米載體不同浸提時間對小鼠成纖維細胞生長的影響的柱狀圖；圖2為實施例3納米載體不同浸提時間對Hela細胞生長的影響的曲線圖；
圖3實施例5、實施例9制得的納米載藥體系的體外釋放的曲線圖。
具體實施例方式以下結合具體實施例來說明本發明的技術方案。本發明所用試劑均可從市面購買，如生エ生物工程(上海)有限公司、上海易利生化試劑有限公司等。實施例I.本實施例CTX介導的靶向納米載體，通過包括以下步驟的制備方法制得(I)制備殼聚糖季銨鹽衍生物，配制質量體積比(g/ml)為I %的、PH = 7的殼聚糖季銨鹽衍生物磷酸鹽緩沖溶液；向其中加入聚こニ醇-琥珀酰亞胺酷水溶液，殼聚糖季銨鹽衍生物與聚こニ醇-琥珀酰亞胺酯的摩爾比I : O. 2，反應I. 5h，得殼聚糖季銨鹽衍生物-聚こニ醇溶液；(2)CTX用2-亞氨基硫烷鹽酸鹽以摩爾比I : 2修飾，得CTX-巰基試劑；(3)將殼聚糖季銨鹽衍生物-聚こニ醇與CTX-巰基試劑以摩爾比I : 3室溫反應lh，加入こ醇析出沉淀，混合液與こ醇的體積比I : 2，過濾，得CTX-殼聚糖季銨鹽衍生物；(4)將O. 40g CTX-殼聚糖季銨鹽衍生物加入40ml去離子水中制得質量體積百分比濃度為I %的CTX-殼聚糖衍生物溶液，攪拌溶解，加入ニ氯甲烷Iml (與CTX-殼聚糖衍生物溶液體積比為2. 5% )，16000rpm高速均質5min，重復操作3次，置真空干燥器中抽真空30min ;然后邊攪拌邊滴加交聯劑O. 25%的多聚磷酸鈉溶液1ml，攪拌固化55min，即得CTX介導祀向納米載藥體系。實施例2.本實施例CTX介導的靶向納米載體，通過包括以下步驟的制備方法制得(I)制備殼聚糖季銨鹽衍生物，配制質量體積比(g/ml)為3%的、PH = 8的殼聚糖季銨鹽衍生物磷酸鹽緩沖溶液；向其中加入聚こニ醇-琥珀酰亞胺酷水溶液，殼聚糖季銨鹽衍生物與聚こニ醇-琥珀酰亞胺酯的摩爾比I : I，反應2h，得殼聚糖季銨鹽衍生物-聚こニ醇溶液；(2)CTX用巰基試劑2-亞氨基硫烷鹽酸鹽以摩爾比I : 3修飾，得CTX-巰基試劑；(3)將殼聚糖季銨鹽衍生物-聚こニ醇與CTX-巰基試劑以摩爾比I : 5室溫反應2h，加入こ醇析出沉淀，混合液與こ醇的體積比I : 3，過濾，得CTX-殼聚糖季銨鹽衍生物；
(4)將I. OgCTX-羧甲基殼聚糖衍生物加入40ml去離子水中制得質量體積百分比濃度為2. 5%的CTX-殼聚糖衍生物溶液，攪拌分散均勻，加入ニ氯甲烷2ml (與CTX-殼聚糖衍生物溶液體積比為5% )，超聲振蕩5min，重復操作3次，置真空干燥器中抽真空50min ；然后邊攪拌邊滴加交聯劑O. 25%的多聚磷酸鈉溶液2ml，攪拌固化50min，即得CTX介導靶向納米載藥體系。實施例3.本實施例CTX介導的靶向納米載體，通過包括以下步驟的制備方法制得(I)制備羧甲基殼聚糖衍生物，配制質量體積比(g/ml)為8%的、PH = 9的羧甲基殼聚糖衍生物磷酸鹽緩沖溶液；向其中加入聚こニ醇-琥珀酰亞胺酷水溶液，羧甲基殼聚糖衍生物與聚こニ醇-琥珀酰亞胺酯的摩爾比I : 3，反應2.5h，得羧甲基殼聚糖衍生物-聚こニ醇溶液；(2)CTX用巰基試劑2-亞氨基硫烷鹽酸鹽以摩爾比I : 3. 5修飾，得CTX-巰基試 劑；(3)將羧甲基殼聚糖衍生物-聚こニ醇與CTX-巰基試劑以摩爾比I : 6室溫反應3h，加入こ醇析出沉淀，混合液與こ醇的體積比I : 4，過濾，得CTX-羧甲基殼聚糖衍生物；(4)將2. OgCTX-殼聚糖季銨鹽衍生物加入40ml去離子水中制得質量體積百分比濃度為5%的CTX-殼聚糖衍生物溶液，攪拌分散均勻，加入ニ氯甲烷I. 5ml (與CTX-殼聚糖衍生物溶液體積比為2. 5% )，20000rpm高速均質5min，重復操作3次，置真空干燥器中抽真空60min ;然后邊攪拌邊滴加交聯劑O. 5%的氫氧化I丐溶液Iml,攪拌固化60min,即得CTX介導靶向納米載藥體系。實施例4.本實施例CTX介導的靶向納米載體，通過包括以下步驟的制備方法制得(I)制備羧甲基殼聚糖衍生物，配制質量體積比(g/ml)為10%的、PH = 7. 5的羧甲基殼聚糖衍生物磷酸鹽緩沖溶液；向其中加入聚こニ醇-琥珀酰亞胺酷水溶液，羧甲基殼聚糖衍生物與聚こニ醇-琥珀酰亞胺酯的摩爾比I : 5，反應2h，得羧甲基殼聚糖衍生物-聚こニ醇溶液；(2)CTX用巰基試劑2-亞氨基硫烷鹽酸鹽以摩爾比I : 6修飾，得CTX-巰基試劑；(3)將羧甲基殼聚糖衍生物-聚こニ醇與CTX-巰基試劑以摩爾比I : 8室溫反應2h，加入こ醇析出沉淀，混合液與こ醇的體積比I : 5，過濾，得CTX-羧甲基殼聚糖衍生物；(4)將4. OgCTX-羧甲基殼聚糖衍生物加入40ml去離子水中制得質量體積百分比濃度為10%的CTX-殼聚糖衍生物溶液，攪拌分散均勻，加入ニ氯甲烷4ml (與CTX-殼聚糖衍生物溶液體積比為10% )，超聲振蕩8min，重復操作3次，置真空干燥器中抽真空45min ；然后邊攪拌邊滴加交聯劑O. 25%的多聚磷酸鈉溶液2ml，攪拌固化50min，即得CTX介導靶向納米載藥體系。實施例5.本實施例CTX介導的祀向納米載藥載體,通過包括以下步驟的制備方法制得(I)制備殼聚糖季銨鹽衍生物，配制質量體積比(g/ml)為I %的、PH = 7的殼聚糖季銨鹽衍生物磷酸鹽緩沖溶液；向其中加入聚こニ醇-琥珀酰亞胺酷水溶液，殼聚糖季銨鹽衍生物與聚こニ醇-琥珀酰亞胺酯的摩爾比I : O. 2，反應I. 5h，得殼聚糖季銨鹽衍生物-聚こニ醇溶液；(2)CTX用巰基試劑2-亞氨基硫烷鹽酸鹽以摩爾比I : 2修飾，得CTX-巰基試劑；(3)將殼聚糖季銨鹽衍生物-聚こニ醇與CTX-巰基試劑以摩爾比I : 3室溫反應lh，加入こ醇析出沉淀，混合液與こ醇的體積比I : 2，過濾，得CTX-殼聚糖季銨鹽衍生物；(4)將O. 40g CTX-殼聚糖季銨鹽衍生物加入40ml去離子水中制得質量體積百分比濃度為1%的CTX-殼聚糖衍生物溶液，攪拌均勻，加入阿霉素O. 4g，攪拌溶解，加入ニ氯甲烷Iml (與CTX-殼聚糖衍生物溶液體積比為2. 5% )，16000rpm高速均質5min，重復操作3次，置真空干燥器中抽真空30min ;然后邊攪拌邊滴加交聯劑O. 25%的多聚磷酸鈉溶液Iml,攪拌固化55min,即得CTX介導祀向納米載藥體系。
實施例6.本實施例CTX介導的靶向納米載藥載體，通過包括以下步驟的制備方法制得(I)制備羧甲基殼聚糖衍生物，配制質量體積比(g/ml)為3%的、PH = S的羧甲基殼聚糖衍生物磷酸鹽緩沖溶液；向其中加入聚こニ醇-琥珀酰亞胺酷水溶液，羧甲基殼聚糖衍生物與聚こニ醇-琥珀酰亞胺酯的摩爾比I : I，反應2h，得羧甲基殼聚糖衍生物-聚こニ醇溶液；(2)CTX用巰基試劑2-亞氨基硫烷鹽酸鹽以摩爾比I : 2. 5修飾，得CTX-巰基試劑；(3)將羧甲基殼聚糖衍生物-聚こニ醇與CTX-巰基試劑以摩爾比I : 5室溫反應2h，加入こ醇析出沉淀，混合液與こ醇的體積比I : 3，過濾，得CTX-羧甲基殼聚糖衍生物；(4)將I. OgCTX-羧甲基殼聚糖衍生物加入40ml去離子水中制得質量體積百分比濃度為2. 5 %的CTX-殼聚糖衍生物溶液，攪拌均勻，加入巰嘌呤O. 25g，攪拌分散均勻，加入ニ氯甲烷2ml (與CTX-殼聚糖衍生物溶液體積比為5 % )，超聲振蕩5min，重復操作3次，置真空干燥器中抽真空50min ;然后邊攪拌邊滴加交聯劑O. 25%的多聚磷酸鈉溶液2ml，攪拌固化50min,即得CTX介導祀向納米載藥體系。實施例7.本實施例CTX介導的靶向納米載藥載體，通過包括以下步驟的制備方法制得(I)制備殼聚糖季銨鹽衍生物，配制質量體積比(g/ml)為8%的、PH = 9的殼聚糖季銨鹽衍生物磷酸鹽緩沖溶液；向其中加入聚こニ醇-琥珀酰亞胺酷水溶液，殼聚糖季銨鹽衍生物與聚こニ醇-琥珀酰亞胺酯的摩爾比I : 3，反應2. 5h，得殼聚糖季銨鹽衍生物-聚こニ醇溶液；(2)CTX用巰基試劑2-亞氨基硫烷鹽酸鹽以摩爾比I : 5修飾，得CTX-巰基試劑；(3)將殼聚糖季銨鹽衍生物-聚こニ醇與CTX-巰基試劑以摩爾比I : 6室溫反應3h，加入こ醇析出沉淀，混合液與こ醇的體積比I : 4，過濾，得CTX-殼聚糖季銨鹽衍生物；(4)將2. OgCTX-殼聚糖季銨鹽衍生物加入40ml去離子水中制得質量體積百分比濃度為5%的CTX-殼聚糖衍生物溶液，攪拌均勻，加入紫杉醇lg，攪拌分散均勻，加入ニ氯甲烷I. 5ml (與CTX-殼聚糖衍生物溶液體積比為2. 5% ), 20000rpm高速均質5min，重復操作3次，置真空干燥器中抽真空60min ;然后邊攪拌邊滴加交聯劑O. 5%的氫氧化鈣溶液Iml,攪拌固化60min,即得CTX介導祀向納米載藥體系。實施例8.本實施例CTX介導的靶向納米載藥載體，通過包括以下步驟的制備方法制得(I)制備羧甲基殼聚糖衍生物，配制質量體積比(g/ml)為10%的、PH = 7. 5的羧甲基殼聚糖衍生物磷酸鹽緩沖溶液；向其中加入聚こニ醇-琥珀酰亞胺酷水溶液，羧甲基殼聚糖衍生物與聚こニ醇-琥珀酰亞胺酯的摩爾比I : 5，反應2h，得羧甲基殼聚糖衍生物-聚こニ醇溶液；(2)CTX用巰基試劑2-亞氨基硫烷鹽酸鹽以摩爾比I : 6修飾，得CTX-巰基試劑；(3)將羧甲基殼聚糖衍生物-聚こニ醇與CTX-巰基試劑以摩爾比I : 8室溫反應2h，加入こ醇析出沉淀，混合液與こ醇的體積比I : 5，過濾，得CTX-羧甲基殼聚糖衍生物；(4)將4. OgCTX-羧甲基殼聚糖衍生物加入40ml去離子水中制得質量體積百分比濃度為10 %的CTX-殼聚糖衍生物溶液，攪拌均勻，加入5-氟尿嘧啶O. 04g，攪拌分散均勻，加入ニ氯甲烷4ml (與CTX-殼聚糖衍生物溶液體積比為10% )，超聲振蕩8min，重復操作 3次，置真空干燥器中抽真空45min ;然后邊攪拌邊滴加交聯劑O. 25%的多聚磷酸鈉溶液2ml，攪拌固化50min，即得CTX介導靶向納米載藥體系。實施例9.本實施例CTX介導的靶向納米載體，通過包括以下步驟的制備方法制得(I)制備殼聚糖季銨鹽衍生物，配制質量體積比(g/ml)為I %的、PH = 7的殼聚糖季銨鹽衍生物磷酸鹽緩沖溶液；向其中加入聚こニ醇-琥珀酰亞胺酷水溶液，殼聚糖季銨鹽衍生物與聚こニ醇-琥珀酰亞胺酯的摩爾比I : O. 2，反應I. 5h，得殼聚糖季銨鹽衍生物-聚こニ醇溶液；(2)CTX用2-亞氨基硫烷鹽酸鹽以摩爾比I : 2修飾，得CTX-巰基試劑；(3)將殼聚糖季銨鹽衍生物-聚こニ醇與CTX-巰基試劑以摩爾比I : 3室溫反應lh，加入こ醇析出沉淀，混合液與こ醇的體積比I : 2，過濾，得CTX-殼聚糖季銨鹽衍生物；(4)將O. 40g CTX-殼聚糖季銨鹽衍生物加入40ml去離子水中制得質量體積百分比濃度為I %的CTX-殼聚糖衍生物溶液，攪拌溶解，加入ニ氯甲烷Iml (與CTX-殼聚糖衍生物溶液體積比為2. 5% )，16000rpm高速均質5min，重復操作3次，置真空干燥器中抽真空30min ;然后邊攪拌邊滴加交聯劑O. 25%的多聚磷酸鈉溶液1ml，攪拌固化55min，即得CTX介導祀向納米載藥體系。(5)向CTX介導靶向納米載藥體系中加入阿霉素O. 4g，繼續攪拌，得到CTX介導的革巴向納米載藥體系。實施例10.本實施例CTX介導的靶向納米載體，通過包括以下步驟的制備方法制得(I)制備殼聚糖季銨鹽衍生物，配制質量體積比(g/ml)為3%的、PH = 8的殼聚糖季銨鹽衍生物磷酸鹽緩沖溶液；向其中加入聚こニ醇-琥珀酰亞胺酷水溶液，殼聚糖季銨鹽衍生物與聚こニ醇-琥珀酰亞胺酯的摩爾比I : I，反應2h，得殼聚糖季銨鹽衍生物-聚こニ醇溶液；(2)CTX用巰基試劑2-亞氨基硫烷鹽酸鹽以摩爾比I : 3修飾，得CTX-巰基試劑；(3)將殼聚糖季銨鹽衍生物-聚こニ醇與CTX-巰基試劑以摩爾比I : 5室溫反應2h，加入こ醇析出沉淀，混合液與こ醇的體積比I : 3，過濾，得CTX-殼聚糖季銨鹽衍生物；(4)將I. OgCTX-羧甲基殼聚糖衍生物加入40ml去離子水中制得質量體積百分比濃度為2. 5%的CTX-殼聚糖衍生物溶液，攪拌分散均勻，加入ニ氯甲烷2ml (與CTX-殼聚糖衍生物溶液體積比為5% )，超聲振蕩5min，重復操作3次，置真空干燥器中抽真空50min ；然后邊攪拌邊滴加交聯劑O. 25%的多聚磷酸鈉溶液2ml，攪拌固化50min，即得CTX介導靶向納米載藥體系。(5)向CTX介導靶向納米載藥體系中加入巰嘌呤O. 25g，繼續攪拌，得到CTX介導的革巴向納米載藥體系。實施例11.本實施例CTX介導的靶向納米載體，通過包括以下步驟的制備方法制得(I)制備羧甲基殼聚糖衍生物，配制質量體積比(g/ml)為8%的、PH = 9的羧甲基殼聚糖衍生物磷酸鹽緩沖溶液；向其中加入聚こニ醇-琥珀酰亞胺酷水溶液，羧甲基殼聚糖衍生物與聚こニ醇-琥珀酰亞胺酯的摩爾比I : 3，反應2.5h，得羧甲基殼聚糖衍生物-聚こニ醇溶液；
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(2)CTX用巰基試劑2-亞氨基硫烷鹽酸鹽以摩爾比I : 3. 5修飾，得CTX-巰基試劑；(3)將羧甲基殼聚糖衍生物-聚こニ醇與CTX-巰基試劑以摩爾比I : 6室溫反應3h，加入こ醇析出沉淀，混合液與こ醇的體積比I : 4，過濾，得CTX-羧甲基殼聚糖衍生物；(4)將2. OgCTX-殼聚糖季銨鹽衍生物加入40ml去離子水中制得質量體積百分比濃度為5%的CTX-殼聚糖衍生物溶液，攪拌分散均勻，加入ニ氯甲烷I. 5ml (與CTX-殼聚糖衍生物溶液體積比為2. 5% )，20000rpm高速均質5min，重復操作3次，置真空干燥器中抽真空60min ;然后邊攪拌邊滴加交聯劑O. 5%的氫氧化I丐溶液Iml,攪拌固化60min,即得CTX介導靶向納米載藥體系。(5)向CTX介導靶向納米載藥體系中加入紫杉醇lg，繼續攪拌，得到CTX介導的靶向納米載藥體系。實施例12.本實施例CTX介導的靶向納米載體，通過包括以下步驟的制備方法制得(I)制備羧甲基殼聚糖衍生物，配制質量體積比(g/ml)為10%的、PH = 7. 5的羧甲基殼聚糖衍生物磷酸鹽緩沖溶液；向其中加入聚こニ醇-琥珀酰亞胺酷水溶液，羧甲基殼聚糖衍生物與聚こニ醇-琥珀酰亞胺酯的摩爾比I : 5，反應2h，得羧甲基殼聚糖衍生物-聚こニ醇溶液；(2)CTX用巰基試劑2-亞氨基硫烷鹽酸鹽以摩爾比I : 6修飾，得CTX-巰基試劑；(3)將羧甲基殼聚糖衍生物-聚こニ醇與CTX-巰基試劑以摩爾比I : 8室溫反應2h，加入こ醇析出沉淀，混合液與こ醇的體積比I : 5，過濾，得CTX-羧甲基殼聚糖衍生物；(4)將4. OgCTX-羧甲基殼聚糖衍生物加入40ml去離子水中制得質量體積百分比濃度為10%的CTX-殼聚糖衍生物溶液，攪拌分散均勻，加入ニ氯甲烷4ml (與CTX-殼聚糖衍生物溶液體積比為10% )，超聲振蕩8min，重復操作3次，置真空干燥器中抽真空45min ；然后邊攪拌邊滴加交聯劑O. 25%的多聚磷酸鈉溶液2ml，攪拌固化50min，即得CTX介導靶向納米載藥體系。(5)向CTX介導靶向納米載藥體系中加入5-氟尿嘧啶O. 04g,繼續攪拌，得到CTX介導的靶向納米載藥體系。
實驗例.圖I為實施例I納米載體不同浸提時間對小鼠成纖維細胞生長的影響的柱狀圖。由圖可知，不同浸提時間的樣品對小鼠成纖維細胞的相對增殖率均高于80%，說明所制備納米載體具有良好的生物相容性，且生物相容性不受浸提時間的影響。圖2為實施例3納米載體不同浸提時間對He I a細胞生長的影響的曲線圖，表明不同浸提時間的樣品對腫瘤細胞(Hela細胞)具有明顯的抑制殺傷作用。圖3實施例5、實施例9的納米載藥體系的體外釋放的曲線圖，表明所制備 載體具有良好的緩釋效果。
權利要求
1.ー種CTX介導的靶向納米載體，其特征在于，通過包括以下步驟的制備方法制得 (1)配制質量體積比為O.01-0. lg/ml的、PH = 7-9的殼聚糖親水性衍生物緩沖溶液；向其中加入聚こニ醇-琥珀酰亞胺酷水溶液，殼聚糖親水性衍生物與聚こニ醇-琥珀酰亞胺酯的摩爾比I : (O. 2-5)，反應I. 5-2. 5h，得殼聚糖親水性衍生物-聚こニ醇溶液； (2)CTX用巰基試劑修飾，CTX與巰基試劑的摩爾比是I : (2-6)，得CTX-巰基試劑； (3)將殼聚糖親水性衍生物-聚こニ醇與CTX-巰基試劑以摩爾比I: (3-8)混合，室溫反應l_3h，加入こ醇析出沉淀，混合液與こ醇的體積比I : (2-5)，過濾，得CTX-殼聚糖親水性衍生物； (4)配制質量體積比為0.01-0.lg/ml的CTX-殼聚糖親水性衍生物溶液，加入其體積(2. 5-10) %的ニ氯甲烷，混勻，抽真空，加入ニ氯甲烷體積O. 5-1倍的固化劑，攪拌固化50_60min,得CTX介導的革巴向納米載體。
2.根據權利要求I所述的CTX介導的靶向納米載體，其特征在于，步驟(I)中的殼聚糖親水性衍生物是羧甲基殼聚糖或殼聚糖季銨鹽親水性衍生物。
3.根據權利要求I所述的CTX介導的靶向納米載體，其特征在于，步驟(I)中的殼聚糖親水性衍生物緩沖溶液是殼聚糖親水性衍生物磷酸鹽緩沖溶液。
4.根據權利要求I所述的CTX介導的靶向納米載體，其特征在于，步驟(2)中的巰基試劑是2-亞氨基硫烷鹽酸鹽。
5.根據權利要求I所述的CTX介導的靶向納米載體，其特征在于，步驟(4)中混勻時超聲或高速均質。
6.根據權利要求I所述的CTX介導的靶向納米載體，其特征在于，步驟(4)中的固化劑是O. 25%的多聚磷酸鈉溶液或O. 5%的氫氧化鈣溶液。
7.—種CTX介導的靶向納米載藥體系，其特征在于，通過包括以下步驟的制備方法制得 (1)配制質量體積比為O.01-0. lg/ml的、PH = 7-9的殼聚糖親水性衍生物緩沖溶液；向其中加入聚こニ醇-琥珀酰亞胺酷水溶液，殼聚糖親水性衍生物與聚こニ醇-琥珀酰亞胺酯的摩爾比I : (O. 2-5)，反應I. 5-2. 5h，得殼聚糖親水性衍生物-聚こニ醇溶液； (2)CTX用巰基試劑修飾，CTX與巰基試劑的摩爾比是I : (2-6)，得CTX-巰基試劑； (3)將殼聚糖親水性衍生物-聚こニ醇與CTX-巰基試劑以摩爾比I: (3-8)混合，室溫反應l_3h，加入こ醇析出沉淀，混合液與こ醇的體積比I : (2-5)，過濾，得CTX-殼聚糖親水性衍生物； (4)向質量體積比為O.01-0. lg/ml的CTX-殼聚糖親水性衍生物溶液中加入活性物質，所述活性物質的用量是CTX-殼聚糖親水性衍生物質量的O. 01-1倍，混勻，再加入CTX-殼聚糖親水性衍生物溶液體積(2. 5-10) %的ニ氯甲烷，混勻，抽真空，加入ニ氯甲烷體積O.5-1倍的固化劑，攪拌固化50-60min，得CTX介導的靶向納米載體。
8.—種CTX介導的靶向納米載藥體系，其特征在于，通過包括以下步驟的制備方法制得 (I)配制質量體積比為O. 01-0. lg/ml的、PH = 7-9的殼聚糖親水性衍生物緩沖溶液；向其中加入聚こニ醇-琥珀酰亞胺酷水溶液，殼聚糖親水性衍生物與聚こニ醇-琥珀酰亞胺酯的摩爾比I : (O. 2-5)，反應I. 5-2. 5h，得殼聚糖親水性衍生物-聚こニ醇溶液；(2)CTX用巰基試劑修飾，CTX與巰基試劑的摩爾比是I : (2-6)，得CTX-巰基試劑； (3)將殼聚糖親水性衍生物-聚こニ醇與CTX-巰基試劑以摩爾比I: (3-8)混合，室溫反應l_3h，加入こ醇析出沉淀，混合液與こ醇的體積比I : (2-5)，過濾，得CTX-殼聚糖親水性衍生物； (4)配制質量體積比為0.01-0.lg/ml的CTX-殼聚糖親水性衍生物溶液，加入其體積(2. 5-10) %的ニ氯甲烷，混勻，抽真空，加入ニ氯甲烷體積O. 5-1倍的固化劑，攪拌固化50-60min,得CTX介導的革巴向納米載體； (5)向CTX介導靶向納米載體中加入活性物質，所述活性物質的用量是CTX-殼聚糖親水性衍生物質量的O. 01-1倍，繼續攪拌，得到CTX介導的靶向納米載藥體系。
9.根據權利要求7或8所述的CTX介導的靶向納米載藥體系，其特征在干，活性物質是阿霉素、巰嘌呤、紫杉醇、5-氟尿嘧啶任ー種。
全文摘要
本發明公開了一種CTX介導的靶向納米載體及納米載藥體系的方法。本發明的CTX介導的靶向納米載體體系生物相容性、緩釋性能及靶向性良好。由于CTX-殼聚糖衍生物具有CTX的高度靶向選擇性，使納米載體識別并結合于腫瘤細胞表面的MMP-2起到靶向作用，同時阻止腫瘤組織的血管生成；而載體攜帶的活性物質，可定位釋放于腫瘤部位以殺死腫瘤細胞，因此該載體系統可以起到雙重的靶向抑制及殺死腫瘤細胞的作用。本發明的制備方法操作簡便、工藝穩定、成本低廉，對原材料有廣泛的適用性，所有具有親水性取代基團的殼聚糖衍生物均可，原料來源十分廣泛。
文檔編號A61K9/14GK102688496SQ20121001109
公開日2012年9月26日 申請日期2012年1月15日 優先權日2012年1月15日
發明者任云利, 周惠云, 姜凌娟, 張志強, 李軍波, 王新勝, 陳雅維 申請人:河南科技大學