專利名稱：牛蒡子苷在制備藥物或保健食品中的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及牛蒡子苷在制備藥物或保健食品中的應用，具體涉及具有二芐基丁內酯木質素結構的牛蒡子苷在制備預防或治療勃起功能障礙藥物或保健食品中的應用，屬于生物醫學技術領域。
背景技術：
男性勃起功能障礙(Erectile dysfunction, ED)是指陰莖不能勃起、勃起不堅或堅而不持久以致不能性交者；國際陽痿學會對此作出的定義為性交時陰莖不能有效地勃起導致性交不滿足。ED是男性最常見的一種性功能障礙，據不完全統計，在男性人群中，ED發生率就達15%。牛蒡子苷(arctiin，ARC)，又名牛蒡苷，最先是從菊科兩年生草本植物牛蒡屬牛蒡Arctium lappa L.的干燥成熟果實牛蒡子中提取分離而來的二芐基丁內酯木脂素類化合物，隨后研究證實在牛蒡根及牛蒡葉也有少量存在。除了牛蒡中存在牛蒡子苷外，水母雪蓮花 Saussurea medusa Maxim 、日本植樹 Torreya nucifera(L. )Sieb. et Zucc.以及藥薯Ipomoea caiHca(L. ) Sweet.等植物中均有發現。現代藥理學證明牛蒡子苷具有抗炎及免疫調節、抗菌、抗病毒、抗腫瘤、抗白血病活性、降血糖等多種藥理活性。中國專利文獻CN102342929A(申請號201010242681. 4)公開了一類具有如下通式
(I)所示結構的牛蒡子苷元及其衍生物在制備用于提高機體耐受力(抗疲勞)的藥物中的用途，以及含有牛蒡子苷元及其衍生物的用于提高機體耐受力(抗疲勞)的藥物組合物。所述牛蒡子苷元及其衍生物對AMPK磷酸化具有促進作用，整體動物試驗表明該類化合物具有提高疲勞耐受能力。該類化合物可用于抗疲勞治療。中國專利文獻CNlOl 134031(申請號200610068587. 5)公開了牛蒡子苷元在制備治療或預防慢性腎功能衰竭及腎纖維化的藥物中的用途。本發明還提供了以牛蒡子苷元為活性成分的用于治療或預防慢性腎功能衰竭及腎纖維化的藥物組合物。本發明提供的藥物組合物在用于慢性腎功能衰竭及腎纖維化時，注射時使用劑量范圍是30mg IOOOmg ;優選30 500mg ; 口服時使用劑量范圍是50mg 2000mg ;優選50 800mg。近年來牛蒡子苷已經成為國內外的研究熱點，但對其在治療勃起功能障礙(ED)等方面的研究未見報道。
發明內容
本發明針對現有技術的不足，提供牛蒡子苷在制備預防或治療勃起功能障礙藥物或保健食品中的應用。本發明的發明目的是通過如下技術方案實現的牛蒡子苷在制備預防或治療勃起功能障礙藥物中的應用。上述應用，牛蒡子苷做為促進NO/cGMP信號轉導的藥效成分制備預防或治療勃起功能障礙藥物。
上述應用，牛蒡子苷做為促進藥物西地那非的藥效成分制備預防或治療勃起功能障礙藥物。上述應用，牛蒡子苷的每日施用劑量為20mg-1000mg。牛蒡子苷在制備預防或治療勃起功能障礙保健食品中的應用。上述應用，牛蒡子苷的每日攝入劑量為10mg-2000mg。經研究發現，牛蒡子苷對離體兔陰莖海綿體的舒張作用與促進NO的釋放有關，能提高陰莖海綿體cGMP濃度，說明牛蒡子苷是通過多種細胞內機制作用于內皮和(或)平滑肌引起海綿體的舒張。所以牛蒡子苷能夠治療勃起功能障礙的機制與促進NO-cGMP信號通路有關。本發明有益效果如下I、本發明經研究發現牛蒡子苷對去氧腎上腺素(phenyl印hrine，PE)引起的大鼠主動脈收縮有明顯的濃度依賴性的舒張作用，牛蒡子苷對大鼠胸主動脈的舒張具有內皮依賴性，同時對血管型勃起功能障礙(A-ED)大鼠有明顯的防治作用，表現在能明顯縮短A-ED大鼠電刺激勃起潛伏期，并能升高大鼠陰莖組織的NO和cGMP含量，這與以往報道的牛蒡子苷用途都不同，為預防和治療勃起功能障礙提供了新的途徑。2、經一系列的實驗證明，牛蒡子苷在預防和治療勃起功能障礙方面具有顯著效果，能夠濃度依賴性地引起兔陰莖海綿體舒張，當NOS抑制劑L-NAME (濃度為10_4mol/L)存在時牛蒡子苷最大舒張效應降低。3、本發明經研究發現牛蒡子苷對PE誘發收縮的離體兔海綿體肌條，ACH(乙酰膽堿)或Sildenafil (西地那非)引起濃度依賴性的舒張效應，牛蒡子苷能加強ACH和Sildenafil對離體兔海綿體肌條的舒張效應。
圖I、濃度為10_4mol/L的L-NAME (N0S合酶抑制劑)，濃度為10_5mol/L的吲哚美辛(Indo)預處理對牛蒡苷血管環舒張效應的影響。(E+):內皮完整；(E-):去內皮。圖2、濃度為10_4mol/L的L-NAME，濃度為10_5mol/L的0DQ(可溶性鳥甘酸環化酶抑制劑)預處理對牛蒡子苷兔陰莖海綿體舒張效應的影響；圖3、牛蒡子苷預處理對ACH兔海綿體舒張效應的影響；圖4、Sildenafil預處理對牛蒡子苷兔海綿體舒張效應的影響；圖5、牛蒡子苷預處理對Sildenafil兔海綿體舒張效應的影響；
具體實施例方式下面結合實施例對本發明的技術方案做進一步說明，但本發明所保護范圍不限于此。材料來源說明 實施例中所述牛蒡子苷購自寶雞市辰光生物科技有限公司；吲哚美辛、L-NAME (N0S合酶抑制劑)、0DQ (可溶性鳥瞰算環化酶抑制劑),ACH (乙酰膽堿)購自sigma公司；去氧腎上腺素(phenyl印hrine，PE)購自梯希愛(上海)化成工業發展有限公司；西地那非購自濟南偉都醫藥科技有限公司；其他試劑均為分析純，購自天津化工有限公司。
實施例I :牛蒡子苷舒血管作用 取雄性Sprague-Dawley大鼠，用木錘擊暈后行頸部脫臼，剪開胸腔，迅速取出胸主動脈條上段，置于 4°C 的 K-H 液(119mmol/L NaCl,4. 7mmol/L KC1,1. 2mmol/LMgCl2,2. 5mmol/L CaCl2,12mmol/LNaHC03,1. 2mmoI/LNaH2PO4, llmmol/L Glucose,pH 7. 4)中。副除其周圍結締組織后，將主動脈條上段剪成2-3mm長的主動脈環，迅速懸掛至離體灌流裝置中。主動脈環先穩定于37°C的K-H液中，K-H液預先用95% 02+5% CO2的混合氣體飽和。逐步調節主動脈環張力至2g,穩定60min ;穩定過程中每隔15min更換I次預先用95%02+5 % CO2的混合氣體飽和過的K-H液。穩定后，用60mmol/L濃度的KCl刺激，共重復刺激3次，以激發最大收縮。標本以Wmol/L的PE(去氧腎上腺素)預收縮后，用10_5mol/L的ACH溶液舒張主動脈環以檢查血管內皮的完整性，舒張幅度達50%以上者可認為內皮完整。需去內皮的血管環在懸掛至離體灌流裝置前，先用機械法去除血管內皮。已完全去內皮的血管，用ACH后不產生舒張。(可參照陳俊、劉繼紅等，粉防己堿松弛立體新西蘭兔陰莖海綿體作用的研究，2003，中華男科學)牛蒡苷對PE預收縮的血管環的作用取雄性Sprague-Dawley大鼠去內皮和內皮完整的血管環，分別以5X 10_6mol/L的PE溶液預收縮血管環，在達到峰值穩定后，以累積加藥法依次加入牛蒡子苷(終度為10_6-5X10_4mol/L)，給藥間隔約3-5min，以藥物作用達到坪值為準，記錄牛蒡子苷作用的量效曲線，并計算最大效應(maximume ffect, Emax)取內皮完整的血管環,在浴槽中分別加入吲哚美辛(終濃度為10_5mol/L)、L-NAME (終濃度為10_4mol/L)孵育30min后，加入PE (終濃度為5X 10_6mol/L)，在收縮達到坪值后，以累積加藥法依次加入牛蒡子苷(終濃度為10_6-5X10_4mol/L)記錄牛蒡子苷作用的量效曲線。結果如圖I所示，牛蒡子苷可以濃度依賴性地引起去內皮和內皮完整主動脈血管環舒張，當NOS合酶抑制劑L-NAME (終濃度為10_4mol/L)存在時明顯抑制了牛蒡苷對內皮完整血管的舒張，預先給予吲哚美辛并不能抑制牛蒡苷引發的血管舒張作用。牛蒡子苷對內皮完整血管舒張的EC50為240. 24umol/L如圖2。該結果說明牛蒡子苷對大鼠胸主動脈的舒張具有內皮依賴性和非內皮依賴性。實施例2 :牛蒡苷對兔陰莖海綿體舒張作用成熟雄性家兔空氣注射致死，迅速剖取陰莖體置于預冷的95% 02+5% CO2氣體飽和的 Ringer-Krebs 液(130mM NaCl, 5mM KCl, I. 27mM MgSO4,0. 95mM CaCl2, 5mM glucose,IOmM NaH2P04/Na2HP04, pH 7.4)中，去除標本上附著的脂肪、筋膜等組織，將標本沿縱軸剖開，分為左右兩條標本，每條約7_X 3_X 3mm,標本置于37度恒溫浴槽中(連續通入95%02+5% CO2)，前負荷2g,平衡Ih,期間每15min更換營養液I次，實驗時加入10 u mol/L吲哚美鋅(indo)可顯著降低標本的自律性。標本以5iimol/LPE刺激收縮后，加入2iimol/LACH可引起明顯舒張來檢測內皮的完整性，內皮完整者進行實驗。肌條平衡穩定后，在浴槽中加入濃度為5X 10_5mol/L的PE溶液預收縮，處于收縮平臺期后依次加入累積濃度為10_6 10_4mOl/L(終濃度)的牛蒡子苷，以肌條最大收縮張力為100%，各濃度引起的舒張程度與最大收縮力的比值計算其舒張效應。分別用10_4mol/LL-NAMEUO^moI/L ODQ預處理和應用機械方法去除內皮后，分別記錄累積濃度(10_6 10_4mOl/L)的牛蒡子苷，觀察應用不同抑制劑后牛蒡子苷對陰莖海綿體平滑肌條的舒張效應。結果如圖2所示，實驗結果表明牛蒡子苷可舒張PE誘發的陰莖海綿體平滑肌收縮作用，并呈濃度依賴性，Logestic回歸分析EC5tl為54. 75 X lO^mol/L. ODQ可部分抑制牛蒡子苷對肌條的舒張效應；應用NOS抑制劑L-NAME預處理也抑制牛蒡子苷對內皮完整肌條的舒張效應。實施例3 :牛蒡子苷對ACH引起的離體兔海綿體舒張效應的影響兔陰莖海綿體肌條置于37度恒溫浴槽中(連續通入95% O2和5% CO2)，前負荷2g，平衡lh，期間每15min更換營養液I次，肌條平衡穩定后，在浴槽中加入5 X 10_5mol/L的PE溶液預收縮，處于收縮平臺期后依次加入累積濃度為10_6 10_5mol/L(終濃度)的ACH，記錄ACH作用的量效曲線；牛蒡子苷(5、10、40iimol/L)孵育30min后，重測ACH的量效曲線。結果表明對PE誘發收縮的兔海綿體，ACH引起濃度依賴性的舒張效應，牛蒡子苷能濃 度依賴性的加強ACH對海綿體的舒張效應，ACH對海綿體發揮舒張效應的機制已證實為通過乙酰膽堿受體促進釋放NO而產生，因此，牛蒡子苷對兔海綿體舒張效應的機制與促進內皮細胞釋放NO有關。實施例4 :牛蒡子苷對sildenafil引起的離體兔海綿體舒張效應的影響兔陰莖海綿體肌條置于37度恒溫浴槽中(連續通入95% O2和5% CO2)，前負荷2g，平衡lh，期間每15min更換營養液I次，肌條平衡穩定后，在浴槽中加入濃度為5X 10_5mOl/L的PE溶液預收縮，處于收縮平臺期后依次加入累積濃度為10_6 4X 10_5mOl/L(終濃度)的牛蒡子苷，記錄記錄牛蒡子苷作用的量效曲線；Sildenafil (終濃度I y mol/L)孵育30min后，重測牛蒡子苷的量效曲線；牛蒡子苷(終濃度40 y mol/L)孵育30min后，測SiIdenafiI的量效曲線。對PE誘發收縮的兔海綿體，SildenafiI弓丨起濃度依賴性的舒張效應，牛蒡子苷能濃度依賴性的加強sildenafil對海綿體的舒張效應如圖4, Sildenafil也能促進牛蒡子苷對海綿體的舒張效應如圖5，但牛蒡子苷對Sildenafil的促進作用要強于Sildenafil對牛蒡子苷的作用。因此，牛蒡子苷可以用于Sildenafil的輔助藥物。實施例5 :牛蒡子苷對血管型ED大鼠的影響將雄性大鼠(140±20g)隨機分為6組，每組10只假手術組(等容量蒸餾水組)、模型組(等容量蒸餾水)、陽性對照組(西地那非組)、牛蒡子苷物100、50、25mg/kg組。灌胃給藥7天后大鼠經戊巴比妥鈉麻醉后腹腔麻醉后，做下腹正中切口，切開皮膚、皮下組織、腹膜，進入腹腔，于髂總動脈分叉處向下找到髂總動脈，向下可見膀胱上動脈起自髂總動脈，其深面找到左髂內動脈，游離血管周圍組織、筋膜，用6-0絲線于髂內動脈起始端結扎左髂內動脈，同法結扎右側髂內動脈。假手術組打開腹腔后，即關腹不做髂內動脈結扎。手術后繼續給藥14天后，測定各組大鼠電刺激勃起潛伏期及陰莖組織中NO、cGMP含量。實驗結果表明，牛蒡苷各劑量組均能縮短大鼠電刺激勃起潛伏期，并顯著升高陰莖組織中NO、cGMP含量，與模型組大鼠比較有顯著性差異(P<0.01)。實驗結果見表I、2。表I牛蒡子苷對A-ED模型大鼠勃起潛伏期的影響
注與模型組比較，*p< 0. 05，**p < 0. 01.表2牛蒡子苷物對A-ED模型大鼠陰莖組織NO和cGMP的影響(x土s n = 10)
組別劑量(mg/Kg) NO (nmol/gprot)cGMP(pmol/mg)
假手術組一 0.22 ±0.06*0.75 ±0.23**
模型組一 0.13±0.070.39±0.16
西地那非組0.009 0.26±0.07**0.69±0.2廣
牛蒡子苷100 0.94 ±0.62**0.79 ±0.30**
牛蒡子苷50 0.80 ±0.16**0.65 ±0.27**
牛蒡子苷25 0.43±0. 15*0. 51±0.276*注與模型組比較，*p< 0. 05，#p < 0. 01。
權利要求
1.牛蒡子苷在制備預防或治療勃起功能障礙藥物中的應用。
2.如權利要求I所述的應用，其特征在于，牛蒡子苷做為促進NO/cGMP信號轉導的藥效成分制備預防或治療勃起功能障礙藥物。
3.如權利要求I所述的應用，其特征在于，牛蒡子苷做為促進藥物西地那非的藥效成分制備預防或治療勃起功能障礙藥物。
4.如權利要求I所述的應用，其特征在于，牛蒡子苷的每日施用劑量為20mg-1000mg。
5.牛蒡子苷在制備預防或治療勃起功能障礙保健食品中的應用。
6.如權利要求5所述的應用，其特征在于，牛蒡子苷的每日攝入劑量為10mg-2000mg。
全文摘要
本發明涉及牛蒡子苷在制備藥物或保健食品中的應用，屬于生物醫學技術領域。本發明公開了牛蒡子苷做為促進NO/cGMP信號轉導的藥效成分制備預防或治療勃起功能障礙藥物；此外本發明還提供牛蒡子苷做為促進藥物西地那非的藥效成分制備預防或治療勃起功能障礙藥物。本發明對男性勃起功能促進作用顯著，能作為治療陰莖勃起功能障礙的藥物使用，為牛蒡子苷提供了新的醫療用途。
文檔編號A61P15/10GK102626417SQ20121006715
公開日2012年8月8日 申請日期2012年3月14日 優先權日2012年3月14日
發明者侯東, 張鵬英, 曹劍鋒, 曹旭, 陳靠山, 黃濤濤 申請人:山東大學