專利名稱：桔梗總皂苷在治療和預防解脲脲原體感染性疾病藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及桔梗總皂苷在藥物中的應用。
背景技術：
解脲脲原體(Ureaplasma urealyticum,UU)是性傳播疾病-非淋菌性尿道炎的
主要病原體之一，發病率較高。可引起的非淋菌性尿道炎、子宮內膜炎、輸卵管炎、前列腺炎等泌尿生殖系統炎癥，并可引起男、女不孕、不育及孕婦胎兒宮內感染、流產等并發癥。UU引起的非淋菌性尿道炎臨床上具有非典型性，頑固復發性和遷延不愈等特點， 且近些年有上升的趨勢。治療以抗生素為主，首選藥物為四環素類、大環內酯類和喹諾酮類。近年來由于UU對抗生素的耐藥株逐漸增多，耐藥率逐年上升，抗生素的療效顯著下降， 例如UU對四環素耐藥率1996年僅為8. 6%，2000年則上升為46. 4%, 2006年12月上升為68. 3%。環丙沙星的耐藥率為80%，對左氧氟沙星耐藥率也在26. 8%-48. 3%之間。對大環內酯類藥物如紅霉素通常維持在30% -50%的水平；同類藥物羅紅霉素和阿奇霉素的療效如今也不容樂觀，據文獻表明，對羅紅霉索耐藥水平最高達到77.8%，而阿奇霉素為 66. 7%，而且在治療方面出現的多重耐藥更令人棘手。臨床上持續性、復發性泌尿生殖道感染及耐藥問題已經成為日益常見和棘手的問題。因此，開發能夠治療UU感染且耐藥率低的新型抗菌素是目前治療UU尤其是耐藥UU感染的最有效途徑。但是，隨著化學合成新抗菌素難度和成本的增加，國內、外研究人員開始青睞于從天然植物是尋找具有抗菌活性的成分。桔梗為桔梗科植物桔梗Platycodon grandiflorum(Jacq. )A. DC.的根,是我國的傳統中藥。其味苦、辛，性平。主歸肺經。具有宣肺化痰，利咽，排膿的功效，臨床主要用于咳嗽痰多，胸悶不暢，咽痛音啞，肺癰吐膿等癥的治療。桔梗的現代研究始于20世紀40年代，其主要成分為齊墩果酸型五環三萜皂苷，其他尚含有多糖、黃酮、聚炔、留體、酚酸、脂肪酸、無機元素、揮發油等類型的化合物。現代藥理研究表明，桔梗具有抗炎鎮痛、祛痰鎮咳、抗腫瘤、免疫調節、促進外分泌腺分泌、抑制胰脂肪酶、改善胰島素抵抗、抗RSV(呼吸道合細胞病毒)活性等廣泛的藥理作用。但目前國內外尚無關于桔梗皂苷抗UU作用的相關文獻報道。
發明內容
本發明目的是提供桔梗總皂苷在治療和預防解脲脲原體感染性疾病藥物中的應用。桔梗總皂苷在治療和預防解脲脲原體感染性疾病藥物中的應用桔梗總皂苷作為治療和預防解脲脲原體感染性疾病藥物中的活性成分，桔梗總皂苷為桔梗酸類、遠志酸類、 桔梗二酸類、桔梗酸A內酯類皂苷中的一種或幾種的組合物。桔梗作為藥食同源植物，其市場需求量極大，是用于清上焦之火的主要藥材之一， 但目前尚未見桔梗單味藥或其有效部位用于治療下焦淋癥的報道。
本發明發現了其新的藥理活性，將進一步擴大其藥用范圍及市場需求。同時本發明將打破解脲脲原體治療市場抗生素的壟斷局面，避免了抗生素對人體的毒副作用及耐藥性。本發明桔梗總皂苷在治療和預防解脲脲原體感染性疾病藥物中的應用中，桔梗總皂苷作為治療和預防解脲脲原體感染性疾病藥物中的活性成分，發現具有抗解脲脲原體作用;體外試驗表明，其抗UU的MIC值為16-32 μ g/ml ;MBC為32-64 μ g/ml ；32μ g/ml能夠明顯抑制UU在液體培養基內的生長繁殖速度；64μ g/ml能完全抑制UU的生長繁殖；并可快速起效。體內試驗證明，桔梗皂苷栓經陰道給藥后能夠降低UU感染小鼠的陰道分泌物UU 培養陽性率，改善陰道炎癥的病理組織學表現，對UU感染陰道炎具有治療作用。本發明中桔梗總皂苷作為治療和預防解脲脲原體感染性疾病藥物中的活性成分， 將桔梗總皂苷制備成常規劑型后，對UU引起的感染性疾病是有效的。
圖I為具體實施方式
一中桔梗總皂苷體外抗UU時效曲線圖，其中 表示空白對照組，■表不桔梗總阜苷濃度為16 μ g/ml, ▲表不桔梗總阜苷濃度為32 μ g/ml, X表不桔梗總皂苷濃度為64 μ g/ml ；圖2為具體實施方式
一中桔梗總皂苷對UU生長的快速抑制作用，其中■表示紅霉素,▲表不桔梗總阜苷；圖3為具體實施方式
一中小鼠陰道病理組織學觀察中空白對照組的情況圖；圖4為具體實施方式
一中小鼠陰道病理組織學觀察中模型對照藥組的病變情況圖；圖5為具體實施方式
一中小鼠陰道病理組織學觀察中陽性對照藥組的病變情況圖；圖6為具體實施方式
一中小鼠陰道病理組織學觀察中桔梗低劑量組的病變情況圖；圖7為具體實施方式
一中小鼠陰道病理組織學觀察中桔梗高劑量組的病變情況圖。
具體實施例方式具體實施方式
一本實施方式桔梗總皂苷在治療和預防解脲脲原體感染性疾病藥物中的應用桔梗總皂苷作為治療和預防解脲脲原體感染性疾病藥物中的活性成分，桔梗總皂苷為桔梗酸類、遠志酸類、桔梗二酸類、桔梗酸A內酯類皂苷中的一種或幾種的組合物。桔梗總皂苷為兩種或兩種以上物質組成時按任意比混合。 桔梗總皂苷體外抗MP試驗如下I實驗材料解脲脲原體國際標準株(ATCC 27816)，購自美國菌種保藏中心。桔梗總皂苷，實驗室提取，提取物總皂苷含量在80%以上。PPLO培養基、96孔板、加樣器、恒溫培養箱。
2方法和結果2. I桔梗總皂苷的提取及含量測定2. I. I桔梗總皂苷的提取a、取桔梗飲片(市售)，加8倍體積75%乙醇，加熱回流提取3次，每次》1，濾過，合并濾液山、濾液減壓回收乙醇至稠膏狀，得桔梗提取物；C、再將桔梗提取物加生藥量10倍量的水溶解，上于AB-8大孔吸附樹脂柱，依次以4倍柱體積的水、20%、30%、40%、50%乙醇洗脫，合并40%、50%乙醇洗脫液，減壓回收至無醇味，即得桔梗有效部位；d、將該桔梗有效部位以水溶解，依次以石油醚、乙酸乙酯萃取3次，棄萃取液，再用水飽和正丁醇萃取5 次，合并正丁醇液，減壓回收，蒸干，即得桔梗總皂苷。2. 2桔梗總皂苷的含量測定2. 2. I對照品溶液的制備稱取經60°C減壓干燥至恒重的桔梗皂苷D8. OOmg，加 70 %甲醇適量溶解，置50mL容量瓶中，用70 %甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。2. 2. 2供試品溶液的制備稱取桔梗總皂苷5. Omg,加70%甲醇適量溶解，置IOmL 容量瓶中，用70%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。2. 2. 3檢測波長的選擇量取對照品溶液I. 5mL及供試品溶液lmL，于70°C水浴蒸發至干，加入5%香草醛-冰醋酸(臨用新配)O. 20mL,高氯酸O. 80mL,于60°C水浴顯色 15min后冰水冷卻lOmin。加入冰醋酸5mL,搖勻。立即在紫外分光光度計下與400 800nm 波長下掃描，同時以空白溶液作參比。結果，對照品及供試品的最大吸收波長均在475nm，故選擇475nm為檢測波長。2. 2. 4線性關系考察量取對照品溶液O. 6、I. 5,2. 4,3. 3,4. 2mL,置具塞試管中， 于70°C水浴蒸發至干，加入5%香草醛-冰醋酸(臨用新配)O. 20mL，高氯酸O. 80mL，于60°C 水浴顯色15min后冰水冷卻lOmin。各加入冰醋酸5mL,搖勻，以同法平行處理的空白溶劑為空白，在475nm處測定吸光度。結果見表I。表I吸光度A與對照品質量C (mg)的關系
對照品c (mg)O. 096O. 240O. 384O. 528O. 672吸光度AO. 235O. 587O. 949I. 284I. 673以對照品質量C(mg)為橫坐標，吸光度A為縱坐標，繪制標準曲線，的回歸方程為 A = 2. 4812C-0. 0072 (r = O. 9998)，在 O. 096mg O. 672mg 范圍內線性關系良好。2. 2. 5精密度試驗吸取對照品溶液2. 4mL，照I. 4項下方法顯色測定吸光度，連續測定5次，結果見表2。表2精密度試驗結果
次數II345吸光度AO. 947O. 940O. 945O. 944O. 948結果計算5次吸光度測定結果的RSD為O. 33%，說明儀器精密度良好。2. 2. 6穩定性試驗取對照品和供試品溶液，照I. 4項下方法顯色，分別在顯色后的第 l、5、10、15、20、30、40、50、60、70、80、90min 測定吸光度，結果見表 3。表3穩定性試驗結果表
權利要求
1.桔梗總皂苷在治療和預防解脲脲原體感染性疾病藥物中的應用，其特征在于桔梗總皂苷在治療和預防解脲脲原體感染性疾病藥物中的應用桔梗總皂苷作為治療和預防解脲脲原體感染性疾病藥物中的活性成分，桔梗總皂苷為桔梗酸類、遠志酸類、桔梗二酸類、桔梗酸A內酯類皂苷中的一種或幾種的組合物。
2.根據權利要求I所述桔梗總皂苷在治療和預防解脲脲原體感染性疾病藥物中的應用，其特征在于采用口服給藥所用桔梗總皂苷片劑的制備如下一、稱取50g桔梗總皂苷、 IOOg淀粉、50g糊精、20g微晶纖維素、40ml體積濃度為80%的乙醇溶液和8g羧甲基淀粉鈉；二、稱取的桔梗總皂苷過100目篩，然后與稱取的淀粉、糊精、微晶纖維素和5g羧甲基淀粉鈉混合，再加入稱取的乙醇溶液，混合后制成軟材，經制顆、干燥和整粒后加入余量的羧甲基淀粉鈉混勻，然后壓片，包薄膜衣，干燥即得。
3.根據權利要求I所述桔梗總皂苷在治療和預防解脲脲原體感染性疾病藥物中的應用，其特征在于采用口服給藥所用桔梗總皂苷膠囊劑的制備如下一、稱取50g桔梗總皂苷、IOOg淀粉、50g糊精、30ml體積濃度為80%的乙醇溶液和IOg微粉硅膠；二、稱取的桔梗總皂苷過100目篩，然后與稱取的淀粉和糊精混合，再加入稱取的乙醇溶液，混合后制成軟材，經制顆、干燥和整粒后加入稱取的微粉硅膠混勻，裝入膠囊即得。
4.根據權利要求I所述桔梗總皂苷在治療和預防解脲脲原體感染性疾病藥物中的應用，其特征在于采用口服給藥所用桔梗總皂苷顆粒劑的制備如下一、稱取50g桔梗總皂苷、800g蔗糖、IOOg糊精和180ml體積濃度為80%的乙醇溶液；二、稱取的桔梗總皂苷過 100目篩，然后與稱取的蔗糖和糊精混合，再加入稱取的乙醇溶液，混合后制成軟材，經制顆、干燥和整粒后即得。
5.根據權利要求I所述桔梗總皂苷在治療和預防解脲脲原體感染性疾病藥物中的應用，其特征在于采用口服給藥所用桔梗總皂苷滴丸劑的制備如下一、稱取IOOg桔梗總皂苷和800g聚乙二醇4000 ;二、稱取的桔梗總皂苷過100目篩，然后與稱取的聚乙二醇4000 混合，再滴入冷卻的液體石蠟中，制成滴丸，包薄膜衣，干燥即得。
6.根據權利要求I所述桔梗總皂苷在治療和預防解脲脲原體感染性疾病藥物中的應用，其特征在于采用口服給藥所用桔梗總皂苷微丸劑的制備如下一、稱取IOOg桔梗總皂苷、400g糊精和50g淀粉；二、稱取的桔梗總皂苷過100目篩，然后與稱取的糊精混合，再加入稱取的淀粉，混勻制得藥丸坯料，然后再制丸機中制成中藥微丸，干燥，整粒，包薄膜衣， 干燥即得。
7.根據權利要求I所述桔梗總皂苷在治療和預防解脲脲原體感染性疾病藥物中的應用，其特征在于采用口服給藥所用桔梗總皂苷口服液的制備如下一、稱取15g桔梗總皂苷、3g苯甲酸鈉和Ig甜蜜素；二、稱取的桔梗總皂苷過100目篩，然后與稱取的苯甲酸鈉和甜蜜素混合，加水至IOOOml，攪勻，灌裝，滅菌，即得。
8.根據權利要求I所述桔梗總皂苷在治療和預防解脲脲原體感染性疾病藥物中的應用，其特征在于采用粘膜給藥所用桔梗總皂苷栓劑的制備如下一、稱取150g桔梗總皂苷、 350g聚乙二醇600和IOOOg聚乙二醇PEG6000 ;二、稱取的桔梗總皂苷過100目篩，然后與 50°C熔融的聚乙二醇600、聚乙二醇PEG6000混合，澆膜，冷卻，制成1000粒，即得。
9.根據權利要求I所述桔梗總皂苷在治療和預防解脲脲原體感染性疾病藥物中的應用，其特征在于采用皮膚給藥所用桔梗總皂苷洗劑的制備如下一、稱取IOOg桔梗總皂苷、3g苯甲酸鈉和Ig香精；二、稱取的桔梗總皂苷過100目篩，然后與稱取的苯甲酸鈉、香精混合，加純化水至950ml，調節pH 6. 0-7. 0搖勻，加水至1000ml，分裝，即得。
10.根據權利要求I所述桔梗總皂苷在治療和預防解脲脲原體感染性疾病藥物中的應用，其特征在于采用注射給藥所用注射用桔梗總皂苷凍干粉的制備如下一、稱取5g桔梗總皂苷；二、稱取的桔梗總皂苷過100目篩，然后與950ml水混合，調節pH7.0，濾過，再加注射用水至1000ml，滅菌，冷藏，濾過，濃縮，冷凍干燥，制成粉末，分裝，即得。
全文摘要
桔梗總皂苷在治療和預防解脲脲原體感染性疾病藥物中的應用，它涉及桔梗總皂苷在藥物中的應用。應用桔梗總皂苷作為治療和預防解脲脲原體感染性疾病藥物中的活性成分，桔梗總皂苷為桔梗酸類、遠志酸類、桔梗二酸類、桔梗酸A內酯類皂苷中的一種或幾種的組合物。本發明中桔梗總皂苷具有抗解脲脲原體作用；體外試驗表明，其抗UU的MIC值為16-32μg/ml；MBC為32-64μg/ml；對UU的抑制呈現明顯的時效和量效關系。體內試驗證明，小鼠皮下注射苯甲酸雌二醇后，經陰道感染UU，造成小鼠陰道炎，桔梗皂苷栓經陰道給藥后能夠降低陰道分泌物UU培養陽性率，改善陰道炎癥的病理組織學表現，對UU感染陰道炎具有治療作用。
文檔編號A61K36/34GK102579550SQ201210076228
公開日2012年7月18日 申請日期2012年3月21日 優先權日2012年3月21日
發明者姚琳, 張俊威, 王偉明, 許慶瑞, 高菲 申請人:黑龍江省中醫研究院