專利名稱：硒環肽·脂肪酸合劑及其制備方法
技術領域：
本發明涉及一種“含硒環肽、脂肪酸的合劑”藥物及其制備方法，具體的說是一種具有抗腫瘤抗氧化功能的硒環肽·脂肪酸合劑及其制備方法。
背景技術：
威脅人類生命健康的重大難治性疾病是腫瘤，人類在腫瘤的治療過程中經歷了漫長的歷史變遷。抗腫瘤藥物是重要的治療手段之一，隨著研究的深入與科學技術的發展，抗腫瘤藥物隨著新靶點的發現而不斷進步。 科學家對腫瘤的深入研究發現，盡管腫瘤發生和發展的原因十分復雜，但歸根結底都與基因表達及基因表達產物活性異常密切相關。同時，由于基因表達異常所形成的原發和繼發的腫瘤周圍環境(如血管生成、免疫系統功能變化異常等)的惡化，促進腫瘤細胞惡性表觀的進一步發展，并產生體內擴散和轉移。而且近年來國內外的研究結果清晰地表明，表觀遺傳改變在腫瘤的發生和發展中具有普遍的意義。因此，針對以組蛋白去乙酰化酶(HDAC)這一類影響表觀遺傳的重要分子靶標開展的小分子藥物研發已經成為國際腫瘤靶向治療領域的熱點之一。由于HDAC在基因表達中起著關鍵作用，所以，它們與許多細胞功能密切相關，包括細胞周期調控、細胞增殖、免疫調控、分化和基因程序化表達，同時有與傳統化療藥物對腫瘤耐藥性基因表達完全不同的調節模式等。試驗表明，HDAC抑制劑能夠抑制人體及動物體內的腫瘤的生長，包括肺癌、胃癌、乳腺癌、前列腺癌和淋巴瘤等。HDAC抑制劑在作用機制上既區別于傳統細胞毒類藥物(即在對增殖快速的腫瘤細胞殺傷的同時，也累及正常細胞的傳統化療藥物)，也不同于典型的靶向藥物。但是，現在的研制工作出現了新的問題(一)、現有的植物性抑制劑含量低，效果差；(二)、化學合成的抑制劑性能單一，效果差；(三)、大部分抑制劑在體內易降解、半衰期短，不穩定；(四)、對造血因子GATA-I和10的轉錄抑制，可引起血小板減少等不良反應；(五)、還有微量元素硒抗腫瘤功能肯定，但是硒離子在小腸的中性和偏堿性環境中沉淀，嚴重影響作用效果。
發明內容
本發明的目的是要提供一種抗腫瘤、抗氧化的植物性硒環肽·脂肪酸合劑。本發明的另一目的是提供該合劑的制備方法。本發明是根據中醫藥學對“腫瘤”及其并發的抗氧化能力降低的發病機理的認識以及治療原則，參考現代“硒”、“環肽”、“短鏈脂肪酸”及“H D A C抑制劑”的藥理研究成果，從我國衛生部審定的可用于保健食品的中藥材中篩選出益氣養陰、活血通脈、抗腫瘤，又能提高血液微循環和免疫力的藥材，由人參、茜草、枸杞子、五味子、薏苡仁、茯苓、太子參、桅子及微量元素等組成原材料，用現代生物工程技術酶法或微生物發酵法提取出含硒肽及環肽、短鏈脂肪酸等純天然植物HDAC抑制劑化合物，具有高效協同抗腫瘤及抗氧化而副作用不疊加的功效。硒環肽·脂肪酸合劑是具有含硒肽的全新化學結構的亞型選擇性蛋白去乙酰化酶純天然組合抑制劑，屬于新型抗腫瘤作用機制的腫瘤表觀遺傳調控新藥物，與傳統的腫瘤治療藥物不同，它以癌細胞異常的表觀遺傳作為靶點進行飽和攻擊，并通過誘導患者自身的免疫監測和免疫殺傷作用而發揮整體協同抗腫瘤作用，純天然無化學污染。本發明的物品是由下列組分制成的(用量為重量):
人參2-15份茜草3-20份枸杞子5-25份
五味子2-10份薏苡仁7-30份茯苓5-20份
太子參8-30份桅子4-20份硒O. 000001-0. 002份.
本發明物品的最佳重量配比是
人參5份菌草10份枸杞子11份
五味子4份薏該仁15份獲茶8份
太子參12份桅子5份硒O. 0000029份·
本發明物品上述配方中可添加其它微量元素，如添加鋅、鉻等，生成多肽金屬螯合物，來提高功能效果。將上述各組分組成本發明物品的生產方法是以上述配方藥材為原料，采用常規制藥加工方法可生產出含硒肽、脂肪酸中成藥合劑，采用制備肽的常規方法能生產出含硒肽合劑。現重點說明選用微生物發酵法制備肽、脂肪酸化合物。具體方法有兩種(一)、將上述配方藥材混合粉碎，用水煎提取方法得到水煎藥液(預處理)，加入肽菌株，或綜合酶進行微生物發酵培養，調PH值，加熱滅酶，冷卻，過濾純化，既得，再按常規方法制成藥物劑型。(二)、(I)將人參、茜草、五味子、茯苓、太子參按上述配方比例混合粉碎，用75%乙醇(6倍量)回流提取I. 5小時，濾過醇提液備用，藥渣分別保存；(2)將枸杞子、薏苡仁、桅子按上述配方比例混合粉碎，加入醇提后的藥渣，進行水煎2次(8倍水)，每次I. 5小時處理，藥液過濾；(3)把醇提藥液、水提藥液混合后接入微生物蛋白酶(谷草桿菌)，在溫度25-28° C、PH6. 5— 7、攪拌條件下進行酶解3-5小時，利用提取的植物體內已有的小肽，在植物環化酶的作用下，選擇性的形成環肽，滅酶；(4)將上述藥液濃縮，調ph值7-10，在溫度20-42° C、每分鐘攪拌60-80次的條件下進行厭氧發酵生產短鏈脂肪酸，時間7-30天；(5)冷卻，過濾純化，按上述配方比例加硒粉混懸液，強力攪拌2小時，產生含硒肽，再按常規方法制成藥物劑型，既得硒環肽·脂肪酸合劑。本發明抗腫瘤原理是通過下列機制(一)由環肽、短鏈脂肪酸組合成HDAC抑制劑靶向作用，直接殺傷腫瘤細胞；(二)含硒肽協同殺傷腫瘤細胞；(三)提升免疫力及抗氧化能力，抑制腫瘤細胞生存；(四)截斷腫瘤區的血液供應，阻止腫瘤繼續擴大；(五)分化，能是一部分腫瘤細胞轉化為非腫瘤細胞。本發明的主要特點是(一)配方中石竹科、茜草科、五味子科、五加科藥材含環肽量高，環肽生產量多；(二)合劑含有黏附劑(多糖)、果膠、脂肪酸、氨基酸衍生物、植物多糖、多元醇等，均為肽吸收促進劑、修飾劑和穩定劑，所以本發明性能較穩定，對人體更安全，藥理活性更強；(三)活性肽結合硒離子(含硒肽)，由小腸腸壁細胞吸收后再釋放進入血液，從而避免了硒離子在小腸的中性和偏堿性環境中沉淀，提高抗腫瘤的協同效果；(四)所含的中藥及多肽具有活化血小板間黏附作用。為了證實本發明對抗腫瘤及抗氧化抗缺氧作用的效果，我們分別做了以下試驗。(一)抗腫瘤藥效學試驗
(I)、藥物來源與配制硒環肽 脂肪酸合劑，20毫升口服液，按生藥I :1提取。用前以蒸餾水配制成試驗所需濃度的混懸液。(2)、試驗動物試驗采用體重18_22g昆明小鼠，雌雄兼用，但每批試驗性別相同，由中國醫學科學院動物中心提供。(3)、試驗方法取生長良好的小鼠可移植腫瘤Lewis肺癌、肝癌H22及肉瘤S180，按抗癌藥藥效學實驗技術要求常規接種小鼠，于接種后24小時分組給藥。試驗共分五組， 每組10只鼠，設對照組，環磷酰胺陽性藥組(常規方法)，硒環肽·脂肪酸合劑I. 25,2. 5、
3.75g/kg三劑量組。環磷酰胺60mg/kg腹腔注射一次,硒環肽·脂肪酸合劑灌胃給藥連續9次。停藥后24小時處死動物，剝瘤稱重，計算抑瘤率，并進行統計學處理。(4)、試驗結果
I、對小鼠Lewis肺癌的療效試驗
三批試驗結果，硒環肽 脂肪酸合劑I. 25g/kg組的抑瘤率分別為31. 0%、26. 3%,25. 2%(P < O. OUp < O. 05,P < O. 05)；2. 5g/kg組的抑瘤率分別為 36. 3%、31· 6%,41. 0%(p < O. 01、P < O. 01、P < O. 001) ；3. 75g/kg 組的抑瘤率分別為 51. 0%、38· 3%,41. 2% (p < O. 001、p
<O. OUp < O. 001)。2、硒環肽·脂肪酸合劑對小鼠肝癌H22的療效試驗
三批試驗結果，I. 25g/kg 組的抑率分別為 16. 7%,36. 1%、23· 9% (p < O. 05、p < O. 001、P < O. 01) ；2. 5g/kg 組的抑瘤率分別為 22. 5%,35. 6%,22. 4%( p < O. 05、p < O. 001、p
<O. 05) ；3. 75g/kg 組的抑瘤率分別為 29. 6%,41. 4%,34. 2%( p < O. 01、p < O. 001、p
<O. 001)。3、硒環肽 脂肪酸合劑對小鼠肉瘤S180的療效試驗三批試驗結果，硒環肽 月旨肪酸合劑I. 25g/kg組的抑瘤率分別為33. 7%,24. 1%、29· 7%( p均〈O. 05) ；2. 5g/kg組的抑瘤率分別為 35. 2%,32. 7%、21· 8%( p 均〈O. 05) ；3. 75g/kg 組的抑瘤率分別為 45. 9%,40. 6%、33. 6%( ρ〈0· 05、P < O. 01、ρ〈0· 05)。(5)、試驗結論硒環肽·脂肪酸合劑I. 25,2. 5,3. 75g/kg三劑量組對小鼠肉瘤S180有明顯抑瘤作用，對小鼠Lewis肺癌、肝癌H22均表現了明顯抑瘤作用，且呈劑量關系。其中對小鼠Lewis肺癌療效更明顯，硒環肽 脂肪酸合劑大劑量4. 74g/kg組平均抑瘤率達63. 8%。(二)抗氧化試驗
硒環肽 脂肪酸合劑有總黃酮中藥成分，具有抗氧化功效。對此我們進行了試驗。方法如下以硒環肽·脂肪酸合劑(20毫升口服液一I 1原藥材提取)、給以老齡BAL B/C小鼠灌胃45 d后測定與抗氧化延緩衰老有關的生化指標。結果硒環肽 脂肪酸合劑能使肝超氧化物歧化酶(S0D)活性顯著增強；全血谷胱甘肽過氧化物酶(GSH- Px)和過氧化氫酶(CAT)活性顯著提高。結論硒環肽 脂肪酸合劑具有較明顯的抗氧化作用。實施例按下述配方比稱取原料
人參5份菌草10份枸杞子11份五味子4份薏該仁15份獲茶8份
太子參12份桅子5份硒O. 0000029份。
實施例生產方法
(I)將人參、茜草、五味子、茯苓、太子參按上述配方比例混合粉碎，用75%乙醇(6倍量)回流提取I. 5小時，濾過醇提液備用，藥渣分別保存；(2)將枸杞子、薏苡仁、桅子按上述配方比例混合粉碎，加入醇提后的藥渣，進行水煎2次(8倍水)，每次I. 5小時處理，藥液過濾；(3)把醇提藥液、水提藥液混合后接入微生物蛋白酶(谷草桿菌)，在溫度25-28° C、PH6. 5—7、攪拌200rpm條件下進行酶解4小時，產生環肽，滅酶；(4)將上述藥液濃縮，調ph值7-10，在溫度40° C、每分鐘攪拌80次的條件下進行厭氧發酵產酸(短鏈脂肪酸)，時
間10天；(5)過濾純化，將藥液濃縮到每人每天服用3次、每次20毫升的濃度(藥材水為1:0. 86)，再按上述配方比例加硒粉混懸液，強力攪拌2小時，產生含硒肽，及時灌裝扎封，105° C流通蒸汽滅菌30分鐘，既得硒環肽·脂肪酸合劑。
權利要求
1.一種抗腫瘤抗氧化的硒環肽·脂肪酸合劑，其特征在于它是由下述重量配比的原料和方法制成的合劑 人參2-15份茜草3-20份枸杞子5-25份 五味子2-10份薏苡仁7-30份茯苓5-20份 太子參8-30份桅子4-20份硒O. 000001-0. 002份 將上述配比的原料混合后粉碎制成粗粉，用常規提取方法得到水煎藥液，加入酶進行微生物發酵培養，調PH值，加熱滅酶，冷卻，過濾純化，既得，再按常規方法制成藥物劑型。
2.根據權利要求I所述的合劑，其特征在于所說的制備方法包括以下步驟(I)將人參、茜草、五味子、茯苓、太子參按上述配方比例混合粉碎，用75%乙醇(6倍量)回流提取I.5小時，濾過醇提液備用，藥渣分別保存；(2)將枸杞子、薏苡仁、桅子按上述配方比例混合粉碎，加入醇提后的藥渣，進行水煎2次(8倍水)，每次I. 5小時處理，藥液過濾；(3)把醇提藥液、水提藥液混合后接入微生物蛋白酶，在溫度25-28° C、pH6. 5— 7、攪拌條件下進行酶解3-5小時，產生肽，滅酶；(4)將上述藥液濃縮，調ph值7-10，在溫度20-42° C、每分鐘攪拌60-80次的條件下進行厭氧發酵生產短鏈脂肪酸，時間7-30天；(5)冷卻，過濾純化，按上述配方比例加硒，再按常規方法制成藥物劑型，既得硒環肽·脂肪酸合劑。
3.根據權利要求I或2所述的合劑，其特征在于所說的合劑可加工成保健食品。
全文摘要
“硒環肽·脂肪酸合劑”是以中藥人參、茜草、枸杞子、五味子、薏苡仁、茯苓、太子參、梔子、硒等為基原，利用現代微生物發酵技術制備的，具有全新化學結構的組蛋白去乙酰化酶純天然增效性組合抑制劑，包括含硒肽、環肽、短鏈脂肪酸等組合化合物，屬于新型抗腫瘤作用機制的腫瘤表觀遺傳調控藥物，與傳統的腫瘤治療藥物不同，它以癌細胞異常的表觀遺傳作為靶點進行飽和攻擊，并通過誘導患者自身的免疫監測和免疫殺傷作用而發揮整體協同抗腫瘤作用，并且抗氧化，純天然無化學污染。
文檔編號A61K36/8994GK102772696SQ20121018833
公開日2012年11月14日 申請日期2012年6月9日 優先權日2012年6月9日
發明者楊京潤, 楊吉星 申請人:北京港生藥業科技有限公司