專利名稱：一種抗真菌作用的金蓮花藥渣發酵物及其制備工藝的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種抗真菌作用的金蓮花藥渣發酵物及其制備工藝，屬于治療真菌感染疾病技術領域。
背景技術：
我國中醫藥學歷史悠久，中藥業是我國傳統產業之一。中藥企業在生產出大量中成藥的同時，會產生相當數量的藥渣，藥渣一般為濕物料，極易腐敗，味道臭異。早期中藥渣處理的形式主要包括填埋、焚燒、固定區域堆放等。這些處理方法不僅耗去大量資金，更造成了資源浪費和嚴重的污染，如何處理中藥渣已經成為一個亟待解決的問題。所以，利用生物技術對中藥藥渣進行處理，以期達到變廢為寶，提高中藥資源的利用率備受人們的關·注。藥渣中不僅含有豐富的蛋白質、纖維素等初生物質，而且由于現在的提取工藝比較單一(水煎煮)，這些經過提取、煎煮后的中藥中的部分活性成分仍殘留在藥渣中，這些殘留的初生及次生物質使得藥渣具有很高的再利用價值，因此，藥渣作為一種資源開始受到人們的重視，已成為中藥現代化研究的重要內容之一。隨著大量廣譜抗生素的應用、骨髓及器官移植的開展、糖皮質激素及免疫抑制劑的應用，導管介入治療，特別是艾滋病的流行，念珠菌血癥和皮膚、粘膜等真菌感染疾病逐漸增多。真菌感染發生率不斷上升，除了常見病原菌感染的數量不斷增多外，一些罕見的真菌感染也時有報道，針對真菌病日趨嚴重的形勢，對抗真菌藥物的研究也日益增多，但目前療效高、副作用低的抗真菌藥物不多。因此，研究開發高校、無毒、價格低廉、應用方便的抗真菌藥物具有深遠的意義。金蓮花是毛茛科植物金蓮花(Trollius chinensis Bunge)的干燥花及花蕾,廣泛分布于西南、西北、華北、東北等地區。金蓮花具有悠久的藥用歷史，民間用開水沏當茶，具有清熱解毒之功效。目，國內有數十家制藥公司生產金蓮花中藥，有金蓮花膠囊、金蓮花片齊U、金蓮花口服液、金蓮花注射液等制劑，臨床主要用于治療感冒、發燒、慢性扁桃體炎、急性鼓膜炎、尿路感染等炎癥。據不完全統計，全國每年利用金蓮花制藥產生的藥渣有數百萬噸，而絕大多數被廢棄掉，不僅污染環境，而且藥廠為處理藥渣還要消耗大量費用。因此如何將金蓮花藥渣充分利用，變廢為寶，意義深遠。
發明內容
本發明的目的是提供一種抗真菌作用的金蓮花藥渣發酵物及其制備工藝，工藝流程簡單、成本低廉、應用方便，效果好，解決背景技術中存在的上述問題。本發明的目的是這樣實現的一種抗真菌作用的金蓮花藥渣發酵物制備工藝，包含如下工藝步驟
①將干燥后的金蓮花藥渣粉碎成粉末；
②酵母菌活化增殖培養，取高壓滅菌后的增菌液體培養基于無菌容器內，無菌環境下加安琪干酵母5-10克/100ml，置35-37°C恒溫培養箱培養5_7 h ；③將活化增值的酵母菌液加入質量體積分數為40—60%的金蓮花藥渣粉末、4%蛋白胨、4%葡萄糖，混合均勻后繼續發酵；
④發酵條件為培養溫度30—37°C，培養時間72— 96小時；
⑤發酵結束后，將發酵物加入無水乙醇，使乙醇濃度達到60-80%，在提取器中70°C萃取2-4h，將提取液1500-2500轉/分離心15-25分鐘；取上清液在旋轉蒸發儀上回收乙醇，回收乙醇后的剩余液70°C水浴成膏狀，80°C烤箱烤干，即得到金蓮花藥渣發酵物。所述的金蓮花藥渣發酵物提取率為4-8%，即100克金蓮花藥渣發酵后用乙醇提取獲得4-8克金蓮花藥渣發酵物，每克金蓮花藥渣發酵物相當含藥渣12. 5-25g。所述的增菌液體培養基比例為蛋白胨40 g、酵母浸粉20 g、葡萄糖40 g，置于1000 ml蒸餾水中。一種抗真菌作用的金蓮花藥渣發酵物，將干燥后的金蓮花藥渣粉碎成粉末作為原料，以安琪酵母菌為發酵菌種，同時加入酵母菌生長必須的蛋白胨、葡萄糖營養成分，提取金蓮花藥渣發酵物，所述金蓮花藥渣發酵物為發酵品的乙醇提取物，干燥后每克金蓮花藥渣發酵物相當含藥渣12. 5-25g。金蓮花藥渣發酵物根據需要制成不同劑型，作為抗真菌藥物，用于人體的體內、夕卜真菌感染治療與畜禽真菌感染疾病治療。將所述金蓮花藥渣發酵物研磨粉末后，可制成片齊U、膠囊或顆粒劑等劑型，用于口服治療全身真菌感染疾病；也可以制成霜劑、軟膏、洗劑或噴霧劑，治療皮膚、粘膜等真菌感染。用金蓮花藥渣發酵物治療動物體內不同途徑真菌感染模型，觀察其動物體內外感染真菌的治療效果，同時觀察了其毒性。結果表明金蓮花藥渣發酵物對感染真菌的實驗動物有很好的治療效果，并未發現任何毒副作用；體外直接抗真菌實驗，結果表明對臨床分離的致病及耐藥真菌菌株有良好的抑制或殺滅效果，其抗真菌濃度明顯低于常規的艾葉水煎劑和乙醇提取物。本發明為臨床或牲蓄抗真菌藥物提供一種新的選擇，具有成本低廉、應用方便、效益高等特點。本發明的積極效果是(I)金蓮花藥渣資源豐富，把金蓮花提取藥用成分后的藥渣和廢棄物治理及其資源充分利用有效結合，符合可持續發展和循環經濟的基本國策，對國家、企業、消費者都有益，具有推廣應用前景，會產生經濟效益和社會效益；(2)金蓮花藥渣發酵藥用價值高，制藥企業生產金蓮花制劑絕大多數是水煎煮提物有效成分，部分有效成分殘留在藥渣中。本發明應用微生物發酵，經微生物酶的作用可以使一些成分進一步轉化，另一方面一些有效成分可用乙醇進一步萃取出來，為金蓮花資源的再利用和新用途提供科學依據；(3)制備工藝簡單本方法工藝流程簡單，不需要特殊儀器和設備，成本低，生產周期短，適合于工業化生產；(4)應用方便，效果明顯該制劑用量小、效價比高、儲存及應用均方便。并能明顯增加真菌感染實驗動物的治療效果；(5)減少污染，增加經濟效益金蓮花藥渣含水量較高，極易腐敗，會對環境造成嚴重的污染，并且藥渣的廢棄物中尚含有蛋白質、多糖、各種微量元素和維生素及一定量可利用成分，及時對其進行綜合利用，不僅可以解決污染問題，還可帶來一定的經濟效益，具有廣闊的前景。
具體實施例方式以下通過實施例，對本發明作進一步說明。、
一種抗真菌作用的金蓮花藥渣發酵物制備工藝，包含如下工藝步驟
①將干燥后的金蓮花藥渣粉碎成粉末；
②酵母菌活化增殖培養，取高壓滅菌后的增菌液體培養基于無菌容器內，無菌環境下加安琪干酵母5-10克/100ml，置35-37°C恒溫培養箱培養5_7 h ；
③將活化增值的酵母菌液加入質量體積分數為40—60%的金蓮花藥渣粉末、4%蛋白胨、4%葡萄糖，混合均勻后繼續發酵；
④發酵條件為培養溫度30—37°C，培養時間72— 96小時；
⑤發酵結束后，將發酵物加入無水乙醇，使乙醇濃度達到60-80%，在提取器中70°C萃取2-4h，將提取液1500-2500轉/分離心15-25分鐘；取上清液在旋轉蒸發儀上回收乙醇，回收乙醇后的剩余液70°C水浴成膏狀，80°C烤箱烤干，即得到金蓮花藥渣發酵物。在實施例中，本發明按上述制備工藝將金蓮花藥渣進行發酵，在規定的范圍內進行了幾個方案的制備，并對其發酵產物提取物進行了體外和體內動物實驗，均得到一致的有益結果。實施例一
①酵母菌活化增殖培養增菌液體培養基酵母菌=IOOml :5g，35°C恒溫培養箱培養7
h0②活化酵母菌與金蓮花藥渣比例活化酵母菌液金蓮花藥渣=IOOml :40g。③發酵條件為溫度30°C，時間96小時。④發酵物提取方法發酵物加入無水乙醇，使乙醇濃度達到60%，70°C萃取2h，提取液1500轉/分離心25min。上清液回收乙醇，回收乙醇后的剩余液70 V水浴成膏狀，80 V烤箱烤干，即得到金蓮花藥渣發酵提取物。實施例二
①酵母菌活化增殖培養增菌液體培養基酵母菌=IOOml :8g，36°C恒溫培養箱培養6
h0②活化酵母菌與金蓮花藥渣比例活化酵母菌液金蓮花藥渣=IOOml :50g。③發酵條件為溫度34°C，時間84小時。④發酵物提取方法發酵物加入無水乙醇，使乙醇濃度達到70%，70°C萃取4h，提取液2000轉/分離心20min。上清液回收乙醇，回收乙醇后的剩余液70°C水浴成膏狀，80°C烤箱烤干，即得到金蓮花藥渣發酵提取物。實施例三
①酵母菌活化增殖培養=YPD液體培養基酵母菌=IOOml :10g，37°C恒溫培養箱 培養5
h0②活化酵母菌與金蓮花藥渣比例活化酵母菌液金蓮花藥渣=IOOml :60g。③發酵條件為溫度37°C，時間72小時。④發酵物提取方法發酵物加入無水乙醇，使乙醇濃度達到80%，70°C萃取3h，提取液2500轉/分離心15min。上清液回收乙醇，回收乙醇后的剩余液70°C水浴成膏狀，80°C烤箱烤干，即得到金蓮花藥渣發酵提取物。將實施例一、二、三研磨成粉末，分別制成膠囊、片劑、顆粒口服用于動物體內實驗，制成霜劑、軟膏、洗劑外用進行皮膚粘膜抗真菌實驗。
體外抗真菌實驗
采用試管法和平皿法觀察金蓮花藥渣發酵提取物(試樣)對白色念珠菌和羊毛狀小孢子菌體外抗真菌作用，并以氟康唑為陽性對照藥，測定最小抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC);結果見表I。表I結果顯示，試樣對白色念珠菌的抑制作用和殺滅作用幾乎與氟康唑相近，只相差一個梯度；試樣對羊毛狀小孢子菌的抑制作用和殺滅作用與氟康唑一致。其最低抑真菌濃度MIC和殺真菌濃度均較低。表I.試樣對白色念珠菌和羊毛狀小孢子菌的MIC和MBC
權利要求
1.一種抗真菌作用的金蓮花藥渣發酵物制備工藝，其特征在于包含如下工藝步驟 ①將干燥后的金蓮花藥渣粉碎成粉末； ②酵母菌活化增殖培養，取高壓滅菌后的增菌液體培養基于無菌容器內，無菌環境下加安琪干酵母5-10克/100ml，置35-37°C恒溫培養箱培養5_7 h ； ③將活化增值的酵母菌液加入質量體積分數為40—60%的金蓮花藥渣粉末、4%蛋白胨、4%葡萄糖，混合均勻后繼續發酵； ④發酵條件為培養溫度30—37°C，培養時間72— 96小時； ⑤發酵結束后，將發酵物加入無水乙醇，使乙醇濃度達到60-80%，在提取器中70°C萃取2-4h，將提取液1500-2500轉/分離心15-25分鐘；取上清液在旋轉蒸發儀上回收乙醇，回收乙醇后的剩余液70°C水浴成膏狀，80°C烤箱烤干，即得到金蓮花藥渣發酵物。
2.根據權利要求I所述之一種抗真菌作用的金蓮花藥渣發酵物制備工藝，其特征在于所述的金蓮花藥渣發酵物提取率為4-8%，即100克金蓮花藥渣發酵后用乙醇提取獲得4-8克金蓮花藥渣發酵物，每克金蓮花藥渣發酵物相當含藥渣12. 5-25g。
3.根據權利要求I或2所述之一種抗真菌作用的金蓮花藥渣發酵物制備工藝，其特征在于所述的增菌液體培養基比例為蛋白胨40 g、酵母浸粉20 g、葡萄糖40 g，置于1000ml蒸餾水中。
4.一種抗真菌作用的金蓮花藥渣發酵物，其特征在于將干燥后的金蓮花藥渣粉碎成粉末作為原料，以安琪酵母菌為發酵菌種，同時加入酵母菌生長必須的蛋白胨、葡萄糖營養成分，提取金蓮花藥渣發酵物，所述金蓮花藥渣發酵物為發酵品的乙醇提取物，干燥后每克金蓮花藥渣發酵物相當含藥渣12. 5-25g。
5.根據權利要求4所述之一種抗真菌作用的金蓮花藥渣發酵物，其特征在于所述金蓮花藥渣發酵物作為抗真菌藥物，用于人體的全身或局部真菌感染治療與畜禽全身或局部真菌感染疾病的治療。
6.根據權利要求5所述之一種抗真菌作用的金蓮花藥渣發酵物，其特征在于所述金蓮花藥渣發酵物研磨粉末后，制成片劑、膠囊或顆粒劑劑型，用于口服治療全身真菌感染疾病；制成霜劑、軟膏、洗劑或噴霧劑，治療皮膚、粘膜等真菌感染。
全文摘要
本發明涉及一種抗真菌作用的金蓮花藥渣發酵物及其制備工藝，屬于治療真菌感染疾病技術領域。技術方案是將干燥后的金蓮花藥渣粉碎成粉末作為原料，以安琪酵母菌為發酵菌種，同時加入酵母菌生長必須的蛋白胨、葡萄糖營養成分，提取金蓮花藥渣發酵物，所述金蓮花藥渣發酵物為發酵品的乙醇提取物，干燥后每克金蓮花藥渣發酵物相當含藥渣12.5-25g。試驗結果表明金蓮花藥渣發酵物對感染真菌的實驗動物有很好的治療效果，并未發現任何毒副作用；對臨床分離的致病及耐藥真菌菌株有良好的抑制或殺滅效果，其抗真菌濃度與臨床常用的抗真菌藥物氟康唑、潔爾陰一致。本發明為臨床或牲蓄抗真菌藥物提供一種新的選擇，具有成本低廉、應用方便、效益高等特點。
文檔編號A61P31/10GK102727599SQ20121023618
公開日2012年10月17日 申請日期2012年7月10日 優先權日2012年7月10日
發明者儲金秀, 勾向博, 安春娜, 張博男, 張瀟, 王建行, 王志路, 王樹華, 白靜, 胡雷, 韓婷, 韓淑英 申請人:河北聯合大學