專利名稱：一種炮制大黃或/和生大黃的檢測方法
技術領域：
本發明涉及一種炮制大黃或/和生大黃的檢測方法,本發明還涉及一種九制大黃的質量檢測方法。
背景技術：
大黃為寥科植物藥用大黃Rheum officinale Baill.、掌葉大黃RheumpalmatumL.或唐古特大黃Rheum tanguticum Maxim, ex Balf.的干燥根及根莖。大黃為臨床常用中藥，具有瀉熱通腸，涼血解毒，逐瘀通經的功能。然而，生大黃的劇烈瀉下、腹痛的副作用比較突出，因此，歷代對大黃多采用酒炒、醋炒、清蒸、制炭、酒蒸、蜜蒸、醋蒸、九蒸九曬等手段進行炮制。一般認為，大黃酒炒后瀉下稍緩，善清上焦血分熱毒。酒熟大黃瀉下緩和，減輕腹痛、惡心、嘔吐等不良反應，增強活血祛瘀作用。大黃炭瀉下極弱，并有止血作用。·醋大黃瀉下稍緩，善于消積化瘀。其中，九制大黃為大黃的干燥根及根莖經九蒸九曬后所得，經過九蒸九曬的炮制過程，九制大黃的部分結合性蒽醌衍生物轉變為游離性蒽醌衍生物，九制大黃與生大黃相t匕，強烈的腹痛、瀉下副作用得到緩解，而生大黃的降血脂、改善血液流變學的作用得到保留，故歷代醫藥學家對副作用低的九制大黃的療效給予肯定和推崇。九制大黃的傳統炮制工藝為取生大黃片加10%的黃酒與適量水，拌勻，悶透過夜(約18h)，于次日常溫下蒸2h，取出，曬至七八成干時，把剩余藥汁拌入，混勻，曬干，如此反復九蒸九曬即得九制大黃。雖然九制大黃療效顯著，但因其炮制工藝繁瑣，工時較長，能耗大，不適應于大生產，因此生產該炮制品的廠家日益減少，處于瀕臨滅絕的境地，故市場上該炮制品種嚴重匱乏。專利號200910264893. X，發明名稱一種醋五味子的炮制方法，該專利中指出，傳統醋蒸五味子需要蒸制1-2天，耗時長，而該發明中采用高壓蒸制方法，不僅保證了產品質量，而且還節約了炮制時間，降低了能耗。高壓蒸制法，為目前新興的炮制方法之一，目前還未見將高壓蒸制法用于炮制生大黃的系統性研究報道。隨著中藥化學的逐漸發展,人們開始對生大黃和九制大黃的化學成分就行研究，希望從化學成分的差異上來說明生品和炮制品的區別。有學者對大黃中多糖、鞣質含量進行了統計，認為九制大黃與六制大黃相當，即九制大黃只須蒸曬6次即可(胡昌江，等，九制大黃炮制過程中多糖和鞣質的含量變化研究，中成藥，1999年21卷8期)。然而，大黃主要成分為結合性蒽醌、游離性蒽醌、芪類化合物、鞣質、多糖等，在經過炮制后，其有效成分的化學結構發生較大改變，而炮制方法中的細小差異很有可能會導致炮制品質量的差異，因此，為了規范九制大黃的產品質量，急需建立一種準確可行的質量檢測方法。目前，對生大黃的質量檢測方法有較多的報道，劉氏等研究了大黃飲片的HPLC指紋圖譜，采用C 18柱，柱溫40°C，以乙腈-O. 1%磷酸進行梯度洗脫，最終分離得出25個共有峰，該法重復性好，為大黃藥材質量控制提供了依據(劉翠玲等，大黃飲片HPLC指紋圖譜的方法學研究，中藥新藥與臨床藥理，2009年20卷5期)。然而，生大黃在經九蒸九曬的炮制過程后，其化學成分發生較大變化，能否采用現有生大黃的色譜條件對九制大黃進行質量檢測，還無法論證；同時，上述方法采用乙腈為有機相，乙腈售價較高，且對人體危害較為嚴重，加之該方法檢測時間在96分鐘以上，乙腈用量較大，不利于檢測成本的節省和對環境的保護。
發明內容
本發明的目的在于提供一種可以有效檢測炮制大黃或/和生大黃的方法；本發明的另一目的是提供一種采用指紋圖譜對九制大黃的質量檢測方法；本發明的另一目的是提供一種制備九制大黃的新方法，用以取代傳統九制大黃繁瑣的工藝步驟；本發明還提供了一種九制大黃的檢測方法。本發明提供了一種炮制大黃或/和生大黃的檢測方法，它是采用高效液相色譜法進行檢測的，色譜條件如下色譜柱以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；紫外檢測器，檢測波長為254±5nm ;流動相為甲醇-(O. 1%-0. 3%) V/V磷酸水溶液系統，梯度洗脫，梯度條件如下
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O進一步地，檢測波長為254nm ;流動相為甲醇-O. 1%V/V磷酸水溶液系統。進一步地，所述高效液相色譜法中，柱溫為25-35 °C。進一步地,色譜柱為Kromasil C18, 250mm X 4. 6mm, 5 μ m0進一步地，所述高效液相色譜法中，樣品溶液的制備方法如下精密稱取炮制大黃或生大黃樣品粗粉，以50-100%v/v甲醇提取后，定容，制備得到樣品溶液。進一步地,所述高效液相色譜法中，以蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚中的一種化合物或兩種以上的混合物為對照品。本發明還提供了九制大黃的質量檢測方法，它包括如下操作步驟(I)樣品溶液的制備精密稱取九制大黃樣品粗粉，加入適量甲醇，浸泡后，超聲提取，提取液放冷至室溫，過濾，定容，微濾后，取續濾液作為樣品溶液；(2)參照品溶液制備用甲醇或流動相溶液溶解大黃酚，微濾，濾液作為參照品溶液；(3)色譜條件色譜柱以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；紫外檢測器，檢測波長為254±5nm ;流動相為甲醇-0.1%V/V磷酸水系統，梯度洗脫，梯度條件如下
權利要求
1.一種炮制大黃或/和生大黃的檢測方法，其特征在于它是釆用高效液相色譜法進行檢測的，色譜條件如下 色譜柱以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；紫外檢測波長為254±5mn;流動相為甲醇-(0. 1%-0. 3%) V/V磷酸水溶液系統，梯度洗脫，梯度條件如下
2.根據權利要求I所述的檢測方法，其特征在于檢測波長為254nm;流動相為甲醇-0. 1%V/V磷酸水溶液系統。
3.根據權利要求I所述的檢測方法，其特征在于所述高效液相色譜法中，柱溫為25-35 °C。
4.根據權利要求I所述的檢測方法，其特征在干色譜柱為KromasilCIS，250mmX 4. 6mm，5 u m。
5.根據權利要求I所述的檢測方法，其特征在于所述高效液相色譜法中，樣品溶液的制備方法如下 精密稱取炮制大黃或生大黃樣品粗粉，以50-100%v/v甲醇提取后，定容，制備得到樣品溶液。
6.根據權利要求I所述的檢測方法，其特征在于所述高效液相色譜法中，以蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚中的ー種化合物或兩種以上的混合物為對照品。
7.九制大黃的質量檢測方法，其特征在于它包括如下操作步驟 (1)樣品溶液的制備 精密稱取九制大黃樣品粗粉，加入適量甲醇，浸泡后，超聲提取，提取液放冷至室溫，過濾，定容，微濾后，取續濾液作為樣品溶液； (2)參照品溶液制備 用甲醇或流動相溶液溶解大黃酚，微濾，濾液作為參照品溶液； (3)色譜條件 色譜柱以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；紫外檢測器，檢測波長為254±5nm;流動相為甲醇-0. 1%V/V磷酸水系統，梯度洗脫，梯度條件如下
8.根據權利要求7所述的質量檢測方法，其特征在于步驟(I)中，甲醇用量為九制大黃的50倍W/V，浸泡12h，超聲提取30min。
9.根據權利要求7所述的質量檢測方法，其特征在于所述標準指紋圖譜如圖I所示。
10.一種制備九制大黃的方法，其特征在于具體方法如下 (1)取生大黃，加黃酒水溶液悶潤，黃酒水=3:7V/V，至藥材潤至透心； (2)取步驟(I)悶潤后的藥材，高壓蒸制；所述高壓蒸制的溫度為110-120°C，蒸制次數為1-3次，毎次蒸制2-6小吋； (3)蒸制完成后，取出，干燥，即得大黃炮制品。
11.根據權利要求10所述的炮制方法，其特征在于步驟(2)中，所述高壓蒸制的溫度為120°C，蒸制次數為2-3次，毎次蒸制3小時；或，所述高壓蒸制的溫度為120°C，蒸制次數為I次，毎次蒸制6小吋。
全文摘要
本發明公開了一種檢測炮制大黃或/和生大黃的方法；本發明還公開了一種九制大黃的質量檢測方法以及九制大黃新的制備方法。本發明九制大黃或/和生大黃的檢測方法，以甲醇為有機相用于對九制大黃和生大黃的鑒別和檢測，各成分分離度良好，能夠較好地對九制大黃和生大黃實現質量控制，同時，本方法中采用甲醇為有機相，不僅極大地節省了檢測成本、保護了環境。九制大黃的質量檢測方法，能夠清楚地鑒別到九制大黃與其他炮制品或生大黃的差別，為九制大黃的使用提供了安全保證。本發明炮制方法，將傳統的九蒸九曬減少至1-3次的高壓蒸制，極大地減少了操作步驟，縮短了工時，為中藥大黃的炮制提供了一種新方法和思路。
文檔編號A61K36/708GK102788859SQ201210296450
公開日2012年11月21日 申請日期2012年8月20日 優先權日2011年8月31日
發明者張然, 胡昌江 申請人:成都中醫藥大學