專利名稱：一種抗hiv病毒、提高免疫力的中藥制劑及其制備方法
技術領域：
本發明屬于中藥領域，具體涉及一種抗HIV病毒、提高免疫力的中藥制劑及其制備方法。
背景技術：
艾滋病全稱為獲得性免疫缺陷綜合征(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS),是由人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus, HIV)引起的慢性致死性的傳染病。隨著艾滋病迅速蔓延，艾滋病已經成為全球高度重視的衛生問題和社會問題。現今用于治療艾滋病的藥物多為西藥，價格昂貴、毒副作用較多。目前，從中醫中藥中尋找抗HIV病毒藥物是研究的熱門課題，一些從天然植物中分離得到的化學成分如秋水仙堿、黃芪素、楊梅黃素等都具有抗HIV活性。中醫以辯證施治為精髓，從中醫病因學角度分析，艾滋 病的外因是邪毒外侵，內因是正氣虧虛。中醫藥的治療有著自身的優勢，具體體現在可以提 高機體免疫功能，抑制或殺滅HIV病毒等方面，總體改善患者臨床癥狀，提高患者生存質量
坐寸ο本發明所述的中藥組合制劑在制備抗HIV病毒、提高免疫力藥物中的新用途，至今尚未見文獻報道和專利公開。
發明內容
本發明的目的在于提供一種抗HIV病毒、提高免疫力的中藥制劑，它具有滋補腎陽、清熱解毒和通經絡的功效。本發明的技術方案如下一種抗HIV病毒、提高免疫力的中藥制劑及其制備方法，其特征在于所述組合物由下列重量百分比的原料制成
鎖陽 30%-45%、老鸛草 20%-35%、石斛 10%_25%、石榴皮 10%_15%、甘草 2%_10%。優選的是所述鎖陽為34. 5%、老鸛草為24. 4%、石斛為21. 5%、石榴皮為13. 4%、甘草為6. 2%ο優選的還可以是所述鎖陽為40. 8%、老鸛草為26. 5%、石斛為12. 6%、石榴皮為
11.7%、甘草為 8. 4%O一種抗HIV病毒、提高免疫力的中藥制劑的其制備方法，包括以下步驟
(1)各藥物組分按重量百分比進行稱量，將石斛、甘草加水煎煮2-4次，過濾，合并煎液，濃縮至相對密度為I. 03-1. 08的清膏，備用；
(2)將石榴皮、鎖陽加5-8倍量體積百分比為65-95%的乙醇水溶液回流提取2_4次，每次1-2. 5小時，過濾，合并濾液，濃縮至相對密度為I. 02-1. 20的浸膏，備用；
(3)將老鸛草加體積百分比為45-60%的乙醇水溶液微波提取1-2次，每次O.2-0. 5h，合并提取液，過濾，提取液加入熱明膠溶液，攪拌至不再產生沉淀為止，靜置l_3h，離心，棄去上清液得沉淀，沉淀加丙酮溶解，濃縮得浸膏；
(4)合并上述水提浸膏和醇提浸膏，減壓干燥，得干浸膏，粉碎成細粉，加入適宜的輔料，制成適合的劑型，即得。本發明的有益效果在于
本發明藥方中鎖陽為君，味甘，性溫，歸肝、腎、大腸經，以補腎助陽為長。石斛為臣，味甘，性微寒，歸胃、腎經，因此石斛與鎖陽配伍，增強了益腎效果。老鸛草和石榴皮為佐，老鸛草味辛、苦，性平，歸肝腎脾經，具有祛風濕，通經絡，清熱毒的功效。石榴皮味酸、澀，性溫，歸大腸經具有澀腸止瀉，殺蟲的功效。甘草味甘，性平，歸肺脾經，具有補脾益氣、緩急止痛、清熱解毒，調和諸藥的功效，現代藥理研究表明，其對HIV病毒具有抑制作用，作為使藥。綜上所述，本發明中藥組合制劑的主要治療功能是益腎健脾，清熱解毒，通經絡。用于抗HIV病毒、提高機體免疫力。本發明藥物組合中藥制劑經毒性試驗證明無毒副作用，經藥效學試驗證明本中藥 制劑是一種有效、價格低廉的抗Hiv病毒、提高機體免疫力的藥物。
具體實施例方式 下面將結合具體實施方式
進一步說明本發明，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。一、制備例
實施例I:
一種抗HIV病毒、提高免疫力的中藥制劑，按重量百分比由以下組分組成鎖陽為39. 1%、老鸛草為25. 4%、石斛為18. 2%、石榴皮為13. 1%、甘草為3. 6%。實施例2
一種抗HIV病毒、提高免疫力的中藥制劑，按重量百分比由以下組分組成鎖陽為
33.4%、老鸛草為21. 8%、石斛為25. 0%、石榴皮為11. 5%、甘草為8. 3%。實施例3:
一種抗HIV病毒、提高免疫力的中藥制劑，按重量百分比由以下組分組成鎖陽為
34.5%、老鸛草為24. 4%、石斛為21. 5%、石槽皮為13. 4%、甘草為6. 2%。實施例4:
一種抗HIV病毒、提高免疫力的中藥制劑，按重量百分比由以下組分組成鎖陽為41. 8%、老鸛草為30. 5%、石斛為10. 4%、石槽皮為10. 9%、甘草為6. 4%。實施例5:
一種抗HIV病毒、提高免疫力的中藥制劑的制備方法，采用以下步驟(I)按重量百分比稱取，鎖陽為35. 2%、老鸛草為33. 1%、石斛為13. 7%、石榴皮為14. 3%、甘草為3. 7% ; (2)將所述石斛和甘草分別加8倍量的水煎煮3次，過濾，合并提取液，濃縮至相對密度I. 05，得到清膏備用；(3)將所述石榴皮、鎖陽分別加入體積百分比為85%的乙醇水溶液加熱回流提取3次，每次I. 5h，過濾，合并濾液，濃縮至相對密度為I. 14的浸膏，備用；(4)將所述老鸛草加入6倍量體積百分比為50%的乙醇水溶液微波提取2次，每次30min，合并提取液，過濾，提取液加入熱明膠溶液，攪拌至不再產生沉淀為止，靜置I. 5h，離心，棄去上清液得到沉淀，沉淀加丙酮溶解，濃縮得到浸膏；(5)將上述水提浸膏和醇提浸膏合并，減壓干燥得到干浸膏，粉碎成細粉，過100目篩，加2%重量體積百分比的聚乙烯吡咯烷酮的醇溶液作粘合劑，制粒，真空干燥，加入適量微晶纖維素和微粉硅膠的預混輔料，填充膠囊，制得膠囊劑。實施例6:一種抗HIV病毒、提高免疫力的中藥制劑，按重量百分比由以下組分組成鎖陽為37. 6%、老鸛草為28. 6%、石斛為20. 6%、石榴皮為10. 4%、甘草為2. 8%，按實施例5的步驟
(2)、(3)、(4)、(5)制成。實施例7:
一種抗HIV病毒、提高免疫力的中藥制劑，按重量百分比由以下組分組成鎖陽為45. 0%、老鸛草為20. 8%、石斛為24. 9%、石榴皮為12. 3%、甘草為7. 0%，按實施例5的步驟
(2)、(3)、(4)、(5)制成。實施例8
一種抗HIV病毒、提高免疫力的中藥制劑的制備方法，采用以下步驟(I)按重量百分 比稱取，鎖陽為43. 5%、老鸛草為21. 4%、石斛為15. 5%、石榴皮為13. 7%、甘草為5. 9% ；(2)將所述石斛和甘草分別加10倍量的水煎煮2次，過濾，合并提取液，濃縮至相對密度I. 03，得到清膏備用；(3)將所述石榴皮、鎖陽分別加入體積百分比為65%的乙醇水溶液加熱回流提取4次，每次I. Oh,過濾，合并濾液，濃縮至相對密度為I. 20的浸膏，備用；(4)將所述老鸛草加入8倍量體積百分比為60%的乙醇水溶液微波提取2次，每次15min，合并提取液，過濾，提取液加入熱明膠溶液，攪拌至不再產生沉淀為止，靜置3h，離心，棄去上清液得到沉淀，沉淀加丙酮溶解，濃縮得到浸膏；(5)將上述水提浸膏和醇提浸膏合并，減壓干燥得到干浸膏，粉碎成細粉，過100目篩，加1%重量體積百分比的聚乙烯吡咯烷酮的醇溶液作粘合齊U，制粒，真空干燥，加入適量乳糖，制得片劑。實施例9:
一種抗HIV病毒、提高免疫力的中藥制劑的制備方法，采用以下步驟(I)按重量百分比稱取，鎖陽為30. 2%、老鸛草為34. 7%、石斛為17. 3%、石榴皮為10. 0%、甘草為7. 8% ; (2)將所述石斛和甘草分別加8倍量的水煎煮4次，過濾，合并提取液，濃縮至相對密度I. 08，得到清膏備用；(3)將所述石榴皮、鎖陽分別加入體積百分比為95%的乙醇水溶液加熱回流提取2次，每次2. 5h，過濾，合并濾液，濃縮至相對密度為I. 08的浸膏，備用；(4)將所述老鸛草加入5倍量體積百分比為45%的乙醇水溶液微波提取I次，每次25min，合并提取液，過濾，提取液加入熱明膠溶液，攪拌至不再產生沉淀為止，靜置2h，離心，棄去上清液得到沉淀，沉淀加丙酮溶解，濃縮得到浸膏；(5)將上述水提浸膏和醇提浸膏合并，減壓干燥得到干浸膏，粉碎成細粉，過100目篩，加2%重量體積百分比的聚乙烯吡咯烷酮的醇溶液作粘合劑，制粒，真空干燥，加入適量微粉硅膠，制得片劑。實施例10
一種抗HIV病毒、提高免疫力的中藥制劑的制備方法，采用以下步驟(I)按重量百分比稱取，鎖陽為40. 8%、老鸛草為26. 5%、石斛為12. 6%、石榴皮為11. 7%、甘草為8. 4% ；(2)將所述石斛和甘草分別加10倍量的水煎煮3次，過濾，合并提取液，濃縮至相對密度I. 06，得到清膏備用；(3)將所述石榴皮、鎖陽分別加入6倍量體積百分比為90%的乙醇水溶液加熱回流提取2次，每次2. Oh,過濾，合并濾液，濃縮至相對密度為I. 02的浸膏，備用；(4)將所述老鸛草加入體積百分比為55%的乙醇水溶液微波提取2次，每次12min，合并提取液，過濾，提取液加入熱明膠溶液，攪拌至不再產生沉淀為止，靜置lh，離心，棄去上清液得到沉淀，沉淀加丙酮溶解，濃縮得到浸膏；(5)將上述水提浸膏和醇提浸膏合并，減壓干燥得到干浸膏，粉碎成細粉，過100目篩，加1%重量體積百分比的聚乙烯吡咯烷酮的醇溶液作粘合齊 ，制粒，真空干燥，加入適量微晶纖維素，填充膠囊，制得膠囊劑。二、試驗例本發明中藥制劑對小鼠淋巴細胞免疫調節功能的影響。試驗例I :本發明中藥制劑對小鼠體重和臟器指數的影響。體重16-18gICR小鼠，雌雄各半，購自上海斯萊克實驗動物有限公司。將小鼠隨機分為正常對照組和實驗組，每組10只，實驗組包括本發明中藥制劑低、中、高劑量組，所用劑量分別為O. 245g/kg體重、O. 490g/kg體重、I. 470g/kg體重。本發明中藥制劑樣品(按實施例3方法制備所得)加蒸餾水配制所需濃度，正常對照組給予等體積的蒸餾水，灌胃給藥，各組均每次灌胃O. 5ml/10g，每日I次，連續給藥30日。各組灌胃給藥30日，于末次給藥后24h，稱體重，摘眼球放血處死，摘出胸腺和脾臟稱重。以胸腺或脾臟重量(mg)與體重(g)之比作為胸腺或脾指數。
試驗結果本發明中藥制劑的低、中、高劑量組與蒸餾水正常對照組比較，無顯著差異性(P > O. 05)，結果見表I。表I本發明中藥制劑對小鼠體重及臟器指數的影響(X土S)
組別I劑量(g/kg體重) I體重I胸腺指數I脾指數
正常對照組 O_21. 30±1. 102. 13±0. 415. 84±0. 69
低劑量組0.245 20.60±1.202.23±0. 52 3±0. 73
中劑量組0.490 20·50±1·402· 19±0· 33H7±0.66
高劑量組| ·470 |20·70±1·30丨2· 25±0· 47|6· 04±0· 56
試驗例2 :本發明中藥制劑對小鼠T淋巴細胞增殖的影響。體重16_18gICR小鼠，雌雄各半，購自上海斯萊克實驗動物有限公司。將小鼠隨機分為正常對照組和實驗組，每組10只，實驗組包括本發明中藥制劑低、中、高劑量組，所用劑量分別為O. 245g/kg體重、O. 490g/kg體重、I. 470g/kg體重。本發明中藥制劑樣品(按實施例3方法制備所得)加蒸餾水配制所需濃度，正常對照組給予等體積的蒸餾水，灌胃給藥，各組均每次灌胃O. 5ml/10g，每日I次，連續給藥30日。ConA誘導的小鼠淋巴細胞轉化實驗(按文獻“保健食品檢驗與評價技術規范”中方法測定):采用MTT法檢測小鼠淋巴細胞轉化及增殖情況。無菌取脾，于無菌Hanks液中制成細胞懸液，200目篩網過濾，Hanks液洗滌3次。用RPMl 1640培養液調整細胞濃度為3 X IO6個.mL, —孔加ConA液50 μ L, 一孔作對照，置5%C02、37°C培養72h。培養結束前4h，每孔吸去上清液O. 7mL,加入不含小牛血清的RPMl 1640培養液和MTT(5mg/mL，每孔50 μ L)。培養結束后，每孔加入酸性異丙醇lmL，吹打混勻，波長570nm處用酶標儀測定吸光度值(A值)。淋巴細胞的增殖能力=加ConA孔的A值-不加ConA孔的A值。試驗結果本發明中藥制劑的低、中、高劑量組與蒸餾水正常對照組比較，差異有極顯著性，結果見表2。試驗例3 :本發明中藥制劑對小鼠遲發型變態反應和小鼠抗體生成脾細胞數的影響。體重16_18gICR小鼠，雌雄各半，購自上海斯萊克實驗動物有限公司。將小鼠隨機分為正常對照組和實驗組，每組10只，實驗組包括本發明中藥制劑低、中、高劑量組，所用劑量分別為O. 245g/kg體重、O. 490g/kg體重、I. 470g/kg體重。本發明中藥制劑樣品(按實施例3方法制備所得)加蒸餾水配制所需濃度，正常對照組給予等體積的蒸餾水，灌胃給藥，各組均每次灌胃O. 5ml/10g，每日I次，連續給藥30日。
末次給藥后各組小鼠均腹腔注射2% (V/V)SRBC懸液O. 2 μ L，致敏4日后，測量左后足趾厚度，然后再測量部位皮下注射20% (V/V) SRBC20 μ L，24h后測量左后足趾腫脹厚度，同一部位連續測量3次，取平均值。以前后足趾厚度差值表示DTH程度。試驗結果本發明中藥制劑的低、中、高劑量組與正常蒸餾水對照組相比，足趾腫脹度均有明顯的增高趨勢，中、高劑量組與對照組相比，P < O. 05，具有顯著性差異，結果見表2。表2本中藥制劑對小鼠遲發型變態反應和淋巴細胞轉化的影響(X土S)) 組別I劑量(g/kg體重) I淋巴細胞增殖能力I足趾腫脹差值(mm)
正常對照組_0孓 062±0.03O. 74±0. 13
低劑量組一O. 245—O. 074±0. 03O. 86±0. 15
中劑量組一O. 490—O. 102±0. 02O. 98±0. 20
高劑量組 | .470|θ. 117±0.05|l.06±0.24
試驗例4 :本發明中藥制劑抗HIV病毒實驗。選用人T淋巴細胞C8166、MT_4以及HIV-1實驗株HIV-I1iib測試本發明中藥制劑(按實施例3制備而得)對C8166細胞的毒性作用，本發明中藥制劑對HIV-I1iib誘導C8166細胞病變的抑制作用，本發明中藥制劑對HIV-I1iib感染MT-4細胞死亡的保護作用，由此測出本發明中藥制劑的毒性值CC5tl、活性值EC5tl和綜合治療指數TI，TI= CC50/ EC500一、對C8166細胞的毒性實驗
將本發明中藥制劑做倍比稀釋，將4 X 105/mlC8166細胞懸液100 μ L與不同濃度的待測藥物溶液混合，設3個重復孔。同時設置不含藥物的空白對照孔，37°C，5%C02培養3天，采用MTT法測定其對C8166細胞毒性。ELx800酶標儀測定OD值，測定波長為595nm，參考波長為630nm，計算得到CC5tl值，即對50%的正常T淋巴細胞系C8166產生毒性時的藥物濃度。二、對HIV-I1iib誘導C8166細胞病變的抑制作用實驗
將8X 105/mlC8166細胞50 μ L/孔接種到含有100 μ L/孔梯度倍比稀釋藥物的96孔細胞培養板上，然后加入50 μ L的HIV-I1iib稀釋上清，1300TCID50/孔。設3個重復孔，同時設置不含藥物的空白對照孔。AZT為陽性對照藥物。于37°C，5%C02培養3天，倒置顯微鏡下(100X )計數合胞體的形成。EC5tl為抑制合胞體形成50%的藥物濃度。三、HIV-I1iib感染MT-4細胞死亡的保護作用實驗
在96孔細胞培養板上，對藥物進行5倍倍比稀釋，每個稀釋度設4個孔，共6個稀釋度。每孔100 μ L，同時設置不含藥物的未感染或感染HIV-I1iib的細胞對照組。AZT作為陽性對照藥物。表3本發明中藥制劑的細胞毒性作用
權利要求
1.一種抗HIV病毒、提高免疫力的中藥制劑及其制備方法，其特征在于所述組合物由下列重量百分比的原料制成 鎖陽 30%-45%、老鸛草 20%-35%、石斛 10%_25%、石榴皮 10%_15%、甘草 2%_10%。
2.根據權利要求I所述的抗HIV病毒、提高免疫力的中藥制劑，其特征在于所述鎖陽為34. 5%、老鸛草為24. 4%、石斛為21. 5%、石槽皮為13. 4%、甘草為6. 2%。
3.根據權利要求I所述的抗HIV病毒、提高免疫力的中藥制劑，其特征在于所述鎖陽為40. 8%、老鸛草為26. 5%、石斛為12. 6%、石槽皮為11. 7%、甘草為8. 4%。
4.一種抗HIV病毒、提高免疫力的中藥制劑的其制備方法，其特征是包括以下步驟 (1)各藥物組分按重量百分比進行稱量，將石斛、甘草加水煎煮2-4次，過濾，合并煎液，濃縮至相對密度為I. 03-1. 08的清膏，備用； (2)將石榴皮、鎖陽加5-8倍量體積百分比為65-95%的乙醇水溶液回流提取2_4次，每次1-2. 5小時，過濾，合并濾液，濃縮至相對密度為I. 02-1. 20的浸膏，備用； (3)將老鸛草加體積百分比為45-60%的乙醇水溶液微波提取1-2次，每次0.2-0. 5h，合并提取液，過濾，提取液加入熱明膠溶液，攪拌至不再產生沉淀為止，靜置l_3h，離心，棄去上清液得沉淀，沉淀加丙酮溶解，濃縮得浸膏； (4)合并上述水提浸膏和醇提浸膏，減壓干燥，得干浸膏，粉碎成細粉，加入適宜的輔料，制成適合的劑型，即得。
全文摘要
本發明涉及一種抗HIV病毒、提高免疫力的中藥制劑及其制備方法，它由鎖陽、老鸛草、石斛、石榴皮、甘草組成，按特定工藝制成片劑、顆粒劑或膠囊劑等藥學上可接受的劑型。本發明藥物具有滋補腎陽、清熱解毒和通經絡的功效，對HIV病毒具有顯著的抑制作用，并提高機體免疫力。
文檔編號A61P31/18GK102846965SQ20121036013
公開日2013年1月2日 申請日期2012年9月25日 優先權日2012年9月25日
發明者蘇劉花 申請人:南京澤朗農業發展有限公司