一種治療肺部感染性疾病的藥物及其應用的制作方法
【專利摘要】一種治療肺部感染性疾病的藥物及其應用，屬于藥物【技術領域】。該藥物包含從四方蒿或風輪菜提取的總黃酮、新橙皮苷二氫查耳酮、柚皮苷二氫查耳酮、7-甲氧基漢黃芩素、6,7-二甲氧基黃芩素或其藥學上可接受的鹽中任意1種物質或任意2種以上物質的組合物。本發明一方面提供了一種治療肺部感染性疾病的藥物，該藥物具有抗病毒，抑制病毒誘導的肺損傷、肺水腫、肺炎，降低支氣管黏液分泌等藥理作用，本發明另一方面確定了一種治療肺部感染性疾病的藥物的應用，其可作為治療急性肺炎、病毒性肺炎、肺水腫或支氣管炎藥物使用。
【專利說明】一種治療肺部感染性疾病的藥物及其應用
【技術領域】
[0001]本發明屬于藥物【技術領域】，具體涉及一種治療肺部感染性疾病的藥物及其應用。【背景技術】
[0002]肺部感染在呼吸系統疾病或感染性疾病中占有較大的比重。由于目前醫療條件的限制，醫源性及續發性肺部感染的幾率日趨嚴重。盡管近年來抗生素和其它抗微生物藥物的應用，有效控制了病情的發展，但隨著病原微生物基因變異速度的加快及耐藥菌(如超級細菌)的出現，以及患者藥敏性的降低，肺部感染總體發病率和死亡率并無明顯降低，且抗生素類藥物的長期使用，具有較為明顯的毒副作用。天然藥物在治療肺部感染性疾病方面具有一定的優勢，可通過多途徑，多靶點而發揮療效。
[0003]四方蒿 Elsholtzia blanda Benth.或風輪菜 Clinopodium chinense (Benth.)
0.Kuntze [Calamintha Chinensis Benth.]為傳統中藥材,具有疏風清熱、解毒消腫的功效，臨床用于治療感冒發熱、咽喉腫痛、肝炎、腸炎等癥。在江浙地區資源豐富。但其藥效物質及藥理作用尚不清楚。
【發明內容】
[0004]針對現有技術存在的問題，本發明的目的在于設計提供一種治療肺部感染性疾病的藥物及其應用的技術方案。
[0005]所述的一種治療肺部感染性疾病的藥物，其特征在于包含從四方蒿或風輪菜提取的總黃酮、新橙皮苷二氫查耳酮、柚皮苷二氫查耳酮、7-甲氧基漢黃芩素、6，7-二甲氧基黃芩素或其藥學上可接受的鹽中任意I種物質或任意2種以上物質的組合物。
[0006]所述的一種治療肺部感染性疾病的藥物，其特征在于活性成分占總重量的1%。~99.9%，所述的活性成分為從四方蒿或風輪菜提取的總黃酮、新橙皮苷二氫查耳酮、柚皮苷二氫查耳酮、7-甲氧基漢黃芩素、6，7- 二甲氧基黃芩素或其藥學上可接受的鹽。
[0007]所述的一種治療肺部感染性疾病的藥物在制備治療肺部感染性疾病藥物中的應用。
[0008]所述的一種治療肺部感染性疾病的藥物的應用，其特征在于所述的肺部感染性疾病為急性肺炎、病毒性肺炎、肺水腫或支氣管炎。
[0009]本發明一方面提供了一種治療肺部感染性疾病的藥物，該藥物具有抗病毒，抑制病毒誘導的肺損傷、肺水腫、肺炎，降低支氣管黏液分泌等藥理作用，本發明另一方面確定了一種治療肺部感染性疾病的藥物的應用，其可作為治療急性肺炎、病毒性肺炎、肺水腫或支氣管炎藥物使用。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0010]圖1藥物對病毒感染小鼠肺損傷保護作用的HE染色病理觀察圖(放大倍數X 200) 圖2藥物對病毒感染小鼠肺組織AQP5蛋白表達的影響結果圖(放大倍數X200)圖3藥物對病毒感染小鼠氣管及肺組織MUC5AC蛋白表達的影響結果圖(放大倍數 X200)。
【具體實施方式】
[0011 ] 以下結合實施例來進一步說明本發明。
[0012]實施例1:四方蒿或風輪菜總黃酮、新橙皮苷二氫查耳酮、柚皮苷二氫查耳酮、7-甲氧基漢黃芩素、6，7-二甲氧基黃芩素的制備
1)將5Kg四方蒿或風輪菜根莖粉碎后，加藥材質量10倍的水提取，濃縮至流浸膏(含水量12%左右)，趁熱加浸膏體積5倍量的95%乙醇醇沉；
2)減壓濃縮乙醇提取物，至流浸膏(含水量12%左右)，加浸膏體積3倍量的蒸餾水混懸，以乙酸乙酯萃取4 - 5次，每次用量為混懸液體積3倍量的乙酸乙酯，減壓或真空干燥濃縮乙酸乙酯提取物至干浸膏，即得到四方蒿或風輪菜總黃酮；
3)取20g四方蒿或風輪菜總黃酮濕法裝柱，進行硅膠柱層析，以乙酸乙酯和石油醚(溶劑比例1:20 — 10:1)或乙酸乙酯和氯仿(溶劑比例1:5 — 5:1)洗脫；
4)硅膠薄層檢測層析流份，每50mL收集一流份，以石油醚-乙酸乙酯-冰醋酸(7: 3:0.5)為展開劑，經碘熏后日光下檢識，具有相同斑點的流份合并，濃縮至干，分別得到新橙皮苷二氫查耳酮、新柚皮苷二氫查耳酮、7-甲氧基漢黃芩素和6，7- 二甲氧基黃芩素。
[0013]實施例2:藥效試驗 I材料與方法
利巴韋林泡騰片(批號:091210)，浙江艾康禮德制藥有限公司。
[0014]甲型流感病毒 小鼠肺適應株A/PR/8/34，病毒效價為1: 512。本實驗在浙江省醫學科學院ABSL2生物安全實驗室中進行。
[0015]1.1動物與分組
清潔級ICR小鼠，雌雄各半，18~22g，由浙江省實驗動物中心提供，實驗動物許可證號:SCXK(浙)2008-0033。按體重隨機分為6組:正常對照組、模型對照組、利巴韋林給藥組和新橙皮苷二氫查爾酮(NHDC)給藥組、柚皮苷二氫查爾酮(NDC)給藥組，四方蒿或風輪菜提取的總黃酮(TF)給藥組，每組10只。
[0016]1.2模型建立及給藥
除正常對照組給予等劑量生理鹽水滴鼻外，其余各組在乙醚輕度麻醉下以10 LD50病毒量滴鼻感染小鼠，30 μ L/只。于感染后24 h開始灌胃給藥。正常對照組和模型對照組在同等條件下給予生理鹽水灌胃，每天I次，連續4d。
[0017]1.3取材及保存
于末次給藥后禁食禁水8 h，稱重，摘眼球取血后處死，迅速取肺組織，用生理鹽水洗凈并用無菌濾紙吸干后稱全肺重，并計算肺指數及肺指數抑制率。取左側肺葉稱濕量(W)，80°C烘箱中烘烤48 h后稱干量(D)，計算肺組織W/D比值。取右側肺組織10%福爾馬林液固定，用于HE染色和免疫組化分析。
[0018]L 4血清炎性介質的測定
將摘眼球后所取血液置試管中4°C，3000 rpm/min離心20min，吸取上清，置_20°C冰箱中，備用。采用雙抗體夾心ABC-ELISA法，分別測定小鼠血清中IL-6、LTB4和ICAM-1含量。檢測程序按照試劑盒說明書進行。
[0019]1.5肺臟形態學觀察
將固定后的肺組織樣本行石蠟包埋切片，切片5 μ m，經HE染色、中性樹膠封固后顯微鏡觀察照相。
[0020]1.6免疫組化分析
肺組織常規包埋切片后，脫蠟、透明。采用一步法，一抗濃度為4 mg/mL，同時設立陰性對照片(用抗體稀釋液體PBS替代一抗)，DAB顏色，蘇木精復染，中性樹膠封片。陽性結果為細胞膜(AQP5或MUC5AC)上顯棕黃色顆粒沉淀；陰性對照片顯示細胞核及細胞膜呈藍色，胞質及整片組織呈淡藍色背景。采用ImagepiO-Plus 4.0軟件分析，計算圖像光密度值。
[0021]1.7藥物對病毒增殖的抑制作用
取對數生長期細胞ifep-2或MDCK，以RPM1-1640培養液稀釋至濃度約I X IO4個/mL，接種于96孔板，每孔加入50 UL (100 TCID5tl)呼吸道合胞病毒或流感病毒溶液，置37°C，50mL/LC02培養箱中培養2h，棄上清，加入不同濃度的含藥維持液，每孔0.2mL,繼續培養48h。當細胞病變達到75%以上時，每孔加入含5.0 g/L MTT的培養液50 μ L，繼續培養2h，棄上清，每孔加DMSO溶解液100 μ L，混勻10 min，于570 nm波長處，測其吸光度(OD)值。計算藥物對RSV抑制率。
[0022]2.0統計方法 實驗數據采用SPSS 17.0統計分析軟件進行統計學處理，所得結果以均數土標準差(7 土s)表不。取？ < 0.05作為顯著性差異水平。
[0023]3 結果
3.1藥物對病毒感染小鼠肺損傷及肺水腫的保護作用結果 表1藥物對病毒感染小鼠肺損傷及肺水腫的保護作用(n=10，I ±s)
【權利要求】
1.一種治療肺部感染性疾病的藥物，其特征在于包含從四方蒿或風輪菜提取的總黃酮、新橙皮苷二氫查耳酮、柚皮苷二氫查耳酮、7-甲氧基漢黃芩素、6，7-二甲氧基黃芩素或其藥學上可接受的鹽中任意I種物質或任意2種以上物質的組合物。
2.如權利要求1所述的一種治療肺部感染性疾病的藥物，其特征在于活性成分占總重量的1%。~99.9%，所述的活性成分為從四方蒿或風輪菜提取的總黃酮、新橙皮苷二氫查耳酮、柚皮苷二氫查耳酮、7-甲氧基漢黃芩素、6，7- 二甲氧基黃芩素或其藥學上可接受的鹽。
3.如權利要求1所述的一種治療肺部感染性疾病的藥物在制備治療肺部感染性疾病藥物中的應用。
4.如權利要求3所述的一種治療肺部感染性疾病的藥物的應用，其特征在于所述的肺部感染性疾病為急性肺炎、.病毒性肺炎、肺水腫或支氣管炎。
【文檔編號】A61P11/00GK103463183SQ201310414363
【公開日】2013年12月25日 申請日期:2013年9月12日 優先權日:2013年9月12日
【發明者】余陳歡, 應華忠, 陳勤, 鐘宇森, 臧家娜, 方杰 申請人:浙江省醫學科學院