一種艾葉的乙酸乙酯提取物及其制備、檢測方法和用途
【專利摘要】本發明涉及艾葉提取物、方法和應用，具體涉及一種艾葉的乙酸乙酯提取物及其制備、檢測方法和用途，其有效成分是黃酮類和甾醇類。本發明提供了艾葉提取物在制備抗腫瘤的藥物中的應用，并提供了應用超高液相色譜-質譜聯機分析技術及結果構建艾葉提取物指紋圖譜分析方法。該方法包括艾葉提取物的超高液相色譜-質譜分析條件、色譜峰的特征。色譜組分的質譜提供的化合物結構信息等。本發明公開的指紋圖譜及其技術可用于艾葉的品種鑒別及艾葉提取物的質量監控。
【專利說明】一種艾葉的乙酸乙酯提取物及其制備、檢測方法和用途
[【技術領域】][0001]本發明涉及艾葉提取物、方法和應用，具體涉及一種艾葉的乙酸乙酯提取物及其制備、檢測方法和用途。
[【背景技術】]
[0002]艾葉為菊科植物艾Artemisia argyi Levi, et Vant.的干燥葉。具有溫經止血，散寒止痛的功效，臨床用于吐血、衄血、少腹冷痛、經寒不調、宮冷不孕、外用治皮膚瘙癢。主要含揮發油、黃酮類、三萜類、鞣質等成分。具有止血、抗菌抗病毒、抗腫瘤、清除自由基、鎮痛等多種生理活性。
[0003]國內發明200810052604.5公開了用乙酸乙酯和乙醇混合物作為溶劑對艾葉進行提取；提取液經過色譜柱層析得洗脫液用制備液相色譜梯度洗脫得到的洗脫液，流動相為水和乙腈，收集40.0分鐘洗脫液得到有效組分。
[0004]國內發明201110131147.0公開了從艾葉中提取倍半萜內酯類化合物ChlOToklotzchin的提取方法，首先用乙醇提取，經大孔吸附樹脂、聚酰胺樹脂和硅膠柱層析分離。最后利用乙醇重結晶，得到了高純度的化合物。
[0005]國內發明201210117611.5公開了一種艾葉提取物，將艾葉用乙酸乙酯浸泡，然后回流，回流結束后固液分離，所得液體濃縮后，經干燥即得。用于制備抗乙肝病毒藥物。
[0006]本方法較200810052604.5及201110131147.0制備時間短、方法操作簡單。其主要抗腫瘤成分為黃酮類和留醇類，200810052604.5及201110131147.0抗腫瘤成分為揮發油類成分。201210117611.5為抗乙肝病毒藥物，此發明只做顏色反應并未確定其具體成分。
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【發明內容】
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[0007]為了提取一種能夠治療腫瘤的艾葉有效成分，本發明提供了一種艾葉的乙酸乙酯提取物及其制備、檢測方法和用途。
[0008]為實現上述目的，設計一種艾葉的乙酸乙酯提取方法，包括以下步驟:
[0009]a.艾葉用石油醚浸泡18~36h，每100g艾葉需要300~800ml的石油醚，然后滲濾回收殘渣；
[0010]b.所述的殘渣用70~90%的乙醇提取濃縮，濃縮后的濃縮液相對于于乙醇的密度為 1.15 ~1.20，
[0011]c.將所述的濃縮液用乙酸乙酯進行萃取，收集乙酸乙酯層的萃取液。
[0012]上述提取方法還具有如下優化的方案:
[0013]所述的步驟(b)中，乙醇提取的次數為2次，每次提取時間為2小時，合并2次提取液進行所述的濃縮。
[0014]所述的步驟(b)中，乙醇的濃度為80%。
[0015]步驟(a)中，所述的艾葉先經過粉碎，粉碎后的粒徑為250~850 μ m。
[0016]步驟(a)中，所述的浸泡，需要的時間為24h。[0017]一種用上述方法提取得到的艾葉乙酸乙酯提取物，主要成分為黃酮類和留醇類。具體為芹菜素、棕矢車菊素、木犀草素、異澤蘭黃素、β -谷留醇和槲皮素。
[0018]一種藥物制劑，由上述的姜黃的乙酸乙酯提取物和藥學上可接受的載體組成。
[0019]所述的制劑為片劑、散劑、片劑、膠囊或口服液。
[0020]一種檢測上述艾葉的乙酸乙酯提取物的方法，用超高效液相色譜-電噴霧串聯質儀對所述艾葉提取物進行分析，以獲得艾葉乙酸乙酯提取物的UPLC-Q-T0F-MS圖譜，
[0021]a.質譜條件為:ESI離子源，正離子模式檢測；霧化器N2壓力為50psi ;干燥氣N2流速為15L/min ;質量掃描范圍50~1200 ;自動3級質譜；
[0022]b.色譜分析條件為:色譜柱:Waters ACQUITY UPLC? BEHC18Column (5(tomX 2.I謹.i d., 1.7 μ m) ;二元梯度洗脫，A相為0.1%甲酸水溶液；B相為乙腈，流速為0.3mL/min,梯度洗脫的程序如下:90%A相,逐漸減少A相比例,至14min時A相比例為O,保持2min,流速:0.3mL/min ;進樣量3 μ L。
[0023]本發明首次提供了艾葉提取物在制備腫瘤的藥物中的應用，并且提供了應用超高效液相色譜-質譜聯機分析技術及結果構建艾葉提取物指紋圖譜的方法。該方法包括艾葉提取物的UPLC-MS分析條件。色譜峰的特征、色譜組分的質譜提供的化合物結果信息等。本發明公開的指紋圖譜及其技術可用于艾葉的品種鑒別及艾葉提取物的質量監控。
[【專利附圖】
【附圖說明】]·[0024]圖1為艾葉UPLC-Q-T0F/MS正離子模式下總離子流圖。
[【具體實施方式】]
[0025]為了使本發明的目的、技術方案及優點更加清楚明白，結合附圖對本發明進行進一步詳細說明。本申請中的生產設備都是本領域的常用設備，應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發明，并不用于限定本發明。
[0026]實施例1:
[0027]艾葉的乙酸乙酯提取物
[0028]由以下方法制備:艾葉粉碎，過35目篩得到粒徑為250 μ m的艾葉顆粒，稱取艾葉顆粒500g，用2000ml石油醚滲濾，先用石油醚浸泡18h，至滲漉液顏色變淺(滲濾液約為2500ml )，回收殘渣，揮干殘渣中的石油醚，用70%乙醇提取2次，每次乙醇用量為2500ml，每次提取時間為2小時，合并提取液，將其減壓濃縮至無醇味，相對密度為1.15-1.20，用乙酸乙酯萃取，收集上層萃取液，蒸干后得乙酸乙酯提取物。
[0029]實施例2
[0030]艾葉的乙酸乙酯提取物
[0031]由以下方法制備:取艾葉粉碎，過20目篩得到粒徑為850 μ m的艾葉顆粒，稱取艾葉顆粒500g，用1500ml石油醚浸泡24h，得到殘渣和滲濾液(滲濾液體積約為2000)，將殘渣揮干石油醚，濃度為80%的乙醇提取2次，每次乙醇用量為1500ml，每次提取時間為2小時，合并兩次提取液，減壓濃縮至相對密度1.15-1.20，得乙醇濃縮液，用乙酸乙酯萃取，得到上層乙酸乙酯萃取液，烘干后得乙酸乙酯提取物。
[0032]實施例3[0033]艾葉的乙酸乙酯提取物
[0034]由以下方法制備::取艾葉粉碎，過30目篩得到粒徑為450 μ m的艾葉顆粒，艾葉用石油醚滲濾，先用2000ml石油醚浸泡36h，得到殘渣和滲濾液(滲濾液體積約為2500ml)，揮干殘渣中的石油醚，用90%乙醇提取，提取3次，每次乙醇用量為2000ml，提取時間為3小時，合并提取液，然后濃縮至無醇味，相對密度為1.15-1.20，用乙酸乙酯萃取，取上層的乙酸乙酯萃取液，烘干后得乙酸乙酯提取物，干燥后所得的艾葉提取物為棕黑色。
[0035]本發明所得的艾葉提取物對腫瘤有預防和治療作用。可以按照常規制劑工藝，將本發明所述的艾葉提取物制備成任何一種適合于臨床使用的制劑，例如散劑、片劑。膠囊、口服液等。
[0036]實施例4
[0037]艾葉的乙酸乙酯提取物的顆粒劑
[0038]1、組成:艾葉的乙酸乙酯提取物(實施例2的方法制備)50g，淀粉15g，微晶纖維素20g，硬脂酸鎂6g。
[0039]2、制備方法:按照配比稱取原輔料，按照等量遞加法混合均勻，直接壓片。
[0040]實施例5
[0041]對艾葉抗腫瘤的藥物的檢測:
[0042]用超高效液相色譜-電噴霧串聯質譜對實施例1的艾葉乙酸乙酯提取物進行分析以獲得提取物的指紋圖譜。其色譜分析條件為:Waters ACQUITY UPLC? BEHC18Column(50mmX2.lmm.1 d.，1.7μm)柱；二元梯度洗脫，A相為0.1%甲酸水溶液，B相為乙腈流速0.3mL/min;進樣量3 μ L。
[0043]優選的色譜條件:
[0044]
【權利要求】
1.一種艾葉的乙酸乙酯提取方法，其特征在于包括以下步驟: a.艾葉用石油醚浸泡18~36h，每100g艾葉需要300~800ml的石油醚，然后滲濾回收殘渣； b.所述的殘渣用70~90%的乙醇提取濃縮，濃縮后的濃縮液相對于于乙醇的密度為1.15 ~1.20， c.將所述的濃縮液用乙酸乙酯進行萃取，收集乙酸乙酯層的萃取液。
2.如權利要求1所述的艾葉的乙酸乙酯提取方法，其特征在于所述的步驟(b)中，乙醇提取的次數為2次，每次提取時間為2小時，合并2次提取液進行所述的濃縮。
3.如權利要求1所述的艾葉的乙酸乙酯提取方法，其特征在于所述的步驟(b)中，乙醇的濃度為80%。
4.如權利要求1所述的艾葉的乙酸乙酯提取方法，其特征在于步驟(a)中，所述的艾葉先經過粉碎，粉碎后的粒徑為250~850 μ m。
5.如權利要求1所述的艾葉的乙酸乙酯提取方法，其特征在于步驟(a)中，所述的浸泡，需要的時間為24h。
6.一種用權利要求1方法提取得到的艾葉乙酸乙酯提取物，其特征在于所述的艾葉乙酸乙酯提取物主要成分為黃酮類和留醇類。
7.如權利要求6所述的艾葉乙酸乙酯提取物，其特征在于所述的艾葉乙酸乙酯提取物的主要成分為芹菜素、棕矢車菊素、木犀草素、異澤蘭黃素、β -谷留醇和槲皮素。
8.—種藥物制劑，由權利要求6或7所述的姜黃的乙酸乙酯提取物和藥學上可接受的載體組成。
9.如權利要求8所述的藥物制劑，其特征在于所述的制劑為片劑、散劑、片劑、膠囊或口服液。
10.一種檢測權利要求6所述艾葉的乙酸乙酯提取物的方法，用超高效液相色譜-電噴霧串聯質儀對所述艾葉提取物進行分析，以獲得艾葉乙酸乙酯提取物的UPLC-Q-TOF-MS圖譜，其特征在于: a.質譜條件為:ESI離子源，正離子模式檢測；霧化器N2壓力為50psi;干燥氣N2流速為15L/min ;質量掃描范圍50~1200 ;自動3級質譜； b.色譜分析條件為:色譜柱:WatersACQUITY UPLC? BEH C18Column(50mmX2.lmm.1d.，1.7 μ m) ;二元梯度洗脫，A相為0.1%甲酸水溶液；B相為乙腈，流速為0.3mL/min，梯度洗脫的程序如下:90%A相，逐漸減少A相比例，至14min時A相比例為0，保持2min，流速:0.3mL/min ;進樣量 3 μ L。
【文檔編號】A61K36/282GK103705559SQ201310680696
【公開日】2014年4月9日 申請日期:2013年12月12日 優先權日:2013年1月7日
【發明者】陳士林, 黃林芳, 任偉光, 林森森, 徐宏喜, 楊大堅, 卞兆祥, 陳新滋 申請人:中國醫學科學院藥用植物研究所, 香港浸會大學