一種從板栗殼中提取純化抑制α-葡萄糖苷酶活性成分的方法
【專利摘要】本發明涉及一種從板栗殼中提取純化抑制α-葡萄糖苷酶活性成分的方法，首先將板栗殼洗凈、烘干、粉碎，用75％(v/v)乙醇回流提取、減壓濃縮、加入水飽和正丁醇溶液萃取，最后用大孔樹脂AB-8進行吸附洗脫，得到具有抑制α-葡萄糖苷酶活性的多酚提取物。
【專利說明】一種從板栗殼中提取純化抑制α-葡萄糖苷酶活性成分的方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于天然產物化學領域，特別涉及一種從板栗殼中提取純化抑制α -葡萄糖苷酶活性成分的方法。
【背景技術】
[0002]板栗殼為殼斗科植物栗(Castanea mollissima Blume)的殼斗，為落葉喬木，一般高15~20米，適宜栽種于山地向陽山坡的沙壤土上，我國南北各地廣泛栽培。果實殼斗球形，上有針刺，刺上密被緊貼柔毛，成熟時開裂而散出堅果。
[0003]板栗殼的藥理作用主要有抗菌、抗炎、抗凝血、治療慢性支氣管炎和治療菌痢等，現在對板栗殼的研究主要集中在色素和生物活性物質的提取等方面。板栗殼中含有多酚、有機酸、多糖(或甙類)、黃酮(或皂甙類)、植物留醇(或三萜)、內酯、香豆素(或其甙類)和鞣質等化學成份。板栗殼中的棕色素屬于黃酮類化合物，具有很好的抑菌效果；從板栗殼中提取的多酚具有較高的抗氧化能力(李金鳳等，板栗殼中多酚的提取及體外抗氧化性研究，林產化學與工業，2010，30 (I): 54-58)。
[0004]α -葡萄糖苷酶與糖尿病和肥胖癥緊密相關，抑制α -葡萄糖苷酶能有效地降低糖尿病的發病率。α-葡萄糖苷酶抑制劑通過競爭性抑制小腸粘膜上皮細胞的α-葡萄糖苷酶，延緩腸道對碳水化合物的吸收，減緩餐后血糖升高從而達到對糖尿病的治療。目前已研發出以α-葡萄糖苷酶抑制劑為基礎的藥物如Acarbose和Miglitol等。多種中藥提取物也表現出對α-葡萄糖苷酶有明顯的抑制作用，有研究指出黃酮類、生物堿類、萜類、酚類等物質能有效地抑制α -葡萄糖苷酶的活性，但是至今尚未發現有報道稱從板栗殼中分離出具有抑制α-葡萄糖苷酶活性的物質。
[0005]板栗殼屬于食品加工中的廢棄物，從中提取出具有抑制α-葡萄糖苷酶活性的化學物質，可以用于治療糖尿病和肥胖癥，這對板栗殼的進一步加工利用和相關藥物和功能性食品的開發，具有一定的指導意義。
【發明內容】
[0006]本發明的目的是提供一種從板栗殼中提取純化抑制α -葡萄糖苷酶活性成分的方法，首先將板栗殼洗凈、烘干、粉碎，用75% (v/v)乙醇回流提取、減壓濃縮、加入水飽和正丁醇溶液萃取，最后用大孔樹脂AB-8進行吸附洗脫，得到具有抑制α -葡萄糖苷酶活性的多酚提取物。具體步驟如下:
[0007](I)將板栗殼洗凈、烘干、粉碎，按照料液比1: 10(w/v)加入75% (v/v)乙醇，沸騰回流提取2~3次，每次2~4小時；
[0008](2)合并板栗殼提取液，50°C減壓濃縮2~4小時，得到濃縮浸膏；
[0009] (3)將濃縮浸膏用水調配成10mg/mL的溶液,然后用4倍體積的水飽和正丁醇萃取3~5次，每次2~4小時；[0010](4)合并水飽和正丁醇萃取液，于70~80°C減壓濃縮2~4小時，得到濃縮浸膏，再于-70~_90°C冷凍干燥10~24小時，得到粉狀提取物；
[0011] (5)將粉狀提取物用水配成0.5mg/mL溶液，用大孔樹脂AB-8進行吸附，用60%(v/v)乙醇以lBV/h的流速洗脫，收集洗脫液；
[0012](6)測定洗脫液對α -葡萄糖苷酶的抑制率和多酚含量，收集酶活抑制率較高的洗脫液，即可得具有抑制該酶活性的板栗殼組分。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0013]圖1是板栗殼提取物大孔吸附樹脂ΑΒ-8洗脫液中的多酚含量和對α -葡萄糖苷酶活性抑制率曲線。
【具體實施方式】
[0014]下面的實施例將對本發明作進一步的解釋，但是本發明并不僅僅局限于這些實施例，這些實施例不以任何方式限制本發明的范圍。
[0015]實施例1:
[0016](I)將100g板栗殼洗凈、烘干、粉碎，按照料液比1: 10(w/v)加入75% (v/v)乙醇沸騰回流2次，每次2小時；
[0017](2)合并板栗殼提取液，50°C下減壓濃縮2小時，得到濃縮浸膏；
[0018](3)將濃縮浸膏用水調配成10mg/mL的溶液，然后用4倍體積的水飽和正丁醇萃取3次,每次2小時；
[0019](4)合并水飽和正丁醇萃取液，于70°C減壓濃縮2小時，得到濃縮浸膏，再于_70°C冷凍干燥10小時，得到0.5g粉狀提取物；
[0020](5)將粉狀提取物用水配成0.5mg/mL溶液，用大孔樹脂AB-8進行吸附，用60 %(v/v)乙醇以lBV/h的流速洗脫，收集洗脫液；
[0021](6)測定不同洗脫管中洗脫液的多酚含量和對α -葡萄糖苷酶的抑制率(圖1)，多酚洗脫峰和抑制率的峰值重疊性較好，說明多酚是有效抑制α-葡萄糖苷酶活性的物質，收集酶活抑制率較高的、洗脫體積1.0-1.5BV處的洗脫液，即可得具有抑制該酶活性的板栗殼組分。
[0022]實施例2:
[0023](I)將IOkg板栗殼洗凈、烘干、粉碎，按照料液比I: 10(w/v)加入75% (v/v)乙醇沸騰回流3次，每次4小時；
[0024](2)合并板栗殼提取液，50°C下減壓濃縮4小時，得到濃縮浸膏；
[0025](3)將濃縮浸膏用水調配成10mg/mL的溶液，然后用4倍體積的水飽和正丁醇萃取5次,每次4小時；
[0026](4)合并水飽和正丁醇萃取液，于80°C減壓濃縮4小時，得到濃縮浸膏，再于_90°C冷凍干燥24小時，得到50g粉狀提取物；
[0027](5)將粉狀提取物用水配成0.5mg/mL溶液，用大孔樹脂AB-8進行吸附，用60%(v/v)乙醇以lBV/h的流速洗脫，收集洗脫液；
[0028](6)測定洗脫液對α -葡萄糖苷酶的抑制率和多酚含量，收集酶活抑制率較高的洗脫液，即可得具有抑制該酶活性的板栗殼組分。
[0029]實施例3:
[0030](I)將IOOkg板栗殼洗凈、烘干、粉碎，按照料液比I: 10 (w/v)加入75% (v/v)乙醇沸騰回流2次，每次3小時；
[0031](2)合并板栗殼提取液，50°C下減壓濃縮3小時，得到濃縮浸膏；[0032](3)將濃縮浸膏用水調配成10mg/mL的溶液，然后用4倍體積的水飽和正丁醇萃取4次，每次3小時；
[0033](4)合并水飽和正丁醇萃取液，于75°C減壓濃縮3小時，得到濃縮浸膏，再于_80°C冷凍干燥12小時，得到450g粉狀提取物；
[0034](5)將粉狀提取物用水配成0.5mg/mL溶液，用大孔樹脂AB_8進行吸附，用60 %(v/v)乙醇以lBV/h的流速洗脫，收集洗脫液；
[0035](6)測定洗脫液對α -葡萄糖苷酶的抑制率和多酚含量，收集酶活抑制率較高的洗脫液，即可得具有抑制該酶活性的板栗殼組分。
【權利要求】
1.一種從板栗殼中提取純化抑制α-葡萄糖苷酶活性成分的方法，其步驟如下: (1)將板栗殼洗凈、烘干、粉碎，按照料液比1: 10(w/v)加入75% (v/v)乙醇，沸騰回流提取2~3次，每次2~4小時； (2)合并板栗殼提取液，50°C減壓濃縮2~4小時，得到濃縮浸膏； (3)將濃縮浸膏用水調配成10mg/mL的溶液,然后用4倍體積的水飽和正丁醇萃取3~5次,每次2~4小時； (4)合并水飽和正丁醇萃取液，于70~80°C減壓濃縮2~4小時，得到濃縮浸膏，再于-70~_90°C冷凍干燥10~24小時，得到粉狀提取物； (5)將粉狀提取物用水配成0.5mg/mL溶液，用大孔樹脂AB-8進行吸附，用60%(v/v)乙醇以lBV/h的流速洗脫，收集洗脫液； (6)測定洗脫液對α-葡萄糖苷酶的抑制率和多酚含量，收集酶活抑制率較高的洗脫液，即可得具有抑制該酶活性的板栗殼組分。
【文檔編號】A61P3/04GK103948654SQ201410201619
【公開日】2014年7月30日 申請日期:2014年5月13日 優先權日:2014年5月13日
【發明者】歐陽杰, 劉莉, 唐新玥, 張欣珂, 王珺璟 申請人:北京林業大學