新喋呤佐劑及含新喋呤佐劑的疫苗的制作方法
【專利摘要】本發明提供一種新喋呤佐劑及含新喋呤佐劑的疫苗，屬于免疫學【技術領域】。所述含新喋呤佐劑的疫苗是每單份疫苗劑中含有0.5～1μg的新喋呤佐劑。新喋呤佐劑屬于人體的內源性物質，毒副作用小，在免疫劑量范圍內使用,安全可靠，能夠有效誘導抗原特異性的體液免疫應答，且所誘導的體液免疫應答效果優于無佐劑組，近于鋁佐劑組，新喋呤佐劑原料易得，為市售產品，成本較低，可添加于多種傳統疫苗和基因工程疫苗中作為疫苗佐劑使用。
【專利說明】
【技術領域】
[0001] 本發明屬于免疫學【技術領域】，具體涉及一種新喋呤佐劑及含該佐劑的疫苗。 新喋呤佐劑及含新喋呤佐劑的疫苗
【背景技術】
[0002] 隨著分子生物學理論和【技術領域】的飛速發展，基因工程疫苗研究也隨之快速發 展，新型基因工程疫苗層出不窮，此類疫苗具有純度高、特異性強等特點，但由于分子較小， 免疫原性較天然抗原相對較弱，難以產生高效的免疫應答。因此研究開發新型的佐劑來增 強新型疫苗的免疫原性是一個重要的課題。
[0003] 鋁鹽佐劑是應用于人用疫苗歷史最久的佐劑。實踐證明鋁鹽佐劑安全有效，但由 于其可引起過敏、誘導退行性神經病變等缺點，迫切需要開發新型疫苗佐劑以適應疫苗產 業的發展。
[0004] 新碟呤（neopterin)是人體體液中最重要的一種碟陡類物質，化學名為2-胺 基-4-羥基-6-(D-赤蘚糖基1，2, 3,-三羥基丙基）喋呤，它是三磷酸鳥苷（GTP)代謝、四 氫生物喋呤生物合成過程中的一種中間代謝產物。新喋呤可作為多種遞質酶（如苯丙氨酸 酶、酪氨酸酶、色氨酸酶）羥化過程中的輔助因子，主要由單核巨噬細胞在被活化的T淋巴 細胞所產生的C-干擾素（C-IFN)刺激下分泌產生的，是C-IFN誘導單核巨噬細胞活性增強 的一個特異性標志物，是細胞介導免疫激活的象征，其生物穩定性好，可于體液中檢測到。
【發明內容】
[0005] 為解決現有疫苗佐劑種類少，毒副作用等問題，本發明提供一種安全、有效、穩定、 經濟的新喋呤佐劑，并且還提供含有新喋呤佐劑的疫苗。
[0006] 本發明采用的技術方案如下： 本發明所述新喋呤作為制備疫苗佐劑的應用。
[0007] 所述新碟呤為化合物neopterin，別名名稱D-erythro-Neopterin，所述新碟呤為 市購生物產品，分子式為C 9HnN504，分子量為253. 20,結構式如圖1所示。
[0008] 在人體中推薦劑量為每200 μ L疫苗液中的新喋呤用量不超過1 μ g，優選0. 5 μ g。
[0009] 本發明提供的含有新喋呤佐劑的疫苗，所述的每單份疫苗劑中含有0. 5?1 μ g新 喋呤，所述的每單份疫苗劑為臨床使用的常規單次注射參考量。
[0010]
[0011] 本發明提供的含有新喋呤佐劑的疫苗制備方法如下： 按每單份疫苗劑加入〇. 5?1 μ g新喋呤的量，在疫苗劑中加入新喋呤，再加生理鹽水 至100?200 μ L，按常規混合均勻，即得含有新喋呤佐劑的疫苗。
[0012] 所述疫苗為常規甲肝抗原、乙肝抗原和狂犬病毒抗原中的一種。
[0013] 新喋呤佐劑能顯著增強抗原特異性的體液免疫反應。
[0014] 本發明與現有技術相比，其有益效果為：（1)新喋呤佐劑是人體的內源性物質，毒 副作用小，在免疫劑量范圍內使用是安全可靠的；（2)新喋呤佐劑能夠有效的誘導抗原特 異性的體液免疫應答，且其所誘導的體液免疫應答效果優于無佐劑組；（3)新喋呤佐劑原 料易得，為市售產品，成本較低，可添加于多種傳統疫苗和基因工程疫苗中作為疫苗佐劑； (4)新喋呤佐劑與疫苗聯合應用能有效增強疫苗體液免疫應答，免疫效果優于無佐劑的疫 苗。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0015] 圖1為本發明中新喋呤的分子結構式。
【具體實施方式】
[0016] 下面結合實施例，進一步闡述本發明。這些實施例僅用于說明本發明而不用于限 制本發明的范圍，下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，按照常規條件或按照制造廠 商所建議的條件。文中所述的較佳條件實施方法僅作示范之用。
[0017] 實施例1 本實施例提供的新喋呤佐劑用量為〇. 5 μ g。
[0018] 本實施例提供的含有新喋呤佐劑的甲肝疫苗是：在每單份HAV抗原（即臨床使用 的單次注射劑量）中，加入〇. 5 μ g的新喋呤佐劑，再加生理鹽水至200 μ L，按常規混合均 勻，得含有新喋呤佐劑的甲肝疫苗，其中，新喋呤為市購產品，購自SIGMA公司，HAV抗原為 市購的抗原滴度為512EU/ml的18EU HAV抗原液，購自中國醫學科學院北京協和醫學院醫學 生物學研究所。
[0019] 本實施例1所得含有新喋呤佐劑的甲肝疫苗的免疫試驗和效果如下： A、 免疫 將6?8周齡、18?22g的清潔級ICR小鼠隨機分為新喋呤佐劑組、氫氧化鋁佐劑組、 無佐劑組和空白組，共四組，每組8只；所用氫氧化鋁為常用的氫氧化鋁膠體佐劑，其制法 參照《中國藥典(三部)》，（國家藥典委員會.北京：人民衛生出版社.2005:118-119)，在人 體中的劑量為1.8?2. 7mg。
[0020] 對新喋呤佐劑組：實施例1的含有新喋呤佐劑的甲肝疫苗至小鼠體內，注射劑量 為每只小鼠200 μ L，其中疫苗中含有新喋呤0. 5 μ g，甲肝抗原18EU ; 對氫氧化鋁佐劑組：將氫氧化鋁300ug與甲肝抗原18EU混合后加生理鹽水至200ul， 經腹腔皮下多點注射到小鼠體內，注射劑量為每只小鼠200μ L ; 對無佐劑組：將甲肝抗原18EU與生理鹽水混合至200ul，再經腹腔皮下多點注射到小 鼠體內，注射劑量為每只小鼠200μ L ; 對空白組僅注射生理鹽水，注射劑量為每只小鼠200ul ; 免疫方案：在第0周經腹腔皮下多點注射到小鼠體內，免疫次數為一次； B、 ELISA檢測血清抗一 HAV IgG水平 在免疫后的第4、8、12、16周，采集小鼠尾靜脈血，分離血清，ELISA檢測血清抗一 HAV IgG水平，按KPL公司生產的小鼠 IgG ELISA試劑盒方法進行檢測。
[0021] C、數據分析 對所獲得的實驗數據以SPSS16. 0統計軟件進行單因素方差分析，以P < 0. 05為差異 的統計學意義，結果見表1。
[0022] 表1為使用實施例1提供的佐劑后，16周內，各實驗組小鼠血清抗-HAV IgG水平 (抗體效價值)。
[0023] 表 1
【權利要求】
1. 新喋呤作為制備疫苗佐劑的應用。
2. 根據權利要求1所述的新喋呤作為制備疫苗佐劑的應用，其特征在于所述新喋呤為 化合物neopterin，分子式為C9H nN504，分子量為253. 20。
3. -種含有如權利要求2所述的新喋呤佐劑的疫苗，其特征在于每單份疫苗劑中含有 0. 5?1 μ g新喋呤，所述的每單份疫苗劑為臨床使用的常規單次注射參考量。
4. 根據權利要求3所述的含有新喋呤佐劑的疫苗，其特征在于每200 μ L疫苗液中的新 喋呤用量為0.5 μ g。
5. 根據權利要求3所述的含有新喋呤佐劑的疫苗，其特征在于制備方法如下：按每 單份疫苗劑加入〇. 5?1 μ g新喋呤的量，在疫苗中加入新喋呤，再加生理鹽水至100? 200 μ L，按常規混合均勻，即得含有新喋呤佐劑的疫苗。
6. 根據權利要求5所述的含有新喋呤佐劑的疫苗，其特征在于所述的疫苗為常規甲肝 抗原、乙肝抗原和狂犬病毒抗原中的一種。
【文檔編號】A61P37/04GK104056266SQ201410313973
【公開日】2014年9月24日 申請日期:2014年7月3日 優先權日:2014年7月3日
【發明者】王海漩, 胡云章, 胡凝珠 申請人:中國醫學科學院醫學生物學研究所