一種具有心肌保護作用的杜仲組分組合物及其制劑的制作方法
【專利摘要】本發明屬于中藥領域，具體涉及一種治療心血管疾病的杜仲組分組合物。該組合物的成分均來自中藥杜仲，其具體由重量百分比為10～80％的杜仲總黃酮，10～80％的杜仲環烯醚萜和10～80％的杜仲木脂素組成。所述組合物的重量百分比優選為20～40％的杜仲總黃酮，40～60％的杜仲環烯醚萜和20～50％的杜仲木脂素組成。本發明通過對杜仲的單一有效部位進行組合，通過調整相關重量配比，得到了一種療效明確、具有臨床開發前景的杜仲組分組合物。
【專利說明】-種具有心肌保護作用的杜仲組分組合物及其制劑
【技術領域】
[0001] 本發明屬于中藥領域，具體涉及一種治療心血管疾病的杜仲組分組合物。
【背景技術】
[0002] 杜仲為杜仲科植物杜仲Eucommia ulmoides Oliv.的干燥樹皮，別名思仙、木棉 等，始載于《神農本草經》，列為中藥上品，具有補肝腎、強筋骨、安胎等功效，在臨床上應用 于治療肝腎不足、腰膝酸痛、妊娠的習慣性流產、高血壓等，常與補骨脂、續斷等配伍。
[0003] 心血管疾病，又稱為循環系統疾病，循環系統指人體內運送血液的器官和組織，主 要包括心臟和血管，可細分為急性和慢性，一般都與動脈硬化有關。心肌缺血是指心臟的血 液灌注減少，導致心臟的供氧量減少，心肌能量代謝不正常，不能支持心臟正常工作的一種 病理狀態。冠狀動脈粥樣硬化導致的冠脈狹窄是引起心肌缺血最主要、最常見的病因，進而 導致心肌缺血缺氧，因此冠心病是心肌缺血的主要原因。心肌缺血主要分為隱匿性冠心病、 心絞痛型、心肌梗死型、缺血性心肌病和猝死性5類。
[0004] 心肌缺血常見的原因是冠狀動脈硬化，其次還有炎癥（風濕性、梅毒性、川崎病和 血管閉塞性脈管炎等）、痙攣、栓塞、結締組織疾病、創傷和先天性畸形等多種。流行病學研 究發現，與動脈粥樣硬化相關的重要危險因子為高脂血癥、高血壓病、糖尿病、吸煙、肥胖、 同型半胱氨酸增高、體力活動少、高齡和男性等。缺血心肌的損傷機制包括能量缺乏、鈣超 載、自由基生成增多、酸中毒引起的心肌損害、細胞膜通透性增加等方面。
[0005] 研究表明杜仲水提物能夠顯著降低脂肪酸的合成，降低3 -羥基一 3 -甲基戊二 酰輔酶A(HMG - CoA)還原酶活性，提高高密度脂蛋白（HDL)膽固醇的水平，降低血漿膽固 醇和甘油三酯濃度。另外，杜仲水提物還可以抑制Cu 2+介導的低密度脂蛋白（LDL)的氧化 修飾。眾所周知，HMG - CoA還原酶的活化、血漿膽固醇和甘油三酯水平升高會促進動脈粥 樣硬化斑塊的形成；HDL或HDL膽固醇具有很強的抗動脈粥樣硬化的作用，而另一類脂蛋白 LDL的氧化修飾則推進著動脈粥樣硬化（AS)的病變形成，所以杜仲水提物通過降低血漿膽 固醇和LDL的氧化修飾水平，提高HDL膽固醇水平，抑制AS的發生發展。杜仲水提物還能 夠通過舒張血管產生降壓作用，且具有內皮依賴性。此外，另有研究表明，杜仲中的活性單 體也表現出在降壓、降血脂、抗氧化、抗動脈粥樣硬化等藥理活性。例如，杜仲中環烯醚萜類 單體京尼平及京尼平苷，苯丙酸類化合物阿魏酸和咖啡酸，黃酮類化合物槲皮素、蘆丁和黃 芩素，三萜類化合物白樺脂酸和熊果酸。
[0006] 雖然目前的研究表明杜仲具有一定的對心血管疾病的治療作用，但是杜仲目前主 要上市的產品主要集中在降壓領域，其他領域的應用較少。CN200710035744公開了一種杜 仲木脂素提取物在抗心血管重塑方面的應用，其機理仍然是與杜仲的降壓作用相關（通過 調節腎素-血管緊張素 RAS系統），并且采用杜仲單一有效部位（木脂素），活性成分較為 單一，對于心血管疾病的治療效果也極其有限。
【發明內容】
[0007] 本發明通過研究發現杜仲的單一有效部位，例如，環烯醚萜、木脂素或黃酮類成 分，在心肌缺血的療效方面，具有作用，但療效不明顯，無法作為藥物上市用于心血管疾病 患者的治療。本發明通過對杜仲的單一有效部位進行組合，通過調整相關重量配比，得到了 一種療效明確、具有臨床開發前景的杜仲組分組合物。
[0008] 本發明的一個目的是提供一種具有心肌保護作用的杜仲組分組合物，該組合物的 成分均來自中藥杜仲，其具體由重量百分比為10?80%的杜仲總黃酮，10?80%的杜仲環 烯醚萜和10?80 %的杜仲木脂素組成。
[0009] 在本發明的一個實施方案中，所述組合物的重量百分比優選為20?40 %的杜仲 總黃酮，40?60 %的杜仲環烯醚廠和20?50 %的杜仲木脂素組成。在本發明進一步地實施 方案中，所述組合物的重量百分比可以為30%的杜仲總黃酮，50%的杜仲環烯醚萜和20% 的杜仲木脂素組成；所述組合物的重量百分比也可以為25%的杜仲總黃酮，45%的杜仲環 烯醚萜和30 %的杜仲木脂素組成。
[0010] 本發明的中藥有效部位提取物可用現有技術自制或通過商業渠道獲得，也可本發 明列出的方法進行制備。
[0011] 杜仲總黃酮的制備：稱取杜仲葉粗粉5. 0kg，配制45%的乙醇40L，用濃鹽酸調pH 為4,在60?70°C下進行攪拌提取兩次（第一次用25L乙醇溶液提取2小時，第二次用15L 乙醇溶液提取1小時），濾過，合并提取液，濃縮至4L后靜置I. 0小時離心。取上清液加入 處理好的大孔樹脂柱中進行飽和吸附，依次用水、45%乙醇、65%乙醇進行洗脫，吸附提取 液的流速為〇. 5個保留體積/小時，解吸時的流速為2個保留體積/小時，棄去水洗液，收 集65%乙醇溶液洗脫液，濃縮成稠膏、干燥得到杜仲葉總黃酮含量為80%的干粉0.31kg， 收率為4. 96%。
[0012] 杜仲環烯醚萜的制備：杜仲皮烘干、粉碎、過篩，以杜仲鮮皮為佳。稱取處理后的杜 仲皮20千克，采用常規浸提，以15倍的液固比加入70%。乙醇-水溶液為提取劑，在60°C 條件下提取2小時，重復3次。將提取液過濾、濃所，用鹽酸調至pH2. 5 ;采用正丁醇萃取， 收集萃取液，濃縮液冷卻到-10?_20°C，再置于冷凍干燥器中冷卻到-45?-65°C，真空度 <20Pa，時間24?48小時低溫真空干燥，得到環烯醚萜活性部位675. 3克，總環烯醚萜化合 物含量為78.5%。
[0013] 杜仲木脂素的制備：取杜仲樹皮（去外皮）2Kg，用8L 65 %乙醇回流提取兩次，每 次lh，過濾，合并兩次提取液濃縮至800ml。用DlOl大孔樹脂拌樣上樣（大孔樹脂柱體積 3L)，水洗3倍柱體積，1 %氨水繼續洗3倍柱體積，再水洗至中性。用20%乙醇洗脫2倍柱 體積，用45%乙醇洗2. 5倍柱體積。45%乙醇洗脫液濃縮至600ml。洗脫液濃縮后干燥成 粉末。用松脂醇二葡萄糖苷作為對照，提取物經紫外檢測木脂素成分含量為85 %，經HPLC 檢測松脂醇二葡萄糖苷含量為12. 5%。
[0014] 本發明還提供杜仲組分組合物經過加工制備的適合服用的任何單位劑量形式的 藥物制劑，這些藥物制劑選自以下劑型：片劑、糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊 齊?、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口服液、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、粉劑、溶液劑、栓劑、軟膏劑、硬 膏劑、霜劑、噴霧劑、滴劑、貼劑，需要時可以制成緩釋制劑、腸溶制劑。
[0015] 本發明的杜仲組分組合物，在制備成藥物制劑時可加入藥物可接受的載體，所述 藥物可接受的載體選自：抗氧劑、螯合劑、表面活性劑、填充劑、崩解劑、潤濕劑、分散劑、潤 滑劑、矯昧劑、色素等，常用的載體如：甘露糖醇、右旋糖苷、乳糖、葡萄糖、山梨醇、甘露醇、 木糖醇、氧化納、硅衍生物、纖維素及纖維素衍生物、亞硫酸納、焦亞硫酸納、藻酸鹽、明膠、 甘油、吐溫80、瓊脂、碳酸鈣、碳酸氫鈣、聚乙二醇、環糊精、環糊精、磷脂類材料、高嶺土、滑 石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸饃等。
【具體實施方式】
[0016] 下面將進一步通過舉例來說明本發明。需要指出的是，以下說明僅僅是對本發明 要求保護的技術方案的舉例說明，并非對這些技術方案的任何限制。本發明的保護范圍以 所附權利要求書記載的內容為準。
[0017] 實施例1杜仲各有效部位的制備
[0018] 杜仲總黃酮的制備：稱取杜仲葉粗粉5. 0kg，配制45%的乙醇40L，用濃鹽酸調pH 為4,在60?70°C下進行攪拌提取兩次（第一次用25L乙醇溶液提取2小時，第二次用15L 乙醇溶液提取1小時），濾過，合并提取液，濃縮至4L后靜置I. 0小時離心。取上清液加入 處理好的大孔樹脂柱中進行飽和吸附，依次用水、45%乙醇、65%乙醇進行洗脫，吸附提取 液的流速為〇. 5個保留體積/小時，解吸時的流速為2個保留體積/小時，棄去水洗液，收 集65%乙醇溶液洗脫液，濃縮成稠膏、干燥得到杜仲葉總黃酮含量為87%的干粉0. 34kg。
[0019] 杜仲環烯醚萜的制備：杜仲皮烘干、粉碎、過篩，以杜仲鮮皮為佳。稱取處理后的杜 仲皮20千克，采用常規浸提，以15倍的液固比加入70%。乙醇-水溶液為提取劑，在60°C 條件下提取2小時，重復3次。將提取液過濾、濃所，用鹽酸調至pH2. 5 ;采用正丁醇萃取， 收集萃取液，濃縮液冷卻到-10?_20°C，再置于冷凍干燥器中冷卻到-45?-65°C，真空度 <20Pa，時間24?48小時低溫真空干燥，得到環烯醚萜活性部位675. 3克，總環烯醚萜化合 物含量為78.5%。
[0020] 杜仲木脂素的制備：取杜仲樹皮（去外皮）2Kg，用8L 65 %乙醇回流提取兩次，每 次lh，過濾，合并兩次提取液濃縮至800ml。用DlOl大孔樹脂拌樣上樣（大孔樹脂柱體積 3L)，水洗3倍柱體積，1 %氨水繼續洗3倍柱體積，再水洗至中性。用20%乙醇洗脫2倍柱 體積，用45%乙醇洗2. 5倍柱體積。45%乙醇洗脫液濃縮至600ml。洗脫液濃縮后干燥成 粉末。用松脂醇二葡萄糖苷作為對照，提取物經紫外檢測木脂素成分含量為87. 3%。
[0021] 實施例2杜仲組分組合物的實驗研究
[0022] 動物心肌缺血模型的復制及給藥方法
[0023] 雄性SD大鼠，體重220±50g，每組12只。假手術組：灌服等量的水溶液；模型組： 灌服等量的水溶液；各組動物均按體重灌胃給予受試藥物（5ml/kg)。每天1次，共給藥7 次。在末次給藥后30分鐘，1 %戊巴比妥鈉（50mg/kg)腹腔注射麻醉，持續監測心電圖變化。 將心電圖電極針埋在左下肢及右上肢皮下，在左心耳與肺動脈圓錐之間找到與左冠狀動脈 伴行的心大靜脈，在左心耳下方2_處用眼科針6-0絲線穿線，進針深度約1-1. 5_，寬約 2-3_，連同心大靜脈一起結扎冠狀動脈左前降支（假手術組只穿線不結扎）。心電圖顯示 ST段顯著抬高或異常Q波時；即表明急性心肌缺血造模成功。
[0024] 心肌缺血梗死面積百分比的測定：術后24h，將麻醉后的大鼠打開胸腔，迅速取 下心臟在結扎線以下將左心室切成厚度為2mm的4-5片，放入1 % TTC溶液中，在37°C 水浴、避光條件下染色15min，梗死區不著色（白色），非梗死區染成紅色，按照公式1用 Image-J(NIH)軟件計算梗死區面積百分比。心肌梗死面積百分比（S) %=梗死區面積/左 心室總面積X 100%。
[0025] 左室血流動力學指標測定：術后24h，再次將大鼠腹腔注射1 %戊巴比妥鈉（50mg/ kg)麻醉，然后靜脈推注肝素全身抗凝，手術分離右頸總動脈后應用生理記錄儀檢測心臟 血流動力學參數。插管至左心室記錄壓力曲線，記錄左室最大收縮（+)和舒張（一）速率 (土 dp/dtmax) 〇
[0026] 血清心肌酶水平的測定：術后24h，將麻醉后的大鼠打開腹腔，從腹主動脈取血 5?8ml，放置1?2h，離心IOmin (3000rpm)，測定血清LDH和CK-MB的水平。
[0027] 各給藥組的給藥劑量均為100mg/kg，各給藥組組成如下：
[0028]
【權利要求】
1. 一種具有心肌保護作用的杜仲組分組合物，其特征在于，該組合物的成分均來自 中藥杜仲，其具體由重量百分比為10?80 %的杜仲總黃酮，10?80 %的杜仲環烯醚萜和 10?80 %的杜仲木脂素組成。
2. 根據權利要求1所述的組合物，其特征在于，所述組合物的重量百分比優選為20? 40%的杜仲總黃酮，40?60%的杜仲環烯醚萜和20?50%的杜仲木脂素組成。
3. 根據權利要求2所述的組合物，其特征在于，所述組合物的重量百分比為30%的杜 仲總黃酮，50%的杜仲環烯醚萜和20%的杜仲木脂素組成。
4. 根據權利要求2所述的組合物，其特征在于，所述組合物的重量百分比為25%的杜 仲總黃酮，45%的杜仲環烯醚萜和30%的杜仲木脂素組成。
5. -種包含權利要求1所述的杜仲木脂素提取物的藥物制劑，所述杜仲組分組合物 經過加工制備的適合服用的任何單位劑量形式的藥物制劑，所述藥物制劑選自以下劑型： 片劑、糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口服液、顆粒劑、沖 齊IJ、丸劑、散劑、丹劑、粉劑、溶液劑、栓劑、軟膏劑、硬膏劑、霜劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。
【文檔編號】A61P9/00GK104435067SQ201410706095
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年11月28日 優先權日:2014年11月28日
【發明者】肖軍平, 吳永忠, 陳梁, 康興東, 毛金娣 申請人:普正藥業股份有限公司